目的 :构建人白细胞介素 7(h IL - 7)的真核表达载体。方法 :从人脾脏组织的总 RNA中 ,用 RT- PCR方法扩增出编码成熟 h IL- 7的 c DNA,将其克隆于 p MD18- T质粒中 ,并进行序列测定。再将 h IL - 7c DNA以正义及反义插入真核、原核双...目的 :构建人白细胞介素 7(h IL - 7)的真核表达载体。方法 :从人脾脏组织的总 RNA中 ,用 RT- PCR方法扩增出编码成熟 h IL- 7的 c DNA,将其克隆于 p MD18- T质粒中 ,并进行序列测定。再将 h IL - 7c DNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体 p BK- CMV质粒 ,转化至大肠杆菌 DH5α。最后将表达的 lacz- h IL - 7重组蛋白行SDS- PAGE电泳 ,并作考马斯亮蓝染色分析 ,western blot鉴定。结果 :h IL- 7序列测定结果与预期一致。p BK-CMV- h IL- 7(正义插入 )的克隆表达重组蛋白 ,western blot证实此蛋白为 IL- 7。结论 :成功构建了 h IL- 7的真核表达载体 ,为进一步研究 h IL- 7的抗肿瘤作用创造了条件。展开更多
文摘目的 :构建人白细胞介素 7(h IL - 7)的真核表达载体。方法 :从人脾脏组织的总 RNA中 ,用 RT- PCR方法扩增出编码成熟 h IL- 7的 c DNA,将其克隆于 p MD18- T质粒中 ,并进行序列测定。再将 h IL - 7c DNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体 p BK- CMV质粒 ,转化至大肠杆菌 DH5α。最后将表达的 lacz- h IL - 7重组蛋白行SDS- PAGE电泳 ,并作考马斯亮蓝染色分析 ,western blot鉴定。结果 :h IL- 7序列测定结果与预期一致。p BK-CMV- h IL- 7(正义插入 )的克隆表达重组蛋白 ,western blot证实此蛋白为 IL- 7。结论 :成功构建了 h IL- 7的真核表达载体 ,为进一步研究 h IL- 7的抗肿瘤作用创造了条件。
