人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白K8.1单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：4

1

作者 张玲 卢春 +3 位作者 曾怡 钱超 唐桂霞 秦娣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期685-688,F0002,共5页

目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在... 目的:制备人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。方法:用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导含重组质粒pGEX-6p-1+K8.1的大肠杆菌BL21表达谷胱甘肽-S-转移酶GST/K8.1融合蛋白,将以包涵体形式存在的融合蛋白进行变性、复性、复性后的GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化。以纯化的GST/K8.1融合蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,常规杂交瘤技术制备单克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌K8.1单抗的杂交瘤细胞株。免疫组化染色(IHC)和Westernblot法鉴定单抗的特异性。结果:建立了一株稳定分泌抗K8.1单抗的杂交瘤细胞株,命名为3G10;IHC和Westernblot法显示,3G10株单抗能特异地识别HHV-8K8.1蛋白。结论:成功制备出抗HHV-8包膜糖蛋白K8.1的单克隆抗体。 展开更多

关键词 人类疱疹病毒8型 包膜糖蛋门K8.1 包涵体 单克隆抗体

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人类疱疹病毒8型病毒干扰素调节因子编码基因的克隆及在真核细胞中的表达 被引量：4

2

作者 程林 卢春 +3 位作者 陈秀英 曾怡 姚水洪 秦娣 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1145-1149,共5页

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和Bam... 目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)编码的病毒干扰素调节因子(virusinterferonregulatoryfactor,vIRF)基因K9,并将其导入真核细胞中进行表达。方法:根据GenBank登记的K9基因核苷酸序列设计一对PCR引物,其5′端分别引入HindⅢ和BamHⅠ酶切位点。以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增K9基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pK9。为了便于蛋白检测,再设计第二对引物,上游引物不变,在下游引物5′端引入了Flag序列。以质粒pK9为模板再次PCR,扩增K9-Flag基因,并把K9-Flag序列克隆入pcDNA3.1(+)中,得到重组质粒pK9F。重组质粒经酶切鉴定,核酸序列测定和分析后瞬时转染NIH3T3细胞,用RT-PCR、Westernblot分别从核酸和蛋白水平检测K9基因的表达情况。结果:PCR分离、克隆的K9-Flag序列全长1380bp,核酸序列分析显示克隆的K9基因与GenBank中己经登记的K9基因序列100%同源,引入的Flag序列完全正确;RT-PCR和Westernblot都在K9预期位置检测到特异性条带。结论:HHV-8K9基因在NIH3T3细胞中获得了正确表达。 展开更多

关键词 人类疱疹病毒8型 K9 病毒干扰素调节因子 真核表达

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实时荧光定量聚合酶链反应检测复发性阿弗他溃疡患者中人类疱疹病毒5型和8型的潜伏 被引量：4

3

作者 顾杨 李晶泉 +4 位作者 尚巍 徐昊 李文颜 张虹 陈政翰 《国际口腔医学杂志》 CAS 2008年第2期103-106,共4页

目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区... 目的采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测轻型复发性阿弗他溃疡(RAU)患者4种样本中人类疱疹病毒5型(HHV-5)和8型(HHV-8)的潜伏情况。方法选择18例轻型RAU患者为试验组,同时选择健康者23名为对照组进行临床采样,样本包括唾液、病变区脱落细胞、病变区组织块及外周血。然后用实时荧光定量PCR检测4种样本中HHV-5和HHV-8的DNA。结果HHV-5仅在试验组患者病损区组织块样本中能检测到,而在对照组的组织块样本中没有检测到。试验组和对照组的血液和唾液样本中均有HHV-5阳性检出,但两组比较其差异无统计学意义(P>0.05);试验组和对照组的脱落细胞样本中均无HHV-5阳性检出。试验组和对照组的4种样本中HHV-8均检出阴性。结论HHV-5在RAU患者的溃疡区可能有潜伏。 展开更多

关键词 复发性阿弗他溃疡 实时荧光定量聚合酶链反应 人类疱疹病毒5型 人类疱疹病毒8型

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人类疱疹病毒8型包膜糖蛋白编码基因K8.1的分离、克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：6

4

作者 曾怡 卢春 黄丽 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期105-108,共4页

目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1编码基因,并置于大肠杆菌中作融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点,以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DN... 目的:分离、克隆人类疱疹病毒8型(HHV-8)包膜糖蛋白K8.1编码基因,并置于大肠杆菌中作融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入BamHⅠ、XhoⅠ酶切位点,以佛波酯(TPA)刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增出K8.1编码基因,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含K8.1基因重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。结果:分离、克隆的411bp序列与基因数据库中所登记的HHV-8K8.1序列呈现100%同源性。IPTG诱导后的菌体,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),显示有一个41ku的融合表达蛋白产生。结论:HHV-8K8.1编码基因在E.coli中初步获得正确表达。 展开更多

关键词 人类疱疹病毒8型 包膜糖蛋白K8.1基因 原核表达

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人类疱疹病毒8型肿瘤转化基因K12的分离及在昆虫细胞中的表达 被引量：3

5

作者 卢春 朱建中 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期425-428,F002,共5页

目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因 K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达。方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模... 目的:分离人类疱疹病毒8型(HHV-8)肿瘤转化基因 K12,克隆至杆状病毒载体并在昆虫细胞中作尝试性表达。方法:设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHI、EcoRI酶切位点,以佛波脂刺激的原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增HHV-8肿瘤转化基因K12。将经序列测定后的PCR产物克隆进杆状病毒转移载体pVL1393中,构建成重K12杆状病毒转移载体pVL-K12,并与线性BaculoGold病毒 DNA共转染昆虫细胞Sf9,获得重组病毒。RT-PCR检测K12 mRNA转录水平;间接免疫荧光染色(IFA)检测K12编码蛋白在Sf9细胞中的表达状况。结果:含 HHV-8 K12基因重组杆状病毒在昆虫细胞Sf9中获得表达,经IFA证实该重组蛋白为HHV-8特异性蛋白。结论:杆状病毒载体能够介导HHV-8肿瘤转化基因K12编码的蛋白在昆虫细胞中表达。 展开更多

关键词 人类疱疹病毒8型 肿瘤转化基因K12 杆状病毒表达载体 分离 昆虫细胞

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人类8型疱疹病毒感染在多发性骨髓瘤发病机制中的作用

6

作者 张春阳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期81-84,共4页

多发性骨髓瘤是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常聚集为特征的一种B细胞肿瘤。最近 ,一些实验室在骨髓瘤患者骨髓树突状细胞中检测到人类 8型疱疹病毒 (HHV 8)DNA序列。研究表明 ,HHV 8基因表达产物vIRF ,vIL 8R和vIL 6可能参与多发... 多发性骨髓瘤是以骨髓中克隆性浆细胞恶性增殖和异常聚集为特征的一种B细胞肿瘤。最近 ,一些实验室在骨髓瘤患者骨髓树突状细胞中检测到人类 8型疱疹病毒 (HHV 8)DNA序列。研究表明 ,HHV 8基因表达产物vIRF ,vIL 8R和vIL 6可能参与多发性骨髓瘤的发病机制 ,但绝大多数欧洲实验室报告在骨髓瘤骨髓标本中未找到HHV 8感染的证据。目前的研究还没有确定HHV 8与多发性骨髓瘤之间是必然联系 ,还是一种地区性的机会感染。骨髓瘤感染的HHV 8特异病毒株在其发病机制中处于何种地位及有无因果关系 。 展开更多

关键词 人类8型疱疹病毒 病毒感染 多发性骨髓瘤 发病机制 MM

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人类疱疹病毒8型ORF50基因截短片段和vIL-6全长基因的克隆、表达及表达产物的纯化 被引量：1

7

作者 徐静 朱晓蕾 +1 位作者 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期303-307,共5页

目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为... 目的:克隆人类疱疹病毒8型(human herpesvirus 8,HHV-8)ORF50截短基因和编码病毒IL-6(vIL-6)全长基因,将其置于大肠杆菌中作融合表达,并纯化融合表达的vIL-6。方法:分别以本实验室先前构建的重组质粒pcDNA3.1+ORF50和pcD-NA3.1+vIL-6为模板,PCR扩增目的基因片段,克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,构建含HHV-8ORF50截短基因的重组原核表达质粒pORF50-C1,pORF50-C2,pORF50-C3和含vIL-6全长基因的重组原核表达质粒pvIL-6。重组质粒经酶切鉴定和核酸序列测定正确后转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化vIL-6表达产物。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和Western blot检测GST融合蛋白的表达和纯化情况。结果:核酸序列分析的结果表明,克隆的序列与基因数据库中已登记的HHV-8相应序列呈现100%同源;IPTG诱导后的菌体,经SDS-PAGE,显示有相应大小的融合表达蛋白产生。Western blot亦在预期的位置检测到特异性条带。结论:在E.coli中获得了正确表达的HHV-8ORF50基因3个截短片段和vIL-6全长基因,并成功纯化了vIL-6融合蛋白。 展开更多

关键词 人类疱疹病毒8型 ORF50截短基因 vIL-6全长基因 原核表达 亲和层析

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Kaposi肉瘤患者血清人类疱疹病毒8型的检测 被引量：3

8

作者 普雄明 吴卫东 居哈尔 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期87-88,共2页

目的了解干扰素治疗Kaposi肉瘤近期疗效及其对血清HHV-8DNA检测的影响。方法主要应用干扰素治疗4例无明显内脏损害的新疆经典型Kaposi肉瘤患者,同时在治疗前后采用PCR法检测血清HHV-8DNA特异性片段。结果4例患者经干扰素治疗45d后,均有... 目的了解干扰素治疗Kaposi肉瘤近期疗效及其对血清HHV-8DNA检测的影响。方法主要应用干扰素治疗4例无明显内脏损害的新疆经典型Kaposi肉瘤患者,同时在治疗前后采用PCR法检测血清HHV-8DNA特异性片段。结果4例患者经干扰素治疗45d后,均有不同程度的近期疗效,主要表现在皮损色泽变暗、结节和斑块变软、变平,部分小结节消退,且均无新皮损发生。但淋巴水肿无明显改观。血清HHV-8DNA特异性片段经PCR检测,治疗后全部转阴。结论干扰素治疗可有效地清除Kaposi肉瘤患者血清中HHV-8感染,能缓解病情,防止Kaposi肉瘤多灶病状的发生。 展开更多

关键词 KAPOSI肉瘤 干扰素 治疗 人类疱疹病毒8型

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人疱疹病毒8型K12基因在大肠杆菌中的克隆和表达 被引量：6

9

作者 朱建中 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期274-276,共3页

目的:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因在大肠杆菌中进行融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点,用此引物从质粒pCR-K12中扩增出HHV-8的K12基因,PCR产物经双酶切后按正确阅读框连接到原核表达载体p... 目的:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因在大肠杆菌中进行融合表达。方法:设计一对PCR引物,在引物的5'端分别引入EcoRI和XhoI酶切位点,用此引物从质粒pCR-K12中扩增出HHV-8的K12基因,PCR产物经双酶切后按正确阅读框连接到原核表达载体pGEX-6p-1上相应酶切位点,并转化BL21感受态细胞。结果:重组菌经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,菌体SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)显示有一个大小为33ku的融合表达蛋白产生。结论:初步表明K12基因在大肠杆菌中获得正确表达。 展开更多

关键词 人疱疹病毒8型 K12基因 原核表达

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含绿色荧光蛋白基因与人疱疹病毒8型K12基因重组真核表达载体的构建 被引量：2

10

作者 朱建中 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期453-454,共2页

目的:构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人疱疹病毒8型K12基因的重组真核表达载体。方法:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因插入到真核表达质粒pCR3.1的EcoRI和XhoI位点,构建重组质粒pCR-K12;PCR扩增GFP基因,将GFP基因插入到重组质粒pCR-K12中... 目的:构建含绿色荧光蛋白(GFP)基因与人疱疹病毒8型K12基因的重组真核表达载体。方法:将人疱疹病毒8型(HHV-8)K12基因插入到真核表达质粒pCR3.1的EcoRI和XhoI位点,构建重组质粒pCR-K12;PCR扩增GFP基因,将GFP基因插入到重组质粒pCR-K12中K12上游的KpnI和EcoRI位点中,获得重组表达质粒pCR-GFP-K12。结果:重组表达质粒pCR-GFP-K12的酶切鉴定符合预期结果,此重组质粒中的K12与GFP融合表达并受上游启动子pCMV控制。结论:重组表达质粒pCR-GFP-K12已构建成功,为研究K12的生物学活性及其作用机制打下基础。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 人疱疹病毒8型 K12基因 重组真核表达载体 构建

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驴源马疱疹病毒8型的分离鉴定与生物信息学分析 被引量：8

11

作者 王彤彤 刘梦媛 +7 位作者 张敬文 郗灿坤 贾淑楠 于跃 刘文强 任慧英 王长法 李亮亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第8期3030-3037,共8页

本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织,经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况;对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨,经反复冻融后接种于兔肾细胞(R... 本研究旨在分离1株驴源马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)毒株并分析其遗传特征。从山东省聊城地区某驴场采集病驴肺脏组织,经PCR方法鉴定EHV-8的感染情况;对EHV-8感染阳性的肺组织进行研磨,经反复冻融后接种于兔肾细胞(RK-13)细胞中,盲传3代,待出现细胞病变(CPE)时收集细胞,并通过PCR、间接免疫荧光试验、透射电镜等技术对EHV-8进行鉴定。利用PCR扩增获得分离株的ORF 70全基因组序列,并进行生物信息学分析。研究结果显示,经PCR鉴定获得EHV-8感染阳性的肺脏组织,病料接种易感细胞RK-13后出现典型CPE,分别收集前3代的细胞培养物,经PCR扩增,均获得与预期大小一致的ORF 70基因片段,将分离获得的EHV-8毒株命名为SDLC66,序列上传GenBank,获得登录号:MW816102。经测序和序列比对发现,SDLC66毒株与AHV-3毒株(GenBank登录号:U24184.1)ORF 70基因的相似性为99%,与国内的EHV-8 wh毒株(GenBank登录号:JQ343919.1)、国外EHV-8/IR/2015/40(GenBank登录号:MF431614.1)、EHV-8/IR/2003/19(GenBank登录号:MF431611.1)参考毒株的相似性最高,均为99.8%。经遗传进化树分析发现,SDLC66与EHV-8(EHV-8 wh、EHV-8/IR/2015/40和EHV-8/IR/2003/19株)在一个小分支上,亲缘关系最近;与EHV-1型参考毒株(Hong Kong/57/1984、United Kingdom/32/1982、Oxfordshire/206/2013株)序列来源于同一大分支,亲缘关系较近,与EHV-4毒株(91c1和TH20p株)亲缘关系较远。间接免疫荧光试验可见与病毒蛋白特异结合的红色荧光信号;透射电镜观察可见直径约110 nm的圆形病毒粒子,并且核衣壳外有一层亮晕,亮晕外有一层囊膜。说明本试验成功分离得到1株驴源EHV-8毒株,为进一步研究其致病性和致病机制奠定基础。 展开更多

关键词 驴 疱疹病毒8型 ORF70基因 遗传变异

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山东、河南、河北驴群马动脉炎病毒和马疱疹病毒8型的检测与分析 被引量：2

12

作者 王彤彤 黄泽统 +7 位作者 陈丽 郭瑞宏 董宇婷 刘文强 刘桂芹 王长法 任慧英 李亮亮 《动物医学进展》 北大核心 2022年第5期30-35,共6页

为了解我国山东省、河南省、河北省驴群中马动脉炎病毒(EAV)和马疱疹病毒8型(EHV-8)的感染现状,于2020年从3个省份的屠宰场和驴场收集驴血样品共计860份。通过RT-PCR和PCR方法分别对血样进行EAV和EHV-8检测,统计其阳性率和混合感染率,... 为了解我国山东省、河南省、河北省驴群中马动脉炎病毒(EAV)和马疱疹病毒8型(EHV-8)的感染现状,于2020年从3个省份的屠宰场和驴场收集驴血样品共计860份。通过RT-PCR和PCR方法分别对血样进行EAV和EHV-8检测,统计其阳性率和混合感染率,并分析其流行情况;同时,对3个省份EAV和EHV-8阳性样品的ORF7基因和ORF70部分基因序列进行克隆、测序及遗传进化分析。结果显示,EAV的阳性率为5.7%(49/860),EHV-8的阳性19.7%(169/860),混合感染率为1.9%(16/860)。分析显示,3个省份扩增的EAV ORF7基因测序结果均与经典毒株EAV Bucyrus同源性最高,亲缘关系最近;河北EHV-8 ORF70基因与EHV-8 IR/2010/16亲缘关系最近,河南EHV-8 ORF70基因与EHV-8 IR/2010/47亲缘关系最近,山东EHV-8 ORF70基因与EHV-8 wh亲缘关系最近。论文首次报道EAV和EHV-8在驴群感染情况,为下一步防控EAV和EHV-8奠定了基础。 展开更多

关键词 驴 马动脉炎病毒 马疱疹病毒8型 遗传分析

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马疱疹病毒8型荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

13

作者 李亮亮 于跃 +7 位作者 王天娇 丁相丹 胡乐玉 王长法 刘文强 刘桂芹 任慧英 王彤彤 《动物医学进展》 北大核心 2022年第12期15-19,共5页

马疱疹病毒8型(EHV-8)是近年来在规模化养驴场发现的一种病毒,其主要导致马属动物呼吸困难、繁殖障碍(流产、产弱驹等),严重危害养驴业的健康发展。为建立EHV-8的分子生物学检测方法,用于该病原感染的流行病学调查和致病机制研究,根据N... 马疱疹病毒8型(EHV-8)是近年来在规模化养驴场发现的一种病毒,其主要导致马属动物呼吸困难、繁殖障碍(流产、产弱驹等),严重危害养驴业的健康发展。为建立EHV-8的分子生物学检测方法,用于该病原感染的流行病学调查和致病机制研究,根据NCBI数据库中EHV-8参考毒株ORF 70基因序列的高度保守区域,设计特异性引物,优化程序,建立检测EHV-8的荧光定量PCR方法。结果表明,该方法灵敏度高,最小检测浓度为100拷贝/μL,灵敏度是常规PCR的100倍;特异性强,与EHV-1、EHV-4均无交叉反应;重复性好,组内和组间重复试验变异系数分别为0.15%~0.83%和0.06%~0.47%。利用新建立的方法对120份临床驴血样本进行检测,阳性检出率为32.5%,研究结果为EHV-8的检测和致病性研究提供了可靠的技术支撑。 展开更多

关键词 马疱疹病毒8型 ORF70 实时荧光定量PCR 检测

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马疱疹病毒8型gD蛋白的生物信息学分析及多克隆抗体制备

14

作者 徐萌 郗灿坤 +7 位作者 王天娇 李瑞博 丁相丹 孙祺 胡乐玉 任慧英 李亮亮 王彤彤 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期11-16,共6页

旨在探索马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白gD的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备。用生物信息学分析软件对gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66毒株为模板,通过PCR... 旨在探索马疱疹病毒8型(Equine herpesvirus type 8,EHV-8)囊膜蛋白gD的生物信息学特性、原核表达和多克隆抗体制备。用生物信息学分析软件对gD基因编码蛋白质的理化性质、亲/疏水性和跨膜区进行分析,以EHV-8 SDLC66毒株为模板,通过PCR扩增gD蛋白的胞外区并克隆至pET-32a(+)载体中,将重组质粒pET-32a-gD转化至BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达后,收集菌体超声破碎,纯化并获得重组gD蛋白,免疫新西兰兔制备多克隆抗体,用间接ELISA测定所制备多克隆抗体的效价,同时用Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)明确所制备多克隆抗体的特异性。结果表明,EHV-8 gD编码的蛋白稳定,是亲水性蛋白,有跨膜区,位于30-330 aa。gD蛋白跨膜区正确克隆入pET-32a(+)载体,获得重组质粒pET-32a-gD。重组gD蛋白在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中以包涵体形式表达,分子质量约为55 ku,将其纯化后免疫新西兰兔获得抗gD多克隆抗体,该抗体的效价高达1∶200 000,Western blot与IFA结果表明该多克隆抗体具有良好的特异性。 展开更多

关键词 马疱疹病毒8型 囊膜蛋白gD 生物信息学分析 多克隆抗体 原核表达

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马疱疹病毒8型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

15

作者 纪言霏 齐来勇 +4 位作者 张健鹏 许丹丹 张敬文 赵霞 刘文强 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2023年第8期24-28,共5页

为了建立一种能够快速检测马疱疹病毒8型(EHV-8)的方法,本试验以EHV-8的全基因组序列为模板,针对糖蛋白B(gB)基因的保守序列,进行对比分析,设计EHV-8的特异性引物和探针,优化反应条件,建立EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该... 为了建立一种能够快速检测马疱疹病毒8型(EHV-8)的方法,本试验以EHV-8的全基因组序列为模板,针对糖蛋白B(gB)基因的保守序列,进行对比分析,设计EHV-8的特异性引物和探针,优化反应条件,建立EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的敏感性、特异性和重复性进行验证,使用该方法进行临床样本检测。结果显示,建立的EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法对EHV-8 DNA模板的最低检测限为1.1×10^(2)copies/μL,敏感性高;EHV-8与EHV-1、EHV-4、马流产沙门氏菌和肠产毒性大肠杆菌均无交叉反应,特异性强;批内重复性试验和批间重复性试验均表明该方法重复性好。对132份临床样本的检测结果显示,阳性检出率为10.61%,基因测序正确。由此可见,本试验建立的EHV-8 TaqMan实时荧光定量PCR检测方法能够满足EHV-8的检测需求,且该方法敏感性高、特异性强、重复性好,为EHV-8的进一步研究提供了有效的辅助检测手段。 展开更多

关键词 驴 马疱疹病毒8型 糖蛋白B(gB)基因 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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人类疱疹病毒6型与肝脏疾病的研究进展

16

作者 张艳 王志毅 《临床肝胆病杂志》 CAS 2007年第1期67-68,共2页

关键词 人类疱疹病毒6型 肝脏疾病 hhv-6 非甲-戊型肝炎 淋巴细胞 单个核细胞 生物学特性 疾病患者

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抗人类疱疹病毒7型南京分离株YY5单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

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作者 杨晓梅 姚堃 +5 位作者 朱建中 丁传林 窦洁 冯东举 周锋 仇镇宁 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期203-206,共4页

目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗... 目的:制备抗人类疱疹病毒7型(HHV-7)单克隆抗体,应用于临床与科研。方法:用纯化的HHV-7南京株YY5免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经间接ELISA法筛选。间接免疫荧光、免疫印迹试验等方法鉴定单抗。结果:获得了3株分泌抗(HHV-7)单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为6H9、6C11、4D5。单克隆抗体亚类鉴定表明:6H9为IgG1类,6C11、4D5为IgM类。用间接ELISA方法检测单抗腹水滴度分别为:1:6.40×104,1:1.28×105,1:1.00×103。免疫印迹试验结果表明:6C11能与分子质量约70 ku大小的病毒蛋白结合。结论:成功制备并鉴定3株抗HHV-7单克隆抗体,为进一步研究HHV-7的特性及为临床快速诊断提供可能。 展开更多

关键词 单克隆抗体 人类疱疹病毒7型 小鼠 hhv-7 骨髓瘤细胞

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VEGF在头颈部Kaposi肉瘤中的表达及其与HHV-8病毒相关性研究 被引量：1

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作者 郑军 黎昌学 +1 位作者 尹宏斌 徐江 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2012年第10期1056-1058,共3页

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在头颈部Kaposi肉瘤(Kaposi’ssarcoma,KS)中的表达,并分析人类8型疱疹病毒(Human Herpesivirus-8,HHV-8)感染对其表达的影响,探讨VEGF与头颈部KS发生发展的关系。... 目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在头颈部Kaposi肉瘤(Kaposi’ssarcoma,KS)中的表达,并分析人类8型疱疹病毒(Human Herpesivirus-8,HHV-8)感染对其表达的影响,探讨VEGF与头颈部KS发生发展的关系。方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测3例头颈部KS和3例正常对照组织中VEGF mRNA表达,免疫组化S-P法检测9例头颈部KS和正常对照组织中VEGF蛋白的表达,并用Western blotting检测感染有HHV-8病毒的BCBL-1细胞和未感染HHV-8病毒的BJAB细胞中VEGF蛋白的表达水平。结果:VEGF在头颈部KS中的mRNA和蛋白表达水平均高于正常对照组织(P<0.05),且VEGF蛋白在BCBL-1细胞中的表达较BJAB细胞高,差异有显著性(P<0.01)。结论:VEGF在头颈部Kaposi肉瘤中高表达,并且其高表达与感染HHV-8密切相关。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子 KAPOSI肉瘤 人类8型疱疹病毒

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多发性骨髓瘤患者病毒HHV-6 HHV-8的检测

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作者 刘娜 王京华 +2 位作者 孙志扬 周榕铭 白建文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第20期1189-1190,共2页

关键词 多发性骨髓瘤 人类疱疹病毒6 人类疱疹病毒8 聚合酶链式反应

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HIV-1Rev基因编码蛋白在PEL细胞系中的表达及其表达蛋白抑制HHV-8溶解性周期复制 被引量：3

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作者 李久明 华立新 +4 位作者 冯宁翰 曹戌 吕志刚 秦娣 卢春 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期702-706,共5页

目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)编码基因的重组真核表达质粒并初步探索Rev基因编码蛋白对人类疱疹病毒8型(HHV-8)溶解性周期复制的影响。方法:构建pRev-F... 目的:构建含人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)病毒颗粒蛋白表达调节因子(regulator of virion protein expression,Rev)编码基因的重组真核表达质粒并初步探索Rev基因编码蛋白对人类疱疹病毒8型(HHV-8)溶解性周期复制的影响。方法:构建pRev-Flag重组质粒并进行酶切鉴定和序列测定;将pRev-Flag重组质粒瞬时转染原发性渗出性淋巴瘤细胞系(PEL)BCBL-1细胞和小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3,采用RT-PCR、Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测Rev基因的表达情况;提取瞬时转染pRev-Flag重组质粒的BCBL-1细胞总RNA,进行RT-PCR检测HHV-8次要衣壳蛋白编码基因ORF26 mRNA转录水平。结果:核酸序列分析结果表明,克隆的Rev基因序列与GenBank中已登记的Rev序列100%同源,RT-PCR和Western blot都在Rev预期位置检测到特异性条带。RT-PCR检测显示,Rev基因编码蛋白能够降低HHV-8 ORF26 mRNA转录水平。结论:成功构建含Rev基因序列的重组质粒并在真核细胞中获得正确表达;初步探索表明Rev蛋白能够抑制HHV-8溶解性周期复制。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒1型 病毒颗粒蛋白表达调节因子 人类疱疹病毒8型 复制

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