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真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：1: 1; 作者焦建伟俞梅敏茹炳根《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期340-343,共4页; 通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 Cod... 展开更多; 关键词低分子量尿激酶原突变体表达稀有密码子大肠杆菌; 在线阅读下载PDF 职称材料

低分子量尿激酶与Annexin V的融合基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达: 2; 作者王丽鸳金勇丰 +1 位作者朱成钢张耀洲《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期246-250,共5页; 将低分子量尿激酶与膜联蛋白 (AnnexinV)的融合基因重组到家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK UKAV ,并与线性化的病毒Bm PAK6DNA共转染家蚕细胞 ,获得重组病毒BacPAK UKAV。将重组病毒BacPAK UKAV感染家蚕培养细... 展开更多; 关键词低分子量尿激酶 ANNEXINV 膜联蛋白V 融合基因家蚕杆状病毒表达系统基因表达溶栓药物; 在线阅读下载PDF 职称材料

用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体被引量：1: 3; 作者潘淑媛高丽华 +6 位作者胡显文杨波殷亮胥照平张正光郗永义陈惠鹏《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期834-840,共7页; 将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载... 展开更多; 关键词低分子量尿激酶突变体内部核糖体进入位点二氢叶酸还原酶基因重组CHO细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质被引量：1: 4; 作者焦建伟刘宁 +1 位作者俞梅敏茹炳根《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期862-865,共4页; 将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大... 展开更多; 关键词低分子量单链尿激酶原纤维蛋白肽融合蛋白表达性质; 在线阅读下载PDF 职称材料

溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达被引量：3: 5; 作者张磊亮焦建伟 +2 位作者邵开峰俞梅敏茹炳根《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期1046-1050,共5页; 将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥... 展开更多; 关键词低分子量尿激酶原抗栓肽血小板聚集; 在线阅读下载PDF 职称材料

共表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响被引量：4: 6; 作者刘志刚林建波 +1 位作者康铁军俞炜源《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期486-489,共4页; 以复制子为p15A的质粒pACU184为基础 ,构建了 3种表达硫氧还蛋白 (TrxA)或和二硫键异构酶 (DsbC)的表达质粒 .经IPTG诱导 ,克隆的DsbC和TrxA都以可溶的形式高表达 .分别将构建的 3种表达质粒与复制子为colE1并克隆有人源化鼠抗人纤维... 展开更多; 关键词共表达 TrxA DSBC 异源蛋白大肠杆菌硫氧还蛋白二硫键异构酶低分子量尿激酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达被引量：1: 1; 作者焦建伟俞梅敏茹炳根; 机构北京大学生命科学学院; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期340-343,共4页; 基金国家 8 63高技术发展计划 (No .863 10 2 0 9)资助项目&&; 文摘通过一种融合抗栓肽的低分子量尿激酶原的突变体 (DscuPA 32K)在大肠杆菌中表达的研究 ,进行了一系列不同条件下的实验 .DscuPA 32K在菌株BL2 1中的表达很低 ,表达量仅为 3% ;为提高其表达量 ,引进一种整合稀有tRNA基因的菌株BL2 1 CodonPlusTM RIL ,增加大肠杆菌中识别稀有密码子的tRNA的数量 ,DscuPA 32K的表达水平确实有了很大提高 ,最大表达量约占 2 0 % .结果表明 ,富含稀有密码子的DscuPA 32K在大肠杆菌中表达受限制的因素 ,完全可以由增加稀有tRNA的数量来克服 .免疫印迹分析DscuPA 32K具有良好的抗原性 .此表达菌株可能有利于含大肠杆菌稀有密码子的真核基因在大肠杆菌中的表达 .; 关键词低分子量尿激酶原突变体表达稀有密码子大肠杆菌; Keywords low molecular scuPA,mutant,expression,rare codon; 分类号 R394.6 [医药卫生—医学遗传学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名低分子量尿激酶与Annexin V的融合基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达: 2; 作者王丽鸳金勇丰朱成钢张耀洲; 机构浙江大学生物化学研究所; 出处《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期246-250,共5页; 基金浙江省自然科学基金资助项目 (编号 3 0 10 81); 文摘将低分子量尿激酶与膜联蛋白 (AnnexinV)的融合基因重组到家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中 ,获得重组转移载体pBacPAK UKAV ,并与线性化的病毒Bm PAK6DNA共转染家蚕细胞 ,获得重组病毒BacPAK UKAV。将重组病毒BacPAK UKAV感染家蚕培养细胞 (MOI=10 )和 5龄幼虫 (10 5pfu/头 ) ,Western印迹方法表明表达产物大小约为 6 9kD。用纤维蛋白平板溶圈法测定表达产物的纤溶活性 ,其融合蛋白具有明显的纤溶活性 ,约为 5× 10 -5U/个细胞。用APTT法测定表达产物的抗凝活性 ,比野生病毒Bm PAK6感染表达产物的APTT时间延长了 1倍以上 ,表现出明显的抗凝活性。体外实验表明 ,家蚕培养细胞和幼虫表达的重组低分子量尿激酶与AnnexinV融合蛋白具有溶栓与抗栓双功能。研究结果为今后进一步探索具有溶栓抗栓功能的血栓药物提供了新的方向。; 关键词低分子量尿激酶 ANNEXINV 膜联蛋白V 融合基因家蚕杆状病毒表达系统基因表达溶栓药物; Keywords Low molecular weight prourokinase Annexin V Bombyx mori baculovirus expression vector systemThrombolytic and anti thrombus; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体被引量：1: 3; 作者潘淑媛高丽华胡显文杨波殷亮胥照平张正光郗永义陈惠鹏; 机构军事医学科学院生物工程研究所吉林大学生命科学院; 出处《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期834-840,共7页; 基金 863计划（Z18-03-12）资助项目.; 文摘将二氢叶酸还原酶基因（dhfr）克隆至pIRES载体中弱化的脑心肌炎病毒（ECMV）内部核糖体进入位点（IRES）的下游，构建了含有弱化dhfr筛选标记和可用氨甲蝶呤（MTX）加压提高表达水平的双顺反子真核表达载体pIRES—dhfr。利用该表达载体表达了一种无糖基化和具有凝血酶抗性的低分子量尿激酶型纤溶酶原激活剂（LMW—uPA）突变体（缺失尿激酶原的1—143位氨基酸，Arg156→Lys，Asn302→Ala），用脂质体转染方法将表达载体pIRES—dhfr／LMW—UK转染CHO—dhfr-细胞后经过一轮MTX筛选，几乎所有获得的单克隆细胞株都表达LMW—UK，其中约50％为表达水平较接近（500—5000IU／10^6cells／d）的高表达阳性克隆。用转瓶无血清培养表达水平约为17．5pg／cell／d的rCHO细胞系LB2-UK，收集的上清经过阳离子交换柱和凝胶过滤层析两步纯化后，获得的重组蛋白的纯度可以达到99％。用S-2444发色底物法检测，所获得的突变体双链UK比例大于98％。; 关键词低分子量尿激酶突变体内部核糖体进入位点二氢叶酸还原酶基因重组CHO细胞; Keywords low molecular weight urokinase, mutant, internal ribosome entry site, dhfr, recombinant CHO cell; 分类号 Q782 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质被引量：1: 4; 作者焦建伟刘宁俞梅敏茹炳根; 机构北京大学生命科学学院; 出处《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期862-865,共4页; 文摘将人工合成的寡核苷酸片段进行定向连接后 ,得到编码纤维蛋白 β链N端 (β 15～ 42 )多肽的基因片段及连接区片段 (linker) ,再与低分子量尿激酶原 (scuPA 32k)cDNA分子进一步连接后 ,得到了Fβ (15～ 42 ) /scuPA 32k的融合基因 .在大肠杆菌中经过IPTG诱导表达 ,经过变性及复性 ,Zn2 + 螯合层析及SephacrylS2 0 0凝胶层析后 ,目的蛋白被纯化 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)显示为一条蛋白质纯化条带 ,分子质量为35ku .经纤维蛋白平板法测定比活为 870 0 0U/mg.经纤溶酶活化后的融合蛋白与低分子量尿激酶相比 ,对显色底物S2 44 4酶促动力学性质相似 .同时Fβ (15～ 42 ) /scuPA; 关键词低分子量单链尿激酶原纤维蛋白肽融合蛋白表达性质; Keywords low molecular single chain urokinase, fibrin peptide, fusion; 分类号 R394.8 [医药卫生—医学遗传学] R973.2 [医药卫生—药品]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达被引量：3: 5; 作者张磊亮焦建伟邵开峰俞梅敏茹炳根; 机构北京大学生命科学学院; 出处《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第6期1046-1050,共5页; 基金国家自然科学基金 (批准号 :3 0 2 0 0 0 5 7)资助; 文摘将抗栓肽 ( Decorsin)嫁接到低分子量尿激酶原 ( scu PA-3 2 k)上 ,可以期望获得既具有抗血小板聚集活性 ,又具有溶栓活性的新型基因工程蛋白质分子 .利用计算机辅助分子设计手段模拟了该融合蛋白的分子结构 ,证明其活性区可以正常发挥功能 .根据大肠杆菌偏好密码子合成 Decorsin的基因 ,与 scu PA-3 2 k基因融合在一起 ,构建新的嵌合体基因 dscu PA,并在大肠杆菌中通过 IPTG进行诱导表达 ,该重组蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式存在 .对包涵体进行变性和复性并通过层析纯化得到目的蛋白质 .用纤维蛋白平板法测得重组蛋白的比活为 92 0 0 0 IU/mg.激活纤溶酶原的酶促动力学性质与天然低分子量尿激酶相似 ,且有较强的抑制血小板聚集的功能 .重组蛋白 dscu PA不但具有较强的溶栓功能 ,而且具有抗栓功能 .; 关键词低分子量尿激酶原抗栓肽血小板聚集; Keywords ScuPA-32k Decorsin Platelet aggregation; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名共表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响被引量：4: 6; 作者刘志刚林建波康铁军俞炜源; 机构军事医学科学院生物工程研究所; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期486-489,共4页; 基金国家高技术研究发展计划项目 (No.10 2 0 9 0 3 0 1); 文摘以复制子为p15A的质粒pACU184为基础 ,构建了 3种表达硫氧还蛋白 (TrxA)或和二硫键异构酶 (DsbC)的表达质粒 .经IPTG诱导 ,克隆的DsbC和TrxA都以可溶的形式高表达 .分别将构建的 3种表达质粒与复制子为colE1并克隆有人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体低分子量尿激酶融合基因 (C6 UK)的表达质粒共转化大肠杆菌XL1 blue ,在 30℃用IPTG诱导表达 .SDS PAGE显示 ,共表达TrxA或DsbC都能导致C6 UK融合蛋白的部分可溶性表达 ,而且同时共表达TrxA和DsbC 2种分子时 ,C6 UK完全以可溶形式表达 ,但表达量降低 .分别用溶圈法和ELISA检测了各种共表达时可溶表达产物的生物活性 .结果显示 ,只有共表达DsbC时才能检测到明显的C6; 关键词共表达 TrxA DSBC 异源蛋白大肠杆菌硫氧还蛋白二硫键异构酶低分子量尿激酶; Keywords thioredoxin, disulfide isomerase, low molecular weight single chain urokinase, co expression; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	真核低分子量尿激酶原突变体基因在大肠杆菌中的高效表达	焦建伟俞梅敏茹炳根	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2001	1	在线阅读下载PDF 职称材料
2	低分子量尿激酶与Annexin V的融合基因在家蚕杆状病毒表达系统中的表达	王丽鸳金勇丰朱成钢张耀洲	《蚕业科学》 CAS CSCD	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	用弱化dhfr双顺反子载体在CHO细胞中高效表达低分子量尿激酶突变体	潘淑媛高丽华胡显文杨波殷亮胥照平张正光郗永义陈惠鹏	《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心	2006	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	纤维蛋白肽与低分子量尿激酶原融合蛋白的构建及性质	焦建伟刘宁俞梅敏茹炳根	《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心	2001	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	溶栓与抗栓双功能尿激酶原突变体的模拟、构建与表达	张磊亮焦建伟邵开峰俞梅敏茹炳根	《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心	2004	3	在线阅读下载PDF 职称材料
6	共表达TrxA和DsbC对富含二硫键的异源蛋白在大肠杆菌中表达的影响	刘志刚林建波康铁军俞炜源	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2002	4	在线阅读下载PDF 职称材料