小菜蛾对杀螟丹抗性相关序列的代表性差异分析 被引量：1

1

作者 程罗根 陈之浩 +1 位作者 张晓飞 李忠英 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2003年第2期14-16,共3页

采用代表性差异分析方法 ,以小菜蛾的敏感品系作为驱赶扩增子 ,抗杀螟丹近等基因系作为检测扩增子 ,通过 3轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的差异片段 ,经亚克隆测序并与GenBank等数据库同源比较 ,发现其中一个亚克隆序列与P4 5 0... 采用代表性差异分析方法 ,以小菜蛾的敏感品系作为驱赶扩增子 ,抗杀螟丹近等基因系作为检测扩增子 ,通过 3轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的差异片段 ,经亚克隆测序并与GenBank等数据库同源比较 ,发现其中一个亚克隆序列与P4 5 0基因有部分同源性 ,其余亚克隆与已知基因序列的同源性较低 ,判断这些序列可能是新基因的片段。 展开更多

关键词 小菜蛾 杀螟丹 抗性 相关序列 代表性差异分析 亚克隆测序

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代表性差异分析技术与疾病基因的克隆 被引量：1

2

作者 杨林 袁爱力 +1 位作者 李勇 吕有勇 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期271-274,共4页

本文结合代表性差异分析的技术原理和方法 ,介绍了近年来该方法在肿瘤基因克隆、新病原体的筛查和多态相关标志物的分离等方面的应用 ,并提出了存在的问题和今后的展望。

关键词 代表性差异分析 基因克隆 疾病基因

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甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析方法在筛查人非小细胞肺癌组织中高甲基化修饰序列的应用

3

作者 李勇 郭榕 宁金鹰 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期644-648,共5页

目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用... 目的探讨甲基化CpG岛扩增联合代表性差异分析(MCA/RDA)方法在筛查人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中高甲基化修饰序列的应用。方法以92对NSCLC和癌旁对照组织DNA为研究对象,应用MCA/RDA方法筛查肺癌组织DNA中高甲基化修饰的CpG岛序列。应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和甲基化特异性PCR(methylation-sensitive PCR,MSP)技术,分析胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-4)基因启动子区CpG岛的甲基化修饰与基因表达的相关性。结果获得5个经Slot Blot验证在肺癌组织中高甲基化修饰的CpG岛序列(IGFBP-4、KLK10、ADAM23、GADD45G和DUOX1)。甲基化抑制剂5-aza-2'-deoxycytidine处理NSCLC细胞可明显上调IGFBP-4基因的表达。在41例(44.6%)癌组织中检测到IGFBP-4表达水平显著低于癌旁对照组织。47例(51.1%)癌组织检测到IGFBP-4高甲基化显著高于癌旁组织的检出率(16.3%,15/92;P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与基因表达呈负相关(r=-0.396,P<0.001)。IGFBP-4高甲基化与TNM分期(P=0.013)和淋巴结转移(P=0.022)相关。结论应用MCA/RDA方法筛查到5个在NSCLC组织中高甲基化修饰的CpG岛序列,并证实IGFBP-4启动子区CpG岛的高甲基化可能通过抑制基因的表达参与了NSCLC的发生。 展开更多

关键词 癌 非小细胞肺 甲基化CpG岛扩增 代表性差异分析 胰岛素样生长因子结合蛋白质4

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抗双酰胺类杀虫剂小菜蛾的cDNA代表性差异分析

4

作者 王莹莹 李广阅 +2 位作者 徐巨龙 孙诗晴 薛超彬 《山东农业科学》 2018年第10期25-29,共5页

小菜蛾(Plutella xylostella L.)为世界性十字花科蔬菜的重要害虫之一,由于其繁殖力较强,世代重叠严重,加上一些地区生产上用药频繁,导致小菜蛾对多种杀虫剂产生了抗性。随着氯虫苯甲酰胺和氟苯虫酰胺等双酰胺类杀虫剂的大量应用,小菜... 小菜蛾(Plutella xylostella L.)为世界性十字花科蔬菜的重要害虫之一,由于其繁殖力较强,世代重叠严重,加上一些地区生产上用药频繁,导致小菜蛾对多种杀虫剂产生了抗性。随着氯虫苯甲酰胺和氟苯虫酰胺等双酰胺类杀虫剂的大量应用,小菜蛾对该药剂的抗性问题也日益受到关注。为了研究小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性机制,本试验利用敏感品系cDNA作为"驱动子"(Drivers),小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺品系、抗氟苯虫酰胺品系cDNA作为"检测子"(Testers),通过改进的cDNA代表性差异分析法(cDNA rrepresentational difference analysis,cDNA RDA),在小菜蛾抗氯虫苯甲酰胺品系、抗氟苯虫酰胺品系中获得2个与28S rRNA基因有较高同源性的序列,其中一个序列(DP3-1)与棉铃虫细胞色素P450类TBP蛋白同源性为97%,另外一个序列(DP3-2)与赤拟谷盗的TcasGA2_TC010626蛋白基因同源性为93%;此外,两个抗性品系中各获得一个未知序列。本研究为进一步探讨小菜蛾对双酰胺类杀虫剂的抗性机制提供了新线索。 展开更多

关键词 小菜蛾 cDNA代表性差异分析 双酰胺类杀虫剂 抗性机制

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应用代表性差异分析法筛选人癌候选抑癌基因

5

作者 湛凤凰 江宁 +5 位作者 曹利 邓龙文 周鸣 谢奕 曾朝阳 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期165-169,共5页

运用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ），以正常人鼻咽上皮细胞及鼻咽癌ＨＮＥ１细胞作为比较的样品来源，分离了四个在鼻咽癌中缺失的ｃＤＮ... 运用ｃＤＮＡ代表性差异分析法（ｃＤＮＡｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃＤＮＡＲＤＡ），以正常人鼻咽上皮细胞及鼻咽癌ＨＮＥ１细胞作为比较的样品来源，分离了四个在鼻咽癌中缺失的ｃＤＮＡ片段．以此四个片段作探针，分别进行ＤＮＡ杂交、ＲＮＡ杂交，结果显示，这些差异性的ｃＤＮＡ序列确实来自正常人鼻咽上皮且只在其中表达和／或在鼻咽癌ＨＮＥ１中表达降低，并在鼻咽癌病人中存在不同程度的缺失．序列分析结果表明这些差异性表达的基因为具有相当抑癌基因功能的已知基因和可能与鼻咽癌相关的抑癌基因的新基因．从而说明ｃＤＮＡＲＤＡ是一种高效、敏感。 展开更多

关键词 鼻咽癌 抑癌基因 cDNA代表性差异分析法

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胸膜肺炎放线杆菌菌影疫苗免疫仔猪前后差异表达基因的鉴定与分析 被引量：1

6

作者 杨舒心 雷连成 +3 位作者 杜崇涛 王瑜 谢芳 韩文瑜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期276-280,共5页

为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析。试验结果表明,正向... 为获得胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影诱导的仔猪淋巴细胞差异表达基因,本研究应用代表性差异分析技术构建APP菌影免疫前后正、反两个外周血淋巴细胞cDNA差减文库,并对文库中的差异基因进行克隆、测序和生物信息学分析。试验结果表明,正向文库中获得11个表达丰度上调的基因,其中7个基因与已知基因具有相似性,4个为未知新基因,经进一步功能注解发现,正向文库功能基因包括免疫信号传导相关蛋白RhoE、防御相关蛋白糖基转移样酶-1、上皮膜蛋白2、白介素-17和肿瘤免疫相关的周期素依赖性蛋白激酶抑制因子3等,这些功能基因表达丰度升高,可能有助于机体建立抗APP的免疫应答。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 外周血淋巴细胞 代表性差异分析 差异表达基因

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应用cDNA RDA联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的方法学分析 被引量：1

7

作者 彭依群 邓小戈 +3 位作者 翟木绪 隋国良 王敏 廖二元 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2005年第4期413-417,共5页

目的探讨采用cDNA代表性差异分析法(representational difference analysis,RDA)联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇(E2)干预MG63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNARDA... 目的探讨采用cDNA代表性差异分析法(representational difference analysis,RDA)联合cDNA阵列点杂交筛查差异表达基因的可行性及局限性。方法将17β雌二醇(E2)干预MG63细胞cDNA分别制备成检测和驱赶扩增子进行消减杂交作为整个cDNARDA的内部质控,以干预组扩增子、对照组扩增子和第4轮双向消减产物为模板,行内对照基因GAPDH的RTPCR进行消减效率分析,Southern杂交证实消减产物来源,快速Northern杂交证实消减产物确实呈差异表达;克隆到pGEMTeasy载体,转化JM109感受态细菌并铺Amp+XgalIPTG琼脂皿得到差异表达文库,随机挑取白色单菌落培养后点成尼龙阵列膜,分别与干预组和对照组扩增子及第4轮消减产物杂交,得到差异表达克隆用于后续研究。结果内部质控结果显示,第3轮消减杂交后,PCR未见差异性产物扩增;cDNARDA共得到3个雌二醇诱导表达上调条带和2个表达下调条带。Southern杂交结果显示在检测扩增子及第1～4轮差异产物中均可见阳性杂交信号,而驱赶扩增子中无杂交信号;快速Northern杂交证实干预组细胞总RNA的两处杂交信号均较对照组强;阵列膜同一克隆两个点对应的杂交信号呈高度相关一致性,共得到120个差异表达克隆(56个表达上调,64个表达下调)。结论cDNA代表性差异分析法联合cDNA阵列点杂交方法能有效快速高通量筛查E2诱导MG63差异表达基因。 展开更多

关键词 cDNA代表性差异分析法 CDNA阵列 基因表达 方法学

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小菜蛾对杀虫双抗性遗传的RDA分析 被引量：3

8

作者 张晓飞 程罗根 +2 位作者 陈之浩 于光 李忠英 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2003年第1期78-82,共5页

采用代表性差异分析法 (RDARepresentationaldifferenceanalysis)初步研究了小菜蛾两个品系 ,敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异 .用敏感品系作为驱动扩增子 (driver) ,抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子 (tester) ,通过四... 采用代表性差异分析法 (RDARepresentationaldifferenceanalysis)初步研究了小菜蛾两个品系 ,敏感品系和抗杀虫双近等基因系之间基因组的差异 .用敏感品系作为驱动扩增子 (driver) ,抗杀虫双近等基因系作为检验扩增子 (tester) ,通过四轮消减杂交后 ,得到两个差异片段 ,范围在 1 50bp至 30 0bp之间 。 展开更多

关键词 小菜蛾 近等基因系 杀虫双抗性 代表性差异分析法

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胸膜肺炎放线杆菌血清1型与5型基因组DNA差异基因的筛选与鉴定 被引量：2

9

作者 谢芳 韩文瑜 +3 位作者 杜崇涛 周靓 杨舒心 雷连成 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期757-761,共5页

为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因... 为了解胸膜肺炎放线杆菌(APP)不同血清型间的差异基因,本研究采用代表性差异分析(RDA)方法,筛选APP血清1型CVCC259株和血清5型CVCC263株的差异基因。经BLAST分析和Southern blot验证,分别获得CVCC259株的8个和CVCC263株的12个特异基因片段。本实验为APP感染和致病机制的研究奠定基础。 展开更多

关键词 胸膜肺炎放线杆菌 代表性差异分析 差异基因 鉴定

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小菜蛾对溴氰菊酯抗性相关的DNA片段的克隆与分析 被引量：2

10

作者 程罗根 陈之浩 +1 位作者 张晓飞 李忠英 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期526-529,共4页

采用代表性差异分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)方法 ,以小菜蛾Plutellaxylostella (L .)的敏感品系作为对照组 ,溴氰菊酯抗性近等基因系 (nearisogenicline)作为测试组 ,通过三轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的... 采用代表性差异分析 (representationaldifferenceanalysis ,RDA)方法 ,以小菜蛾Plutellaxylostella (L .)的敏感品系作为对照组 ,溴氰菊酯抗性近等基因系 (nearisogenicline)作为测试组 ,通过三轮消减杂交得到大小为 15 0～ 30 0bp的差异扩增带 ,经亚克隆测序并与GenBank等数据库同源比较 ,发现差异片段与已知抗性相关基因无同源性 ;以随机选取的差异片段作探针进行Southernblot分析 ,在测试组扩增子和三轮差异产物中都获得了阳性结果 ,而在对照组扩增子中的结果是阴性的。 展开更多

关键词 小菜蛾 溴氰菊酯 抗药性 代表性差异分析法 DNA测序

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布鲁氏菌强毒株与弱毒株基因组DNA差异基因筛选与鉴定 被引量：2

11

作者 张俊敏 韩文瑜 +5 位作者 雷连成 孙长江 赵瑞利 冯新 赵伟栋 杜涛峰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期513-518,共6页

本研究应用代表性差异分析技术(RDA)对流产布鲁氏菌强毒株544A和弱毒株104M进行基因组差减分析。经过3轮差减杂交,获得强毒株特有的9条差异片段和弱毒株特异的17条差异片段。经BLAST分析和PCR鉴定,最终证实3条差异片段,与流产布鲁氏菌... 本研究应用代表性差异分析技术(RDA)对流产布鲁氏菌强毒株544A和弱毒株104M进行基因组差减分析。经过3轮差减杂交,获得强毒株特有的9条差异片段和弱毒株特异的17条差异片段。经BLAST分析和PCR鉴定,最终证实3条差异片段,与流产布鲁氏菌经典弱毒株S19同源性在98%～99%之间,只在弱毒株104M基因组中检测出,而在强毒株544A中不存在。该实验为建立布鲁氏菌自然感染菌与疫苗株的基因鉴别诊断方法奠定了基础。 展开更多

关键词 流产布鲁氏菌 代表性差异分析 差异片段 鉴定

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差异表达基因分离技术的研究进展 被引量：3

12

作者 高雪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期71-74,共4页

分离并克隆差异表达基因是生命科学的研究热点。近年来,以差示筛选、扣除杂交等基本方法为基础,先后出现了抑制差减杂交,微阵列技术等多种分析差异表达基因的技术,使差异表达基因分离方法不断完善。对这些方法的优缺点、发展趋势及应用... 分离并克隆差异表达基因是生命科学的研究热点。近年来,以差示筛选、扣除杂交等基本方法为基础,先后出现了抑制差减杂交,微阵列技术等多种分析差异表达基因的技术,使差异表达基因分离方法不断完善。对这些方法的优缺点、发展趋势及应用前景进行了简要综述。 展开更多

关键词 差异表达基因 差示筛选 扣除杂交 MRNA差异显示技术 RNA指纹图谱技术 代表性差异分析 抑制差减杂交 微阵列技术

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通过cDNARDA法分离和识别盐藻(Dunaliella salina)盐胁迫相关基因 被引量：10

13

作者 方孝东 黄薇 +2 位作者 林栖凤 李冠一 屈良鹄 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期67-72,共6页

采用cDNA代表性差异分析 (RDA)技术 ,对盐藻在盐胁迫时差异表达的基因进行了分离鉴定 .在分离到的 10个基因中 ,有 5个与已知基因同源 (包括叶绿素a b结合蛋白基因、蛋白磷酸酶I催化亚基基因和 3个核糖体蛋白基因 ) ,还有 5个未知功能... 采用cDNA代表性差异分析 (RDA)技术 ,对盐藻在盐胁迫时差异表达的基因进行了分离鉴定 .在分离到的 10个基因中 ,有 5个与已知基因同源 (包括叶绿素a b结合蛋白基因、蛋白磷酸酶I催化亚基基因和 3个核糖体蛋白基因 ) ,还有 5个未知功能基因则是首次在盐藻中被分离 .值得注意的是 ,所有这 5个已知基因的功能都与细胞分裂或盐胁迫有关 .结果表明 :取样时盐藻细胞仍处于恢复阶段 ,所分离到的基因对于盐藻耐盐可能具有重要意义 ;蛋白磷酸酶I的下调表达可能是盐藻调节离子平衡的一个重要过程和细胞分裂受阻的原因所在 ;盐藻减缓细胞分裂速度可能是为了减少能量消耗 ,以留出足够的能量来应对盐胁迫 ;其它 5个未知基因可能也与盐藻适应盐胁迫机制有关 . 展开更多

关键词 盐藻 盐胁迫 差异表达 基因分离鉴定 代表性差异分析

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猪Torque teno病毒研究进展 被引量：2

14

作者 伍志伟 王红宁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期331-334,共4页

1997年,Nishizawa等应用运用代表性差异分析（Representational difference analysis,RDA）技术从不明原因的输血后肝炎患者血清中发现一种新的环状单链DNA病毒,并以患者名字将其命名为Torque teno virus（TTV）,又因TTV与输血传播病毒... 1997年,Nishizawa等应用运用代表性差异分析（Representational difference analysis,RDA）技术从不明原因的输血后肝炎患者血清中发现一种新的环状单链DNA病毒,并以患者名字将其命名为Torque teno virus（TTV）,又因TTV与输血传播病毒（Transfusion transmitted virus,TTV）巧合,因此被许多科学家亦称为输血传播病毒。 展开更多

关键词 DNA病毒 代表性差异分析 VIRUS 猪 输血 TTV 科学家 患者

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人成骨肉瘤MG-63细胞雌激素相关基因的分离

15

作者 彭依群 廖二元 邓小戈 《湖南医科大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第5期459-462,共4页

目的 :筛查 17β雌二醇 (17β estradiol,E2 )诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞株差异表达cDNA片段 ,寻找雌激素相关基因。方法 :改良的cDNA代表性差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis,cDNARDA)分离E2 干预MG 6 3细胞株表达上... 目的 :筛查 17β雌二醇 (17β estradiol,E2 )诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞株差异表达cDNA片段 ,寻找雌激素相关基因。方法 :改良的cDNA代表性差异分析法 (cDNArepresentationaldifferenceanalysis,cDNARDA)分离E2 干预MG 6 3细胞株表达上调cDNA片段 ,经Southern和快速Northern杂交证实表达上调的cDNA片段来源后 ,将其克隆到 pGEM Teasy载体 ,蓝白筛选后挑取阳性克隆进行测序和同源比较分析 ,最后选取其中部分克隆行Northern印迹杂交。结果 :第 4轮消减杂交得到 5个E2 诱导人成骨肉瘤MG 6 3细胞表达上调的差异cDNA条带 ,Southern和快速Northern杂交证明表达上调的cDNA片段来自E2 干预的MG 6 3细胞 ;随机选 2 5个克隆测序得到13个序列 ,7个与已知基因高度同源 ;其中 2个克隆经Northern杂交证实E2 干预后表达上调。结论 :cDNARDA能有效筛查差异表达基因 ,人成骨肉瘤MG 6 3细胞中某些基因受雌激素诱导表达上调 ,可能与绝经后骨质疏松的发病相关。 展开更多

关键词 cDNA代表性差异分析法 雌激素 MG-63细胞 差异表达基因

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猪细环病毒实验室诊断方法的研究进展

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作者 梅淼 赵玲 +1 位作者 朱玲 李淞 《养猪》 2012年第1期121-123,共3页

1997年12月，日本学者Nishizawa等利用代表性差异分析（representationaldifferenceanalysis）法，首次从一位名为TorqueTero的输血后非甲一非庚型肝炎病人的血清中克隆获得了一种新的不明病原DNA（N22），

关键词 病毒实验室 诊断方法 代表性差异分析 日本学者 猪 病原 肝炎

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