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出生后早期代谢型谷氨酸受体4在小鼠耳蜗毛细胞中的表达特征
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作者 陈知己 刘雪莱 +5 位作者 周小清 佘雨婷 冯梦龙 邝韶景 方红雁 袁伟 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第11期1227-1234,共8页
目的探究代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠耳蜗基底膜的表达定位,及其从出生后至毛细胞突触成熟的表达变化。方法10只健康的3月龄C57BJ/6L野生型小鼠(5只雄鼠,5只雌鼠,体质量25~35 g)配对繁殖,分别... 目的探究代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠耳蜗基底膜的表达定位,及其从出生后至毛细胞突触成熟的表达变化。方法10只健康的3月龄C57BJ/6L野生型小鼠(5只雄鼠,5只雌鼠,体质量25~35 g)配对繁殖,分别选取出生后P1~P30不同日龄的小鼠,采用分频听觉脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测P12、P14、P16、P21、P30日龄小鼠在45.2、32.0、22.6、16.0、11.3、8.0、5.6和4.0 kHz的听反应阈,用免疫荧光标记联合激光共聚焦显微镜扫描耳蜗基底膜铺片。观察mGluR4与突触相关蛋白Ctbp2和Snap25的表达定位关系,以及统计随突触成熟发生的荧光斑数量变化。结果在小鼠ABR检测中发现,P12日龄小鼠在所有频率最大刺激声强度下均未能诱发出分化良好的波形,70%的P14日龄小鼠能够被至少1个频率的刺激声诱发出分化良好的Ⅰ波。在P14、P16、P21、P30日龄小鼠ABR测试中,50%的小鼠无法被45.2 kHz刺激声诱发出ABR波形,87.5%的小鼠无法被32.0 kHz刺激声诱发出ABR波形,其他频率的听反应阈随小鼠日龄增加逐步降低。在基底膜铺片免疫荧光染色检测中发现,mGluR4表达于出生后的小鼠耳蜗基底膜,其荧光强度在内毛细胞(inner hair cell,IHC)强于外毛细胞(outer hair cell,OHC)。在P11小鼠的IHC中即能够检测到清晰明显的mGluR4荧光斑点,其存在于细胞表达Snap25的突触囊泡胞吐活性区,但与突触蛋白Ctbp2无明显共标。在突触区mGluR4的荧光斑点信号统计中,P30小鼠荧光斑点数量多于P14小鼠(P<0.05)。结论在小鼠出生后早期,mGluR4在IHC突触区表达逐渐增加。随着突触功能成熟其可能参与囊泡胞吐调控,并可能通过自身药理特性抑制谷氨酸递质释放,影响突触可塑性。 展开更多
关键词 代谢型谷氨酸受体4 内毛细胞 耳蜗 突触
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代谢型谷氨酸受体4通过Rab5抑制神经病理性痛 被引量:1
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作者 陈锐 王华 江伟 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期139-143,共5页
目的探讨代谢型谷氨酸受体4(mGluR4)激活后抑制神经病理性痛的机制。方法首先取24只SD大鼠,鞘内置管后随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和脊神经根结扎(SNL)组(n=12)。空白对照组只行鞘内置管术,其余大鼠均于术前和... 目的探讨代谢型谷氨酸受体4(mGluR4)激活后抑制神经病理性痛的机制。方法首先取24只SD大鼠,鞘内置管后随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和脊神经根结扎(SNL)组(n=12)。空白对照组只行鞘内置管术,其余大鼠均于术前和术后第1~6日测量50%机械缩足阈值(50%PWT);其次,将SNL组大鼠于术后第7日起,随机分为SNL+生理盐水组(n=6)和SNL+VU0155041组(n=6),分别予以鞘内注射生理盐水和VU0155041(500nm01)10μL,2次/d×7d,注药前和注药后30min测量其50%PWT。最后,末次给药后1h取空白对照组、SNL+生理盐水组和SNL+VU0155041组大鼠左侧脊髓腰膨大处送检基因芯片并利用Western blotting检测mGluR4及Rab5各亚型的表达变化。结果SNL大鼠术后1~6d其手术同侧后肢50%PwT较空白对照组及假手术组明显降低(P〈0.01);SNL+VU0155041组大鼠手术同侧后肢50%PwT与SNL+生理盐水组相比自给药第4日起逐渐升高(P〈0.01);Agilent表达谱基因芯片结果显示:SNL+生理盐水组的Rab5含量高于空白对照组,而空白对照组和SNL+VU0t55041组相比无明显差异;Western blotting结果显示:SNL+生理盐水组的mGluR4表达明显低于空白对照组和SNL+VU0155041组(P〈0.05),而Rab5A和Rab5C的表达明显高于空白对照组和SNL+VU0155041组(P〈0.05),Rab5B在3组中的表达差异无统计学意义(P〉0.05)。结论mGluR4激活后可能是通过Rab5A和Rab5C调控突触囊泡递质释放从而影响神经病理性痛。 展开更多
关键词 代谢型谷氨酸受体4 Rab5 神经病理性痛
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代谢型谷氨酸受体4在ES细胞体外分化为心肌细胞中的表达研究 被引量:2
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作者 郑蓓 周立民 +2 位作者 赵青威 张幸国 朱丹雁 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期366-372,共7页
目的:探索代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)体外分化为心肌细胞中的表达情况。方法:采用悬滴培养法,体外诱导ES细胞分化为心肌细胞,分别以维甲酸(retinoic a... 目的:探索代谢型谷氨酸受体4(metabotropic glutamate receptor 4,mGluR4)在小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES细胞)体外分化为心肌细胞中的表达情况。方法:采用悬滴培养法,体外诱导ES细胞分化为心肌细胞,分别以维甲酸(retinoic acid,RA)和溶剂二甲亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)作为阳性对照和阴性对照;利用免疫荧光法和流式细胞术,鉴定ES细胞衍生心肌细胞团中心肌特异性蛋白α-actinin/Troponin-T和mGluR4共表达情况;用Western Blot法,考察ES细胞定向分化为心肌细胞过程中mGluR4蛋白表达水平;同时观察了小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达变化。结果:ES细胞及其分化来的早期心肌细胞团均表达mGluR4,随着心肌细胞逐渐成熟,mGluR4蛋白表达水平下调。流式细胞术结果显示,贴壁分化11 d的细胞团中mGluR4与心肌特异性蛋白Troponin-T共表达细胞比率仅为(3.00±1.00)%。同时,小鼠胚胎心脏发育过程中mGluR4基因和蛋白表达也呈下降趋势,直至成体小鼠心脏中不表达mGluR4蛋白。结论:ES细胞体外分化为心肌细胞过程中mGluR4有表达并呈下调趋势,与小鼠体内心脏发育过程中mGluR4表达情况基本一致。 展开更多
关键词 代谢型谷氨酸受体4 胚胎干细胞 肌细胞 心脏/细胞学 受体 谷氨酸 心肌细胞
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第三组代谢型谷氨酸受体亚型对神经病理性痛的影响
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作者 陈锐 王华 +1 位作者 周全红 江伟 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1328-1332,共5页
目的探讨第三组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)亚型对神经病理性痛的调节作用。方法取30只SD大鼠,随机分为5组(n=6),于鞘内置管术后第5天分别给予单次鞘内注射等容量(10μL)生理盐水、L(+)-2-氨基-4-膦酰基丁酸(L-AP4)、VU0155041、AMN082和(... 目的探讨第三组代谢型谷氨酸受体(mGluRs)亚型对神经病理性痛的调节作用。方法取30只SD大鼠,随机分为5组(n=6),于鞘内置管术后第5天分别给予单次鞘内注射等容量(10μL)生理盐水、L(+)-2-氨基-4-膦酰基丁酸(L-AP4)、VU0155041、AMN082和(S)-3,4-二甲酸苯基甘氨酸(DCPG),注药后每隔15 min和30 min分别测量大鼠50%机械缩足阈值(50%PWT)和缩足潜伏期(PWL)。另取30只SD大鼠,随机分为5组(n=6),鞘内置管并行脊神经根结扎(SNL),术后第7天给予单次鞘内注射生理盐水及同上药物10μL,注药后同法测量大鼠50%PWT和PWL。再取18只SD大鼠,随机分为空白对照组、SNL组、SNL+注药组(生理盐水、VU0155041、AMN082和DCPG)(n=3),注药组于30 min后与其余各组同取腰膨大处脊髓,Western blotting检测mGluR4、mGluR7和mGluR8的表达。结果 L-AP4、VU0155041、AMN082和DCPG对正常大鼠的痛域无影响(P>0.05);但对神经病理性痛大鼠有不同程度的镇痛作用(P<0.05),其中以VU0155041效果最为显著。与空白对照组相比,SNL组手术同侧脊髓只有mGluR4表达水平降低(P<0.05);与生理盐水组相比,其他注药组只有mGluR4表达水平升高(P<0.05);而mGluR7在各组中的表达水平差异无统计学意义(P>0.05),mGluR8在脊髓基本不表达。结论第三组mGluRs中主要是mGluR4对神经病理性痛有调节作用。 展开更多
关键词 第三组代谢谷氨酸受体 4代谢谷氨酸受体 神经病理性痛
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GRM4正向别构调节剂抑制乳腺癌细胞的增殖并促进细胞凋亡 被引量:1
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作者 李林海 肖斌 +5 位作者 郭梓璇 赖斯华 古丽米热.安外尔 符玉文 陈建芸 孙朝晖 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期561-566,共6页
背景与目的:代谢型谷氨酸受体4(glutamate metabotropic receptor 4,GRM4)在多种恶性肿瘤中高表达并与肿瘤患者的预后相关,但GRM4在乳腺癌中的生物学作用仍不清楚。本研究拟探讨GRM4的两种正向别构调节剂VU0364439及VU0364770对乳腺癌... 背景与目的:代谢型谷氨酸受体4(glutamate metabotropic receptor 4,GRM4)在多种恶性肿瘤中高表达并与肿瘤患者的预后相关,但GRM4在乳腺癌中的生物学作用仍不清楚。本研究拟探讨GRM4的两种正向别构调节剂VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞的增殖及凋亡的影响,进而为乳腺癌的靶向治疗提供思路。方法:在体外培养的乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和SK-BR-3中分别单独加入VU0364439、VU0364770以及联合使用两种试剂,利用Cell Titer-Glo?发光细胞活力测定法定量检测各组乳腺癌细胞系的增殖活性;利用AnnexinⅤ-PI双染法检测各组乳腺癌细胞系的凋亡水平;通过实时荧光定量聚合酶链反应(realtime fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)技术测定GRM4基因在6种乳腺癌细胞系中的表达情况,在GRM4表达水平最高的细胞中单独加入或联合使用VU0364439及VU0364770,用RTFQ-PCR检测GRM4基因表达的改变。结果:与对照组相比,单独使用及联合使用VU0364439及VU0364770显著抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231和SK-BR-3的增殖水平,并促进MCF-7细胞凋亡现象的发生;联合使用与单独使用VU0364439及VU0364770对乳腺癌细胞增殖及凋亡的作用差异无统计学意义(P>0.05);RTFQ-PCR实验表明GRM4在MCF-7细胞中的表达水平最高;在MCF-7细胞中分别单独使用或联合使用VU0364439及VU0364770均能激活GRM4的表达。结论:GRM4的正向别构调节剂能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进细胞凋亡,其作用可能是通过激活GRM4基因的表达引起的,本研究为探索GRM4在乳腺癌中的作用机制以及开发新的乳腺癌靶向治疗方法奠定了基础。 展开更多
关键词 代谢型谷氨酸受体4 正向别构调节剂 乳腺癌 靶向治疗
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