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位点特异性重组酶Cre的克隆、表达、纯化及体外活性鉴定
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作者 高虹 张传生 +2 位作者 魏影允 胡国法 劳为德 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2002年第6期31-33,共3页
克隆了Cre基因 ,分别构建了真核表达载体 pEF EBFP Cre和 pGEX Cre,在大肠杆菌中表达了Cre重组酶 ,并证明了重组酶的删除特性 。
关键词 位点特异性重组酶cre 克隆 纯化 体外活性 鉴定 cre/LOXP系统 原核表达 cre基因 基因表达 大肠杆菌
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利用Cre/loxP位点特异性重组酶系统从转基因植物生产非转基因食品 被引量:2
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作者 徐茂军 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2004年第8期24-27,共4页
转基因植物中的外源基因是引起转基因植物食品安全性问题的主要原因。通过对Cre/loxP系统介导转基因植物中外源基因选择性切除的最新研究成果进行综述分析,指出利用果实、花粉等组织特异性启动子对重组酶基因的表达进行调控,将转基... 转基因植物中的外源基因是引起转基因植物食品安全性问题的主要原因。通过对Cre/loxP系统介导转基因植物中外源基因选择性切除的最新研究成果进行综述分析,指出利用果实、花粉等组织特异性启动子对重组酶基因的表达进行调控,将转基因植物食用部位的外源基因选择性的切除,是将转基因植物转化为非转基因食品的一条有效途径。 展开更多
关键词 转基因植物 Cer/oxP系统 非转基因食品 外源基因切除 安全性 位点异性重组
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Cre/lox位点特异性重组系统在高等真核生物中的研究进展 被引量:12
3
作者 龙定沛 谭兵 +2 位作者 赵爱春 许龙霞 向仲怀 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期177-189,共13页
来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真... 来自于P1噬菌体的Cre/lox系统通过位点特异性重组可以迅速而有效地实现各种生理环境下的基因定点插入、删除、替换和倒位等操作。Cre/lox系统作为目前基因打靶技术的核心工具,已被广泛应用于拟南芥、水稻、小鼠、果蝇、斑马鱼等高等真核模式生物。文章较为全面地介绍了Cre/lox系统的基本概况及其在高等真核生物中的应用,讨论了Cre/lox系统在研究中存在的主要问题和今后的发展方向,为利用该系统在不同高等生物中进行基因操作提供有用的参考。 展开更多
关键词 cre/lox重组系统 基因操作 位点异性重组 基因打靶
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肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的建立 被引量:2
4
作者 侯宁 杨冠 +2 位作者 范雄伟 吴秀山 杨晓 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期69-74,共6页
肥大软骨细胞是软骨细胞的终末分化形式,在软骨内成骨过程中发挥十分关键的作用。为了研究肥大软骨细胞在骨骼发育过程中的功能,文章构建了在8.2 kb小鼠X型胶原基因(Coll0a1)启动子控制下表达Cre重组酶的转基因小鼠品系(Coll0a1(8.2)-C... 肥大软骨细胞是软骨细胞的终末分化形式,在软骨内成骨过程中发挥十分关键的作用。为了研究肥大软骨细胞在骨骼发育过程中的功能,文章构建了在8.2 kb小鼠X型胶原基因(Coll0a1)启动子控制下表达Cre重组酶的转基因小鼠品系(Coll0a1(8.2)-Cre)。采用显微注射法将11.5 kb的转基因片段导入小鼠基因组,共注射受精卵328枚,获得子代鼠51只,经PCR基因型鉴定有3只在基因组上整合有Cre重组酶基因。PCR检测发现Coll0a1(8.2)-Cre转基因在含有肥大软骨细胞的组织中表达。为了检测Cre重组酶表达的强度和组织特异性,转基因小鼠与ROSA26报告小鼠交配,子代ROSA26;Coll0a1(8.2)-Cre双转基因小鼠LacZ染色检测的结果显示,Cre重组酶在所有的肥大软骨细胞中表达。原位杂交的结果证实Coll0a1(8.2)-Cre转基因表达在肥大区的上端。通过对比发现Coll0a1(8.2)-Cre转基因表达的组织特异性和强度均优于之前我们构建的Coll0a1(1.0)-Cre转基因品系。以上结果表明,建立的肥大软骨细胞特异性表达Cre重组酶的转基因小鼠品系可以作为一种遗传学工具,介导目的基因在肥大软骨细胞中的敲除。 展开更多
关键词 肥大软骨细胞 cre重组 转基因小鼠 组织异性
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利用细菌内同源重组技术构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体 被引量:2
5
作者 李玲 国蓉 +4 位作者 常绪生 印慨 张晔 刘志民 章卫平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期185-190,共6页
目的构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型。方法以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrieving vect... 目的构建胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶的基因敲入打靶载体,最终获得胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入小鼠,为胰岛β细胞功能研究提供良好的基因敲除动物模型。方法以低拷贝质粒pBR322-2s为骨架构建取获载体(retrieving vector),应用λ噬菌体Red重组酶介导的缺口修复(gap-repair)方法,通过细菌内的同源重组克隆长度约为12kb的小鼠胰岛素2(Ins2)基因组DNA,同时构建1个带有内部核糖体进入位点(IRES)序列、Cre重组酶序列和正负向筛选标记基因的微型打靶载体(mini-targeting vector),最后通过同源重组获得Ins2-Cre打靶载体。结果以Ins2基因的第3外显子为靶点,成功构建了受内源性Ins2基因启动子严格调控的表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体。结论成功构建了在胰岛β细胞中特异性表达Cre重组酶的基因敲入型打靶载体,为获得胰岛β细胞中基因特异性敲除小鼠模型提供了关键材料。 展开更多
关键词 胰岛分泌细胞 cre重组 基因打靶 打靶载体 同源重组 内部核糖体进入位点
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Cre/loxP位点特异性重组系统及其在口腔医学领域中的应用 被引量:4
6
作者 张文娟 于丹妮 《国际口腔医学杂志》 CAS 2011年第1期55-58,共4页
Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗... Cre/loxP位点特异性重组系统由Cre重组酶和loxP位点组成。Cre重组酶可识别loxP位点并催化2个loxP位点之间的DNA进行精确的位点特异性重组。该系统作用方式简单、重组效率高,可定时、定位地对基因进行修饰,已成为一种定向改变生物活体遗传信息的重要的试验工具。本文主要就Cre/loxP系统的结构、重组机制、特点及其在口腔医学领域中的应用作一综述。 展开更多
关键词 位点异性重组 cre/LOXP系统 cre重组
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肝特异性表达Cre重组酶转基因猪成纤维细胞的建立
7
作者 杨春 朱洪伟 +3 位作者 刘宗岳 王桂武 杨福合 邢秀梅 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第10期145-149,共5页
试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ... 试验旨在建立肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞系,为获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。通过PCR方法分别从血液和pcDNA3.1(+)载体上扩增肝脏特异性启动子α1-抗胰蛋白酶启动子(PhAAT)和BGHpolyA片段。通过双酶切(XhoⅠ、SalⅠ)从载体pGC-FRT2neo上获得FRT2neo交换盒,再利用重叠PCR方法获得猪源的Cre重组酶基因,最后通过三重融合PCR方法和酶切方法将4个片段连接。利用真核表达载体pC1-neo构建出Cre表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo。LipofectamineTM2000介导转染猪成纤维细胞,通过G418筛选出阳性细胞系,最后通过PCR鉴定证明构建的Cre重组酶表达载体pC1-PhAATCreBGHpolyA-FRT2neo成功整合到细胞的基因组中,获得了肝脏特异性表达Cre重组酶猪成纤维细胞,为最终通过核移植方法获得肝脏特异性表达Cre重组酶转基因猪奠定基础。 展开更多
关键词 cre重组 肝脏异性启动子 真核表达载体 三重融合PCR 细胞转染
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Cre/LoxP系统介导的位点特异性重组技术 被引量:1
8
作者 陈双喜 许守明 《安徽农学通报》 2009年第15期27-28,107,共3页
Cre/LoxP系统是一种对转入基因进行定点操作的基因重组系统,在遗传操作中具有重要作用。该系统可以将外源基因定点整合到染色体上或将特定DNA片断删除。
关键词 cre/LoxP 定点整合 异性重组
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Cre/loxp位点特异性重组系统在转基因植物中的应用 被引量:4
9
作者 邱淑萍 陈在杰 王锋 《福建农业学报》 2008年第2期211-217,共7页
位点特异性重组系统能够在植物遗传转化中更准确、可靠的操纵外源DNA的引入或删除,已成为植物遗传操作中的重要工具。本文简要介绍目前应用最为广泛的Cre/loxp位点特异性重组系统的重组机制,并着重阐述Cre/loxp系统在删除转基因植物中... 位点特异性重组系统能够在植物遗传转化中更准确、可靠的操纵外源DNA的引入或删除,已成为植物遗传操作中的重要工具。本文简要介绍目前应用最为广泛的Cre/loxp位点特异性重组系统的重组机制,并着重阐述Cre/loxp系统在删除转基因植物中标记基因及定点整合等方面的应用。 展开更多
关键词 位点异性重组 cre/loxp 转基因植物 基因删除 定点整合
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红鳍东方鲀6种同工酶的组织特异性及基因位点分析 被引量:4
10
作者 杨翠华 王伟继 +2 位作者 李鹏飞 孔杰 王清印 《海洋水产研究》 CSCD 北大核心 2006年第3期47-51,共5页
采用水平淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法,对2龄野生红鳍东方鲀的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、眼、鳃6种组织中的苹果酸酶(ME),乳酸脱氢酶(LDH),异柠檬酸脱氢酶(IDH),葡萄糖脱氢酶(GLCDH),磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和酯酶(EST)共6种同工... 采用水平淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法,对2龄野生红鳍东方鲀的肌肉、肝脏、肾脏、心脏、眼、鳃6种组织中的苹果酸酶(ME),乳酸脱氢酶(LDH),异柠檬酸脱氢酶(IDH),葡萄糖脱氢酶(GLCDH),磷酸葡萄糖变位酶(PGM)和酯酶(EST)共6种同工酶进行了研究。结果表明,以上6种同工酶存在明显的组织特异性。LDH在除肝脏外的5种组织中活性很强,GLCDH只在肝脏中表达,鳃组织中的GLCDH和肌肉组织中的EST表达活性都很弱。6种同工酶共检测到12个基因位点,其中ME和PGM有两个基因位点编码,EST有5个基因位点编码。本试验还检测到Ldh-1、Est-1、Est-2、Est-3和Est-4共5个基因位点具有多态现象(P0·99),多态位点比例为41·67%,在12个基因位点共观察到17个等位基因表达,平均每个位点表达的等位基因数为1·417个。同时在红鳍东方鲀眼组织中发现,AB3型和B4型LDH间有一条酶带弱表达。 展开更多
关键词 红鳍东方纯 同工 组织异性 基因位点
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фC31位点特异性整合酶系统研究进展 被引量:3
11
作者 吴民耀 文瑞丽 +2 位作者 师红 王昭晖 张耀君 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2010年第7期30-36,共7页
介绍了фC31重组酶作用机制、фC31整合酶在基因治疗及其转基因动物研制中的应用、фC31整合酶催化效率的影响因素,以及фC31整合酶整合的安全性。实验证实,фC31-int可作用于多种动植物细胞及组织,将目的基因特异地整合到宿主基因组,... 介绍了фC31重组酶作用机制、фC31整合酶在基因治疗及其转基因动物研制中的应用、фC31整合酶催化效率的影响因素,以及фC31整合酶整合的安全性。实验证实,фC31-int可作用于多种动植物细胞及组织,将目的基因特异地整合到宿主基因组,使目的基因得以持续、高效地表达。近年来该酶在哺乳动物体内和体外的研究进展表明,фC31整合酶已经成为研究转基因、基因治疗及基因修饰的一种重要工具。 展开更多
关键词 фC31整合 位点异性重组 转基因 基因治疗
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基于重组聚合酶扩增技术检测弓形虫方法的建立及应用 被引量:1
12
作者 宋绍征 顾乐盈 +3 位作者 武颖超 孟雅琴 于康英 黄晓华 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第2期107-112,共6页
目的 旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法 以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作... 目的 旨在建立一种基于重组聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术检测弓形虫的方法,并应用于宠物猫临床样本验证。方法 以弓形虫基因529重复序列(Rep-529)作为靶标基因序列,设计引物和探针,构建Rep-529重组质粒作为标准品,建立荧光RPA反应体系。将质粒标准品10倍比稀释成不同浓度作为检测模板,进行灵敏度测试;分别以弓形虫、隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等几种寄生虫基因组DNA作为模板,进行特异性测试;同时应用荧光RPA法和RT-PCR法对52例阳性和40例阴性猫临床样本进行检测,比较分析2种方法检测结果的符合率。结果 本实验成功建立了一种以PTRep重组质粒为标准品、ToxD-F/ToxD-R为引物、RepD-P为荧光探针的RPA反应体系,反应恒定温度为39℃,反应时间为30 min,检测灵敏度为1拷贝/μL,与隐孢子虫、新孢子虫、旋毛虫、贾第鞭毛虫、牛巴贝斯虫、环形泰勒虫等寄生虫无任何明显交叉反应,特异性良好。共检测了92例猫临床粪便样本,荧光RPA检测方法的阳性符合率高于常规RT-PCR法(98.08%vs.82.69%),阳性率差异无统计学意义(χ^(2)=1.392,P>0.05)。结论 本研究成功建立的弓形虫荧光RPA检测方法,具有快速、灵敏、特异、准确等特点,有可能作为弓形虫临床现场快速检测方法。 展开更多
关键词 重组聚合扩增 弓形虫 检测 灵敏度 异性
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φC31整合酶系统介导的位点特异性整合研究进展 被引量:5
13
作者 马晴雯 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期567-575,共9页
来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体φC31的整合酶可介导链霉菌附着位点(attB)和噬菌体附着位点(attP)之间的同源重组,这种重组亦可在多种动植物细胞内进行;而且,该整合酶还可介导含attB位点的载体以位点特异性方式整合于多种真核生物基... 来源于链霉菌(Streptomyces)噬菌体φC31的整合酶可介导链霉菌附着位点(attB)和噬菌体附着位点(attP)之间的同源重组,这种重组亦可在多种动植物细胞内进行;而且,该整合酶还可介导含attB位点的载体以位点特异性方式整合于多种真核生物基因组内的假attP位点,并使转基因持续高效表达。因此,φC31整合酶在基因修饰、基因治疗及转基因动物研制等方面得到了广泛的应用。文章就近年来φC31整合酶整合规律、提高效率方面的改进及安全性等相关领域的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 ΦC31整合 位点异性整合 基因治疗 转基因 安全性
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XerCD/dif位点特异性重组
14
作者 田德桥 王玉民 郑涛 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1003-1008,共6页
大约10%~15%的大肠杆菌在染色体复制过程中会形成染色体二聚体。大肠杆菌染色体编码的重组酶XerC和XerD作用于染色体复制终点区的dif序列,以同源重组的方式将染色体二聚体解离为单体,使细菌得以正常复制分裂。编码霍乱毒素的噬菌体CTX... 大约10%~15%的大肠杆菌在染色体复制过程中会形成染色体二聚体。大肠杆菌染色体编码的重组酶XerC和XerD作用于染色体复制终点区的dif序列,以同源重组的方式将染色体二聚体解离为单体,使细菌得以正常复制分裂。编码霍乱毒素的噬菌体CTXΦ以位点特异的方式整合入霍乱弧菌染色体,但其基因组中不含有任何重组酶基因,其整合过程需要细菌染色体编码的XerC和XerD重组酶,且整合位点与大肠杆菌dif序列相似。XerCD重组酶基因和dif位点在细菌染色体广泛存在,表明其可能是染色体二聚体解离,噬菌体及其他外源基因成分整合入染色体过程中一种广泛存在的途径。文章对XerCD/dif位点特异性重组在细菌染色体二聚体解离。 展开更多
关键词 XerCD dif 位点异性重组
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Cre/lox位点特异重组系统在转基因植物中的应用 被引量:3
15
作者 赵妍 余涛 邢少辰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期95-103,共9页
位点特异重组系统由重组酶和相应的重组酶识别位点组成,通过两者间的相互作用,实现外源基因精确整合与切除等一系列遗传操作.主要可分为Cre/lox系统、FLP/frt系统、R/RS系统和Gin/gix系统.目前,研究最充分应用最广泛的位点特异重组系统... 位点特异重组系统由重组酶和相应的重组酶识别位点组成,通过两者间的相互作用,实现外源基因精确整合与切除等一系列遗传操作.主要可分为Cre/lox系统、FLP/frt系统、R/RS系统和Gin/gix系统.目前,研究最充分应用最广泛的位点特异重组系统为Cre/lox系统.此系统为位点特异重组系统家族中的一员,由38.5kDCre重组酶和34bplox位点组成,最早被应用于动物转基因研究,包括基因敲除、基因激活、基因易位等.近年来,随着研究的深入,Cre/lox系统被逐步应用到植物研究中,并在诸多领域取得重大进展.本文总结归纳了Cre/lox系统在定点整合、定点切除以及叶绿体转化等方面的最新研究成果,旨在为利用Cre/lox系统构建环境安全和高效表达的植物遗传转化体系提供参考. 展开更多
关键词 cre重组 LOXP位点 位点重组 转基因植物
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异源位点特异性重组系统在植物中的研究 被引量:2
16
作者 易厚富 王金发 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期62-66,共5页
关键词 位点异性 重组系统 高等植物 重组机理 方式
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基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ序列位点特异性聚合酶链反应鉴别鹿茸及其伪品 被引量:1
17
作者 杨重晖 尹程程 +7 位作者 宋文博 荆礼 陈昊媛 杨洋 李芳宇 刘莉 赵大庆 齐滨 《世界中医药》 CAS 2020年第10期1381-1385,共5页
目的:基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列建立一种新的PCR鉴定方法,以快速鉴别出梅花鹿、马鹿茸片与驯鹿茸片。方法:采集不同来源的鹿茸片共60批。通过比较梅花鹿、马鹿与驯鹿等其他伪品的COⅠ基因序列差异,根据SNP鉴别位点设计梅花... 目的:基于细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)序列建立一种新的PCR鉴定方法,以快速鉴别出梅花鹿、马鹿茸片与驯鹿茸片。方法:采集不同来源的鹿茸片共60批。通过比较梅花鹿、马鹿与驯鹿等其他伪品的COⅠ基因序列差异,根据SNP鉴别位点设计梅花鹿茸、马鹿茸同驯鹿茸的鉴别引物Cne-F、Rt-F、Co-R,并对影响聚合酶链反应(PCR)结果的主要因素变性时间、退火温度、退火时间、延伸时间等进行方法学考察和优化。结果:该实验构建的双位点特异PCR鉴别体系,基于COⅠ的鉴别位点,可通过PCR扩增获得294 bp的梅花鹿、马鹿特异片段,而产生514 bp的驯鹿特异片段,伪品及阴性对照无条带。结论:该实验建立对梅花鹿、马鹿及驯鹿等其他伪品鹿茸的PCR鉴别方法简便、可靠。 展开更多
关键词 鹿茸 细胞色素C氧化亚基Ⅰ DNA 位点异性 聚合链反应 分子鉴定
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GLUT4-Cre转基因模型建立与Cre酶特异性表达
18
作者 孔辉 骆惠均 +4 位作者 陈玉英 王龙 陆振虞 费俭 王铸钢 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2004年第10期789-792,832,共5页
目的 建立骨骼肌和脂肪组织特异性表达Cre重组酶基因的转基因小鼠,以期在上述组织细胞中实现相关基因的条件性剔除。方法 选择人葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的启动子驱动Cre重组酶的特异性表达,利用基因重组技术,构建GLUT4-Cre转基因表... 目的 建立骨骼肌和脂肪组织特异性表达Cre重组酶基因的转基因小鼠,以期在上述组织细胞中实现相关基因的条件性剔除。方法 选择人葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因的启动子驱动Cre重组酶的特异性表达,利用基因重组技术,构建GLUT4-Cre转基因表达质粒。通过显微注射法将该质粒导入小鼠受精卵细胞核,获得的新生鼠经PCR和Southern杂交方法进行基因型的分析鉴定,常规方法培育、传代转基因鼠。用RT-PCR和免疫组化法对Cre酶在阳性转基因鼠体内mRNA和蛋白表达水平进行检测。结果 获得5只阳性转基因首建鼠,其中3只已建系并稳定传代。在脑、脂肪组织中检测到Cre基因表达,而心肌、骨骼肌及肝脏组织中未检出转基因表达。结论 成功构建了在脑、脂肪组织中特异性表达Cre的转基因鼠,为研究与2型糖尿病、胰岛素抵抗等相关的条件性基因剔除小鼠模型的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 异性表达 GLUT4 脂肪组织 阳性 转基因鼠 骨骼肌 质粒 cre重组 cre基因 建系
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热诱导的位点特异性重组植物表达载体构建及烟草转化
19
作者 徐广博 李政 +4 位作者 赵惠贤 刘香利 赵洁 刘丹 吴静 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1795-1800,共6页
选择标记基因安全性问题是限制转基因植物商品化种植的重要因素。为了从转基因后代中诱导性剔除选择标记基因,本研究克隆了拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因启动子,并构建了Hsp18.2启动子诱导表达的CinH/Rs位点特异性重组删除植物表达载体。... 选择标记基因安全性问题是限制转基因植物商品化种植的重要因素。为了从转基因后代中诱导性剔除选择标记基因,本研究克隆了拟南芥热激蛋白Hsp18.2基因启动子,并构建了Hsp18.2启动子诱导表达的CinH/Rs位点特异性重组删除植物表达载体。结果表明,利用农杆菌介导法进行了烟草转化,转化后的烟草经过除草剂筛选和PCR检测,得到转基因阳性植株。本研究为利用位点特异性重组建立植物无标记基因转化体系奠定了基础。 展开更多
关键词 位点异性重组 热诱导 Hsp18 2启动子 选择标记基因
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柑桔基因工程位点特异性重组系统研究进展
20
作者 江学友 陈善春 《中国南方果树》 北大核心 2014年第6期24-26,共3页
基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有... 基于位点特异性重组系统R/Rs和Cre/loxP的无选择标记基因转化体系已被成功用于marker-free转基因柑桔的创制。在柑桔中,R/Rs系统介导的选择标记基因的删除往往不精确且有嵌合体。对于Cre/loxP系统,基于化学诱导系统构建的删除系统能有效清除选择标记基因,但同样存在删除不完全的缺点。组成型表达启动子驱动Cre/loxP系统表现出极高的删除效率,且极少有嵌合体的发生。FLP/FRT系统已被成功用于转基因植物选择标记基因的删除,但在柑桔上还没有相关的报道。 展开更多
关键词 柑桔基因工程 选择标记基因 位点异性重组系统 基因删除
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