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端粒酶反转录功能区基因的表达和纯化 被引量:3
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作者 程希远 庞建新 +2 位作者 吴曙光 兰和魁 任大明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期675-678,共4页
通过PCR技术扩增出hTRT的目的片段,克隆至表达载体pET28 b中并转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后在52kDa处发现有外源基因的表达,密度扫描显示表达蛋白含量为20%。目标蛋白以包含体形式存在,含8mol/L尿素和10mmol/LDTT的裂解缓冲液溶解的包... 通过PCR技术扩增出hTRT的目的片段,克隆至表达载体pET28 b中并转化至BL21(DE3),经IPTG诱导后在52kDa处发现有外源基因的表达,密度扫描显示表达蛋白含量为20%。目标蛋白以包含体形式存在,含8mol/L尿素和10mmol/LDTT的裂解缓冲液溶解的包含体采用金属螯合层析有效分离出目标蛋白。免疫印迹实验表明:诱导出的融合蛋白是端粒酶反转录功能区基因所编码的蛋白质。 展开更多
关键词 端粒酶 转录功能区基因 表达 纯化 pET载体 亲和层析
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端粒酶反转录酶基因在肝细胞癌中的表达及其意义 被引量:2
2
作者 张营 赵金满 尚海 《中国全科医学》 CAS CSCD 2008年第11期951-953,共3页
目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝... 目的研究肝细胞癌中端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的表达及其临床意义。方法采用原位杂交方法分别对肝细胞癌及肝炎后肝硬化组织中hTERTmRNA进行检测。结果肝癌中hTERTmRNA表达阳性率明显高于肝硬化组织,差别有统计学意义(P〈0.01);中、低分化的肝癌hTERT mRNA阳性强度高于高分化者,差别有统计学意义(P〈0.05);肝癌中hTERTmRNA表达阴性组患者术后3年生存率高于阳性组患者,差别有统计学意义(P〈0.05);hTERTmRNA表达弱阳性的肝癌患者生存时间较强阳性者延长,差别有统计学意义(P〈0.05)。结论hTERTmRNA阳性表达普遍存在于肝癌组织中,通过检测肝癌中hTERTmRNA表达情况可用来作为肝癌诊断及预后估计的新标志物。 展开更多
关键词 端粒酶 端粒酶转录mRNA 肝细胞癌 肝硬化 预后
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miR-1182调控胃癌细胞人端粒酶反转录酶的分子机制及其对迁移能力的影响 被引量:4
3
作者 张丹 郝宁波 +5 位作者 唐波 吕沐瀚 谢睿 胡长江 汪苏敏 杨仕明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1074-1077,共4页
目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检... 目的研究miR-1182在胃癌细胞中调控人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)的机制及对其迁移能力的影响。方法胃癌细胞MKN28中转染miR-1182类似物,qRT-PCR检测转染后细胞miR-1182的相对表达量,Western blot检测转染后细胞hTERT的表达变化;进一步通过生物信息学预测miR-1182与hTERT mRNA的结合位点,双荧光素酶实验分析miR-1182对hTERT mRNA的作用机制;Transwell实验检测转染miR-1182类似物对MKN28细胞体外迁移能力的影响。结果 qRT-PCR表明miR-1182组的miR-1182的相对表达量(10.168±2.645)明显高于对照组(1.008±0.167)(P<0.01)。Western blot结果显示在胃癌细胞系中过表达miR-1182后,hTERT的蛋白水平下调。双荧光素酶实验表明miR-1182可与hTERT mRNA的ORF区结合,且其主要结合部位为hTERT mRNA的ORF-1;在Transwell迁移实验中,miR-1182类似物转染细胞后,miR-1182组穿膜细胞数为(23.333±4.509)/视野,对照组穿膜细胞数为(71.000±4.582)/视野,miR-1182组细胞迁移能力明显低于对照组(P<0.01)。结论 miR-1182通过与胃癌细胞hTERT的ORF区结合,从而在转录后水平抑制hTERT的表达,并发现其可抑制胃癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 端粒酶转录 miR-1182 胃肿瘤 肿瘤转移
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实时RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶mRNA用于乳腺癌鉴别诊断及与c-Myc基因的相关性 被引量:3
4
作者 唐峰 陈忠清 +5 位作者 包芸 朱腾芳 王虹 朱虹光 许祖德 胡锡琪 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期727-731,共5页
目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定... 目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定量RT-PCR技术(Real-ti me RT-PCR)定量检测hTERT和c-Myc基因的转录水平。结果以NhTERT=10为临界值,所有正常组织和良性病变NhTERT值均小于临界值,而hTERT基因转录升高的导管原位癌及浸润性导管癌其NhTERT值均大于此临界值。显示hTERT和c-Myc基因转录水平呈正相关(γ=0.7395,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR技术检测hTERT基因表达具有高敏感性和特异性,能为常规病理学诊断提供客观的参考指标,从而提高乳腺不典型导管增生与导管原位癌鉴别诊断的准确性。原癌基因c-Myc转录水平上调可能与乳腺癌hTERT基因转录激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒酶 实时荧光定量逆转录聚合链式 人端粒酶转录 C-MYC原癌基因
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人端粒酶反转录酶启动子的克隆与肿瘤靶向治疗的研究 被引量:2
5
作者 李帆 谭晓华 +2 位作者 彭晓君 蔡红兵 胡大荣 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第2期207-211,共5页
目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体... 目的克隆hTERT启动子,并观察hTERT启动子调控下tk/GCV系统对人肺癌细胞系A549的特异性杀伤效果。方法设计特异性引物,以HepG2基因组DNA为模板,用PCR方法扩增hTERT启动子;分别构建hTERT启动子和hCMV启动子调控的LacZ、tk基因真核表达载体;将上述质粒用脂质体转染A549细胞和人胚肺成纤维细胞系MRC5后,通过RT-PCR和β-Gal染色观察hTERT启动子工作情况;用MTT法检测不同浓度的GCV对A549和MRC5细胞的细胞毒作用。结果成功克隆hTERT上游-280bp^+40bp的核心启动子。RT-PCR和β-Gal染色显示hTERT启动子能有效地调控其下游tk基因、LacZ基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中特异性转录和表达;hTERT启动子调控的tk/GCV系统对端粒酶阳性的肿瘤细胞系A549有明显的特异性杀伤效应。结论hTERT启动子可特异性地调控目的基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞中表达而不影响正常的细胞,表明端粒酶启动子调控自杀基因的表达是一种很有希望的肿瘤靶向基因治疗策略。 展开更多
关键词 肿瘤 HTERT启动子 GCV 调控 表达 人端粒酶转录 特异性杀伤 克隆 目的基因 LACZ基因
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人端粒酶逆转录酶和人白细胞介素18融合基因真核表达载体的构建和功能研究 被引量:1
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作者 童向民 金洁 +2 位作者 姚航平 钱文斌 孟海涛 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2006年第4期360-365,共6页
目的:以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)融合基因,并观察其生物学功能。方法:健康人单核细胞经RT-PCR扩增hIL-18后、T-A克隆。亚克隆至经N heⅠ、H indⅢ酶切的PCDNA 3.1(+)/hTERT中,限... 目的:以基因重组技术在真核细胞中表达人白细胞介素18(hIL-18)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)融合基因,并观察其生物学功能。方法:健康人单核细胞经RT-PCR扩增hIL-18后、T-A克隆。亚克隆至经N heⅠ、H indⅢ酶切的PCDNA 3.1(+)/hTERT中,限制性内切酶验证后,挑选出含有目标基因的正确克隆。经限制性内切酶和DNA测序分析两个基因是否已经正确连接到真核表达载体中。将hTERT/hIL-18融合基因质粒脂质体介导转染3T 3细胞中表达,经W estern-b lot验证目的基因表达产物,同时对转染细胞作免疫荧光染色。以EL ISA检测转染细胞刺激KG-1细胞分泌γ干扰素的能力,以流式细胞仪检测转染细胞抗MTX诱导凋亡的能力。结果:hTERT/hIL-18融合基因的真核表达载体PCDNA 3.1(+)构建成功,经限制性内切酶验证和DNA测序及同源性对比分析,该基因片段与NCB I基因库hIL-18和hTERT基因CDS序列同源性均达到99.9%;而细胞转染后经W estern-b lot验证,hTERT/hIL-18融合蛋白的分子量约127 kM r,与预期一致,荧光显微镜观察显示融合蛋白在细胞中弥散表达。此融合蛋白能刺激KG-1细胞分泌γ-干扰素,并具有抗MTX诱导凋亡的生物学功能。结论:本实验构建的PCDNA 3.1(+)/hTERT-hIL-18质粒能够在真核细胞中表达,并具有生物学功能,为进一步转染树突状细胞,研制肿瘤的治疗性疫苗提供基础。 展开更多
关键词 白细胞介素18 端粒 末端转移 基因表达 端粒酶转录 融合 蛋白
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端粒酶逆转录酶、RNA成分和相关蛋白1基因在肺癌组织中的表达及其临床意义
7
作者 陈仕新 王孝养 +1 位作者 方慧娟 徐永健 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期287-289,312,共4页
用逆转录 PCR(RT- PCR)法对手术切除的 4 0例肺癌组织 ,9例肺部良性实质性病变和 2 2例癌旁正常组织的端粒酶逆转录酶 (h TERT)、 RNA成分 (h TR)和相关蛋白 1(h TEP1) m RNA表达进行了检测 ,并与肺癌的病理分型、TNM分期进行了比较。... 用逆转录 PCR(RT- PCR)法对手术切除的 4 0例肺癌组织 ,9例肺部良性实质性病变和 2 2例癌旁正常组织的端粒酶逆转录酶 (h TERT)、 RNA成分 (h TR)和相关蛋白 1(h TEP1) m RNA表达进行了检测 ,并与肺癌的病理分型、TNM分期进行了比较。发现肺癌组织、肺部良性实质性病变、癌旁正常组织的 h TR、h TEP1普遍呈阳性表达 ,3组间阳性率比较差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,而 h TERT基因表达肺癌组织 (32 / 4 0 ,80 % )高于良性实质性病变 (5 / 9,5 6 % ) ,也高于癌旁正常组织 (3/ 2 2 ,13% ) ,3组间差异有极显著性 (P<0 .0 0 1)。h TERT在肺癌组织中的表达率 期 (14 / 14 ,10 0 % )高于 期 (11/ 14 ,78% ) , 期高于 期 (7/ 12 ,5 8% )。鳞、腺癌间 h TERT m RNA表达无显著差异。结果表明 :端粒酶基因表达上调在肺癌发生发展中起重要作用 ,端粒酶也参与部分肺部良性实质性病变发病机制 ;用 RT- PCR检测 h TERT m RNA表达有助于肺癌恶性程度的判断和肺部良。 展开更多
关键词 端粒酶转录 RNA 相关蛋白1基因 临床意义 端粒酶 肺癌 转录聚合
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腺病毒介导的人端粒酶反转录酶牙周膜细胞系的建立
8
作者 孙贵军 秦晓东 +5 位作者 王世琴 胡慧珍 陆笑颜 金佳佳 吴生荣 何祥一 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期25-30,共6页
目的通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒p Ad-pshuttle-cmv-h TERT... 目的通过腺病毒法建立稳定表达外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因的牙周膜细胞系,以构建腺病毒介导的高效、稳定的hTERT牙周膜细胞系。方法聚合酶链反应(PCR)法扩增hTERT基因编码序列,构建同源重组腺病毒质粒p Ad-pshuttle-cmv-h TERT,收集腺病毒颗粒后感染人牙周膜细胞,实时荧光定量PCR检测h TERT及成骨相关基因碱性磷酸酶、核心结合因子2、骨涎蛋白、骨钙素、骨桥素、Ⅰ型胶原蛋白m RNA的表达水平,茜素红染色观察成骨分化能力,CCK-8检测细胞增殖能力。结果成功构建了含h TERT基因的腺病毒颗粒并感染牙周膜细胞,感染细胞与正常牙周膜细胞形态相似;实时荧光定量PCR结果显示h TERT及成骨相关基因在感染细胞中高表达;茜素红染色显示牙周膜细胞系成骨能力强;CCK-8结果示牙周膜细胞系增殖能力强。结论通过腺病毒法成功建立了过表达h TERT的人牙周膜细胞系,其具有较强的成骨分化能力,这为研究牙周膜再生机制提供了一个理想的细胞系。 展开更多
关键词 牙周膜细胞 人端粒酶转录 腺病毒 稳定表达 成骨分化
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hTERT基因转染激活人毛乳头细胞端粒酶的实验研究 被引量:3
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作者 刘官智 伍津津 +2 位作者 朱堂友 鲁元刚 杨桂红 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期69-71,共3页
目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳... 目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养。应用反转录(RT)-PCR法检测hTERTmRNA的表达,端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果:未转染DPC和空载体转染细胞(DPC-EGFP)无hTERTmRNA表达,端粒酶活性为阴性;而外源性hTERT基因转染细胞(DPC-hTERT)稳定表达hTERTmRNA,同时端粒酶活性转为阳性。结论:外源性hTERT基因转染能够激活体外培养人DPC的端粒酶,为建立永生化细胞系奠定基础。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 基因 HTERT 端粒酶 人端粒酶转录
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贵州部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性分析与比较 被引量:2
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作者 任春霞 张锚链 +3 位作者 林远箭 李国富 杨恭 孙丽君 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期166-172,共7页
背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增... 背景与目的:用FISH检测人端粒酶RNA组分(human telomerase RNA component,hTERC)扩增是筛查宫颈组织早期癌变的有效方法,但是其检测结果的准确率尚不清楚。本研究旨在分析贵州省部分地区少数民族与当地汉族妇女宫颈癌中端粒酶基因扩增和表达与HPV感染的相关性。方法:用FISH检测hTERC基因的扩增,结合免疫组化检测端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、HPV16/18 E6抗原和HPV16 E7抗原的表达,分析和比较了贵州省部分地区少数民族(苗族、侗族和土家族)与汉族宫颈癌患者之间的扩增或表达的差异。结果:少数民族与汉族之间在hTERC扩增,hTERT、E6和E7表达上差异无统计学意义(P>0.05);在少数民族和汉族中,hTERC基因的扩增与hTERT表达差异无统计学意义(P>0.05),但HPV16/18感染与hTERC扩增或与hTERT表达之间具有显著相关性(P<0.01)。说明宫颈癌中,HPV感染可能是导致hTERC扩增与hTERT高表达的主要原因之一。结论:检测HPV16/18 E6和hTERT表达,并结合测定hTERC扩增可提高贵州省部分地区少数民族以及汉族妇女宫颈癌筛查的准确率。 展开更多
关键词 宫颈癌 端粒酶RNA组分 端粒酶转录 HPV 扩增 表达
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端粒酶hTERT基因siRNA表达质粒的构建和鉴定 被引量:1
11
作者 吴斌华 李祥勇 +2 位作者 梁统 唐旭东 周克元 《海南医学院学报》 CAS 2005年第4期266-268,共3页
目的:构建含人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因不同位点的一系列siRNA真核表达质粒mU6-hTERT1~5,为以端粒酶为靶点的基因治疗鼻咽癌研究奠定基础。方法:将人工合成的针对hTERT基因4个不同位点和1个混... 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(Humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)基因不同位点的一系列siRNA真核表达质粒mU6-hTERT1~5,为以端粒酶为靶点的基因治疗鼻咽癌研究奠定基础。方法:将人工合成的针对hTERT基因4个不同位点和1个混乱序列的正反链DNA序列经基因重组定向克隆插入到真核表达质粒载体mU6中,通过PCR检测确定重组结果。根据260nm处紫外红吸收值计算重组质粒的浓度。结果:各对DNA序列均按正确方向插入pmU6质粒,纯度和浓度均符合实验要求。结论:成功构建成了含人端粒酶hTERT基因4个不同位点的siRNA真核表达质粒。 展开更多
关键词 端粒酶转录 质粒 聚合 RNA干扰 人端粒酶转录 HTERT基因 真核表达质粒 siRNA DNA序列 鉴定
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反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达 被引量:1
12
作者 袁艳鹏 关云谦 +2 位作者 林庆玲 薛金花 蔡彦宁 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期365-370,共6页
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,p... 目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。 展开更多
关键词 转录巢式多重聚合链式 时钟基因 单细胞 NIH/3T3
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家蚕微孢子虫反转录酶基因部分序列的克隆与分析
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作者 高永珍 黄可威 常智杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 2002年第2期120-125,共6页
从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis)中通过RT PCR扩增出反转录酶 (reversetranscriptase)基因的部分序列(大小为 1 2kb) ,经 3′ RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)获得其 3′端序列 ,但经两次 5′ RACE后仍未发现起始密码子 (ATG)。目... 从家蚕微孢子虫 (Nosemabombycis)中通过RT PCR扩增出反转录酶 (reversetranscriptase)基因的部分序列(大小为 1 2kb) ,经 3′ RACE(RapidAmplificationofcDNAEnds)获得其 3′端序列 ,但经两次 5′ RACE后仍未发现起始密码子 (ATG)。目前得到的cDNA序列为 330 3bp ,推测其编码 110 1个氨基酸的多肽 ,经同源性比较分析 ,发现该序列与许多生物体的反转录酶基因有一定的同源性。 展开更多
关键词 家蚕微孢子虫 转录基因 RT-PCR RACE 同源性 基因克隆 序列分析
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马传贫病毒白细胞弱毒疫苗毒株反转录酶基因克隆及序列分析比较
14
作者 张宝山 刘永刚 +4 位作者 卢景良 孔宪刚 刘胜旺 杨威 马云燕 《中国预防兽医学报》 CSCD 2000年第2期99-101,共3页
本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已... 本实验从商品化马传贫弱毒疫苗培养物提纯马传贫疫苗毒病毒粒子并抽提病毒RNA后 ,采用RT_PCR方法扩增并首次克隆了马传贫驴强毒反转录酶 (RTase)基因。经核苷酸序列测定得出反转录酶基因全长 1 6 6 8bp ,编码 5 5 6个氨基酸。通过与已发表其它马传贫病毒反转录酶基因序列比较 ,发现在氨基酸和核苷酸水平差异率分别为 1 4 .0 %和 1 6 .6 %。变异氨基酸随机分布于整个基因上 ,无明显规律。在反转录病毒高度保守的酶基因上发现这样大的差异 ,展示出马传贫驴强毒作为马传贫弱毒疫苗亲本毒株的独特分子特性。 展开更多
关键词 马传贫驴强毒 转录基因 克隆 序列分析 EIAV
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竞争性反转录聚合酶链反应对髌韧带中的α_1-Ⅰ型胶原蛋白基因表达的定量检测
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作者 蔡冬青 陈启明 +1 位作者 李嘉豪 邓美娟 《体育科学》 CSSCI 北大核心 1998年第5期54-57,67,共5页
应用竞争性反转录聚合酶链反应技术,对韧带中的α_1-Ⅰ型胶原蛋白基因表达进行了定量测定。研究表明:该技术是适用于对一小块髂韧带中的基因表达进行定量研究。
关键词 竞争性转录聚合 α1-Ⅰ型胶原蛋白基因 髌韧带
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膀胱癌中端粒酶RNA的原位表达与肿瘤预后
16
作者 韩宇 洪宝发 +1 位作者 杨勇 王晓雄 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期843-844,共2页
观察人端粒酶mRNA(hTR)在各级膀胱移行细胞癌 (TCC)中的表达 ,分析其与肿瘤分级及预后的关系。作者回顾性分析了 6 7例膀胱移行细胞癌及对照组的正常膀胱上皮、膀胱良性病变各 10例 ,对石蜡标本用地高辛标记的端粒酶反转录酶基因 (hTRET... 观察人端粒酶mRNA(hTR)在各级膀胱移行细胞癌 (TCC)中的表达 ,分析其与肿瘤分级及预后的关系。作者回顾性分析了 6 7例膀胱移行细胞癌及对照组的正常膀胱上皮、膀胱良性病变各 10例 ,对石蜡标本用地高辛标记的端粒酶反转录酶基因 (hTRET)寡核苷酸作为RNA探针 ,原位检测端粒酶mRNA在膀胱移行细胞癌细胞中的表达。结果显示 ,标本的端粒酶mRNA表达强度与膀胱TCC分级、预后显著相关 (P <0 0 1)。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 人端粒酶RNA 预后 人端粒酶反转录酶基因 TCC HTR
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反转录-重组酶介导等温扩增(RT-RAA)快速检测基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒 被引量:2
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作者 陈耀 仲欣雨 +8 位作者 吴陈雨 丁雪 黄璟 王欢莉 范忠军 孙静 陈星逸 余树培 夏文龙 《中国动物检疫》 CAS 2023年第1期121-127,共7页
为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导... 为建立一种基因2型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的快速检测方法,根据其ORF6基因保守序列设计了3对特异性引物,通过引物筛选及条件优化,建立了基因2型PRRSV的反转录-重组酶介导等温扩增(reverse transcription recombinase-aided isothermal amplification,RT-RAA)快速检测方法。结果显示:该方法在40℃恒温孵育25 min即可完成靶序列扩增;特异性强,和猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒均无交叉反应;灵敏度高,最低检出限为2×10^(0)TCID_(50)/μL,是常规RT-PCR方法的10倍;应用该方法对39份疑似PRRSV感染的临床样品进行检测,检出阳性样品25份,和实验室前期建立的荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。以上结果说明,本研究建立的RT-RAA检测方法简便快速、特异性强、灵敏度高、临床适用性好,为PRRSV感染的快速诊断提供了新的技术手段。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 基因2型 转录-重组介导等温扩增 快速检测
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转反义Trxs基因小麦灌浆期内源Trxh基因表达及淀粉酶活性的研究 被引量:2
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作者 任江萍 赵安民 +3 位作者 王新国 李永春 牛洪斌 尹钧 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期893-897,共5页
为了进一步揭示反义Trxs基因在抗穗发芽小麦中的作用机理,以转反义Trxs基因的T4代转基因株系(以豫麦70为受体)为材料,运用RT-PCR检测和酶活性测定方法,对其灌浆过程中硫氧还蛋白h(Trxh)基因在不同水平上的表达方式以及α-淀粉酶活... 为了进一步揭示反义Trxs基因在抗穗发芽小麦中的作用机理,以转反义Trxs基因的T4代转基因株系(以豫麦70为受体)为材料,运用RT-PCR检测和酶活性测定方法,对其灌浆过程中硫氧还蛋白h(Trxh)基因在不同水平上的表达方式以及α-淀粉酶活性进行了检测。结果表明,转基因小麦籽粒中内源Trxh基因mRNA转录量、Trxh硫氧还蛋白h活性和α-淀粉酶活性均显著低于未转基因的,平均分别比未转基因籽粒下降了21.1%,23.2%和12.6%。其中,花后25-30 d抑制作用最大。回归分析表明,Trxh基因表达量与Trxh活性、α-淀粉酶活性均呈极显著或显著正相关。说明反义Trxs基因的导入干扰或部分抑制了小麦内源同源基因的表达,致使Trxh表达量减少,Trxh活性降低,从而导致了α-淀粉酶活性的降低。 展开更多
关键词 基因小麦 义TRXS基因 转录聚合链式 硫氧还蛋白h Α-淀粉
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小檗碱对大鼠肝硬化肝组织IFN-γ表达与端粒酶活性的影响 被引量:4
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作者 骆中华 吕飞 《医药导报》 CAS 2015年第3期306-309,共4页
目的探讨小檗碱抑制血吸虫肝硬化组织恶性变潜能的作用及其机制。方法将80只大鼠感染日本血吸虫尾蚴,随机分为A、B、C、D组,每组20只。模型对照组(A组)不作任何治疗;吡喹酮组(B组)感染尾蚴6周后给予吡喹酮500 mg·kg-1·d-1灌胃... 目的探讨小檗碱抑制血吸虫肝硬化组织恶性变潜能的作用及其机制。方法将80只大鼠感染日本血吸虫尾蚴,随机分为A、B、C、D组,每组20只。模型对照组(A组)不作任何治疗;吡喹酮组(B组)感染尾蚴6周后给予吡喹酮500 mg·kg-1·d-1灌胃2 d;小檗碱组(C组)感染尾蚴6周后给予小檗碱150 mg·kg-1·d-1灌胃6周;小檗碱+吡喹酮组(D组)在感染尾蚴6周后给予吡喹酮500 mg·kg-1·d-1灌胃2 d,再以小檗碱150 mg·kg-1·d-1灌胃6周。另取10只大鼠作为正常对照组(E组)。第12周末分别留取各组大鼠肝组织,检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型胶原及干扰素-γ(IFN-γ)含量、端粒酶活性与端粒酶反转录酶(TERT)表达情况。结果与A组比较,B组和C组肝纤维化程度均减轻,肝组织IFN-γ含量显著升高,端粒酶活性与TERT表达水平降低(P<0.05)。与B组比较,C组大鼠肝纤维化程度、IFN-γ含量及端粒酶活性、TERT表达水平无明显差异(P>0.05)。与B组、C组比较,D组大鼠肝纤维化程度进一步减轻,肝组织IFN-γ含量显著升高(P<0.05),端粒酶活性及TERT表达水平显著降低(P<0.05)。结论小檗碱可通过调节大鼠肝组织内免疫应答,促进IFN-γ表达,抑制肝组织TERT表达及端粒酶活性,可配合吡喹酮对大鼠晚期血吸虫肝硬化起协同、增效作用。 展开更多
关键词 小檗碱 吡喹酮 干扰素-γ 肝硬化 血吸虫 端粒酶转录 端粒酶
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TGF-β1对大鼠肝星状细胞中端粒酶的调节作用(英文) 被引量:1
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作者 袁洪 周于禄 +5 位作者 刘世坤 邓珍珍 黄利华 李佐军 李兵 王春江 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期442-451,共10页
目的:探索转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肝星状细胞端粒酶表达的影响以及肝纤维化过程中TGF-β1所起的作用。方法:梯度密度离心法分离正常大鼠肝脏中原代肝星状细胞并分两组培养。肝星状细胞的形态通过荧光倒置显微镜观察,肝星状细... 目的:探索转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肝星状细胞端粒酶表达的影响以及肝纤维化过程中TGF-β1所起的作用。方法:梯度密度离心法分离正常大鼠肝脏中原代肝星状细胞并分两组培养。肝星状细胞的形态通过荧光倒置显微镜观察,肝星状细胞的纯度通过免疫细胞化学染色和自发荧光鉴定。分别观察用浓度为0,0.1,1,10 ng/mL的TGF-β1处理24 h和1 ng/mL TGF-β1处理并培养3,6,9 d,观察肝星状细胞的端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)mRNA的表达变化。结果:细胞形态学观察结果表明TGF-β1能触发HSCs从静息状态向高度分化的肌成纤维细胞的转化。正常大鼠原代肝星状细胞中TERT mRNA的表达随细胞培养时间的增加而增加,但相邻时间点间差异无统计学意义(P>0.05)。与0 ng/mL组相比,0.1 ng/mL TGF-β1处理HSCs 1 d对TERT mRNA的表达无明显抑制作用,而浓度为1 ng/mL和10 ng/mL TGF-β1处理HSCs 1 d能显著抑制TERT mRNA的表达(P<0.05)。用1 ng/mL TGF-β1处理HSCs 3 d对TERT mRNA的表达无明细抑制作用,1 ng/mL TGF-β1处理HSCs 6 d能显著抑制TERT mRNA的表达(P<0.05)。TGF-β1对HSCs中TERT mRNA的抑制作用呈浓度和时间依赖性。结论:肝纤维化过程中,TGF-β1可能通过减少端粒酶反转录酶的表达来促进肝星状细胞的转化,从而促进肝纤维化的进展。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 肝星状细胞 端粒酶转录 肝纤维化
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