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新型二甲双胍碳点促进炎症微环境下人牙周膜干细胞成骨分化
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作者 王凯 李永凯 +2 位作者 黄姣 徐凌 危晶晶 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第15期1760-1770,共11页
目的拟制备一种新型二甲双胍碳点(metformin carbon dots,MCDs),以促进炎症微环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨分化潜能。方法以二甲双胍(metformin,Met)为前体,分别联合柠檬酸(citric acid,... 目的拟制备一种新型二甲双胍碳点(metformin carbon dots,MCDs),以促进炎症微环境下人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs)的成骨分化潜能。方法以二甲双胍(metformin,Met)为前体,分别联合柠檬酸(citric acid,CA)、抗坏血酸(ascorbic acid,AA)或羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CS)通过一步水热法合成3种不同类型的MCDs(分别记为MCDsCA、MCDsAA、MCDsCS),通过透射电镜、傅里叶变换红外光谱仪和紫外-可见分光光度计等表征其理化特性。使用CCK-8、激光共聚焦显微镜评估3种MCDs的生物相容性及其细胞摄取能力。采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色和ALP活性测定筛选出在炎症微环境下促进hPDLSCs成骨分化效果最佳的MCDs类型。通过ALP和茜素红S(alizarin red S,ARS)染色、qRT-PCR、Western blot等实验评估最适浓度下MCDsCS及其原料(Met+CS)对炎症微环境下hPDLSCs成骨分化的影响。结果成功合成3种具备良好理化性质和生物相容性的纳米级MCDs,且其均能被hPDLSCs成功摄取。MCDsCA和MCDsAA在较低浓度(0~0.50 mg/mL)内均能显著促进hPDLSCs的增殖,MCDsCS在较宽浓度(0~2.00 mg/mL)内表现出优异的细胞相容性;在炎症微环境下,MCDsCA和MCDsAA对hPDLSCs的ALP表达无明显改善,而MCDsCS则以浓度依赖性方式显著促进hPDLSCs的ALP表达,以0.10 mg/mL效果最佳(P<0.05)。0.10 mg/mL的MCDsCS相较于Met+CS更能显著促进炎症微环境下hPDLSCs的ALP表达和钙结节形成,提高成骨相关基因(ALP、Runt相关转录因子2、Ⅰ型胶原、骨钙素)和蛋白质(ALP、Runt相关转录因子2、骨钙素)的表达(P<0.01),降低炎症因子白细胞介素-1β和白细胞介素-6的水平(P<0.01)。结论成功制备出一种生物相容性良好的新型MCDsCS,可有效促进炎症微环境下hPDLSCs的成骨分化,并发挥抗炎作用,有望成为牙周炎治疗的潜在纳米材料。 展开更多
关键词 二甲双胍 碳点 牙周膜干细胞 成骨分化 炎症微环境
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炎症微环境下miR-210调控Twist1对牙周膜干细胞成骨分化的影响
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作者 郑兴 何家才 《实用口腔医学杂志》 北大核心 2025年第1期21-25,共5页
目的:研究炎症微环境下微小RNA(miR)-210调控Twist1对牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响。方法:培养PDLSCs,分为对照组、炎症组、miR-阴性对照(NC)组、炎症+miR-NC组、炎症+miR-210组、miR-NC+NC质粒组、炎症+miR-NC+NC质粒组、炎症+m... 目的:研究炎症微环境下微小RNA(miR)-210调控Twist1对牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响。方法:培养PDLSCs,分为对照组、炎症组、miR-阴性对照(NC)组、炎症+miR-NC组、炎症+miR-210组、miR-NC+NC质粒组、炎症+miR-NC+NC质粒组、炎症+miR-210+NC质粒组、炎症+miR-210+Twist1质粒组,各炎症组均采用10μg/L肿瘤坏死因子-α处理的方式建立炎症微环境,采用脂质体转染miR序列或质粒。处理24 h后检测miR-210和Twist1的表达水平;成骨诱导分化2周后检测茜素红染色的A590水平及Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)的表达水平。结果:炎症组的miR-210表达水平低于对照组,Twist1表达水平高于对照组(P<0.05);炎症+miR-NC组的miR-210表达水平及成骨诱导后的A590水平、Runx2及OCN表达水平均低于miR-NC组,Twist1表达水平高于miR-NC组(P<0.05);炎症+miR-210组的miR-210表达水平及成骨诱导后的A590水平、Runx2及OCN表达水平均高于炎症+miR-NC组,Twist1表达水平低于炎症+miR-NC组(P<0.05);miR-210组的Twist1表达水平及野生型Twist1报告基因的荧光值均低于miR-NC组(P<0.05);炎症+miR-210+Twist1质粒组的Twist1表达水平高于炎症+miR-210+NC质粒组,成骨诱导后的A590水平、Runx2及OCN表达水平均低于炎症+miR-210+NC质粒组(P<0.05)。结论:炎症微环境下miR-210表达降低,进而增加Twist1表达并抑制PDLSCs成骨分化。 展开更多
关键词 牙周 牙周膜干细胞 MIR-210 TWIST1 成骨分化
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KCNQ1OT1靶向miR-218对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖和成骨分化的影响
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作者 王思青 张茂奇 +1 位作者 胡婷婷 叶芳 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第6期559-564,共6页
目的探究KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向miR-218对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSC)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养hPDLSC,随机分为hPDLSC组、LPS组、pcDNA-KCNQ1OT1组、pcDNA组、miR-218组、miR-NC组。观察各组细胞增殖... 目的探究KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1OT1)靶向miR-218对脂多糖(LPS)诱导的人牙周膜干细胞(hPDLSC)增殖和成骨分化的影响。方法体外培养hPDLSC,随机分为hPDLSC组、LPS组、pcDNA-KCNQ1OT1组、pcDNA组、miR-218组、miR-NC组。观察各组细胞增殖和茜素红染色情况,分别检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,KCNQ1OT1和miR-218表达水平,白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,以及细胞中骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)、Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨形态发生蛋白2(BMP2)表达水平。双萤光素酶实验验证KCNQ1OT1和miR-218的关系。结果LPS组与hPDLSC组相比,miR-218组与pcDNA-KCNQ1OT1组相比,细胞增殖率、ALP活性、KCNQ1OT1以及OPN、OCN、RUNX2、BMP2表达水平降低,miR-218表达水平以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平升高(P<0.05);pcDNA-KCNQ1OT1组与LPS组相比,细胞增殖率、ALP活性、KCNQ1OT1以及OPN、OCN、RUNX2、BMP2表达水平升高,miR-218表达水平以及IL-1β、IL-6、TNF-α水平降低(P<0.05)。hPDLSC组、pcDNA-KCNQ1OT1组、miR-NC组钙化结节较多,为暗红色,LPS组、pcDNA组、miR-218组暗红色钙化结节较少。KCNQ1OT1和miR-218间有靶向关系。KCNQ1OT1-WT+miR-218组萤光素酶活性低于KCNQ1OT1-WT+miR-NC组(P<0.05)。结论KCNQ1OT1能够下调miR-218,促进LPS诱导的hPDLSC的增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 长链非编码RNA KCNQ1重叠转录物1 MIR-218 人牙周膜干细胞 成骨分化 脂多糖
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ADAM28 shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞增殖、分化和凋亡的影响
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作者 赵征 李杰 邱海燕 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期619-624,共6页
目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖、分化和凋亡的影响及作用机制。方法:用ADAM28 shRNA干扰载体转染HPDLSCs 48 h后检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞周期。酶... 目的:探讨金属蛋白酶解离素28(ADAM28)shRNA干扰载体对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖、分化和凋亡的影响及作用机制。方法:用ADAM28 shRNA干扰载体转染HPDLSCs 48 h后检测转染效率,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞周期。酶动力学法检测碱性磷酸酶(ALP)活性,Western blot检测分化相关基因CAP、Pax9蛋白的表达。FCM测定HPDLSCs凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白的表达差异。用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:重组干扰载体PGPU6/GFP/Neo-ADAM28-shRNA可高效转染HPDLSCs,干扰载体组的细胞增殖活性显著下降,S期、G 2+M期的细胞比例和细胞增殖指数(PI=S+G 2M)明显降低,ALP值明显降低,CAP、Pax9蛋白的表达水平下降,凋亡率显著提高,Bcl-2、Bax蛋白的表达水平上调。结论:ADAM28 shRNA干扰载体抑制HPDLSCs的增殖、分化,诱导HPDLSCs凋亡。其机制可能是干扰载体抑制金属蛋白酶域和类解离素域的催化裂解和类EGF功能域的促细胞增殖作用,阻碍Notch信号传递并参与细胞凋亡负反馈调节机制。 展开更多
关键词 金属蛋白酶解离素28 shRNA干扰载体 人牙周膜干细胞 增殖 分化 凋亡
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机械力作用下牙周膜干细胞调控骨重塑的研究进展 被引量:2
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作者 韩行 李颖辉 +2 位作者 李雯雯 徐书奎 马文盛 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期265-277,共13页
力诱导的牙周组织重塑在口腔稳态调控中具有重要意义。牙周膜为正畸牙移动(OTM)过程提供微环境支持,而牙周膜干细胞(PDLSC)作为重要的间充质干细胞,在调控牙周组织重塑中发挥重要作用。本文综述了机械力刺激下PDLSC调控骨重塑的研究进展... 力诱导的牙周组织重塑在口腔稳态调控中具有重要意义。牙周膜为正畸牙移动(OTM)过程提供微环境支持,而牙周膜干细胞(PDLSC)作为重要的间充质干细胞,在调控牙周组织重塑中发挥重要作用。本文综述了机械力刺激下PDLSC调控骨重塑的研究进展,指出PDLSC可通过多种途径感知机械力刺激,是具有多向分化能力及免疫调节作用的间充质干细胞。PDLSC通过调控骨骼系统细胞,如成骨细胞、破骨细胞及骨细胞的活动调节骨重塑,还可通过调控免疫系统活动间接影响骨重塑。本文总结了PDLSC在OTM骨重塑中的功能作用,为进一步探索机械力调控骨重塑的机制提供了基础。 展开更多
关键词 机械力 牙周膜干细胞 成骨分化 破骨细胞
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西格列汀激活基质细胞衍生因子-1/CXC趋化因子受体4信号通路对脂多糖诱导的人牙周膜干细胞增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响 被引量:2
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作者 唐小雪 周政 +1 位作者 李启期 姜丹丹 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期37-45,共9页
目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LP... 目的 探讨西格列汀对脂多糖(LPS)诱导的炎症微环境下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、凋亡、炎症和成骨分化的影响及分子机制。方法 体外培养hPDLSCs,用不同浓度的西格列汀处理后检测细胞活力,以确定后续西格列汀实验浓度。采用1μg/mL LPS刺激诱导24 h建立hPDLSCs炎症模型并分为空白组、对照组、西格列汀低浓度组(0.5μmol/L)、西格列汀中浓度组(1μmol/L)、西格列汀高浓度组(2μmol/L)、西格列汀高浓度+基质细胞衍生因子-1 (SDF-1)/CXC趋化因子受体4 (CXCR4)通路抑制剂(AMD3100)组(2μmol/L+10μg/mL)。细胞计数试剂盒-8检测培养24、48、72 h后的hPDLSCs增殖活性;流式细胞术检测培养72 h后hPDLSCs凋亡情况;诱导成骨分化21 d后茜素红染色检测hPDLSCs成骨分化能力,试剂盒测定hPDLSCs中碱性磷酸酶(ALP)活性;酶联免疫吸附检测hPDLSCs培养上清液中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测hPDLSCs中成骨分化相关基因Runt相关转录因子2 (RUNX2)、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)及SDF-1和CXCR4 mRNA表达;Western blot检测hPDLSCs中SDF-1、CXCR4蛋白表达。结果 与空白组比较,对照组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平显著降低,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05);与对照组比较,西格列汀低、中、高浓度组hPDLSCs增殖活性、矿化结节数量、染色强度、ALP活性和RUNX2、OCN、OPN mRNA及SDF-1、CXCR4 mRNA和蛋白表达水平依次升高,凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平依次降低(P<0.05);AMD3100可部分逆转高浓度西格列汀对LPS诱导的hPDLSCs的作用效果(P<0.05)。结论 西格列汀可能通过激活SDF-1/CXCR4信号通路促进LPS诱导的炎症微环境下hPDLSCs的增殖和成骨分化,抑制hPDLSCs凋亡和炎症反应。 展开更多
关键词 西格列汀 脂多糖 人牙周膜干细胞 成骨分化 基质细胞衍生因子-1 CXC趋化因子受体4
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M2型巨噬细胞通过调控氧化-抗氧化体系和线粒体自噬影响人牙周膜干细胞的成牙骨质分化潜能 被引量:4
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作者 甘典 陈发明 李璇 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期164-172,共9页
目的:探索巨噬细胞(Mφ)极化对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成牙骨质分化的影响及作用机制。方法:将THP-1人单核细胞分别诱导为M0、M1和M2型Mφ,用RPMI 1640基础培养基或不同极化状态Mφ来源的上清液与成牙骨质诱导液等比例混合制备条件培养... 目的:探索巨噬细胞(Mφ)极化对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成牙骨质分化的影响及作用机制。方法:将THP-1人单核细胞分别诱导为M0、M1和M2型Mφ,用RPMI 1640基础培养基或不同极化状态Mφ来源的上清液与成牙骨质诱导液等比例混合制备条件培养基(CM-Control、CM-M0、CM-M1和CM-M2)用于培养hPDLSCs,将条件培养基培养的hPDLSCs形成的细胞膜片包裹人脱矿牙本质基质(TDM)移植至裸鼠皮下进行异位牙骨质形成实验。以CM-Control组作为对照,通过HE染色实验观察类牙骨质样组织的形成;免疫荧光染色(IMF)和qRT-PCR,检测成牙骨质分化标记物骨涎蛋白(BSP)、牙骨质附着蛋白(CAP)和牙骨质蛋白-1(CEMP-1),氧化-抗氧化体系标记物超氧化物歧化酶1(SOD1)和核转录因子红系2相关因子2(NRF2)以及线粒体自噬标记物PTEN诱导假定激酶1(PINK1)和微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)的表达水平。结果:体内实验中,CM-M2组形成的类牙骨质样组织更多,CAP、CEMP-1蛋白表达量更高且伴随SOD1蛋白和PINK1、LC3蛋白表达水平升高,NRF2蛋白未见明显差异。体外实验中,CM-M2组BSP(P<0.01)、CAP(P<0.001)和CEMP-1(P<0.01)的mRNA水平上升,SOD1的mRNA水平上升(P<0.05),而NRF2的mRNA水平无统计学差异(P>0.05),PINK1的mRNA水平上升(P<0.05)。结论:M2型Mφ可能通过上调hPDLSCs的氧化-抗氧化体系和线粒体自噬水平促进hPDLSCs的成牙骨质分化潜能。 展开更多
关键词 成牙骨质分化 巨噬细胞极化 牙周膜干细胞 线粒体自噬
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巨噬细胞极化对牙周膜干细胞增殖、迁移、成骨分化的影响
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作者 李克朋 沈振国 +2 位作者 刘向东 程甜甜 王元银 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第8期1392-1398,共7页
目的 探究不同极化类型巨噬细胞(Mφs)对牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、迁移、成骨分化的影响。方法 组织块法分离培养PDLSCs;刺激人髓系白血病单核细胞(THP-1)活化为未分化的Mφs (M0)型后诱导极化为Ⅰ型Mφs(M1)和Ⅱ型Mφs(M2),实时荧光... 目的 探究不同极化类型巨噬细胞(Mφs)对牙周膜干细胞(PDLSCs)增殖、迁移、成骨分化的影响。方法 组织块法分离培养PDLSCs;刺激人髓系白血病单核细胞(THP-1)活化为未分化的Mφs (M0)型后诱导极化为Ⅰ型Mφs(M1)和Ⅱ型Mφs(M2),实时荧光定量PCR (qPCR)检测炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达水平;收集不同极化类型Mφs的培养上清液后刺激PDLSCs,对照(NC)组不添加Mφs的培养上清液,噻唑蓝(MTT)法检测对PDLSCs增殖的影响,划痕实验检测对PDLSCs迁移的影响,Western blot检测Runt相关转录因子2(RUNX2)和碱性磷酸酶(ALP)蛋白表达以及茜素红染色探究PDLSCs钙化结节沉积。结果 qPCR显示M1型Mφs中TNF-α、IL-1β和IL-6表达量较M0和M2型Mφs升高(P<0.05),M2型Mφs中IL-10和TGF-β表达量较M0和M1型Mφs升高(P<0.05);Western blot显示,与NC组相比,M0和M2组PDLSCs中RUNX2和ALP蛋白表达升高(P<0.05);茜素红染色显示,相较于NC组,M0、M1和M2组PDLSCs中钙化结节沉积增多;MTT结果表明M0和M1组PDLSCs的增殖较NC组受抑制(P<0.05);划痕实验显示M1和M2组PDLSCs迁移能力强于NC组。结论 M0和M1型Mφs抑制PDLSCs增殖,M1和M2型Mφs促进PDLSCs迁移,不同类型的Mφs均促进PDLSCs成骨分化。 展开更多
关键词 巨噬细胞 牙周膜干细胞 增殖 迁移 成骨分化
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基于转录组测序探讨柚皮素对脂多糖作用下人牙周膜干细胞的抗炎作用及相关机制 被引量:1
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作者 李俊玉 徐晓梅 +3 位作者 刘兴玉 曾婷 张丽 郑茜 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期512-520,共9页
目的联合使用转录组测序(RNA-seq)和生信分析,探究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)刺激下的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的抗炎作用及机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检... 目的联合使用转录组测序(RNA-seq)和生信分析,探究柚皮素(Nar)对脂多糖(LPS)刺激下的人牙周膜干细胞(hPDLSCs)的抗炎作用及机制。方法采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测Nar对LPS刺激下hPDLSCs增殖及炎性因子表达情况,筛选出Nar的最佳抗炎浓度。采用RNA-seq,以|log2FC|≥1且P≤0.05为标准筛选出显著差异基因(DEGs)。采用火山图分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析、String数据库及Cytoscape的MCODE模块筛选核心基因。ELISA、qRT-PCR和蛋白印迹实验(Western blot)检测对核因子κB(NF-κB)信号通路的影响。结果适宜浓度的Nar可减轻LPS刺激下hPDLSCs的炎症因子表达,促进其增殖,20μmol/LNar抗炎效果最佳。RNA-seq提示炎症相关信号通路显著富集。Nar通过抑制NF-κB信号通路产生抗炎作用,Nar与NF-κB抑制剂BAY11-7802效果相似。结论Nar可以通过抑制NF-κB信号通路发挥抗炎作用。Nar可能是辅助治疗牙周炎的一种潜在的药效成分。 展开更多
关键词 柚皮素 人牙周膜干细胞 抗炎作用 核因子ΚB 转录组测序
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表面纳米形貌对牙周膜干细胞衰老的作用研究
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作者 孙艳萍 廖立 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期172-180,共9页
目的探讨二氧化钛纳米管形貌对衰老牙周膜干细胞分化能力的影响。方法利用阳极氧化法,分别于20、70 V电压下制备出2种具有二氧化钛纳米管形貌的钛片(20V-NT、70V-NT),观察其表面形貌特征。在成骨诱导条件下培养年轻牙周膜干细胞,挑选具... 目的探讨二氧化钛纳米管形貌对衰老牙周膜干细胞分化能力的影响。方法利用阳极氧化法,分别于20、70 V电压下制备出2种具有二氧化钛纳米管形貌的钛片(20V-NT、70V-NT),观察其表面形貌特征。在成骨诱导条件下培养年轻牙周膜干细胞,挑选具有促进成骨分化作用的表面形貌。用RO3306和Nutlin-3a诱导年轻牙周膜干细胞衰老,获得衰老的牙周膜干细胞。诱导衰老牙周膜干细胞成骨分化,观察表面形貌对衰老牙周膜干细胞成骨分化的影响。结果阳极氧化法可在钛片表面形成纳米管形貌,且纳米管直径随电压的增大而增大;不同直径纳米管形貌对年轻牙周膜干细胞成骨分化的影响存在较大差异,20V-NT表面纳米形貌促成骨分化效果更明显。与光滑钛片相比,20V-NT表面纳米形貌提高了衰老牙周膜干细胞碱性磷酸酶阳性数量,促进了钙沉积以及成骨标志性基因Runt相关转录因子2、骨桥蛋白、骨钙素的表达。结论特定的表面纳米形貌能增强衰老牙周膜干细胞的分化能力,为牙周再生和进一步提高种植体的性能提供了一种有效方法。 展开更多
关键词 表面形貌 纳米管 成骨 衰老 牙周膜干细胞
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牙周膜-牙槽骨界面基质刚度梯度调控间充质干细胞免疫表型的力学生物学机制
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作者 马玉菲 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期106-106,共1页
目的在人体软-硬组织界面中,细胞尺度基质刚度梯度是细胞普遍经历的关键生物物理因素之一,其在发育和组织稳态中起重要作用。然而,目前细胞尺度基质刚度梯度对细胞行为和功能的影响研究甚少,如对间充质干细胞(MSCs)的免疫调节作用尚不... 目的在人体软-硬组织界面中,细胞尺度基质刚度梯度是细胞普遍经历的关键生物物理因素之一,其在发育和组织稳态中起重要作用。然而,目前细胞尺度基质刚度梯度对细胞行为和功能的影响研究甚少,如对间充质干细胞(MSCs)的免疫调节作用尚不清楚。本研究以牙周膜(PDL)-牙槽骨(AB)界面为例,研究基质刚度梯度调控MSCs免疫表型的作用和机制。方法表征健康和牙周炎大鼠PDL-AB界面微环境,包括矿物含量、胶原纤维排布和含量及MSCs免疫表型;基于微模塑技术开发双层聚丙烯酰胺水凝胶平台构建细胞尺度基质刚度梯度;通过实验和数理建模揭示基质刚度梯度调控MSCs免疫表型的潜在机制。结果牙周炎大鼠PDL-AB界面刚度梯度强度(SGS)明显低于健康组,这主要由于界面处存在低矿物含量梯度,且界面MSCs表现明显抗炎表型(即MSC2)。体外构建高SGS和低SGS基质,低SGS基质通过降低细胞极化诱导MSCs呈现更显著抗炎表型。潜在力学生物学机制可能与整合素β1簇和肌球蛋白ⅡB极化减少,导致H4K16ac定位依赖的染色质重塑,有助于TLR3基因表达密切相关。结论牙周炎大鼠PDL-AB界面MSCs通过调节细胞极化响应界面处低SGS并诱导其呈现抗炎表型。本研究为牙周组织工程和其他再生医学应用中合理设计软-硬组织界面的仿生策略提供指导。 展开更多
关键词 力学生物学 免疫表型 牙槽骨 组织界面 聚丙烯酰胺水凝胶 间充质干细胞 牙周膜 再生医学
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牙周膜干细胞向脂肪细胞方向定向诱导分化实验 被引量:9
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作者 贺慧霞 刘洪臣 +3 位作者 王东胜 曹均凯 张海钟 鄂玲玲 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期203-207,共5页
目的探讨人牙周膜干细胞(PDLSCs)向脂肪细胞定向分化潜能,分析其分化过程中形态与功能变化。方法免疫磁珠法分离人PDLSCs,用成脂诱导液连续诱导21d,通过倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪、RT-PCR、Westernblot及免疫荧光方法观察诱导... 目的探讨人牙周膜干细胞(PDLSCs)向脂肪细胞定向分化潜能,分析其分化过程中形态与功能变化。方法免疫磁珠法分离人PDLSCs,用成脂诱导液连续诱导21d,通过倒置显微镜、透射电镜、流式细胞仪、RT-PCR、Westernblot及免疫荧光方法观察诱导细胞形态、结构变化,分析其表面脂肪细胞特异性标志——低密度脂蛋白(LPL)和过氧化物酶体增殖物受体γ(PPAR-γ)的基因及蛋白表达时相及表达量,油红O染色检测脂滴分泌情况。结果诱导21d,诱导细胞呈脂肪细胞样圆形细胞,超微结构观察可见胞浆中大量脂肪细胞特征性脂滴。流式分析结果显示,有96.54%的PDLSCs向脂肪细胞分化。诱导细胞表达脂肪细胞特异性表面标志LPLmRNA和PPAR-γmRNA及PPAR-γ蛋白,且随诱导时间延长PPAR-γ蛋白表达量增加。诱导细胞产生油红O阳性染色的脂滴。结论人PDLSCs在适当条件下可定向分化为脂肪细胞样细胞,并具有脂肪细胞形态、结构和功能特点,具有可塑性。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 诱导 分化 脂肪细胞
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改良法分离培养人牙周膜干细胞 被引量:12
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作者 申涛 常慧君 +2 位作者 简从相 杨彦春 周继祥 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期71-74,78,共5页
目的改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定。方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代;测定克隆形成率;免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋... 目的改良法体外分离培养人牙周膜干细胞(PDLSC),并进行鉴定。方法采用酶消化组织块法获得人牙周膜细胞,通过有限稀释法克隆化培养、分离得到PDLSC,用含10%FBS的α-MEM培养液培养并传代;测定克隆形成率;免疫组织化学检测角蛋白及波形蛋白表达;流式细胞术分析细胞周期及表面标志物STRO-1、CD146的表达;并进行成骨、成脂诱导实验。结果本研究所得细胞有较强的克隆形成能力,波形蛋白染色阳性,角蛋白阴性,细胞周期分析大多细胞处于G0/G1期,STRO-1及CD146高表达,成骨、成脂诱导实验证明所得细胞有多向分化能力。结论改良法克隆化培养可成功分离得到PDLSC,为进一步研究PDLSC奠定了基础。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 鉴定 细胞克隆
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转化生长因子β1对牙周膜干细胞迁移、粘附及增殖的影响 被引量:9
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作者 王爽 丰培勋 +3 位作者 陈悦 石建峰 曹沛 张海娟 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期782-786,共5页
目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对牙周膜干细胞(PDLSCs)的迁移、粘附和增殖的影响,初步探讨TGF-β1通过影响牙周组织干细胞参与牙周改建的机制。方法分离培养人PDLSCs,鉴定其多向分化潜能。用Transwell法检测TGF-β1对PDLSCs的迁移... 目的研究转化生长因子β1(TGF-β1)对牙周膜干细胞(PDLSCs)的迁移、粘附和增殖的影响,初步探讨TGF-β1通过影响牙周组织干细胞参与牙周改建的机制。方法分离培养人PDLSCs,鉴定其多向分化潜能。用Transwell法检测TGF-β1对PDLSCs的迁移的影响。用粘附实验检测TGF-β1对PDLSCs粘附能力的影响。用MTT法和生长率法检测TGF-β1对PDLSCs增殖的影响。结果浓度为2.5ng/mL以及10ng/mL的TGF-β1可促进PDLSCs的迁移,而且此作用呈剂量效应关系。粘附实验结果显示,在分别作用2h和4h后,浓度为10ng/mL的TGF-β1可促进PDLSCs的粘附。MTT法的结果证实了TGF-β1可促进PDLSCs的增殖,该作用呈剂量效应关系。再将细胞在含有或者不含有10ng/mLTGF-β1的培养基中培养2、4、6d,对细胞进行计数后发现TGF-β1显著促进PDLSCs的生长。结论 TGF-β1可促进PDLSCs的迁移、粘附和增殖。推测TGF-β1可能通过诱导PDLSCs向牙周组织部位迁移并提高其粘附和增殖能力。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 TGF-β1 迁移 粘附 增殖
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脂多糖对人牙周膜干细胞增殖及炎性因子表达的影响 被引量:17
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作者 王岚 夏佳佳 +1 位作者 刘琪 金岩 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期286-290,共5页
目的观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖及炎性因子表达的影响。方法培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10μg.mL-1LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng.mL-1LPS刺激单核细胞的上清液培养... 目的观察牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)增殖及炎性因子表达的影响。方法培养和鉴定HPDLSCs。实验分为3组,A组采用含有10μg.mL-1LPS的α-MEM培养液培养HPDLSCs,B组采用含有10 ng.mL-1LPS刺激单核细胞的上清液培养HPDLSCs,C组采用α-MEM培养液培养HPDLSCs。MTT法检测HPDLSCs的增殖能力,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLSCs白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达。结果 HPDLSCs具有克隆形成能力和骨向及脂向分化能力。与C组相比,A组和B组均抑制HPDLSCs的增殖,且B组比A组的抑制作用更明显(P<0.05);A组和B组IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达均增加,且B组比A组增加更明显(P<0.05)。结论牙龈卟啉单胞菌可通过LPS直接或间接地一方面抑制HPDLSCs的增殖,另一方面增加炎性因子的表达,从而加重牙周炎症组织的损伤,延缓牙周组织的自我修复。 展开更多
关键词 脂多糖 人牙周膜干细胞 炎性因子
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蛇床子素通过调控miR⁃26a表达对人牙周膜干细胞生物学特性的影响 被引量:2
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作者 陈亚琼 高鹏 沈慧 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1690-1693,共4页
目的探究蛇床子素通过调控miR-26a表达对人牙周膜干细胞(PDLSCs)生物学特性的影响及其相关机制。方法体外培养PDLSCs细胞,以不同浓度蛇床子素(0、1×10^(-4)、1×10^(-5)、1×10^(-6)、1×10^(-7)mol/L)进行干预,筛选... 目的探究蛇床子素通过调控miR-26a表达对人牙周膜干细胞(PDLSCs)生物学特性的影响及其相关机制。方法体外培养PDLSCs细胞,以不同浓度蛇床子素(0、1×10^(-4)、1×10^(-5)、1×10^(-6)、1×10^(-7)mol/L)进行干预,筛选适宜浓度;另将细胞分为蛇床子素(1×10^(-5)mol/L)+anti-miR-NC组、蛇床子素(1×10^(-5)mol/L)+anti-miR-26a组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞活力和增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-26a表达,蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞增殖核抗原Ki67(Ki-67)、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP2)、基质金属蛋白酶(MMP9)蛋白表达。结果与对照组比较,1×10^(-5)mol/L蛇床子素组细胞OD值、迁移数、miR-26a表达和Ki-67、PCNA蛋白表达升高(P<0.05),MMP2、MMP9蛋白表达降低(P<0.05)。与蛇床子素+anti-miR-NC组比较,蛇床子素+anti-miR-26a组细胞OD值、迁移数、miR-26a表达和Ki-67、PCNA蛋白表达降低(P<0.05),MMP2、MMP9蛋白表达升高(P<0.05)。结论蛇床子素可能通过上调miR-26a表达促进PDLSCs细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 蛇床子素 人牙周膜干细胞(pdlscs) miR-26a 增殖 迁移
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淫羊藿苷促进人牙周膜干细胞增殖及骨向分化的作用 被引量:19
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作者 秦子顺 殷丽华 +6 位作者 王开娟 刘琪 程文晓 高鹏 孙可墨 钟梅 余占海 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期370-376,共7页
目的采用体外和体内方法研究淫羊藿苷(ICA)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及骨向分化的影响。方法采用体外酶消化组织块法培养h PDLSCs,有限稀释克隆法分离纯化,检测细胞表面标志物以进行鉴定。体外实验:h PDLSCs与1×10-7 mol... 目的采用体外和体内方法研究淫羊藿苷(ICA)对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)增殖及骨向分化的影响。方法采用体外酶消化组织块法培养h PDLSCs,有限稀释克隆法分离纯化,检测细胞表面标志物以进行鉴定。体外实验:h PDLSCs与1×10-7 mol·L-1 ICA共同培养,用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖情况,经碱性磷酸酶(ALP)染色后采用酶联免疫仪检测其骨向分化情况,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测其成骨基因的表达情况,茜素红染色检测其骨量表达。体内实验:将h PDLSCs和纳米羟磷灰石(n HAC)复合物经1×10-7 mol·L-1 ICA共同诱导培养后,将其植入免疫缺陷小鼠,术后30 d采用组织切片法观察成骨状况。结果体外实验:1×10-7 mol·L-1 ICA作用于h PDLSCs后,与不含ICA的对照组相比,实验组从培养的第2天开始,h PDLSCs增殖明显;培养3、5、7 d,实验组ALP活性明显升高;培养7 d,成骨基因的相对表达量明显增高;培养14、21、28 d,实验组钙化结节的面积明显大于对照组。体内实验:实验组骨量较对照组明显增加。结论 1×10-7 mol·L-1 ICA可以促进h PDLSCs的增殖及骨向分化,提示采用ICA代替常规生长因子应用于牙周组织工程具有一定可行性。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 淫羊藿苷 增殖 分化 纳米羟磷灰石
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人牙周膜干细胞的体外分离、纯化及初步鉴定 被引量:34
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作者 高秦 刘宏伟 +2 位作者 金岩 聂鑫 刘源 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期34-37,共4页
目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其生物学特性及表型特点并进行初步鉴定。方法:采用胶原酶和D ispase酶联合消化法培养人牙周膜干细胞,有限稀释法分离纯化,将克隆形成的细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析... 目的:体外分离纯化人牙周膜干细胞,研究其生物学特性及表型特点并进行初步鉴定。方法:采用胶原酶和D ispase酶联合消化法培养人牙周膜干细胞,有限稀释法分离纯化,将克隆形成的细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析及免疫组织化学染色技术检测抗波形丝蛋白(V im en-tin)、STRO-1、骨粘素(ON)、骨涎蛋白(BSP)的表达。结果:获得纯化人牙周膜干细胞,在透射电镜下,这种细胞核质比例大,核大,细胞器少;流式细胞仪细胞周期分析大多数细胞处于G0/G1期,为慢周期性;该细胞抗波形丝蛋白、STRO-1表达阳性、骨粘连素、骨桥蛋白弱阳性表达。结论:提供了比较有效的分离纯化牙周膜干细胞的方法。该方法分离的人牙周膜干细胞具有干细胞的超微结构、细胞周期及表型特点。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 细胞克隆 超微结构 细胞周期 免疫细胞化学 纯化技术
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肿瘤坏死因子-α对牙周膜干细胞骨向分化及Notch信号通路的影响 被引量:20
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作者 马玉 李淑慧 +1 位作者 丁欣欣 吴佩玲 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期184-189,共6页
目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化及Notch信号通路的影响,初步探讨在TNF-α影响下Notch信号通路对PDLSCs成骨分化的调控作用。方法采用酶消化结合组织块法获得PDLSCs,通过流式细胞仪检测间充质干细胞(MS... 目的研究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对牙周膜干细胞(PDLSCs)骨向分化及Notch信号通路的影响,初步探讨在TNF-α影响下Notch信号通路对PDLSCs成骨分化的调控作用。方法采用酶消化结合组织块法获得PDLSCs,通过流式细胞仪检测间充质干细胞(MSCs)表面标记物CD105、CD90、CD146、CD45、CD31的表达,将PDLSCs分为实验组(10ng·mL^(-1)TNF-α)和对照组(不含TNF-α),使用CCK-8法检测PDLSCs增殖能力;通过碱性磷酸酶(ALP)活性、茜素红染色、实时定量聚合酶链反应(PCR)检测TNF-α对PDLSCs成骨能力的影响;实时定量PCR检测Notch信号通路受体Notch1、Notch2、Notch3,配体JAG1、JGA2、DLL1,细胞内效应分子Hes-1的表达。结果流式细胞仪检测结果显示CD105、CD90及CD146表达阳性,CD45、CD31表达阴性;CCK-8法结果显示TNF-α能够促进PDLSCs增殖能力(P<0.05);ALP活性检测结果显示,实验组与对照组相比,ALP活性降低(P<0.05);茜素红染色结果显示,与对照组相比,实验组矿化结节减少;实时定量PCR结果显示,与对照组相比,成骨标志基因牙骨质附着蛋白(CAP)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)表达量明显降低(P<0.05);Notch信号通路相关分子中Notch1、Notch2、JAG1、JGA2、Hes-1的表达水平显著降低(P<0.05),而Notch3、DLL1的表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够促进PDLSCs增殖而抑制其骨向分化,同时抑制Notch信号通路的表达,说明Notch信号通路对PDLSCs骨向分化具有一定的调控作用。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞 NOTCH信号通路 肿瘤坏死因子-Α 成骨分化
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牙周膜干细胞中乙酰基转移酶MORF调控成骨的研究 被引量:3
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作者 袁林 孙晋 +6 位作者 程峰 杨征毅 曹依娜 潘广嗣 钱钧 何恩亮 王涵 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期778-782,共5页
目的:比较正常与炎症来源牙周膜干细胞(H-PDLSCs与P-PDLSCs)中乙酰基转移酶MORF表达水平的差异及其对PDLSCs分化的调控。方法:有限稀释法培养H-PDLSCs与P-PDLSCs,LPS、TNF-α、IL-β及三者混合物体外模拟炎症微环境诱导H-PDLSCs(IP-PDLS... 目的:比较正常与炎症来源牙周膜干细胞(H-PDLSCs与P-PDLSCs)中乙酰基转移酶MORF表达水平的差异及其对PDLSCs分化的调控。方法:有限稀释法培养H-PDLSCs与P-PDLSCs,LPS、TNF-α、IL-β及三者混合物体外模拟炎症微环境诱导H-PDLSCs(IP-PDLSCs);基因与蛋白检测方法对比2种来源PDLSCs中MORF的表达水平;蛋白检测方法检测IPPDLSCs中MORF的表达水平;基因、蛋白检测与茜素红染色方法对比H-PDLSCs及下调MORF基因后的PDLSCs成骨基因表达的差异。结果:与H-PDLSCs相比,P-PDLSCs中MORF的表达显著下降(P<0.05);IP-PDLSCs中MORF的表达下降;MORF基因被下调后,PDLSCs成骨能力下降(P<0.05)。结论:牙周炎及炎症微环境会导致PDLSCs中MORF表达的下降,从而使其成骨分化受到抑制。 展开更多
关键词 牙周膜干细胞(pdlscs) 牙周 乙酰基转移酶 成骨分化
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