检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定被引量：24: 1; 作者陈小文刘新光 +1 位作者梁景耀梁念慈《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期176-182,共7页; 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符... 展开更多; 关键词人蛋白激酶ck2α'亚基大肠杆菌克隆表达纯化重组蛋白鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序被引量：33: 2; 作者刘新光梁念慈 +1 位作者马涧泉刘文《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页; 蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／... 展开更多; 关键词人蛋白激酶ck2 Β亚基 DNA测序重组 CDNA; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定被引量：17: 3; 作者刘新光梁念慈马涧泉《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页; 将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sep... 展开更多; 关键词人蛋白激酶ck2α亚基原核表达纯化鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2α′亚基发生特异相互作用被引量：2: 4; 作者黄功华梁景耀 +2 位作者陈碧刘新光梁念慈《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期623-629,共7页; 通过PCR扩增构建的重组质粒pTHCKA′获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将PstⅠ NdeⅠ双酶切的PCR产物 ,连接到同样酶切的“诱饵”载体pGBKT7,构建为酵母双杂交穿梭表达质粒 (BD质粒 ) ,经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH10 9以... 展开更多; 关键词醛缩酶A 人蛋白激酶ck2α’亚基酵母双杂交系统相互作用蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

揭示蛋白激酶CK2生物学功能——亚基敲除/敲减被引量：6: 5; 作者谢松青郑慧玲刘新光《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期227-233,共7页; 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,可催化细胞内多种蛋白质的磷酸化,由2个催化亚基CK2α或α'以及2个调节亚基CK2β组成的异源四聚体结构。为深入了解CK2的结构与功能,通过运用同源重组敲除、... 展开更多; 关键词蛋白激酶ck2 基因敲除基因敲减亚基功能; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定被引量：29: 6; 作者刘新光梁念慈马涧泉《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页; 将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg... 展开更多; 关键词人蛋白激酶 ck2β亚基蛋白质纯化基因表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定: 7; 作者梁景耀陈小文 +1 位作者刘新光梁念慈《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1160-1164,共5页; 目的　研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法　将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose... 展开更多; 关键词蛋白激酶ck2α亚基/小鼠原核表达蛋白质纯化; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定被引量：24: 1; 作者陈小文刘新光梁景耀梁念慈; 机构广东医学院生物化学与分子生物学研究所; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期176-182,共7页; 基金广东省自然科学基金项目 (No.0 11766) 广东省科技计划项目(No .2 0 0 2C3 0 10 9) +1 种基金广东医学院博士启动基金资助项目(No .990 7)~~; 文摘通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 .; 关键词人蛋白激酶ck2α'亚基大肠杆菌克隆表达纯化重组蛋白鉴定; Keywords human protein kinase ck2α′subunit, cloning, pT7 7, GST fusion expression, protein purification; 分类号 Q55 [生物学—生物化学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序被引量：33: 2; 作者刘新光梁念慈马涧泉刘文; 机构广东医学院医用生化研究所中山医科大学生化教研室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页; 基金广东省自然科学基金广东省卫生厅青年科研基金; 文摘蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础．; 关键词人蛋白激酶ck2 Β亚基 DNA测序重组 CDNA; Keywords Human protein kinase ck2,β Subunit,Expressor vector pT7 7,Cloning,DNA sequencing; 分类号 Q55 [生物学—生物化学] Q784 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定被引量：17: 3; 作者刘新光梁念慈马涧泉; 机构广东医学院医用生化研究所中山医科大学生化教研室; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页; 基金广东省自然科学基金!(940 586) 广东省高教厅重点学科经费资助项目; 文摘将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2; 关键词人蛋白激酶ck2α亚基原核表达纯化鉴定; Keywords Human protein kinase ck2 α subunit,Prokaryotic expression,Protein purification; 分类号 Q555.703 [生物学—生物化学] R394.8 [医药卫生—医学遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2α′亚基发生特异相互作用被引量：2: 4; 作者黄功华梁景耀陈碧刘新光梁念慈; 机构广东医学院生物化学与分子生物学研究所; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期623-629,共7页; 基金教育部科学技术研究重点项目 (No.0 3 0 96) 广东省自然科学基金项目 (No.0 11766) 广东省科技计划项目 (No .2 0 0 2C3 0 10 9)资助~~; 文摘通过PCR扩增构建的重组质粒pTHCKA′获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将PstⅠ NdeⅠ双酶切的PCR产物 ,连接到同样酶切的“诱饵”载体pGBKT7,构建为酵母双杂交穿梭表达质粒 (BD质粒 ) ,经DNA测序确证及转染感受态酵母菌AH10 9以排除自主激活 .从体外培养的HL 6 0细胞中提取总RNA ,采用CLONTECHSMART(switchingmechanismat 5′endofRNAtranscript)技术 ,在酵母细胞中构建HL 6 0细胞的酵母双杂交cDNA文库 ,将构建的BD质粒、文库cDNA、酵母穿梭表达质粒pGADT7 Rec ,共转染感受态酵母菌AH10 9进行酵母双杂交实验 .筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白 .筛选结果及一对一回复性实验显示 ,有 6种与CK2α′相互作用蛋白 ,核酸序列分析及同源性检索表明 ,其中 1种与醛缩酶A有高度同源性 (99 6 % ) .; 关键词醛缩酶A 人蛋白激酶ck2α’亚基酵母双杂交系统相互作用蛋白; Keywords aldolase A,human protein kinase ck2 α′ subunit, yeast two-hybrid system, interaction protein; 分类号 Q55 [生物学—生物化学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名揭示蛋白激酶CK2生物学功能——亚基敲除/敲减被引量：6: 5; 作者谢松青郑慧玲刘新光; 机构广东医科大学衰老研究所广东医科大学广东省医学分子诊断重点实验室广东医科大学生物化学与分子生物学研究所; 出处《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期227-233,共7页; 基金国家自然科学基金(No.81170327 No.81671399) +4 种基金广东医学院建博科技创新团队项目(No.STIF201102)资助~~; 文摘蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,可催化细胞内多种蛋白质的磷酸化,由2个催化亚基CK2α或α'以及2个调节亚基CK2β组成的异源四聚体结构。为深入了解CK2的结构与功能,通过运用同源重组敲除、条件性敲除及RNAi引起的基因敲减技术分别对其3个亚基进行敲除与抑制,发现在CK2亚基敲除与抑制后,可对个体生殖、胚胎发育、肿瘤、代谢以及衰老造成重要的影响,说明CK2各亚基具有重要的生物学功能。本文就敲除与敲减蛋白激酶CK2任一亚基后其功能变化的进展作一综述。; 关键词蛋白激酶ck2 基因敲除基因敲减亚基功能; Keywords protein kinase ck2 gene knockout gene knockdown subunit function; 分类号 Q343.13 [生物学—遗传学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定被引量：29: 6; 作者刘新光梁念慈马涧泉; 机构广东医学院生物化学与分子生物学研究所; 出处《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页; 基金国家自然科学基金!( 3 9870 90 0 ) 广东省高教厅重点学科经费资助项目; 文摘将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 .; 关键词人蛋白激酶 ck2β亚基蛋白质纯化基因表达; Keywords human protein kinase ck2β subunit, expression vector pT7 7, prokaryotic expression , protein purification, enzyme kinetic analysis; 分类号 Q555.7 [生物学—生物化学] Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定: 7; 作者梁景耀陈小文刘新光梁念慈; 机构广东医学院生物化学和分子生物学研究所; 出处《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1160-1164,共5页; 基金广东省自然科学基金项目 (No 0 11766) 广东省科技计划项目(No2 0 0 2C3 0 10 9) 湛江市科技计划项目资助; 文摘目的　研究重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达 ,并进行纯化和活性的测定。方法　将已构建成功的小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,产物依次进行DE 5 2、P11磷酸纤维素和肝素 Sepharose柱层析分离 ,SDS PAGE银染。结果　重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量为 4 2ku蛋白过度表达 ,表达蛋白约占菌体总蛋白的 30 6 %。从2 87mg可溶性蛋白质中得到 4 7mg纯化蛋白。SDS PAGE银染显示纯化的蛋白为单一蛋白带。纯化的CK2α和 β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶。重组的CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致。; 关键词蛋白激酶ck2α亚基/小鼠原核表达蛋白质纯化; Keywords protein kinase ck2α subunit/mouse prokaryotic expression protein purification; 分类号 R345.57 [医药卫生—基础医学] R378.21 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定	陈小文刘新光梁景耀梁念慈	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2004	24	在线阅读下载PDF 职称材料
2	重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序	刘新光梁念慈马涧泉刘文	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD	1999	33	在线阅读下载PDF 职称材料
3	重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定	刘新光梁念慈马涧泉	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD	2000	17	在线阅读下载PDF 职称材料
4	醛缩酶A可与人蛋白激酶CK2α′亚基发生特异相互作用	黄功华梁景耀陈碧刘新光梁念慈	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2004	2	在线阅读下载PDF 职称材料
5	揭示蛋白激酶CK2生物学功能——亚基敲除/敲减	谢松青郑慧玲刘新光	《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心	2017	6	在线阅读下载PDF 职称材料
6	重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定	刘新光梁念慈马涧泉	《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心	2000	29	在线阅读下载PDF 职称材料
7	重组小鼠CK2α亚基在大肠杆菌中的表达、纯化及活性测定	梁景耀陈小文刘新光梁念慈	《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心	2003	0	在线阅读下载PDF 职称材料