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猪传染性胃肠炎病毒RT-CPA检测方法构建及初步应用 被引量:1
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作者 赵子惠 陈伯祥 +3 位作者 王佳 成伟伟 杨明 李元新 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第5期65-71,共7页
为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成... 为开发一种猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)RT-CPA快速且准确的检测方法。本试验根据TGEV S基因的D序列,设计了3对引物,使用构建的重组质粒作为标准阳性对照,通过优化筛选条件并应用可视化核酸试纸条,成功建立了一种一步法TGEV RT-CPA检测方法。本实验筛选最优条件为:Mg^(2+)浓度1.0 mmol/L,dNTP浓度0.8 mmol/L,Betaine浓度1.0 mol/L,BstDNA聚合酶浓度8.0 U,反应温度63℃,反应时间60 min,AMV逆转录酶5 U。本研究的扩增产物通过凝胶电泳显示出梯形条带,证明了其对TGEV的特异性检测和重复性良好,灵敏度高达10拷贝/μL。初步应用显示,该方法与TGEV抗原快速检测试剂盒的符合率超过90%,显示了高灵敏度。TGEV RT-CPA方法免去了RNA提取和cDNA合成的步骤,能够完成一步检测,且该方法不需要特殊仪器,适用于现场快速检测TGEV,为快速诊断和防控猪传染性胃肠炎提供了新的技术选择。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 RT-CPA S基因 检测方法
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猪传染性胃肠炎病毒S、N基因DNA疫苗载体构建及其免疫原性 被引量:1
2
作者 成伟伟 容维中 +5 位作者 杨明 李元新 赵子惠 陈伯祥 王佳 周瑶 《福建农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1035-1043,共9页
【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩... 【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S、N基因的DNA疫苗载体,并进行免疫原性试验,为猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis,TGE)的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩增S基因的A位点、D位点和N基因,并将N基因(单独)、A位点和D位点(融合)克隆至pCDNA3.1-His-C构建重组疫苗载体,运用生物信息学软件预测分析S(A-D)蛋白、N蛋白二级结构组成、三级构像、亚细胞定位和优势B细胞抗原表位。将构建成功的重组载体分别转染至PK-15细胞进行间接免疫荧光试验,运用共聚焦检测重组蛋白的表达分布情况。将重组疫苗载体单独或联合免疫小鼠,运用间接ELISA检测IgG抗体水平。【结果】扩增出S基因的A位点、D位点和N基因,大小分别为498、606、1149 bp。构建了A位点与D位点(融合)、N基因(单独)的DNA疫苗重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His。生物信息学软件预测分析发现TGEV感染宿主细胞时N蛋白主要定位于细胞核和线粒体,S(A-D)蛋白主要定位于细胞质和线粒体,S(A-D)蛋白具有7个优势B细胞抗原表位,N蛋白具有8个优势B细胞抗原表位。重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His均在PK-15细胞内成功表达,且S(A-D)-His和N-His在PK-15细胞核和细胞质中均有分布。重组疫苗载体免疫小鼠后,免疫效果由高至低依次为p-N-His>p-S(A-D)-His+p-N-His>p-S(A-D)-His。【结论】本研究构建了TGEV的S、N基因的DNA疫苗载体,免疫小鼠后均产生了较强的特异性抗体,为TGEV的核酸疫苗的研制提供了基础材料和依据。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 S基因 N基因 载体构建 免疫原性
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复方中药制剂对猪传染性胃肠炎病毒的体外作用研究 被引量:1
3
作者 李元新 容维中 +4 位作者 成伟伟 杨明 赵子惠 周瑶 王佳 《畜牧兽医杂志》 2024年第6期58-62,共5页
为了探讨中药复方制剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在PK-15细胞上增殖的体外抑制作用。试验选择由白头翁、黄柏、青皮、炒白术、焦三仙、仙鹤草、木香7味中药提取物组成4个配方的复方中药制剂,采用同时给药、预防给药、治疗给药三种作用... 为了探讨中药复方制剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在PK-15细胞上增殖的体外抑制作用。试验选择由白头翁、黄柏、青皮、炒白术、焦三仙、仙鹤草、木香7味中药提取物组成4个配方的复方中药制剂,采用同时给药、预防给药、治疗给药三种作用方式,观察药物对病毒的抑制吸附穿入、直接杀灭和抑制复制作用。结果显示:以1mg/mL剂量的复方中药制剂在体外对TGEV在PK-15细胞上增殖影响,配方2优于其他3个配方,对TGEV有较好抑制作用,且直接杀灭作用对细胞的保护效果最好,细胞存活率达75%(P<0.01),并筛选出了同时具有3种方式抗病毒的有效复方中药制剂。该研究结果可为后续抗TGEV药物的筛选提供科学依据。 展开更多
关键词 复方中药制剂 传染性胃肠炎病毒 体外作用
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猪传染性胃肠炎的流行特点及防控技术
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作者 辛洪博 刘鹏 《吉林畜牧兽医》 2025年第10期37-39,共3页
猪传染性胃肠炎主要以2周龄以下的仔猪为侵害对象,尤其是1周龄内危害最严重。该病是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,具有传染性较强、发病迅速的特征,发病后对猪的生长发育会造成不利的影响,给养猪户造成严重的经... 猪传染性胃肠炎主要以2周龄以下的仔猪为侵害对象,尤其是1周龄内危害最严重。该病是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,具有传染性较强、发病迅速的特征,发病后对猪的生长发育会造成不利的影响,给养猪户造成严重的经济损失。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 仔猪 传染性胃肠炎
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猪传染性胃肠炎的诊断和防治措施
5
作者 张义琳 蒋伟 《北方牧业》 2025年第15期32-32,共1页
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的高度接触性肠道传染病,该病以引起2周龄以下仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为主要特征,对生猪养殖业的健康发展构成危害。本文对生猪养殖场猪传染性胃肠炎的发生原因、诊断方法及防治... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的高度接触性肠道传染病,该病以引起2周龄以下仔猪呕吐、严重腹泻、脱水和高死亡率为主要特征,对生猪养殖业的健康发展构成危害。本文对生猪养殖场猪传染性胃肠炎的发生原因、诊断方法及防治措施进行分析,旨在保障生猪养殖业的稳定发展。 展开更多
关键词 呕吐 传染性胃肠炎病毒 严重腹泻
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猪传染性胃肠炎的综合防治
6
作者 李开廷 《农村新技术》 2025年第8期42-44,共3页
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起猪的一种高度接触性消化道传染病。该病具有高度的传染性,一旦在猪群中暴发,会迅速传播,难以控制,对养猪业造成严重经济损失。本文以山东省沂南县养殖实践为例,全面介绍该病的综合防治技术,以... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起猪的一种高度接触性消化道传染病。该病具有高度的传染性,一旦在猪群中暴发,会迅速传播,难以控制,对养猪业造成严重经济损失。本文以山东省沂南县养殖实践为例,全面介绍该病的综合防治技术,以期为广大养殖户提供参考。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 高度接触性消化道传染
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猪传染性胃肠炎病毒S基因RAA检测方法的建立与初步应用 被引量:1
7
作者 吕林丹 牟豪 +5 位作者 胡霞 刘明妮 李绍梅 李星 宋振辉 杨柳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3590-3599,共10页
本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基... 本研究旨在建立一种基于猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)S基因便捷、高效和特异的由重组酶介导的核酸等温扩增(recombinase-aid amplification,RAA)检测方法。通过基因组序列比对,选择TGEV S基因中特定片段为检测靶标,构建重组质粒pUC57-S,设计并筛选RAA引物和探针;建立RAA检测方法;评价该方法灵敏度、特异性和重复性;运用该方法检测腹泻临床样品,与荧光定量PCR方法比较检测结果的符合率。结果确定最佳引物对F2/R1和探针PF2;该方法在40℃恒温条件下,30 min即可完成反应;荧光型RAA法最低检出限可达1.34×10^(1)copies·μL^(-1);与猪流行性腹泻病毒、猪丁型冠状病毒、猪呼吸道冠状病毒等常见猪源病毒核酸无交叉反应;采用该方法检测107份临床样本,阳性率为5.61%(6/107),与荧光定量PCR法相比较,检测结果一致。本研究成功建立了一种灵敏、特异、可视化的RAA检测方法,可摆脱对昂贵设备、专业人员和检测技术的依赖,为临床检测TGEV提供良好的技术基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 基础型RAA 荧光型RAA 可视化检测
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DEAD-box解旋酶21对猪传染性胃肠炎病毒复制的调控作用 被引量:1
8
作者 谢立兰 尹杰 +1 位作者 黄冬蛾 李么明 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第4期215-222,共8页
旨在探究DEAD-box解旋酶21(DDX21)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制的调控作用。首先通过蛋白免疫印迹(Western Blot)分析了TGEV感染对DDX21表达的影响;进一步构建了猪DDX21真核表达质粒以及建立稳定敲低DDX21的PK-15细胞系,运用荧光定量... 旨在探究DEAD-box解旋酶21(DDX21)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)复制的调控作用。首先通过蛋白免疫印迹(Western Blot)分析了TGEV感染对DDX21表达的影响;进一步构建了猪DDX21真核表达质粒以及建立稳定敲低DDX21的PK-15细胞系,运用荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹、间接免疫荧光(IFA)和半数细胞培养物感染量(TCID 50)探究外源过表达DDX21及敲低DDX21对TGEV体外复制的调控作用;构建一系列DDX21截短突变体真核表达质粒,鉴定了DDX21调控TGEV增殖的关键功能域。Western Blot分析显示,在TGEV WH-1株感染早期,PK-15细胞内源性DDX21蛋白的表达水平显著上调;RT-qPCR、Western Blot、IFA和TCID 50试验显示,超表达DDX21可以显著提高TGEV N基因的mRNA水平、N蛋白的表达及病毒滴度,且呈剂量依赖性,其601-784 aa区域是其影响TGEV复制的关键;与阴性对照相比,在相应DDX21敲低细胞系中TGEV的增殖显著被抑制,而回补试验逆转了DDX21敲低细胞系中TGEV的滴度。该研究首次揭示了猪DDX21对TGEV增殖的促进作用并鉴定了其调控TGEV复制的关键结构域,为今后研究DDX21蛋白的功能及TGEV的致病机理提供了理论依据。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 DEAD-box解旋酶21 宿主蛋白 病毒复制
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紫甘薯花色苷制备及其抗猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)活性的研究 被引量:14
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作者 雷用东 陈姗姗 +3 位作者 赵晓燕 张莉 马越 童军茂 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期349-352,共4页
为研究紫甘薯花色苷对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的抑制作用,实验纯化了紫甘薯花色苷提取物,并采用液质联机的方法鉴定其结构组成;将制备的花色苷提取物作用于侵染TGEV的猪睾丸(ST)细胞,研究对TGEV诱导ST细胞的形态学变化和凋亡情况的影... 为研究紫甘薯花色苷对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的抑制作用,实验纯化了紫甘薯花色苷提取物,并采用液质联机的方法鉴定其结构组成;将制备的花色苷提取物作用于侵染TGEV的猪睾丸(ST)细胞,研究对TGEV诱导ST细胞的形态学变化和凋亡情况的影响,揭示花色苷对TGEV的预防和治疗效果。结果表明:紫甘薯花色苷提取物中主要含8种花色苷。花色苷质量浓度低于60μg/mL时,ST细胞生长良好且无细胞毒性;接种TGEV后,20μg/mL的花色苷就能抑制TGEV的增殖,且在安全浓度范围内抑制程度成剂量关系。在此体外实验中,花色苷对TGEV的预防效果比治疗效果更明显。结论:紫甘薯花色苷在20~60μg/mL质量浓度范围内对TGEV有很好的抗病毒功效。 展开更多
关键词 紫甘薯 花色苷 猪睾丸细胞 传染性胃肠炎病毒 MTT法
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传染性胃肠炎病毒感染PK-15细胞环状RNA表达谱分析
10
作者 杨玺望 杜芸莎 +3 位作者 刘瑞 梅彩秋 李文庭 刘骁 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期4450-4464,共15页
【目的】分析传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染对猪肾上皮细胞(PK-15)中环状RNA(circRNA)表达的影响以及差异表达circRNA的潜在调控功能。【方法】利用Illumina HiSeq 4000测序平台对PK-15细胞(对照)和T... 【目的】分析传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染对猪肾上皮细胞(PK-15)中环状RNA(circRNA)表达的影响以及差异表达circRNA的潜在调控功能。【方法】利用Illumina HiSeq 4000测序平台对PK-15细胞(对照)和TGEV感染的PK-15细胞进行circRNA转录组测序,筛选差异表达circRNA。对差异表达circRNA来源基因进行GO功能和KEGG通路富集分析,预测TGEV感染相关circRNA-miRNA-mRNA调控网络。随机挑选12种差异表达circRNAs通过实时荧光定量PCR验证其表达水平。【结果】转录组测序中共发现1029种circRNAs。相较于对照PK-15细胞,TGEV感染的PK-15细胞中共发现128种显著差异表达circRNAs,其中70种上调,58种下调。GO功能分析显示,TGEV感染的PK-15细胞中差异表达circRNAs来源基因主要富集在细胞大分子代谢过程和细胞代谢等生物过程;细胞内部分和胞内膜结合细胞器等细胞成分;有机环化合物结合和核酸结合等分子功能中。KEGG通路富集结果显示,TGEV感染的PK-15细胞中差异表达circRNAs来源基因主要富集在肌动蛋白细胞骨架调控、甲型流感、丙型肝炎、cAMP信号通路和mTOR信号通路等方面。circRNA-miRNA-mRNA调控网络显示,TGEV感染的PK-15细胞中存在庞大复杂的circRNA调控网络,多种circRNAs可通过miRNA靶向基因IFNAR1、IFNAR2和NHE3来调节先天免疫和跨膜离子转运,从而影响TGEV感染和症状。实时荧光定量PCR鉴定结果显示,12种差异表达circRNAs表达水平与测序结果基本趋势一致。【结论】TGEV改变了PK-15细胞中circRNA的表达。差异表达circRNA来源基因广泛参与细胞大分子代谢、病毒感染及cAMP信号通路等过程,与先天性免疫和TGEV发病机制相关的多个靶基因IFNAR1、IFNAR2和NHE3可能被circRNA调控。本研究结果揭示了circRNA在TGEV与宿主相互作用中的潜在功能。 展开更多
关键词 环状RNA(circRNA) 传染性胃肠炎病毒(tgev) PK-15细胞 转录组
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)种毒特性研究 被引量:4
11
作者 任晓峰 佟玲 +3 位作者 孙雪娇 赵高伟 王婧婧 高明 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1-7,F0002,共8页
猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)可导致仔猪严重腹泻,死亡率极高,是危害养猪业的重要病毒。免疫接种是预防TGEV感染有效手段,TGEV疫苗开发对防治TGEV感染具有重要价值。制备纯净种毒是疫苗株基础。本试验通过细胞培养、病毒培养、间接免疫荧光... 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)可导致仔猪严重腹泻,死亡率极高,是危害养猪业的重要病毒。免疫接种是预防TGEV感染有效手段,TGEV疫苗开发对防治TGEV感染具有重要价值。制备纯净种毒是疫苗株基础。本试验通过细胞培养、病毒培养、间接免疫荧光、RT-PCR、理化试验、中和试验、纯净度检测等试验技术对TGEV自主致弱毒株HR/DN1进行系统特性,结果表明,该病毒理化特性和分子生物学特性均与TGEV相符,且该病毒具有繁殖滴度高、传代稳定、病毒纯净等特点,符合种毒制备基本条件,为开发TGEV疫苗提供基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 鉴定 疫苗株
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猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)研究进展 被引量:22
12
作者 吴国平 尹燕博 吴时友 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2003年第2期29-32,共4页
关键词 形态特征 理化特性 基因 免疫原性 病原性 传染性胃肠炎病毒 tgev
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猪传染性胃肠炎病毒分子检测方法研究进展 被引量:1
13
作者 申秋平 黄子惠 +2 位作者 王冉 刘晓明 庄林林 《中国猪业》 2024年第5期56-67,共12页
猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,给全球养猪业造成了重大损失。精准检测传染性胃肠炎病毒对科学防控猪传染性胃肠炎具有重要的理论及现实意义。鉴于此,作者综述了近10年来猪传染性胃肠炎病毒分子... 猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒引起的一种高度接触性肠道传染病,给全球养猪业造成了重大损失。精准检测传染性胃肠炎病毒对科学防控猪传染性胃肠炎具有重要的理论及现实意义。鉴于此,作者综述了近10年来猪传染性胃肠炎病毒分子检测方法的研究进展,主要包括免疫学检测技术(酶联免疫吸附试验、免疫荧光方法、免疫酶组织化学法、免疫传感器系统)、基于逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的检测技术(常规RT-PCR、巢式RT-PCR、多重RT-PCR、荧光RT-PCR、多重荧光RT-PCR、纳米PCR)、核酸等温扩增技术(环介导等温扩增、重组酶聚合酶扩增、重组酶介导核酸等温扩增、恒温隔绝式RT-PCR)、芯片检测技术(液相芯片检测方法、多重液相芯片方法、cDNA芯片)等。此外,对这些方法的优缺点和传染性胃肠炎病毒分子检测方法未来发展方向进行了展望,以期为猪传染性胃肠炎的早期诊断和科学防控提供参考依据。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎 病毒 免疫学 逆转录聚合酶 链式反应 等温扩增技术 芯片技术
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微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒最佳收获时间的研究
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作者 叶晓慧 《福建畜牧兽医》 2024年第5期32-34,共3页
本试验旨在探讨使用微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,对比不同时间段培养出的抗原效价,从而确定TGEV培养的最佳收获时间,提升抗原效价,为最终生产出高质量、品质稳定的TGEV活... 本试验旨在探讨使用微载体生物反应器培养猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)的效果,对比不同时间段培养出的抗原效价,从而确定TGEV培养的最佳收获时间,提升抗原效价,为最终生产出高质量、品质稳定的TGEV活疫苗奠定基础。在生物反应器细胞上罐时每次接入细胞量达到1.2×10~9个,按相同的条件进行培养。当微载体上的细胞长至单层致密时,进行细胞接毒,接毒后4 h开始取样,接着每隔2 h留样,18 h后每隔1 h取样1次,直到载体上细胞总脱落面积达80%~85%结束取样,检测抗原效价。结果表明:在接毒后20~21 h病毒效价达到峰值,故确定在接毒后20~21 h为病毒最佳收获时间。 展开更多
关键词 微载体生物反应器 传染性胃肠炎病毒 最佳收获时间 抗原效价
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猪传染性胃肠炎病毒和猪流行性腹泻病毒二重PCR检测方法的建立 被引量:8
15
作者 路超 张莉 +2 位作者 王利丽 杨春蕾 韩伟 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期1377-1382,共6页
通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到T... 通过对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因和猪流行性腹泻病毒(PEDV)M基因进行序列分析,本试验利用DNAStar软件分别设计2对特异性引物,扩增片段长度分别为299和437bp,建立一种针对TGEV和PEDV感染的二重PCR鉴别诊断方法。该方法能同时检测到TGEV和PEDV,而对猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)等均无扩增,其检测TGEV、PEDV的极限为104拷贝/μL;用该方法对临床收集的68份疑似病毒性腹泻仔猪粪便和肠道组织样本进行检测,结果表明本试验建立的二重PCR方法具有特异性强、灵敏度高等特点,能用于临床诊断及流行病学调查。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(tgev) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 二重PCR 诊断
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猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:8
16
作者 胡鸿惠 南文金 +2 位作者 黄健强 吴静波 彭国良 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2279-2284,共6页
本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该... 本研究旨在建立一种用于临床腹泻病例中猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)快速检测的一步法双重RT-PCR方法。根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特性引物,经最佳反应条件的优化和选择,结果显示,该一步法双重RT-PCR检测方法能同时特异性扩增PEDV和TGEV,该方法可检测到稀释度1×10-5的疫苗毒。应用本方法检测2015年度实验室收集的疑似样品,PEDV阳性率为100%。本研究建立的方法快速、敏感性高、特异性强,可用于临床PEDV和TGEV的快速检测及流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 传染性胃肠炎病毒(tgev) 双重RT-PCR
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猪传染性胃肠炎病毒分离株JS2012全基因组序列分析 被引量:4
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作者 郭容利 李彬 +4 位作者 范宝超 温立斌 茅爱华 周萍 何孔旺 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1351-1358,共8页
设计32对PCR引物分片段扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)江苏分离株JS2012全基因组,扩增产物克隆到p MD19-T载体并测序。用DNAstar软件将JS2012全基因组序列与Gen Bank中其他13株TGEV株和猪呼吸道冠状病毒(PRCV-ISU-1)序列进行比对以... 设计32对PCR引物分片段扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)江苏分离株JS2012全基因组,扩增产物克隆到p MD19-T载体并测序。用DNAstar软件将JS2012全基因组序列与Gen Bank中其他13株TGEV株和猪呼吸道冠状病毒(PRCV-ISU-1)序列进行比对以及同源性分析,并绘制基因进化树。JS2012基因组序列全长28 542 bp,不包括poly A。基因组的排列为TGEV典型的基因排列序:5'-ORF1a-ORF1b-S-3a-3b-E-M-N-7-3'。TGEV JS2012株的ORF3基因和Miller组病毒一样有2个大片段的缺失。JS2012的S基因和Miller M6以及Virulent Purdue 2个强毒株有同样的序列特征。除Virulent Purdue外,其余Purdue株在1 123~1 128 bp处均有6 bp的缺失,JS2012与所有Miller株及Virulent Purdue一样,此处没有缺失。JS2012与其他TGEV毒株之间的碱基序列同源性为98.6%-99.9%,与Miller M6的碱基序列同源性最高,亲缘关系最近,同属于Miller组,与Purdue组相对较远。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(tgev) 全基因组 序列分析
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猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白(N)在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的观察 被引量:3
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作者 宋振辉 卿家超 +2 位作者 程方俊 沙莎 周廷宣 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期7-12,共6页
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核衣壳蛋白N基因,将其克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacTMDual,pFastBacTMDual-N转入DH10Bac菌中进行同源重组,经三重抗性和蓝白斑筛选,得到重组质粒Bacmid-N,将其转染昆虫细胞sf9,获得重组... 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)核衣壳蛋白N基因,将其克隆入杆状病毒供体质粒pFastBacTMDual,pFastBacTMDual-N转入DH10Bac菌中进行同源重组,经三重抗性和蓝白斑筛选,得到重组质粒Bacmid-N,将其转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-N.通过间接免疫荧光试验检测显示,重组蛋白在昆虫细胞中得到表达.体外组装TGEV病毒样颗粒(VLPs)试验表明,rBac-N单独感染sf9细胞未见形成明显的病毒样颗粒,昆虫细胞内只观察到杆状病毒粒子.试验结果为探讨TGEV核衣壳蛋白在病毒装配过程中的作用提供了依据. 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒(tgev) N基因 SF9细胞 病毒样颗粒
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猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装 被引量:8
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作者 冷勇 宋振辉 +2 位作者 卿家超 翟少华 买买提.艾孜子 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1432-1437,共6页
利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual,获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM,将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆... 利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆人载体pFastBac^TM Dual,获得转移质粒pFastBac^TM Dual-M和pFastBac^TM Dual-M-sM,将重组质粒转化至DHl0Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM。通过WesternBlot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达。将重组杆状病毒rBac-M和rBae-M-sM分别感染sf9昆虫细胞,进行TGEV病毒样颗粒(VLPs)的体外组装试验。结果表明,M蛋白在sf9细胞内单独表达,M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达,都可形成TGEV病毒样颗粒,而且病毒粒子大小不等,直径在61~101nm。试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒tgev M基因 sM基因 SF9细胞 病毒样颗粒
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猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒A多重荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量:15
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作者 李军 蔡良语 +9 位作者 陈兵 刘建利 孙洁 陈书琨 林庆燕 陶虹 吴绍强 卢体康 陈金顶 秦智锋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期801-805,共5页
为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特... 为对引起腹泻症状的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪轮状病毒A(PRoVA) 3种病毒同时快速地鉴别检测,本研究对GenBank中登录的TGEV的S基因、PEDV的S基因、PRo VA的NSP基因进行序列分析,分别设计了针对3种病毒的特异性引物和用3种荧光基团标记的核酸探针,通过条件优化建立了针对这3种病毒的多重荧光定量RT-PCR方法。结果显示,该方法能够特异性检测PEDV、TGEV和PRo VA,而与其它病原无交叉反应;对TGEV、PEDV和PRo VA的最低检测量分别为1.12拷贝/μL、39拷贝/μL和25拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于5%;该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率达100%。该方法快速、敏感,检测结果准确可靠,为猪病毒性腹泻疾病的流行病学调查和分子生物学快速诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒A 荧光定量RT-PCR检测 多重检测
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