腺病毒载体介导肝细胞生长因子基因对冠状动脉再狭窄的预防作用

1

作者 刘本德 吴红军 曾秋棠 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期75-77,81,共4页

目的应用重组腺病毒载体介导的肝细胞生长因子(HGF)基因转染血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC),探讨HGF基因对其凋亡的诱导作用。方法以肝细胞中抽提的总RNA为模板,反转录cDNA,采用RT-PCR技术获得HGF基因,并引入酶切位点,转染大... 目的应用重组腺病毒载体介导的肝细胞生长因子(HGF)基因转染血管内皮细胞(VEC)及血管平滑肌细胞(VSMC),探讨HGF基因对其凋亡的诱导作用。方法以肝细胞中抽提的总RNA为模板,反转录cDNA,采用RT-PCR技术获得HGF基因,并引入酶切位点,转染大肠埃希菌,筛选阳性菌落,经酶切及测序证实后,转染腺病毒,制造病毒包涵体,经3轮扩増,制备高效表达HGF基因腺病毒载体(Ad-HGF)。以此感染VEC及VSMC,设为Ad-HGF组;再以人工合成HGF培养VEC及VSMC为阳性对照组(HGF组);以未感染Ad-HGF的细胞为阴性对照(对照组)。并采用流式细胞仪检测缺氧情况下各组细胞的凋亡率。结果VEC的Ad-HGF、HGF组细胞凋亡率均低于对照组,差异均有极显著性意义(均P<0.01),但VSMC的3组细胞凋亡率差异无显著性意义(P>0.05)。结论腺病毒载体介导HGF基因感染VEC后能在缺氧情况下有效地阻止VEC发生凋亡,但不能有效抑制VSMC凋亡,提示对冠状动脉再狭窄有预防作用。 展开更多

关键词 人重组腺病毒介导肝细胞生长因子基因 血管内皮细胞 血管平滑肌细胞 细胞凋亡 缺氧 冠状动脉再狭窄

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人酸性成纤维细胞生长因子基因重组腺病毒粘粒载体的构建

2

作者 章斌 梅举 +1 位作者 张宝仁 顾俊彦 《实用医学杂志》 CAS 2002年第11期1150-1152,共3页

目的 :构建人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)重组腺病毒粘粒载体。方法 :抽取人胎脑组织mRNA ,经RT PCR获取aFGF基因 ,测序后将其插入腺病毒粘粒载体pAxCAwt的SwaI位点。结果 :RT PCR合成的DNA片段经克隆、测序后证实为aFGF基因 ,酶切... 目的 :构建人酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)重组腺病毒粘粒载体。方法 :抽取人胎脑组织mRNA ,经RT PCR获取aFGF基因 ,测序后将其插入腺病毒粘粒载体pAxCAwt的SwaI位点。结果 :RT PCR合成的DNA片段经克隆、测序后证实为aFGF基因 ,酶切结果显示 ,aFGF腺病毒重组粘粒 (pAxCAwt aFGF)中aFGF的插入方向正确。结论 :构建的aFGF腺病毒重组粘粒 (pAxCAwt aFGF)可用于进一步的基因治疗的研究中 。 展开更多

关键词 人酸性成纤维细胞生长因子 AFGF 基因重组 腺病毒粘粒载体 基因治疗 心肌缺血 治疗性血管生长 冠心病 CHD

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重组腺病毒载体介导的人野生型p53基因增强肝癌细胞对化疗药物的敏感性 被引量：4

3

作者 施明 王福生 +5 位作者 刘明旭 张冰 雷周云 邱兆华 高兰兴 吴祖泽 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第2期80-83,共4页

目的 :观察表达人野生型p5 3 ,GM CSF和B7 1基因的重组腺病毒载体 (BB 10 2 )提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性。方法 :BEL 74 0 2 ,HLE和HuH 73株肝癌细胞被 5 0MOI的BB 10 2转染后 ,Westernblot检测p5 3基因的表达 ,MTT方法检测肝癌细... 目的 :观察表达人野生型p5 3 ,GM CSF和B7 1基因的重组腺病毒载体 (BB 10 2 )提高肝癌细胞对化疗药物的敏感性。方法 :BEL 74 0 2 ,HLE和HuH 73株肝癌细胞被 5 0MOI的BB 10 2转染后 ,Westernblot检测p5 3基因的表达 ,MTT方法检测肝癌细胞对化疗药物的敏感性。结果 :当MOI为 5 0pfu/细胞时 ,腺病毒载体对 3株肝癌细胞的转染效率均达到 80 %以上。转染BB 10 2后 ,HLE和HuH 7细胞对顺铂的敏感性分别提高 11倍和 2 8倍 ,对丝裂霉素 C的敏感性分别提高 3 .75倍和 2 0倍。而BB 10 2的转染对BEL 74 0 2细胞的化疗敏感性没有影响。结论 :BB 10 2腺病毒载体转染后能显著提高p5 3基因突变的HLE和HuH 7细胞对顺铂和丝裂霉素 C的敏感性 ,因而增强顺铂和丝裂霉素 C对HLE和HuH 展开更多

关键词 重组腺病毒 P53基因 肝细胞癌 顺铂 丝裂霉素-C 药敏试验

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含血管内皮生长因子启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒的制备及其体外杀伤作用观察 被引量：5

4

作者 陈建发 黄宗海 +2 位作者 俞金龙 厉周 车小燕 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第6期623-627,共5页

目的应用AdEasier-1系统高效制备含血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒并观察其体外肿瘤杀伤作用。方法以JM109细菌基因组为模板,PCR扩增出含HindⅢ/BamHⅠ酶切位点的CD基因,亚克隆到pREP8,继而用HindⅢ/XbaⅠ切出... 目的应用AdEasier-1系统高效制备含血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动CD自杀基因重组腺病毒并观察其体外肿瘤杀伤作用。方法以JM109细菌基因组为模板,PCR扩增出含HindⅢ/BamHⅠ酶切位点的CD基因,亚克隆到pREP8,继而用HindⅢ/XbaⅠ切出含pA加尾信号的CD基因,插入到预先构建的含VEGF启动子的转移质粒pAdtrack-VEGFP构建pAdtrack-VEGFP-CD。经PmeⅠ线性化后转化AdEasier-1细菌,用25 μg/ml卡那霉素筛选阳性克隆,先后进行琼脂糖电泳和PacⅠ酶切鉴定,筛选出正确重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CD。经293细胞包装、扩增获得重组腺病毒Ad-VEGFP-CD,行PCR鉴定。通过测定细胞克隆形成率和细胞存活率观察重组腺病毒对体外培养的LoVo细胞的细胞毒作用。结果构建重组腺病毒质粒的成功率为70%(7/10)。包装扩增后重组腺病毒的滴度为4.8×1012 CFU/ml,PCR扩增结果与预期相符。在前药5-氟胞嘧啶存在下,重组腺病毒对LoVo具有明显杀伤作用,细胞克隆形成率和细胞存活率都明显下降。结论应用AdEasier-1系统可以成功制备含VEGF启动子驱动CD自杀基因的重组腺病毒,该重组体具有明显的肿瘤杀伤作用。 展开更多

关键词 腺病毒 胞嘧啶脱氨酶 基因治疗 血管内皮细胞生长因子 同源重组

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重组腺病毒介导的细胞因子基因疗法的实验研究 被引量：1

5

作者 于益芝 曹雪涛 +3 位作者 雷虹 肖农 张明微 马施华 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期256-257,共2页

IL-4是一种较强的巨噬细胞激活因子。将IL-4基因转染巨噬细胞可使其表达较高水平的IL-4并可使其抗肿瘤活性明显增强。M-CSF在体外能促进单核／巨噬细胞的生长。研究表明，重组IL-4及M-CSF在体外具有协同维持巨噬细胞生长的作用。因此，... IL-4是一种较强的巨噬细胞激活因子。将IL-4基因转染巨噬细胞可使其表达较高水平的IL-4并可使其抗肿瘤活性明显增强。M-CSF在体外能促进单核／巨噬细胞的生长。研究表明，重组IL-4及M-CSF在体外具有协同维持巨噬细胞生长的作用。因此，将IL-4基因及M-CSF基因同时转移至巨噬细胞，将有可能对其抗肿瘤活性产生一定的影响。 展开更多

关键词 巨噬细胞 IL-4 M-CSF 重组腺病毒介导 体外 基因疗法 细胞因子 增强 研究 抗肿瘤活性

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重组腺病毒介导的人野生型p53、GM-CSF和B7-1基因增强原代肝癌细胞的免疫原性 被引量：1

6

作者 施明 王福生 +1 位作者 刘明旭 吴祖泽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期769-771,共3页

关键词 重组腺病毒介导 人野生型 p53 GM-CSF B7-1 基因增强 原代肝癌细胞 免疫原性

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力生长因子、E肽重组腺病毒的构建及其在神经细胞中的表达

7

作者 苏永良 刘堰 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期21-29,共9页

力生长因子(mechano-growth factor,MGF)是新近发现的一种诱导性表达的生长因子,由IGF-1基因选择性剪接产生,力生长因子E肽(MGF-24E)是MGF区别于其它IGF-1剪接体的特异性C端序列,其在预防组织修复等方面有重要作用.采用Ad-Easy法成功构... 力生长因子(mechano-growth factor,MGF)是新近发现的一种诱导性表达的生长因子,由IGF-1基因选择性剪接产生,力生长因子E肽(MGF-24E)是MGF区别于其它IGF-1剪接体的特异性C端序列,其在预防组织修复等方面有重要作用.采用Ad-Easy法成功构建MGF,MGF-24E重组腺病毒,重组腺病毒分别感染神经胶质细胞N9和神经元细胞SH-SY5Y,MTT法检测其对两种细胞增殖的影响.结果表明,经腺病毒介导可实现MGF和MGF-24E在神经细胞中的高表达,与对照组相比,MGF和MGF-24E在时间和浓度上对促进N9和SH-SY5Y细胞的增殖均有显著性效应,且二者效果相当.由此认为,MGF和MGF-24E具有促进神经损伤修复的同等作用力,为力生长因子用于基因治疗提供更为切实的理论基础. 展开更多

关键词 力生长因子 重组腺病毒 神经修复 细胞增殖 基因治疗

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腺病毒介导血管内皮生长因子基因_(165)在骨髓间充质干细胞中的表达及其影响

8

作者 杨峰 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2005年第6期432-432,共1页

关键词 血管内皮生长因子基因 骨髓间充质干细胞 腺病毒介导 BMSCS 缺血性心脏病 细胞移植治疗 联合基因治疗 体外培养 大鼠

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重组腺病毒载体转染p16基因对肝癌细胞的生长抑制作用 被引量：1

9

作者 程剑 冯振卿 苏长青 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期361-363,共3页

目的:通过腺病毒转染p16基因观察对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤作用。方法:克隆人p16基因全长cDNA序列,构建携带p16基因的增殖缺陷型重组腺病毒p16(AdV-p16),以AdV-p16感染人肝癌SMMC-7721细胞,观察p16基因的表达及其对细胞的生长抑制或杀... 目的:通过腺病毒转染p16基因观察对肝癌SMMC-7721细胞的杀伤作用。方法:克隆人p16基因全长cDNA序列,构建携带p16基因的增殖缺陷型重组腺病毒p16(AdV-p16),以AdV-p16感染人肝癌SMMC-7721细胞,观察p16基因的表达及其对细胞的生长抑制或杀伤作用。结果:AdV-p16能介导外源基因p16在肝癌SMMC-7721细胞系中高效表达。在感染AdV-p16后随重复感染度(MOI)升高p16基因阳性表达率升高,四甲基偶氮唑蓝染色法(MTT)实验结果表明,SMMC-7721细胞的生长受抑制。结论:腺病毒能够介导p16基因在肝癌细胞中高效表达,促进细胞周期阻滞和诱导肿瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 肝肿瘤 P16基因 重组腺病毒 基因治疗 细胞凋亡

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重组腺病毒介导的TNF基因转染对巨噬细胞功能影响

10

作者 肖农 曹雪涛 +3 位作者 于益芝 雷虹 马施华 章卫平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期295-296,共2页

肿瘤坏死因子(TNF)是迄今为止所发现的抗肿瘤作用最强的一种生物活性因子。它除了直接的杀伤或抑制肿瘤细胞外还介导单核／巨噬细胞发挥强有力的细胞毒效应。但TNF的半衰期短且毒负作用严重。已有学者研究了逆转录病毒介导的TNF基因转染... 肿瘤坏死因子(TNF)是迄今为止所发现的抗肿瘤作用最强的一种生物活性因子。它除了直接的杀伤或抑制肿瘤细胞外还介导单核／巨噬细胞发挥强有力的细胞毒效应。但TNF的半衰期短且毒负作用严重。已有学者研究了逆转录病毒介导的TNF基因转染TIL的抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 TNF基因 转染 重组腺病毒介导 抗肿瘤作用 巨噬细胞功能 瘤细胞 细胞毒效应 生物活性因子 逆转录病毒介导 发现

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重组腺病毒介导mIL-4基因转染的G422胶质母细胞瘤体外生物学特性及体内致瘤性的改变

11

作者 洪波 曹雪涛 +4 位作者 朱诚 王文仲 于益芝 章卫平 雷虹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第4期292-294,共3页

以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖... 以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异,而接种皮下后肿瘤生长延缓、小鼠的存活期延长。 展开更多

关键词 重组腺病毒 介导 mIL-4 基因转染 G422胶质母细胞瘤 体外生物学特性 体内致瘤性

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人血管内皮细胞生长因子重组腺病毒载体的构建、鉴定及在骨髓间充质干细胞的表达

12

作者 郜勇 杨述华 杨操 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期216-216,共1页

为构建人血管内皮细胞生长因子（VEGF）165腺病毒表达载体，体外转染大鼠骨髓问充质干细胞，并研究其相关特性，采用细菌内同源重组技术快速构建Ad—VEGF165腺病毒重组质粒，经酶切及测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组Ad... 为构建人血管内皮细胞生长因子（VEGF）165腺病毒表达载体，体外转染大鼠骨髓问充质干细胞，并研究其相关特性，采用细菌内同源重组技术快速构建Ad—VEGF165腺病毒重组质粒，经酶切及测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组Ad—VEGF165腺病毒，并进行电镜观察及滴度测定。感染大鼠骨髓间充质干细胞观察VEGF165基因的转录和表达。研究发现，酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒含有hVEGF165 cDNA，电镜显示包装细胞中有大量病毒颗粒存在，测定包装的病毒滴度为6．3×10^10 TCID 50／ml。逆转录一聚合酶链反应（RT～PCR）、免疫组织化学及免疫印迹检测骨髓间充质干细胞内有VEGF。的转录和表达。提示：构建的VEGF腺病毒表达载体可有效感染骨髓间充质干细胞，并在体外高效表达。 展开更多

关键词 血管内皮细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 重组腺病毒载体 酶切鉴定 VEGF165基因 逆转录一聚合酶链反应 腺病毒表达载体 骨髓问充质干细胞 HVEGF165 体外转染

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重组人p53腺病毒联合经肝动脉化疗栓塞治疗不同p53表达的中晚期肝细胞癌 被引量：11

13

作者 欧盛秋 马亦龙 +3 位作者 康平 李志坤 蒙志斌 齐锋 《中国介入影像与治疗学》 CSCD 2010年第4期354-357,共4页

目的观察重组人p53腺病毒(rAd-p53)基因联合经导管动脉栓塞化疗术(TACE)治疗不同p53表达的中晚期肝细胞癌的临床疗效。方法 rAd-p53注射液联合TACE治疗中晚期肝细胞癌患者共60例(治疗组),其中p53表达阳性、阴性各30例;同期接受常规TACE... 目的观察重组人p53腺病毒(rAd-p53)基因联合经导管动脉栓塞化疗术(TACE)治疗不同p53表达的中晚期肝细胞癌的临床疗效。方法 rAd-p53注射液联合TACE治疗中晚期肝细胞癌患者共60例(治疗组),其中p53表达阳性、阴性各30例;同期接受常规TACE治疗的中晚期肝细胞癌患者60例(对照组),p53表达阳性、阴性各30例,并分别比较p53表达阳性和阴性的治疗组与对照组的疗效;同时检测各组患者治疗前后血管内皮生长因子(VEGF)水平,并进行比较。结果 p53表达阳性患者中,治疗组有效率为73.33%,明显高于对照组的46.67%(P<0.05);治疗前后VEGF升高的幅度比较,治疗组小于对照组(P<0.05)。p53表达阴性患者中,治疗组及对照组有效率分别为66.67%和60.00%,差异无统计学意义(P>0.05);治疗组与对照组治疗前后VEGF升高的幅度差异较亦无统计学意义(P>0.05)。结论 rAd-p53注射液联合TACE治疗中晚期肝细胞癌,能够提高p53表达阳性的患者的疗效,并能有效抑制TACE术后VEGF升高的幅度。 展开更多

关键词 癌 肝细胞 基因治疗 基因 p53 腺病毒 人 栓塞 治疗性 血管内皮生长因子A

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重组腺病毒Ad-hTERTp-HSV-TK/GCV系统的构建及其对人肝癌细胞HepG2的杀伤作用及旁观者效应研究 被引量：3

14

作者 刘燕 邓志华 +4 位作者 杨长青 刘京龙 贾静 郭素雅 杨强 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期29-32,共4页

背景与目的:肝癌的基因治疗已成为肝癌治疗的重要发展方向,本文探讨Ad-hTERTP-HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用;并观察其过程中旁观者效应的作用。方法:用重组腺病毒Ad-hTERTP-HSV-TK系统分别感染肝癌细胞株HepG2和正常肝... 背景与目的:肝癌的基因治疗已成为肝癌治疗的重要发展方向,本文探讨Ad-hTERTP-HSV-TK/GCV系统对人肝癌细胞株HepG2的杀伤作用;并观察其过程中旁观者效应的作用。方法:用重组腺病毒Ad-hTERTP-HSV-TK系统分别感染肝癌细胞株HepG2和正常肝细胞L-02,加入前体药物更昔洛韦(GCV),四甲基偶氮唑盐比色法检测其对感染后细胞的杀伤作用;将感染后的TK阳性HepG2细胞和未感染的TK阴性HepG2细胞按不同比例浓度(0∶10、1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1、10∶0)混合,观察其旁观者效应。结果:肝癌细胞HepG2的存活率随病毒感染复数(MOI)和GCV浓度增加而逐渐降低,L-02细胞无明显变化。旁观者效应表明,在TK阳性HepG2细胞为10%时,细胞抑制率达28.06%,70%时达90.44%。结论:重组腺病Ad-hTERTP-HSV-tk/GCV系统对肝癌细胞HepG2有选择性杀伤作用及明显的旁观者效应。 展开更多

关键词 基因治疗 肝肿瘤 重组腺病毒载体 HTERT启动子 自杀基因 培养的肿瘤细胞

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腺病毒介导M-CSF、IFN-γ基因分别转染黑色素瘤细胞体外生物学特性的研究

15

作者 雷虹 曹雪涛 +3 位作者 于益芝 周正芳 章卫平 郑玲莉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期295-295,共1页

肿瘤的基因治疗是目前肿瘤研究领域中的一大热点，其方法之一是将细胞因子的基因转移至肿瘤细胞使之表达，提高局部作用的浓度，减少全身应用重组细胞因子带来的副作用，达到低毒高效的目的，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSD最基本的功能是... 肿瘤的基因治疗是目前肿瘤研究领域中的一大热点，其方法之一是将细胞因子的基因转移至肿瘤细胞使之表达，提高局部作用的浓度，减少全身应用重组细胞因子带来的副作用，达到低毒高效的目的，巨噬细胞集落刺激因子(M-CSD最基本的功能是维持巨噬祖细胞增殖、分化、成熟，对于成熟的巨噬细胞(Mφ)也有调节作用， 展开更多

关键词 腺病毒介导 体外生物学特性 M-CSF Γ基因 IFN-Γ 转染 黑色素瘤细胞 重组细胞因子 基因转移 分化

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腺病毒介导HGF基因逆转肝纤维化的实验研究

16

作者 郑斐群 李玮 +2 位作者 吴彬 许尹 方佳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第10期1178-1182,共5页

目的评价腺病毒介导肝细胞生长因子(HGF)对肝纤维化的治疗作用。方法 30只雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)8周,诱导肝纤维化产生。大鼠随机均分为5组,分别注射不同剂量的Ad-HGF或病毒。A组注入PBS,B组注入5×109PFU病毒;C组注... 目的评价腺病毒介导肝细胞生长因子(HGF)对肝纤维化的治疗作用。方法 30只雄性Wistar大鼠皮下注射四氯化碳(CCl4)8周,诱导肝纤维化产生。大鼠随机均分为5组,分别注射不同剂量的Ad-HGF或病毒。A组注入PBS,B组注入5×109PFU病毒;C组注入1×109PFU Ad-HGF,D组注入2.5×109PFU Ad-HGF;E组注入5×109PFU AdHGF。定时采大鼠血清样品,以动态监测大鼠肝功能。8周后处死大鼠,并采血和检测肝组织。采用ELISA法测定在体外和体内的HGF表达;并测定血清中腔脯氨酸(Hyp)含量;病理分析肝脏组织变化及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达和胶原蛋白沉积。结果在细胞培养液中HGF分泌增加约44倍,达到8.8 ng/ml。在注射Ad-HGF大鼠组内,血浆HGF的浓度增加约5倍,超过50 ng/ml,并持续至少10 d。在基因治疗后谷丙转氨酶(GOT)、谷草转氨酶(GPT)、血清中总蛋白,白蛋白,总胆红素明显恢复(P<0.05)。离体肝组织显示,D及E组肝脏形态有明显恢复。在注射CCl48周后,肝组织Hyp含量明显增加,D及E组Hyp含量低于B组及C组。病理研究提示Ad-HGF同样也减弱了转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达和胶原蛋白的沉积。结论静脉注射AdHGF可促进肝功能的恢复和提高胶原溶解能力,有利于缓解肝脏纤维化。 展开更多

关键词 肝纤维化 基因治疗 肝细胞生长因子 腺病毒

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肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠心肌细胞凋亡的影响 被引量：7

17

作者 鲍勇 王邦宁 +4 位作者 胡泽平 程源 陈大年 刘敏 宋兵 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2012年第8期915-919,共5页

目的探讨局部心肌注射重组腺病毒-肝细胞生长因子(Ad-HGF)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的影响。方法 30只SHR为心肌纤维化模型,随机抽取6只作为阳性对照组,其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad-HGF组。腺病毒组、Ad-HGF组SHR开胸... 目的探讨局部心肌注射重组腺病毒-肝细胞生长因子(Ad-HGF)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的影响。方法 30只SHR为心肌纤维化模型,随机抽取6只作为阳性对照组,其余24只再随机平分为腺病毒组、Ad-HGF组。腺病毒组、Ad-HGF组SHR开胸,左心室壁5点分别注射0.1 ml null-Ad5和5×109Pfu/ml Ad5-HGF,术后两组分别存活8只和10只,于4周时处死其中6只。处死前测量左心室内压,ELISA法测定心肌HGF浓度,放射免疫法检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)浓度,免疫组化法及图像分析系统分析心肌Bcl-2和Bax水平,心肌细胞凋亡指数检测采用TUNEL,Western blot法测定HGF、AT1R、Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果与阳性对照组相比,Ad-HGF组左室内压表现为左心室舒张末压(LVEDP)下降(P<0.05)、左心室压力最大下降速度(-dp/dtmax)下降(P<0.05),左心室压力最大上升速度(+dp/dtmax)上升(P<0.05)。心肌HGF、抗细胞凋亡蛋白Bcl-2显著升高(P<0.05);AngⅡ、AT1R与促细胞凋亡基因Bax水平,心肌细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。结论 Ad-HGF可以降低SHR左心室心肌细胞凋亡指数,其作用机制可能与HGF抑制AngⅡ、AT1R、Bax,上调Bcl-2,提高Bcl-2/Bax比例,同时降低心室壁压力有关。 展开更多

关键词 心肌细胞凋亡 重组腺病毒-肝细胞生长因子 AngⅡ BAX BCL-2

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HIL-6和HGF双基因重组腺病毒增强对慢加急性肝衰竭大鼠的治疗效果 被引量：3

18

作者 高丹丹 付佳 +3 位作者 秦波 黄文祥 杨春 贾蓓 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期707-712,共6页

目的:比较超级白细胞介素6(HIL-6)和肝细胞生长因子(HGF)双基因重组腺病毒(Ad-HGF-HIL-6)与HIL-6或HGF重组腺病毒(Ad-HIL-6或Ad-HGF)对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠的治疗效果。方法:将ACLF大鼠随机分为:未感染(model)组、空载体(Ad0)组、A... 目的:比较超级白细胞介素6(HIL-6)和肝细胞生长因子(HGF)双基因重组腺病毒(Ad-HGF-HIL-6)与HIL-6或HGF重组腺病毒(Ad-HIL-6或Ad-HGF)对慢加急性肝衰竭(ACLF)大鼠的治疗效果。方法:将ACLF大鼠随机分为:未感染(model)组、空载体(Ad0)组、Ad-HGF组、Ad-HIL-6组和Ad-HGF-HIL-6组。收集血清及肝组织进行生物化学、病理学及分子生物学检测。结果:Ad-HGF、Ad-HIL-6或Ad-HGF-HIL-6组与Ad0组比较,凝血酶原时间(PT)、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、凋亡指数及Bax蛋白明显降低且肝组织病变减轻,Bcl-2和Ki67蛋白的表达明显增高;以上各项变化均以Ad-HGF-HIL-6组更显著。结论:Ad-HGF-HIL-6比Ad-HGF或Ad-HIL-6对ACLF大鼠有更显著的治疗效果且无明显毒副作用。 展开更多

关键词 慢加急性肝衰竭 超级白细胞介素6 肝细胞生长因子 重组腺病毒 细胞凋亡

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新法制备含VEGF启动子驱动的CD/TK融合基因重组腺病毒 被引量：5

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作者 黄元媛 黄宗海 +4 位作者 陈建发 汤福祥 杨文宇 郑全 车小燕 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第1期117-120,共4页

目的 应用简化的细菌内同源重组法高效制备含血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。方法 先以氯化钙法替代电穿孔法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌，制备BJ5183pAdEasy-1细菌；再以后者作感受... 目的 应用简化的细菌内同源重组法高效制备含血管内皮细胞生长因子(VEGF)启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。方法 先以氯化钙法替代电穿孔法将腺病毒基因组质粒pAdEasy-1导入BJ5183细菌，制备BJ5183pAdEasy-1细菌；再以后者作感受态细菌，与线性化的转移质粒pAdtrack-VEGFP-CDglyTK进行同源重组，获得重组腺病毒质粒pAdEasy-VEGFP-CDglyTK，转染293细胞，制备含VEGF启动子驱动的CD／TK融合基因重组腺病毒。结果 构建重组腺病毒质粒的成功率为60％(6／10)。转染293细胞后7～12d可收获病毒。结论 简化的细菌内同源重组法简便易行，重组效率较高，易于推广应用。 展开更多

关键词 制备 VEGF 启动子 CD/TK融合基因 重组腺病毒 血管内皮细胞生长因子 基因治疗 肿瘤

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重组腺病毒介导IL-2、TNF-α抗肿瘤实验研究 被引量：1

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作者 田长富 李殿俊 +2 位作者 刘旭 张春艳 马占好 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第3期134-137,共4页

目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ... 目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论　腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF 展开更多

关键词 重组腺病毒 介导 IL-2 TNF—α 肿瘤 基因疗法 细胞因子

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