人血管内皮生长因子165基因真核表达载体的构建及表达 被引量：5

1

作者 高全文 董绍忠 +2 位作者 陈希哲 陈琰 杨连甲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期32-34,共3页

目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体,并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达。方法:利用基因克隆技术,将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用 BamH I和Xho I双酶切后,再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pc... 目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达载体,并在大鼠骨髓基质细胞中进行表达。方法:利用基因克隆技术,将原核克隆载体pSP73中的目的基因VEGF165用 BamH I和Xho I双酶切后,再克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,构建重组质粒pcDNA3.1-VEGF165。对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体介导,用重组质粒转染SD大鼠骨髓基质细胞,然后以G418筛选阳性克隆,用免疫细胞化学鉴定。结果:经酶切鉴定及基因测序证实,重组体中已插入目的基因片段VEGF165。免疫细胞化学证实,重组质粒转染的骨髓基质细胞中有VEGF165基因的表达。结论:成功地构建真核表达载体pcDNA3.1-VEGF165,并在骨髓基质细胞中得到表达,为将表达VEGF基因的骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞的可能性提供了实验依据。 展开更多

关键词 基因表达 人血管内皮生长因子165 基因 真核表达载体 构建

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重组人血管内皮生长因子165在大肠杆菌中的可溶性表达、纯化与体外活性评价 被引量：2

2

作者 周晓雷 朱重悦 +4 位作者 张世光 李海潮 张竞 王岩勃 邹卫 《科学技术与工程》 北大核心 2016年第1期42-46,共5页

人血管内皮生长因子165(VEGF165)可有效促进血管新生和增加血管通透性,在伤口愈合方面有重要医疗价值。建立获取高纯度、高活性的优质重组VEGF165蛋白的方法具有重要意义。研究利用带有6组氨酸标签的二硫键形成蛋白A(Dsb A)的E.coli表... 人血管内皮生长因子165(VEGF165)可有效促进血管新生和增加血管通透性,在伤口愈合方面有重要医疗价值。建立获取高纯度、高活性的优质重组VEGF165蛋白的方法具有重要意义。研究利用带有6组氨酸标签的二硫键形成蛋白A(Dsb A)的E.coli表达系统实现了Dsb A-VEGF165融合蛋白的可溶性表达;诱导过程中添加5%(v/v)的乙醇可显著提高工程菌中可溶性融合蛋白表达水平。融合蛋白通过Ni亲和层析粗纯,并经牛肠激酶酶切去除标签蛋白。随后利用肝素亲和层析精纯获得重组人VEGF165蛋白。非还原及还原SDS-PAGE电泳检测到分子量为约40 k Da的同源二聚体蛋白,促HUVEC细胞增殖实验显示重组蛋白具有较优的活性,EC50为13 ng/m L。研究实现了Dsb A-VEGF165的在E.coli中可溶性表达,建立了经济、高效的纯化方法,获得了高质量、高活性的重组人VEGF165蛋白。 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子165 融合蛋白 原核表达 蛋白纯化

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人血管内皮生长因子165慢病毒载体的构建及其抗放射所致细胞凋亡的作用

3

作者 赵仲艳 韦映梅 +5 位作者 黎祥喷 吕瑞妍 肖颂华 刘中霖 邢诒刚 刘军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期576-581,共6页

【目的】构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22细胞,并进一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用。【方法】PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载... 【目的】构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)慢病毒表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPhVEGF165,并转染至HT22细胞,并进一步观察其对放射线损伤所致的细胞凋亡的保护作用。【方法】PCR扩增hVEGF165基因,克隆到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体;通过酶切电泳,菌落PCR初步筛选和测序鉴定构建的pCDH-CMV-MCS-EF-GFP1-hVEGF165重组载体;采用磷酸钙共转染法转染293T细胞包装制备慢病毒液,并感染HT22细胞,采用实时RT-PCR及Western Blot检测hVEGF165基因在HT22细胞中的表达情况。进一步对单纯HT22细胞、空质粒转染组以及hVEGF165转染组HT22细胞进行0、5、10 Gy的X线照射,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】hVEGF165基因片段重组到pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP载体,酶切后电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段,测序结果与GenBank序列完全一致,转染HT22后hVEGF mRNA及蛋白表达水平明显增高。而且同各对照组相比,hVEGF165可以降低细胞放疗后的凋亡率。【结论】pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-hVEGF165慢病毒表达载体构建成功,其转染HT22细胞后可获得高水平hVEGF165 mRNA和蛋白的表达,hVEGF165具有抗放射所致细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 慢病毒 载体构建 HT22细胞 放射治疗

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重组人血管内皮细胞生长因子的表达及活性研究

4

作者 王晓华 吉琼梅 +1 位作者 吴朝霞 董文心 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 2004年第4期426-430,共5页

目的 :用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子 (VEGF) ,分离纯化并检测其生物学活性 ,以研究其在药学领域潜在的药用价值。方法 :利用PCR技术扩增VEGF基因片段 ,克隆到pQE30表达载体中 ,转化E .coliM15菌株后用IPTG... 目的 :用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达人血管内皮生长因子 (VEGF) ,分离纯化并检测其生物学活性 ,以研究其在药学领域潜在的药用价值。方法 :利用PCR技术扩增VEGF基因片段 ,克隆到pQE30表达载体中 ,转化E .coliM15菌株后用IPTG进行诱导表达。经裂解细胞、变性、复性和Ni-NTAagarose金属螯合柱层析等方法纯化得到VEGF。用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管生成实验检测VEGF的生物活性。结果 :重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了相对分子质量为 2 0 6 0 0的融合蛋白 ,它以不溶性的包涵体形式存在 ,占菌体总蛋白的 30 %左右。经分离纯化融合蛋白SDS -PAGE显示为单一区带。CAM结果表明给药组血管生成数 (2 1 7± 3 1、39 3± 2 8)与对照组 (15 4± 1 9、2 9 2± 4 2 )相比有明显增加 (P <0 0 5 )。结论 :利用原核表达系统得到血管内皮生长因子具有天然VEGF生物学活性 ,为进一步的应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子 鸡胚绒毛尿囊膜 基因表达

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重组人血管内皮细胞生长因子工程菌高密度发酵工艺研究 被引量：2

5

作者 胡志明 马骊 +3 位作者 周明乾 孟民杰 杨介钻 王小宁 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第3期267-269,共3页

目的建立人血管内皮细胞生长因子(BL21/pET-24a/hVEGF121)工程菌的高密度发酵工艺。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、诱导时间及补料进行优化。结果采用M9复合培养基、活化至对数生长期时诱导4 h以... 目的建立人血管内皮细胞生长因子(BL21/pET-24a/hVEGF121)工程菌的高密度发酵工艺。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如培养基、诱导时间及补料进行优化。结果采用M9复合培养基、活化至对数生长期时诱导4 h以及以甘油为碳源连续流加补料的条件发酵,可使菌体量提高至68 g/L,rhVEGF121的表达量达菌体蛋白总量的23%。结论该发酵工艺提高了工程菌的产量和rhVEGF121的表达水平。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 高密度发酵 大肠杆菌

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人血管内皮细胞生长因子D在口腔鳞癌中的表达及意义 被引量：2

6

作者 段晓峰 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第27期3142-3145,共4页

目的探讨人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)在口腔鳞癌组织中的表达及其与口腔鳞癌临床病理特征之间的关系。方法 2006年10月—2009年10月贵阳医学院附属医院口腔颌面外科住院口腔鳞癌患者手术切除标本60例,癌旁口腔组织标本32例,同时选... 目的探讨人血管内皮细胞生长因子D(VEGF-D)在口腔鳞癌组织中的表达及其与口腔鳞癌临床病理特征之间的关系。方法 2006年10月—2009年10月贵阳医学院附属医院口腔颌面外科住院口腔鳞癌患者手术切除标本60例,癌旁口腔组织标本32例,同时选取正常口腔组织12例。采用免疫组织化学染色法(SABC法)检测口腔鳞癌组织、癌旁口腔组织和正常口腔组织中VEGF-D的表达,同时分析VEGF-D与患者临床病理特征的关系。采用SPSS 12.0统计软件进行统计学分析,计数资料采用χ2检验。结果 VEGF-D在口腔鳞癌组织、癌旁口腔组织及正常口腔组织中的阳性表达率分别是43.3%(26/60)、84.3%(27/32)、8.3%(1/12)。癌旁口腔组织中VEGF-D的阳性表达率较口腔鳞癌组织和正常口腔组织均明显升高,差异有统计学意义(χ2值分别为14.395和18.645,P<0.05);口腔鳞癌组织中VEGF-D的阳性表达率较正常口腔组织明显升高,差异有统计学意义(P=0.025)。TNM分期Ⅰ/Ⅱ期和Ⅲ/Ⅳ期口腔鳞癌组织中VEGF-D阳性表达率比较,差异有统计学意义(χ2=5.279,P<0.05);有淋巴结转移和无淋巴结转移口腔鳞癌组织中VEGF-D阳性表达率比较,差异有统计学意义(χ2=6.007,P<0.05)。结论 VEGF-D在口腔鳞癌组织及癌旁口腔组织中高表达,癌旁口腔组织中的表达率最高,提示其与肿瘤的侵袭性生长有关。VEGF-D在口腔鳞癌中的表达与淋巴结转移密切相关,VEGF-D可促使口腔鳞癌发生淋巴结转移。 展开更多

关键词 口腔肿瘤 人血管内皮细胞生长因子D 淋巴结转移

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重组人血管内皮细胞生长因子121cDNA的基因克隆、表达和鉴定

7

作者 王跃祥 官孝群 +2 位作者 杨健 莫炜 宋后燕 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期444-448,共5页

应用RT PCR方法 ,扩增人VEGF12 1cDNA基因片段 ,与酵母表达载体pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9KVEGF12 1.该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,PCR鉴定VEGF12 1cDNA与酵母染色体整合状态 ,高拷贝转化子用甲醇诱... 应用RT PCR方法 ,扩增人VEGF12 1cDNA基因片段 ,与酵母表达载体pPIC9K重组 ,获得表达质粒p9KVEGF12 1.该质粒转化毕赤酵母菌GS115 ,用G4 18 YPD平板筛选高拷贝转化子 ,PCR鉴定VEGF12 1cDNA与酵母染色体整合状态 ,高拷贝转化子用甲醇诱导表达 .工程菌用 5L发酵罐发酵 ,表达产物r hVEGF12 1占培养液中总蛋白量 70 %以上 .纯化产物促进牛毛细血管内皮 (BCE)细胞增殖 。 展开更多

关键词 重组人血管内皮细胞生长因子121 CDNA 基因克隆 表达 鉴定 血管生成 血管通透 毕赤酵母

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人血管内皮细胞生长因子在大肠杆菌中的表达

8

作者 王雅梅 祁雅慧 +2 位作者 司杨 殷红 武文琦 《首都医科大学学报》 CAS 2003年第2期111-114,共4页

应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合。经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表... 应用DNA重组技术,将编码人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)的基因插入到原核表达载体pET32M中,与载体中的硫氧还蛋白(相对分子质量约1.4万)基因融合。经双酶切鉴定、序列测定及工程菌初步表达分析,表明该重组质粒在大肠杆菌BL21中有明显表达。表达的硫氧还蛋白-VEGF融合蛋白的相对分子质量约为3.2万,主要以包涵体形式存在,也有少量重组蛋白为可溶性蛋白,Western印迹实验和生物活性分析证实可溶性的重组蛋白具有hVEGF的抗原性和促血管生长活性。 展开更多

关键词 大肠杆菌 人血管内皮细胞生长因子 基因表达 融合蛋白

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利用重组杆状病毒在家蚕中表达人血管内皮细胞生长因子

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作者 曹翠平 吴小锋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期234-240,共7页

家蚕作为“生物工厂”生产重组蛋白质具有很多优势 .构建携带编码人血管内皮细胞生长因子 (VEGF) 16 5个氨基酸的cDNA的重组杆状病毒 .将此重组病毒接种 5龄家蚕幼虫进行重组蛋白的表达生产 .时相表达分析表明 ,感染后大约 80h时表达水... 家蚕作为“生物工厂”生产重组蛋白质具有很多优势 .构建携带编码人血管内皮细胞生长因子 (VEGF) 16 5个氨基酸的cDNA的重组杆状病毒 .将此重组病毒接种 5龄家蚕幼虫进行重组蛋白的表达生产 .时相表达分析表明 ,感染后大约 80h时表达水平达到最高 ,而且重组蛋白主要存在于血淋巴中 .从感染的幼虫收集血淋巴并用Nickle亲和层析纯化重组蛋白产物 .定量分析表明 ,每条家蚕幼虫的表达水平高达 4 2 6 μg左右 .通过细胞培养体外分析 ,发现与对照相比 ,加入纯化的重组VEGF(10ng ml和 10 0ng/ml)能够使人HUVEC细胞体外培养细胞数增加 1 8～ 3 3倍 ,说明家蚕幼虫表达的重组VEGF具有完全的生物活性 ,能够诱导内皮细胞在体外分裂增殖 . 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 基因表达 重组杆状病毒 家蚕

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hVEGF_(121)基因转染对人脐静脉内皮细胞生长的作用

10

作者 李红华 刘厚奇 +3 位作者 汤淑萍 熊俊 汤瑞宝 胡凯猛 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1074-1077,共4页

目的 :构建人血管内皮生长因子 (h VEGF) - 12 1的真核细胞复制表达质粒 ,将 h VEGF1 2 1 基因转染进人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) ,通过旁分泌作用来加快其生长速度。 方法 :采用 RT- PCR方法 ,从... 目的 :构建人血管内皮生长因子 (h VEGF) - 12 1的真核细胞复制表达质粒 ,将 h VEGF1 2 1 基因转染进人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cell,HUVEC) ,通过旁分泌作用来加快其生长速度。 方法 :采用 RT- PCR方法 ,从人胚胎成纤维细胞中克隆 h VEGF1 2 1 前体蛋白全长 c DNA,构建重组真核表达质粒 pc DNA3- h VEGF1 2 1 ,用 Fu GENE6介导转染入HU VEC。收集转染的 HU VEC培养上清 ,用 EL ISA法定量检测 h VEGF蛋白的表达情况 ;绘制细胞生长曲线 ,检测 h VEGF1 2 1促进 HUVEC增殖的生物学活性。设转染 pc DNA3空质粒载体和不转染任何 DNA的 HU VEC做对照。 结果 :(1)成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ,经测序证明基因序列与 Gen Bank中核酸序列一致 ,且插入方向正确 ;(2 )转染细胞瞬时表达 h VEGF蛋白 ,于转染 1d后每 10 4 个细胞每天可分泌 h VEGF蛋白 5 9.95 pg,约为对照组的 10 0倍 ;之后表达水平先快后慢下降 ,于转染 7d后仍较对照组高近 1倍 ;(3)转染细胞生长速度明显加快 ,在转染 3d后细胞数与对照组相比即有显著性差异 (P<0 .0 1) ,细胞倍增时间从对照组的 7d以上缩短为 3d左右。结论 :成功构建了 pc DNA3- h VEGF1 2 1 真核表达质粒 ;该质粒能在 HU 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子-121 真核表达 人脐静脉内皮细胞 细胞增殖

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普萘洛尔对HUVEC-12细胞VGEF/ERK胞内信号转导影响 被引量：2

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作者 鲁建云 李锁 +8 位作者 黄进华 康健 向亚平 秦桂芝 陈静 左成忻 杨盛波 谭丽娜 赵婧 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期587-589,共3页

目的:通过血管内皮生长因子/细胞外信号调节激酶(VEGF/ERK)的胞内信号转导途径研究普萘洛尔治疗血管瘤的疗效机制。方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,观察普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响。摸索合适的重组人... 目的:通过血管内皮生长因子/细胞外信号调节激酶(VEGF/ERK)的胞内信号转导途径研究普萘洛尔治疗血管瘤的疗效机制。方法:以离体培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC-12)为模型,观察普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响。摸索合适的重组人VEGF浓度,建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统,在其基础上采用四甲基偶氮唑蓝法测定普萘洛尔对VEGF阳性系统HUVEC-12细胞的细胞毒作用及蛋白质免疫印迹法测ERK变化。结果:普萘洛尔对体外培养内皮细胞磷酸化ERK影响差异无统计学意义。VEGF在20μg/L时HUVEC-12细胞磷酸化ERK表达最强,以该浓度建立HUVEC-12细胞VEGF阳性系统。与空白对照组相比,普萘洛尔对VEGF阳性系统的HUVEC-12细胞细胞毒作用差异无统计学意义(P>0.05);在普萘洛尔浓度为8～16 mg/L时磷酸化ERK表达受到抑制。结论:普萘洛尔治疗血管瘤的机制可能为通过抑制VEGF诱导的内皮细胞的胞内ERK信号转导,从而促进血管瘤的消退。 展开更多

关键词 普萘洛尔 血管瘤 人血管内皮生长因子 细胞毒 ERK信号通路

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hVEGF_(121)基因真核表达载体的构建及其在神经干细胞中的表达 被引量：2

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作者 张猛 邓娟 +2 位作者 李静 王延江 周华东 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期36-39,共4页

目的构建真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以探究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,hVEGF121)基因导入NSCs的表达变化。方法分离培养胎鼠NSCs,并行nestin、GFAP免疫染... 目的构建真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并转染神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以探究人血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,hVEGF121)基因导入NSCs的表达变化。方法分离培养胎鼠NSCs,并行nestin、GFAP免疫染色鉴定。采用PCR法,以hVEGF121质粒为模板,扩增hVEGF121全长编码序列,克隆入载体pMD18-T,随后又将其亚克隆入pEGFP-N1载体中,构建其真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,并以Fugene 6介导转染,将hVEGF121导入NSCs。倒置显微镜检测转染后的NSCs生长变化及hVEGF121在其中的表达等情况。图像分析技术计算转染效率。RT-PCR法对hVEGF121转染的NSCs进行鉴定。结果成功分离培养到NSCs,并予以鉴定。构建了hVEGF121的真核表达载体pEGFP-N1/hVEGF121,成功地将hVEGF121转染NSCs,其转染效率约50%。被转NSCs生长良好。转染hVEGF121基因的NSCs被诱导分化后,神经球的轴突和轴丘表达神经元标志物NF-200。结论成功地将hVEGF121克隆到pEGFP-N1载体中,并实现了hVEGF121基因在NSCs的表达。 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子基因 真核表达载体 神经干细胞 绿色荧光蛋白

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脂质体法介导pIRES2-EGFP-hVEGF165转染人胎盘源间充质干细胞 被引量：1

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作者 王博蔚 高尚 +3 位作者 朱振威 刘春丽 朱镇 刘志辉 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期270-275,I0003,共7页

目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165,通过脂质体法将其转入人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)中,鉴定hVEGF165的表达活性及携带目的基因的HPMSCs的多向分化潜能。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(R... 目的:构建人血管内皮生长因子165(hVEGF165)的真核表达质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165,通过脂质体法将其转入人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)中,鉴定hVEGF165的表达活性及携带目的基因的HPMSCs的多向分化潜能。方法:采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从人白血病细胞HL-60中扩增出hVEGF165的基因片段,构建pIRES2-EGFP-hVEGF165重组质粒,经酶切检测其构建的正确性,通过脂质体法转染HPMSCs后分别采用RT-PCR、Western blotting法及MTT法检测其转录和表达活性;荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白(EGFP),检测含有报告基因EGFP空载体及携带报告基因和目的基因的真核表达载体转染靶细胞的情况;并再次鉴定转染后HPMSCs的多向分化潜能。结果:成功构建重组质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165;RT-PCR、Western blotting及MTT法检测表明,构建的质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165具有转录及表达活性;绿色荧光显微镜下观察到EGFP表达,目的基因成功转入靶细胞,携带目的基因的HPMSCs仍保持多向分化潜能。结论:成功构建具有表达活性的hVEGF165真核表达质粒pIRES2-EGFP-hVEGF165,hVEGF165在HPMSCs中具有转录及表达活性,且对HPMSCs的增殖具有促进作用;HPMSCs本身可能具有hVEGF165的内分泌功能。 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子165 人胎盘源间充质干细胞 脂质体 转染

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抗人Flt-1单克隆抗体的制备和活性鉴定 被引量：1

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作者 谢印良 马莉 +5 位作者 秦立 刘鹏 曹善楠 朱海燕 熊冬生 许元富 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期524-528,共5页

目的:制备小鼠抗人血管内皮生长因子受体-1(Flt-1)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白为抗原,通过经典的杂交瘤制备和活性筛选方法建立能稳定分泌抗Flt-1蛋白的mAb杂交瘤细胞株。结果:经传统的小鼠... 目的:制备小鼠抗人血管内皮生长因子受体-1(Flt-1)的单克隆抗体(mAb),并鉴定其免疫学特性。方法:以重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白为抗原,通过经典的杂交瘤制备和活性筛选方法建立能稳定分泌抗Flt-1蛋白的mAb杂交瘤细胞株。结果:经传统的小鼠腹水型抗体的制备和纯化方法获得了高纯度的抗人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的mAb。ELISA方法测定出该抗体的免疫球蛋白亚型为IgG1,轻链为κ链。West-ern blot结果显示该抗体能特异性地识别重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白,FACS结果表明该抗体能结合到Flt-1阳性的脐静脉内皮细胞和K562/A02细胞表面,并呈现出抗体浓度依赖性。结论:成功建立了1株能够稳定分泌抗重组人Flt-1胞外Ⅲ区蛋白的mAb细胞株XA12,为今后进一步开展Flt-1及其胞外Ⅲ区蛋白的生物学功能研究以及基因工程抗体研究奠定了基础。 展开更多

关键词 人血管内皮生长因子受体-1 单克隆抗体 血管新生 细胞因子

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rhVEGF对大鼠成骨细胞增殖及功能的影响

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作者 兰泽栋 吴纪程 张端强 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期550-553,共4页

目的:研究rhVEGF对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用细胞培养技术,应用光镜、MTT法及PNPP偶氮法,分别从细胞形态、细胞增殖及分化等特性,分析不同浓度的rhVEGF对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:rhVEGF能促进成骨细... 目的:研究rhVEGF对成骨细胞增殖和分化能力的影响。方法:采用细胞培养技术,应用光镜、MTT法及PNPP偶氮法,分别从细胞形态、细胞增殖及分化等特性,分析不同浓度的rhVEGF对成骨细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响。结果:rhVEGF能促进成骨细胞的增殖和分化,其中,在加入3.125ng/ml浓度的rhVEGF并于第3天时,成骨细胞增殖最显著;而12.5ng/ml组对碱性磷酸酶活性的影响最明显。结论:一定剂量的rhVEGF可明显促进成骨细胞的增殖和分化。 展开更多

关键词 重组人血管内皮生长因子 成骨细胞 增殖 分化

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面愈合的影响 被引量：6

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作者 赵雷 王莉 +4 位作者 姜叙诚 郑林 张帆 赵涵芳 许伟榕 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1015-1018,共4页

目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基... 目的探讨含人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法在SD大鼠背部皮肤制作深达皮肤全层的正方形创面,实验组大鼠创面上覆含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜;对照组分别在大鼠创面上覆整合空质粒的成纤维细胞的生物膜、空白生物膜和仅覆切口膜。采用形态学和免疫组化方法,观察术后3、7、14、29 d实验组和对照组大鼠创面肉芽组织生长及创面愈合情况。结果在各时相实验组中新生的毛细血管数以及血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达均显著高于对照组(P<0.01),且VEGF表达与新生毛细血管数正相关。结论将含hVEGF重组质粒的成纤维细胞种植的基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面成纤维细胞持续、有效地表达VEGF,强有力地促进肉芽组织增生,有利于创面愈合。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 基因工程生物膜 肉芽组织 创伤愈合

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人VEGF基因杆状病毒表达载体的构建及生物学活性鉴定 被引量：4

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作者 孙丽翠 王雅梅 +3 位作者 闫豫东 张静宜 司杨 祁雅慧 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第5期623-626,共4页

目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,... 目的构建含人血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的杆状病毒表达载体,并对其表达产物的生物学活性进行测定。方法用HindⅢ对pcDNA3.1/VEGF进行酶切,回收575 bp的VEGF片段;pFast a载体用HindⅢ酶切回收,与VEGF片段连接。NcoI酶切鉴定方向,得到正向连接重组载体pFast/VEGF;将其转化DH10BAC感受态细胞,经卡那霉素、四环霉素、庆大霉素及蓝白斑筛选得到重组杆状病毒载体pBacmid-Fa-VEGF,PCR扩增鉴定得到单一VEGF条带。将该病毒载体转染sf9细胞,用噬斑筛选及SDS-PAGE和Western blot检测VEGF表达,并通过MTT法检测VEGF促内皮细胞生长活性。结果病毒液在稀释到10-7时出现噬斑,Western blot检测出现单一条带,MTT检测促内皮细胞生长率为19.44%。结论成功构建了含VEGF基因的杆状病毒表达载体,且表达产物具有显著的促内皮细胞生长作用。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 重组杆状病毒载体 Western BLOT SF9细胞 MTT

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VEGF165-tPA双基因真核表达载体的构建和体外表达 被引量：2

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作者 王刚 刘成硅 +2 位作者 张晓明 张凯伦 蒋雄刚 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期55-59,共5页

目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到... 目的构建人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和人组织型纤溶酶原激活因子(tPA)双基因的新型真核表达载体pIRES-VEGF165-tPA,并通过转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,验证载体的体外表达情况。方法将目的基因片段VEGF165和tPA插入到真核表达载体pIRES质粒中,体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞,通过实时荧光定量RT-PCR和Western blot分别检测mRNA和蛋白水平的表达。结果成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,测序结果与预期相符;荧光计数显示体外瞬时转染人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞的转染效率约为(15.6±3.1)%;实时荧光定量RT-PCR和Western blot证实转染pIRES-VEGF165-tPA质粒组细胞在mRNA和蛋白水平的表达均高于各对照组(均P<0.01)。结论成功构建pIRES-VEGF165-tPA双基因真核表达载体,并且实现其在人脐静脉内皮细胞系EA.hy926细胞中的表达,为进一步探索其在机械瓣膜抗凝方面的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子165 人组织型纤溶酶原激活因子 真核表达载体 体外表达

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hVEGF基因工程生物膜对全层皮肤缺损创面中flt-1和TSP-1表达的影响

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作者 赵雷 王莉 +4 位作者 姜叙诚 郑林 张帆 赵涵芳 许伟榕 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期47-50,共4页

目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每... 目的探讨人血管内皮细胞生长因子(hVEGF)基因工程生物膜对创面组织fms样酪氨酸酶(flt-1)和血小板反应蛋白-1(TSP-1)表达的影响。方法建立hVEGF基因工程生物膜覆盖大鼠全层皮肤缺损创面的动物模型,将80只SD大鼠随机分为A、B、C、D四组,每组20只,所有动物于背部制备皮肤全层缺损创面。A组:创面覆盖hVEGF基因工程生物膜和Tegaderm切口膜;B组:创面覆盖空白生物膜和Tegaderm切口膜,C组:创面覆盖含空质粒的成纤维细胞种植的生物膜和Tegaderm切口膜;D组:创面覆盖Tegaderm切口膜。采用免疫组化和图像分析的方法,观察各组在术后3、7、14、29d时创面中flt-1和TSP-1表达的情况。结果术后3、7、14d时,A组flt-1阳性细胞数显著高于B、C、D组(P<0.05或P<0.01);术后7、14、29d时A组创面中TSP-1表达显著低于B、C、D组(P<0.01)。结论将hVEGF基因工程生物膜覆盖于大鼠全层皮肤缺损创面,能使创面持续表达flt-1并抑制TSP-1表达,从而促进新生血管形成,有利于创面愈合。 展开更多

关键词 人血管内皮细胞生长因子 FLT-1 血小板反应蛋白 创面愈合

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