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抗人滋养层细胞表面抗原-2单抗的制备及免疫学特性分析 被引量：6
1
作者 梁洁 刘琼琼 +6 位作者 张慧林 林红 唐奇 刘玉 苏亦平 冯振卿 朱进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期645-650,共6页
目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫... 目的:利用杂交瘤技术制备抗人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigen 2,Trop2)单克隆抗体并鉴定其免疫学特性。方法:以胰腺癌细胞系BxPC3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合后制备单抗。通过酶联免疫法、免疫荧光、免疫沉淀和质谱分析、流式细胞术、免疫组织化学等方法,鉴定单抗的免疫学特性。结果:通过细胞的融合与筛选,获得了持续分泌抗Trop2单抗的杂交瘤细胞株,该抗体可以识别细胞表面的Trop2膜蛋白,也可用于免疫组化识别人肿瘤组织中的Trop2蛋白,同时该抗体对乳腺癌细胞的生长具有一定的抑制作用。结论:该单抗具有作为Trop2阳性表达肿瘤靶向治疗的潜在应用价值。 展开更多
关键词 人滋养层细胞表面抗原-2 单克隆抗体 免疫组化
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靶向Trop2的嵌合抗原受体T细胞制备及其体外耗竭状态研究
2
作者 刘秀盈 李昕展 +3 位作者 朱晶晶 刘静静 冯义超 王建勋 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第15期1750-1759,共10页
目的设计并构建靶向滋养细胞表面糖蛋白抗原2(trophoblast cell surface antigen2,Trop2)的嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)细胞,通过重复抗原刺激构建体外细胞耗竭模型,并探究其抗肿瘤活性及耗竭特性。方法基... 目的设计并构建靶向滋养细胞表面糖蛋白抗原2(trophoblast cell surface antigen2,Trop2)的嵌合抗原受体T(chimeric antigen receptor T cell,CAR-T)细胞,通过重复抗原刺激构建体外细胞耗竭模型,并探究其抗肿瘤活性及耗竭特性。方法基于靶向Trop2的戈沙妥珠单链抗体可变区片段(single-chain variable fragment,scFv)序列构建二代CAR质粒,进行逆转录病毒载体颗粒包装。采用Ficoll法分离健康志愿者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),经OKT-3/IL-2活化后转导CAR病毒载体颗粒制备Trop2 CAR-T细胞,流式细胞术检测MYC标签评估CAR表达率。原代T细胞(primary T cell,P-T)组仅接受相同条件的培养基处理。体外建立人卵巢癌细胞(SKOV3)、人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)及人肺癌细胞(A549)3种典型的实体肿瘤细胞模型,流式细胞术验证Trop2抗原表达,将CAR-T组、P-T组分别与肿瘤细胞共培养,通过荧光素酶法检测不同效应细胞与靶细胞数量比例时的杀伤效率。构建体外耗竭CAR-T模型,利用Incucyte活细胞成像系统动态监测CAR-T长期杀伤能力。流式细胞术检测CAR-T细胞的PD-1和TIM3表达水平,CBA法分析细胞因子分泌水平,结合转录组测序和RT-qPCR验证耗竭相关差异基因。结果成功构建了靶向Trop2的二代CAR-T细胞,标签蛋白MYC显示的CAR阳性率为55.42%,体外实验显示,与P-T组相比,其对Trop2高表达肿瘤细胞(MDA-MB-453、SKOV3)具有抗原特异性及剂量依赖性杀伤效应(P<0.001)。通过体外重复肿瘤刺激建立的CAR-T细胞耗竭模型分析表明,耗竭状态的Trop2 CAR-T细胞对肿瘤的杀伤能力降低,而P-T细胞几乎无杀伤作用。与原始状态相比,耗竭状态CAR-T细胞表面抑制性受体PD-1和TIM-3表达上调(P<0.001),细胞因子分泌功能减弱,转录组分析揭示耗竭细胞出现多个差异表达基因,涉及免疫应答、T细胞受体信号通路等过程呈现下调趋势,而凋亡相关通路呈现激活状态,RT-qPCR分析进一步表明IL3、IL5、IL13等免疫调节基因亦异常表达(P<0.05)。结论靶向Trop2的二代CAR-T细胞在体外重复抗原刺激诱导的耗竭进程中,表现出抗肿瘤活性下降以及效应功能减弱、耗竭相关分子表达上调等典型耗竭特性。 展开更多
关键词 滋养细胞表面糖蛋白抗原2 嵌合抗原受体T细胞 T细胞耗竭 抗肿瘤活性
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LncRNA HIF1A-AS2通过抑制miR-138-5p促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化 被引量：7
3
作者 李勤 许娟秀 尧旋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第22期2210-2218,共9页
目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)缺氧诱导因子-1α-反义链2(hypoxia-inducible factor 1 alpha antisense RNA 2,HIF1A-AS2)对滋养层细胞侵袭和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和机制... 目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)缺氧诱导因子-1α-反义链2(hypoxia-inducible factor 1 alpha antisense RNA 2,HIF1A-AS2)对滋养层细胞侵袭和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的作用和机制。方法比较20个子痫前期(preeclampsia,PE)胎盘(PE组)和20个正常胎盘(对照组)组织中HIF1A-AS2及其预测的靶基因miR-138-5p的表达水平。选用人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/Svneo,在转染HIF1A-AS2过表达质粒、miR-138-5p拟似物和抑制物及各自阴性对照的HTR-8/SVneo细胞中,通过CCK-8检测细胞增殖、Transwell实验检测侵袭、Western blot检测细胞EMT标记分子和转录因子表达来研究HIF1A-AS2和miR-138-5p对滋养层细胞的作用和机制。通过荧光素酶基因报告实验验证HIF1A-AS2和miR-138-5p的结合关系。结果 PE胎盘中HIF1A-AS2显著降低(P<0.05),而miR-138-5p的表达显著增高(P<0.05)。过表达HIF1A-AS2能够抑制miR-138-5p的表达(P<0.05),促进HTR-8/SVneo细胞的侵袭能力(P<0.05),上调EMT标记分子Vimentin和N-cadherin以及EMT转录因子Twist1的表达水平(P<0.05)。此外,miR-138-5p抑制物与过表达HIF1A-AS2对HTR-8/SVneo细胞的作用相同,而miR-138-5p拟似物能够减弱过表达HIF1A-AS2对该细胞的作用。另外,HIF1A-AS2和miR-138-5p在HTR-8/Svneo细胞中可以直接结合。结论 LncRNA HIF1A-AS2能够促进滋养层细胞的侵袭和上皮间充质转化,其作用可能通过抑制miR-138-5p水平来实现。 展开更多
关键词 滋养层细胞 LncRNA HIF1A-AS2 miR-138-5p 侵袭 上皮间充质转化
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IL-2对人滋养层细胞的增殖活性和HCG分泌的影响
4
作者 孙琪 杨永秀 《医学研究生学报》 CAS 2004年第4期309-311,共3页
目的 :探讨白细胞介素 2 (IL 2 )对体外培养的正常孕早期滋养层细胞的增殖活性和绒毛膜促性腺激素(HCG)分泌的调节作用。　方法 :选取培养至第 4代生长良好的滋养层细胞 ,加入不同浓度的IL 2继续培养 4 8h后 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比... 目的 :探讨白细胞介素 2 (IL 2 )对体外培养的正常孕早期滋养层细胞的增殖活性和绒毛膜促性腺激素(HCG)分泌的调节作用。　方法 :选取培养至第 4代生长良好的滋养层细胞 ,加入不同浓度的IL 2继续培养 4 8h后 ,用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞的增殖活性 ,用放射免疫法测定HCG浓度。　结果 :①与对照组相比较 ,IL 2在低浓度 (10 0U/ml、4 0 0U/ml)时促进滋养层细胞的增殖活性和HCG分泌 (P <0 .0 5 ) ;在高浓度 (16 0 0U/ml、6 4 0 0U/ml、2 5 6 0 0U/ml)时抑制滋养层细胞的增殖活性 (P <0 .0 5 ) ,而对HCG分泌无影响。②IL 2与滋养层细胞增殖性之间呈负相关 ,与HCG分泌水平之间无相关性 ;滋养层细胞的增殖活性与HCG分泌水平之间呈正相关。　结论 :①不同浓度的IL 2对滋养层细胞的增殖活性产生不同的作用 ,具有明显的量效关系 ,为病理性妊娠发病机制的研究提供了新的依据 ,也为临床抗早孕、异位妊娠的治疗提供新的思路。②IL 2可能不直接对滋养层细胞HCG的合成与释放产生调节作用。 展开更多
关键词 白细胞介素-2 滋养层细胞 增殖 分泌 病理性妊娠
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流行性乙型脑炎病毒SA14-14-2株E蛋白基因在原核细胞中的高效表达及其表达产物的抗原性分析 被引量：6
5
作者 杨耀武 齐香荣 +3 位作者 陈德胜 何孔旺 陈溥言 沈国顺 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期31-35,共5页
目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并... 目的　获得JEVE蛋白基因并使其在E coli中高效表达 ,以研究其抗原活性 ,为进一步研制ELISA早期诊断试剂盒奠定基础。方法　根据已发表的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株序列 ,设计一对特异性引物 ,通过RT -PCR扩增出E蛋白基因的cDNA片段 ,并将其克隆入 pET - 32a(+)表达载体中 ,构建重组融合表达载体pET -E ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后 ,利用IPTG诱导获得高效表达。结果　扩增的E蛋白基因片段长 1113bp ,编码 371个氨基酸残基 ,该基因片段与国内发表的减毒株SA14 - 14 - 2碱基序列同源性为 10 0 %。表达产物分子量约为 6 2kD ,经Westernblotting分析表明表达产物具有较好的抗原性。结论　通过序列分析表明 ,我国的JEVSA - 14 - 14 - 2减毒株未发生基因突变。表达产物的稳定高效表达及其抗原特异性分析为今后ELISA早期诊断试剂盒的研制提供了依据。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 SA14-14-2株 E蛋白 基因表达 原核细胞 抗原性 基因克隆
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γ-干扰素基因转染对宫颈癌细胞株细胞周期及表面抗原的影响 被引量：3
6
作者 张磊 丁强 +1 位作者 许德华 刘新垣 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第3期270-273,共4页
目的 :研究IFN γ基因转染对宫颈癌细胞表面抗原、细胞周期的影响 ,初步探讨IFN γ基因治疗抗肿瘤作用的机制。方法 :制备含人IFN γ基因的真核表达质粒pcDNA 3 IFN γ ,脂质体包浆后转染人宫颈癌HeLa细胞株 ,流式细胞仪检测基因转染后H... 目的 :研究IFN γ基因转染对宫颈癌细胞表面抗原、细胞周期的影响 ,初步探讨IFN γ基因治疗抗肿瘤作用的机制。方法 :制备含人IFN γ基因的真核表达质粒pcDNA 3 IFN γ ,脂质体包浆后转染人宫颈癌HeLa细胞株 ,流式细胞仪检测基因转染后HeLa细胞表面HLA DR抗原表达、细胞凋亡及细胞周期的变化。结果 :IFN γ基因转染后 ,HeLa细胞表面的HLA DR的表达量明显增强 (P <0 .0 1)。转染IFN γ基因促进了HeLa细胞的凋亡 (P <0 .0 5 ) ,细胞的S期比例随作用时间延长而呈逐渐降低趋势 ,显示了基因转染后DNA的合成代谢受到抑制。结论 :IFN γ基因转染可有效增强宫颈癌细胞表面抗原的表达 ,诱导机体产生抗肿瘤免疫应答 ;并可能通过抑制细胞DNA的合成 ,促进细胞的凋亡 。 展开更多
关键词 Γ-干扰素 基因治疗 宫颈癌 细胞周期 表面抗原 捅亡 培养的肿瘤细胞
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环氧合酶-2在胃癌淋巴结转移灶中的表达及其与生存素和细胞核增殖抗原的关系 被引量：2
7
作者 檀碧波 李勇 +3 位作者 韩杰 范立侨 刘羽 张志栋 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期2007-2009,共3页
目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在胃癌淋巴结转移灶中的表达及其与生存素(Survivin)、细胞核增殖抗原(Ki-67)表达的关系。方法对40例伴淋巴结转移的胃癌手术标本的原发灶、淋巴结转移灶进行COX-2、Survivin、Ki-67免疫组化染色,比较三者在... 目的探讨环氧合酶-2(COX-2)在胃癌淋巴结转移灶中的表达及其与生存素(Survivin)、细胞核增殖抗原(Ki-67)表达的关系。方法对40例伴淋巴结转移的胃癌手术标本的原发灶、淋巴结转移灶进行COX-2、Survivin、Ki-67免疫组化染色,比较三者在淋巴结转移灶及原发灶中表达的差异。结果 (1)COX-2、Survivin在原发灶中强表达率分别为52.5%(21/40)、70.0%(28/40);在淋巴结转移灶中分别为72.5%(29/40)、72.5%(29/40)。COX-2在淋巴结转移灶中的表达显著高于原发灶,差异有统计学意义(χ2=4,P<0.05);但Survivin在淋巴结转移灶与原发灶中的表达强度比较差异无统计学意义(χ2=0.0667,P>0.05)。原发灶中Ki-67指数显著高于淋巴结转移灶(t=-2.17,P<0.05)。(2)双变量相关分析显示,原发灶中COX-2、Ki-67的表达与淋巴结转移灶中二者的表达均呈正相关(P<0.05)。(3)在原发灶中,COX-2与Survivin、Ki-67的表达均呈正相关(r值分别为0.6954和0.6084,P<0.01),Survivin与Ki-67的表达也呈正相关(r=0.6402,P<0.01);在淋巴结转移灶中,COX-2与Ki-67的表达呈正相关(r=0.3350,P<0.05)。结论胃癌淋巴结转移灶中COX-2表达与原发灶比较已经出现异质性变化;COX-2可能通过调控Survivin、Ki-67的表达而参与胃癌细胞的增殖和凋亡过程。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤转移 环氧合酶-2 生存素 细胞核增殖抗原
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IL-2-PE40抑制大鼠角膜上皮细胞MHC抗原表达的研究 被引量：1
8
作者 吴京 黄发明 王小宁 《眼科新进展》 CAS 2002年第1期4-5,共2页
目的　了解正常大鼠角膜细胞在体外经 γ-干扰素诱导后 ,M HC- 、 类抗原异常表达的情况 ,并观察比较 IL- 2 -PE4 0、Cs A对角膜细胞 M HC- 、 类抗原异常表达的免疫抑制作用。方法　采用 ACA S- 570粘附式细胞分析仪和免疫荧光技术 ... 目的　了解正常大鼠角膜细胞在体外经 γ-干扰素诱导后 ,M HC- 、 类抗原异常表达的情况 ,并观察比较 IL- 2 -PE4 0、Cs A对角膜细胞 M HC- 、 类抗原异常表达的免疫抑制作用。方法　采用 ACA S- 570粘附式细胞分析仪和免疫荧光技术 ,对体外原代培养经γ-干扰素诱导后的正常大鼠角膜上皮细胞 M H C- 、 类抗原表达的相对量进行测定 ,并在培养液中加入新型免疫抑制剂 IL- 2 - PE4 0及 Cs A,进一步测定角膜细胞 MH C- 、 类抗原的表达量。结果　未加入 γ-干扰素 ,MH C- 类抗原的表达量为 98.1± 13 .9,MH C- 类抗原无表达 ,经 γ-干扰素诱导后 MH C- 类抗原的表达量为 10 0 6.1±2 6.2 ,MH C- 类抗原的表达量为 997.2± 2 3 .1,有显著性差异。 IL - 2 - PE4 0组 MH C- 类抗原表达量为 618.9± 2 1.3 ,M HC- 类抗原表达量为 691.3± 2 2 .1,Cs A组 MH C- 类抗原表达量为 62 3 .6± 2 2 .1,M HC- 类抗原表达量为 689.3± 2 5.0 ,两者分别与注射用水组比较 ,有显著性差异 ,两者之间比较差异不显著。结论　在体外 ,γ-干扰素可诱导角膜上皮细胞 MH C- 、 类抗原的异常表达 ;IL- 2 - PE4 0及 Cs A均能不同程度地抑制这种表达。 展开更多
关键词 大鼠 角膜移植 主要组织相容性复合体抗原 白细胞介素-2-绿脓杆菌毒素
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肌肉来源干细胞表面抗原-1阳性与阴性细胞体外培养成肌特性的比较
9
作者 车晓霞 赵彤 +1 位作者 朱玲玲 郭杰 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期369-371,374,共4页
目的探讨干细胞表面抗原-1(Sca-1)在成肌细胞增殖分化中的作用。方法采用流式荧光细胞分选技术,从C57BL/6小鼠骨骼肌中分离Sca-1+与Sca-1-细胞进行体外培养,使用CCK-8试剂盒检测2种细胞的增殖曲线,Westernblot测定2种细胞在体外培养过程... 目的探讨干细胞表面抗原-1(Sca-1)在成肌细胞增殖分化中的作用。方法采用流式荧光细胞分选技术,从C57BL/6小鼠骨骼肌中分离Sca-1+与Sca-1-细胞进行体外培养,使用CCK-8试剂盒检测2种细胞的增殖曲线,Westernblot测定2种细胞在体外培养过程中Sca-1、MyoD、成肌素(Myogenin)的蛋白表达。结果在体外培养的前3 d,Sca-1+与Sca-1-细胞增殖曲线没有明显差别;3 d后,Sca-1-细胞增殖比Sca-1+细胞明显加速。同时,2种细胞在体外培养过程中Sca-1均没有明显表达,而Sca-1+细胞的成肌调节因子表达比Sca-1-细胞显著增加。结论 Sca-1的表达在细胞生长发育过程中具有时段性,与成肌细胞细胞周期的起止有关。 展开更多
关键词 干细胞表面抗原-1 肌肉干细胞 成肌调节因子 细胞周期
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食管癌患者外周血MAGE-C2抗原特异性CD8^+ T细胞的功能及临床意义 被引量：4
10
作者 李璞璞 陈新峰 +4 位作者 平玉 张震 秦国慧 黄岚 张毅 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期476-480,共5页
目的:评价食管癌患者外周血恶性黑色素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-C2抗原特异性CD8^+ T细胞的功能,并分析其与临床病理参数的相关性。方法:密度梯度离心法获取130例食管癌初治患者(收集自2014年11月至2015年11月郑... 目的:评价食管癌患者外周血恶性黑色素瘤相关抗原(melanoma-associated antigen,MAGE)-C2抗原特异性CD8^+ T细胞的功能,并分析其与临床病理参数的相关性。方法:密度梯度离心法获取130例食管癌初治患者(收集自2014年11月至2015年11月郑州大学第一附属医院胸外科)的PBMC,流式细胞术、RT-PCR方法筛选HLA-A2*0201和MAGE-C2共阳性的患者,其PBMC培养7、14 d后加MAGE-C2(336-344)抗原肽1μg/ml、IL-2 100μg/ml和CD3/CD28 Dynabeads 2μl处理,诱导扩增抗原特异性CD8^+ T细胞,流式细胞术检测CD8^+ T细胞表面CD107a和胞内IFN-γ的水平,并分析其与临床参数的相关性。结果:筛选出52例HLA-A2*0201和MAGE-C2共阳性的患者,MAGE-C2(336-344)处理其PBMC后,MAGE-C2(336-344)处理组CD8^+ T细胞中CD107a^+IFN-γ^+,CD107a^+IFN-γ^-和CD107a^-IFN-γ^+细胞的比例明显升高(P<0.05);CD107a的表达在早期、未发生淋巴结转移和高分化的食管癌患者明显高于晚期、发生淋巴结转移和低分化的癌症患者(P<0.05);IFN-γ的表达在高分化的食管癌患者明显高于低分化的食管癌患者(P<0.05)。结论:成功诱导扩增MAGE-C2抗原特异性CD8^+ T细胞,并发现其功能与食管癌的分期和淋巴结转移相关,似可作为一种理想的免疫治疗靶点。 展开更多
关键词 食管癌 CD8^+ T细胞 恶性黑色素瘤相关抗原-C2 CD107a 干扰素-Γ
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靶向TROP-2的抗体药物偶联物在晚期非小细胞肺癌中的研究进展及展望
11
作者 许静妍 刘嘉淇 +1 位作者 梅世琪 周清 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期763-776,共14页
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)仍是全球范围内的重大健康负担,患者亟待新的治疗选择。人滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell surface antigen-2,TROP-2)作为一种与NSCLC预后密切相关的靶点,已成为近年来的研究热... 非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)仍是全球范围内的重大健康负担,患者亟待新的治疗选择。人滋养层细胞表面抗原2(trophoblast cell surface antigen-2,TROP-2)作为一种与NSCLC预后密切相关的靶点,已成为近年来的研究热点。其中,靶向TROP-2的抗体药物偶联物(antibody-drug conjugates,ADC)在NSCLC治疗领域取得了突破性进展。临床研究表明,部分TROP-2 ADC药物可显著改善既往经治的晚期/转移性NSCLC患者(无论是否伴有可靶向基因组改变)的无进展生存期,且在后线及一线治疗中均表现出可观的获益潜能。在药物安全性方面,尽管此类药物所引发的血液系统、呼吸系统和消化系统等各系统的不良反应大多可控,但仍需临床密切监测和及时管理。总之,TROP-2 ADC在NSCLC治疗领域具有广阔前景。 展开更多
关键词 肺肿瘤 可靶向基因组改变 抗体药物偶联物 人滋养层细胞表面抗原2 药物治疗
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miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用研究 被引量：13
12
作者 吴琪瑞 王艳华 +5 位作者 刘林英 高丽娜 殷荷 张玉月 韩可栋 张慧萍 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期601-605,共5页
目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transw... 目的探讨miR-488-3p在子痫前期胎盘滋养层细胞侵袭和迁移中的作用。方法qRT-PCR检测胎盘组织中miR-488-3p的表达;并与子痫前期患者的临床特征进行相关性分析;同时,体外培养人绒毛膜滋养层细胞,并转染miR-488-3p mimic和inhibitor;Transwell观察miR-488-3p对滋养层细胞侵袭和迁移的影响;生物信息学软件预测miR-488-3p下游作用靶点,并在胎盘组织中验证其表达;最后,qRT-PCR检测滋养层细胞中miR-488-3p对MMP2表达的影响。结果与正常孕妇比较,子痫前期患者胎盘组织中miR-488-3p表达水平明显升高,并与收缩压、舒张压呈正相关,而MMP2表达水平降低;过表达miR-488-3p后抑制滋养层细胞侵袭和迁移能力,MMP2表达水平降低;而抑制miR-488-3p表达则相反。结论miR-488-3p在子痫前期胎盘组织中升高,可能通过沉默MMP2,抑制滋养层细胞的侵袭和迁移参与子痫前期的发病。 展开更多
关键词 子痫前期 miR-488-3p 滋养层细胞 侵袭 迁移 MMP2
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CD133、TROP-2在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究初探 被引量：2
13
作者 顾宇平 朱一蓓 +2 位作者 张光波 赵云根 黄建安 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1396-1400,共5页
目的:探讨肿瘤干细胞标志物CD133、人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP-2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化、免疫荧光法检测CD133、TROP-2在NSCLC中... 目的:探讨肿瘤干细胞标志物CD133、人滋养层细胞表面抗原-2(trophoblast cell-surface antigens 2,TROP-2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法:用免疫组化、免疫荧光法检测CD133、TROP-2在NSCLC中的表达,激光共聚焦显微镜观察其定位和共定位。结果:①CD133、TROP-2在NSCLC组织中的阳性表达率分别为30.00%和41.25%,均明显高于癌周正常肺组织及肺良性病变组织(P<0.01);②细胞分化程度越低,CD133表达阳性率越高(P=0.024);③CD133、TROP-2在有淋巴结转移组的阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05),TROP-2的阳性表达率随着TNM分期的升高而升高(P<0.05);④CD133、TROP-2在NSCLC中的表达具有密切相关性(P<0.001),且两种蛋白有共定位现象。结论:CD133、TROP-2的阳性表达均与NSCLC的侵袭、转移密切相关,初步证实二者在NSCLC组织中存在共定位关系,CD133联合TROP-2或许能成为NSCLC的肿瘤干细胞筛选标记物。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 肿瘤干细胞 CD133 人滋养层细胞表面抗原-2
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三氯生对人早孕滋养细胞11β-HSD2和HLA-G表达的影响 被引量：2
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作者 杨倩兰 王育 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期787-792,共6页
目的探讨三氯生对人早孕滋养细胞11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)和人类白细胞分化抗原G(HLA-G)表达的影响。方法采用改良的Kliman法分离提纯早孕滋养细胞,分离得到的滋养细胞包括绒毛细胞滋养细胞和绒毛外细胞滋养细胞,绒毛细胞滋养... 目的探讨三氯生对人早孕滋养细胞11β-羟类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)和人类白细胞分化抗原G(HLA-G)表达的影响。方法采用改良的Kliman法分离提纯早孕滋养细胞,分离得到的滋养细胞包括绒毛细胞滋养细胞和绒毛外细胞滋养细胞,绒毛细胞滋养细胞体外培养的过程中合体化形成合体滋养细胞,培养3 d后,以不同浓度的三氯生(0、0.0001、0.001、0.01、0.1、1μmol/L)染毒处理早孕滋养细胞24 h,Western blotting检测合体滋养细胞11β-HSD2的表达及绒毛外细胞滋养细胞HLA-G的表达,明胶酶谱实验检测绒毛外细胞滋养细胞基质金属蛋白酶2/9(MMP2/9)的酶活性。结果经三氯生染毒处理后,合体滋养细胞中11β-HSD2的表达及绒毛外细胞滋养细胞中HLA-G的表达均显著减少,绒毛外细胞滋养细胞MMP2/9的酶活性降低。结论一定浓度的三氯生可以抑制人早孕滋养细胞11β-HSD2和HLA-G的表达及MMP2/9的酶活性。提示过量暴露三氯生可能对女性生殖健康产生不利影响。 展开更多
关键词 三氯生 绒毛外细胞滋养细胞 合体滋养细胞 11β-羟类固醇脱氢酶2 人类白细胞分化抗原G 基质金属蛋白酶2/9
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转化生长因子-β1、Clara细胞分泌蛋白16、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6与支气管肺发育不良的相关性研究 被引量：6
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作者 贺成光 朱筛成 陈大业 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期74-81,共8页
目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、克拉拉细胞分泌蛋白16(clara cell secretory protein,CC16)、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6 (krebs yon denlungen-6,KL-6)在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasi... 目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、克拉拉细胞分泌蛋白16(clara cell secretory protein,CC16)、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6 (krebs yon denlungen-6,KL-6)在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)大鼠肺组织中的表达,以及这些蛋白的表达与肺细胞凋亡的关系。方法按随机数字表法随机将SD新生鼠随机分为对照组、模型组,模型组持续暴露在80%~85%氧中构建BPD模型,对照组始终暴露在空气中。每组在7 d,14 d,21 d时(简称为7 d模型组、14 d模型组、21 d模型组)随机选出8只新生鼠处死,留取5 m L血清。HE染色观察各组肺组织病理学改变,并分析辐射状肺泡计数(radial alveolar count,ROC),肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)。TUNEL染色检测各组肺组织中的细胞凋亡。ELISA检测各组新生鼠的血清中TGF-β1、CC16、KL-6的水平。Western blot检测各组肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达水平。同时分析肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达与肺组织细胞凋亡率的关系。结果与正常组相比,模型组肺组织随暴露氧时间的延长BPD损伤加剧,RAC、血清中CC16的水平以及肺组织中CC16的表达明显减少,MLI、细胞凋亡率、血清中TGF-β1、KL-6的水平,肺组织中TGF-β1、KL-6的表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,模型组新生鼠肺组织中TGF-β1、KL-6的表达与肺组织的细胞凋亡率呈正相关(r=0.977、0.970,均P=0.000),CC16的表达与细胞凋亡率呈现负相关(r=-0.982,P=0.000)。结论肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达与BPD肺组织的细胞凋亡密切相关。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 克拉拉细胞分泌蛋白16 Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6 支气管肺发育不良 肺细胞凋亡
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β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白的生物信息学分析、真核表达与鉴定
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作者 高雯琬 陈思吟 +1 位作者 徐敏 陶崑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期398-403,共6页
目的应用生物信息学方法对β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白进行结构、功能预测分析,并对该蛋白进行真核表达与纯化。方法运用在线蛋白质分析软件ProtParam预测β2m-linker 2-HLA A24蛋白理化性质;... 目的应用生物信息学方法对β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24)蛋白进行结构、功能预测分析,并对该蛋白进行真核表达与纯化。方法运用在线蛋白质分析软件ProtParam预测β2m-linker 2-HLA A24蛋白理化性质;磷酸化位点预测软件NetPhos和蛋白质二级结构预测软件SOPMA分析其磷酸化位点和二级结构;并利用蛋白质结构模型预测工具SWISS-MODEL建立三级结构模型。构建含组氨酸标签(His tag)的重组质粒pcDNA3.4/β2m-linker 2-HLA A24-His tag,在Expi293F细胞表达,经镍柱亲和层析获得β2m-linker 2-HLA A24蛋白;采用SDS-PAGE、Western blot、间接ELISA验证蛋白的纯度和性质。结果β2m-linker 2-HLA A24蛋白含有44个磷酸化位点,属于亲水性蛋白,二级结构以无规卷曲为主,并成功构建三级结构模型;成功构建pcDNA3.4/β2m-linker 2-HLA A24-His tag重组质粒,并在Expi293F细胞表达系统中获得可溶性表达。结论成功构建β2m-linker 2-HLA A24蛋白,生物信息学结果显示该蛋白具备与抗原肽结合并激活T细胞的功能。为后续联合使用该蛋白与抗原肽激活抗原特异性CD8^+T细胞实验奠定了基础。 展开更多
关键词 β2微球蛋白-接头蛋白2-人类白细胞抗原A24(β2m-linker 2-HLA A24) 生物信息学 真核表达
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佛波酯对猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的作用及有关信号机制研究
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作者 郭雨楠 王恩慈 +5 位作者 张溪园 张旭日 王建民 汪洋 刘岩琪 姜代勋 《北京农学院学报》 2022年第3期88-92,共5页
【目的】研究佛波酯诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1表达的作用及有关信号机制。【方法】采用密度梯度离心法分离纯化猪外周血中性粒细胞,以流式细胞术检测中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1表达,分别以实时荧光定量PCR... 【目的】研究佛波酯诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1表达的作用及有关信号机制。【方法】采用密度梯度离心法分离纯化猪外周血中性粒细胞,以流式细胞术检测中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1表达,分别以实时荧光定量PCR、Western Blot法检测信号蛋白p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调控激酶的基因表达和磷酸化活性。【结果】20、30 nmol/L的佛波酯能极显著促进猪中性粒细胞巨噬细胞表面分子抗原-1的表达(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在0.5、6 h可明显增加猪中性粒细胞p38丝裂原活化蛋白激酶的基因表达量(P<0.05,P<0.01);在0.5、3和6 h可极显著增加猪中性粒细胞胞外信号调控激酶的基因表达量(P<0.01)。与对照相比,佛波酯在1、5和30 min可极显著促进p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化活性(P<0.01);在0.5、1、5和30 min可明显促进胞外信号调控激酶磷酸化活性(P<0.05,P<0.01)。【结论】佛波酯能诱导猪中性粒细胞黏附分子巨噬细胞表面分子抗原-1的表达,其机制至少与上调p38丝裂原活化蛋白激酶、胞外信号调控激酶的基因表达与磷酸化活性有关。 展开更多
关键词 P38丝裂原活化蛋白激酶 胞外信号调控激酶 佛波酯 黏附分子 中性粒细胞 巨噬细胞表面分子抗原-1 猪
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芳香烃受体(AhR)内源性配体ITE对胎盘滋养层细胞的增殖抑制作用及其机制 被引量：5
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作者 郝克红 王凯 +1 位作者 陈晓 段涛 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期488-493,共6页
目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)的内源性配体2-(1′H-吲哚-3′-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对胎盘滋养层细胞增殖的影响及其机制。方法用免疫组织化学及Western blot检测AhR在早期绒毛和晚期胎盘组织中的表达,利用... 目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)的内源性配体2-(1′H-吲哚-3′-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE)对胎盘滋养层细胞增殖的影响及其机制。方法用免疫组织化学及Western blot检测AhR在早期绒毛和晚期胎盘组织中的表达,利用人胎盘滋养层细胞系JEG-3和JAR作为细胞模型研究ITE对胎盘滋养层细胞增殖的影响。结果 AhR主要分布于人胎盘合体滋养层细胞的胞质中,并且晚期胎盘组织中AhR蛋白的表达水平高于早期绒毛组织(P<0.05)。AhR蛋白质在JEG-3中表达较高,而在JAR中几乎检测不到。ITE可诱导JEG-3细胞中AhR下游靶基因细胞色素P4501A1(CYP1A1)mRNA的表达,该诱导作用具有剂量和时间依赖性。同时,ITE使JEG-3细胞滞留于细胞周期的S期,进而抑制细胞的增殖。结论 ITE通过激活AhR信号通路抑制胎盘滋养层细胞的增殖,该抑制作用主要通过调节细胞周期的改变来实现。 展开更多
关键词 2-(1'H-吲哚-3'-羰基)噻唑-4-羧酸甲酯(ITE) 芳香烃受体(AhR) 胎盘滋养层细胞 细胞增殖 细胞周期
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环氧合酶-2抑制剂对盐酸诱导大鼠胃粘膜损伤后上皮细胞增殖和愈合的影响 被引量：4
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作者 孙为豪 欧希龙 +6 位作者 俞谦 曹大中 陈洪 俞婷 邵华 朱峰 孙运良 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1508-1512,共5页
目的 :探讨特异性和非特异性环氧合酶 - 2 (COX - 2 )抑制剂 ,对盐酸诱导胃粘膜损伤后上皮细胞增殖和损伤愈合的影响。方法 :大鼠胃内给予 0 6mol/LHCl 1mL后 ,胃内给予NS - 398或吲哚美辛 ,Westernblot和免疫组化法分析盐酸灌胃前、... 目的 :探讨特异性和非特异性环氧合酶 - 2 (COX - 2 )抑制剂 ,对盐酸诱导胃粘膜损伤后上皮细胞增殖和损伤愈合的影响。方法 :大鼠胃内给予 0 6mol/LHCl 1mL后 ,胃内给予NS - 398或吲哚美辛 ,Westernblot和免疫组化法分析盐酸灌胃前、后胃粘膜COX - 2表达 ,免疫组化检测增殖细胞核抗原 (PCNA)评价上皮细胞的增殖状态 ,小格图纸法计算胃损伤指数 (LI)。结果 :盐酸灌胃后 ,COX - 2在胃粘膜表层上皮细胞和腺颈部成体干细胞高表达。盐酸灌胃后 2 4h ,NS - 3984 0mg/kg组及吲哚美辛组PCNA标记指数 (PCNA -LI)分别为 (2 2 72± 4 33) %和(2 1 98± 5 18) % ,明显低于对照组 (34 4 6± 3 6 1) % (P <0 0 5 ) ;NS - 3984mg/kg组和 4 0mg/kg组LI分别为 (1 2 8±0 5 8) %和 (1 16± 0 5 6 ) % ,显著高于对照组 (0 5 8± 0 2 4 ) % (P <0 0 5 )。结论 :COX - 2抑制剂抑制胃粘膜上皮细胞增殖 ,延迟大鼠胃粘膜损伤的愈合 ,提示COX - 2表达在胃粘膜再生过程中起重要作用。 展开更多
关键词 胃粘膜损伤 盐酸 增殖细胞核抗原 环氧合酶-2抑制剂 上皮细胞 细胞增殖 损伤愈合
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联合检测外周血游离LUNXmRNA、SCC和β2-MG对非小细胞肺癌的早期诊断价值 被引量：9
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作者 陈巧巧 孙一奎 王峰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期720-721,725,共3页
目的:探讨一种联合检测外周血游离LUNXmRNA、鳞状细胞癌相关抗原(SCC)和β2-微球蛋白(β2-MG)对非小细胞肺癌(NSCLC)的早期诊断方法。方法:收集69例非小细胞肺癌患者的血浆和血清,分别检测外周血游离LUNXmRNA、SCC和β2-MG值,统计分析... 目的:探讨一种联合检测外周血游离LUNXmRNA、鳞状细胞癌相关抗原(SCC)和β2-微球蛋白(β2-MG)对非小细胞肺癌(NSCLC)的早期诊断方法。方法:收集69例非小细胞肺癌患者的血浆和血清,分别检测外周血游离LUNXmRNA、SCC和β2-MG值,统计分析整理数据。结果:69例非小细胞肺癌患者联合检测外周血游离LUNXmRNA、SCC和β2-MG,其阳性率为82.6%,敏感度为89.8%。结论:联合检测对非小细胞肺癌的检测的阳性率和敏感度都大大提高,有助于提高非小细胞肺癌的早期诊断价值。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 外周血游离LUNXmRNA 鳞状细胞癌相关抗原(SCC) β2-微球蛋白(β2-MG)
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