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槲皮素对5-氟尿嘧啶诱导的人永生化角质形成细胞损伤的保护作用及其机制
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作者 李佳欣 王一 +2 位作者 吴婷婷 郝诗睿 付晓 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期428-436,共9页
目的:探讨槲皮素对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的人永生化角质形成细胞(HACAT)损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:将HACAT细胞分为对照组(正常培养细胞)、5-FU组(7.5 mg·L^(-1) 5-FU作用于HACAT细胞24 h)和低、中及高剂量槲皮素组(2... 目的:探讨槲皮素对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导的人永生化角质形成细胞(HACAT)损伤的保护作用,并阐明其作用机制。方法:将HACAT细胞分为对照组(正常培养细胞)、5-FU组(7.5 mg·L^(-1) 5-FU作用于HACAT细胞24 h)和低、中及高剂量槲皮素组(25,50和75μmol·L^(-1)的槲皮素与7.5 mg·L^(-1) 5-FU共同作用于HACAT细胞24 h)。采用细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测不同剂量(0、10、25、50、75和100μmol·L^(-1))槲皮素处理后各组HACAT细胞存活率,活性氧(ROS)荧光探针法检测各组HACAT细胞中ROS水平,荧光素标记的AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测HACAT细胞凋亡情况,Western blotting法检测各组HACAT细胞中B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解型天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白水解酶3 (Cleaved Caspase-3)、环氧合酶2(COX-2)、白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素6 (IL-6)蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测,与0μmol·L^(-1)槲皮素组比较,10、25、50和75μmol·L^(-1)槲皮素组HACAT细胞存活率无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),而100μmol·L^(-1)槲皮素组HACAT细胞存活率明显降低(P<0.05);与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组细胞存活率明显升高(P<0.05)。ROS荧光探针法检测,与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中ROS水平明显降低(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI双染法检测,与5-FU组比较,低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。Western blotting法检测,与5-FU组比较,中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05);低、中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05);中和高剂量槲皮素组HACAT细胞中COX-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05);中剂量槲皮素组HACAT细胞中IL-1β和IL-6蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:槲皮素对5-FU诱导的HACAT细胞损伤具有保护作用,其机制可能与减少ROS和COX-2等炎症因子表达从而抑制细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 槲皮素 手足综合征 人永生化角质形成细胞 细胞凋亡 环氧合酶2
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枸杞籽油对中波紫外线诱导人永生化角质形成细胞光损伤的防护作用 被引量:2
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作者 王学红 尹星星 +2 位作者 陆杰 张靖鹏 杨永晶 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期47-55,共9页
明确枸杞籽油对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用,进一步提高枸杞籽油的利用率。采用GB 5009.168—2016、GB 5009.83—2016、DB64/T 1514—2017、《保... 明确枸杞籽油对中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)光损伤的防护作用,进一步提高枸杞籽油的利用率。采用GB 5009.168—2016、GB 5009.83—2016、DB64/T 1514—2017、《保健食品中功效成分检测方法》和GB 5009.82—2016(第一法)提供的方法分别测定枸杞籽油主要活性成分脂肪酸、β-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄素、谷甾醇以及维生素E的含量,利用HaCaT细胞构建UVB光损伤模型,检测枸杞籽油对UVB诱导的光损伤HaCaT细胞存活率、凋亡率、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、凋亡相关细胞因子和炎症因子的影响。结果表明,与模型组相比,枸杞籽油可明显提高UVB光损伤HaCaT细胞的存活率(P<0.05),促进抗凋亡因子B淋巴细胞瘤/白血病-2 mRNA的表达(P<0.01),抑制细胞内ROS的生成(P<0.05),降低细胞凋亡率(P<0.01),抑制细胞凋亡相关因子Bcl-2相关X蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9和p53 mRNA的表达(P<0.01),减少炎症因子肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1β和白细胞介素-6的蛋白含量及mRNA表达(P<0.05)。结果表明枸杞籽油可通过调控细胞凋亡及减轻炎症反应来缓解UVB所致HaCaT细胞光损伤。 展开更多
关键词 枸杞籽油 人永生化角质形成细胞 光损伤 凋亡 炎症
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重楼皂苷Ⅰ对紫外损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用研究 被引量:1
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作者 高梓琪 王冬雪 +4 位作者 武思敏 黄业伟 满佳旭 高蕊蕊 张冬英 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2023年第4期621-626,共6页
【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制,为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检... 【目的】研究重楼皂苷Ⅰ(polyphyllinⅠ,PPⅠ)对急性中波紫外线(medium wave ultraviolet rays,UVB)损伤的人永生化角质形成细胞(HaCaT)的保护作用及分子机制,为滇重楼在日化用品中的应用提供理论依据。【方法】采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PPⅠ处理HaCaT的存活率,筛选出无毒性PPⅠ浓度;将HaCaT细胞随机分为4组:空白对照组、UVB处理组(21.6 mJ/cm^(2))、0.250μmol/L PPⅠ+UVB处理组和0.500μmol/L PPⅠ+UVB处理组,采用结晶紫染色法探究2种浓度PPⅠ对UVB处理后HaCaT细胞增殖的影响;采用蛋白质免疫印迹法检测HaCaT细胞凋亡蛋白多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP1)、cleaved-PARP1、乙酰基-赖氨酸、K68位点的线粒体超氧化物歧化酶重组蛋白(mitochondrial recombinant superoxide dismutase 2,K68-SOD2)和沉默调节3蛋白(sirtuin3,SIRT3)的表达。【结果】与空白对照组相比,UVB组的HaCaT细胞存活率显著下降,cleaved-PARP1和K68-SOD2表达显著增加,而SIRT3表达显著降低,造模成功。与UVB组相比,PPⅠ各剂量处理组可提高UVB照射后HaCaT细胞的存活率,增加SIRT3的表达,降低K68-SOD2的乙酰化水平,进而减少凋亡蛋白cleaved-PARP1的表达,降低细胞的凋亡水平。【结论】PPⅠ可能通过增强SIRT3活性使SOD2去乙酰化,以增强SOD2活性,减轻UVB照射HaCaT细胞引起的氧化应激和凋亡,从而对HaCaT细胞起到保护作用。 展开更多
关键词 重楼皂苷Ⅰ 紫外损伤 人永生化角质形成细胞 去乙酰化酶
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P物质受体在人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控 被引量:15
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作者 刘继勇 胡晋红 朱全刚 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期667-670,共4页
目的考察P物质受体(Neurokinin1R,NK1R)在正常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特征。方法培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK1R在两种细胞中的表达;采用RTPCR方法检测NK1R在... 目的考察P物质受体(Neurokinin1R,NK1R)在正常人表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中的表达调控特征。方法培养人表皮角质形成细胞株HaCaT细胞和真皮成纤维细胞,应用免疫组织化学法检测NK1R在两种细胞中的表达;采用RTPCR方法检测NK1R在两种细胞mRNA水平的表达特征,并采用流式细胞术定量检测在不同刺激因素及药物作用下两种细胞中NK1R的表达调控情况。结果NK1R在HaCaT细胞及真皮成纤维细胞中均有表达,阳性部位位于细胞膜及细胞质。NK1RmRNA在HaCaT细胞上的表达水平要高于在真皮成纤维细胞上的表达。P物质和IFNγ可以上调NK1R在两种细胞上的表达,而LPS抑制了NK1R的表达;抗组胺药盐酸西替利嗪和P物质受体特异性拮抗剂SpantideI可以降低两种细胞上NK1R的表达。结论皮肤角质形成细胞和真皮成纤维细胞在细胞、蛋白及mRNA水平均有NK1R的表达,而且这种表达可被过敏炎症因子调控,提示角质形成细胞和真皮成纤维细胞参与了皮肤免疫调控,神经肽P物质可能在皮肤过敏性炎症中起重要作用。 展开更多
关键词 表皮角质形成细胞 HACAT细胞 真皮成纤维细胞 P物质受体 皮肤炎症
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诱导表皮角质形成细胞体外分层的途径及机制 被引量:5
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作者 连小华 杨恬 +1 位作者 蔡绍皙 杨力 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1201-1203,共3页
目的 探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法 在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果 胚胎... 目的 探讨诱导表皮角质形成细胞体外分层途径及机制。方法 在体外培养状态下,利用气液界面培养法及高浓度钙离子诱导胎鼠皮片、表皮角质形成细胞分层,借助冰冻切片、免疫荧光及激光共聚焦等技术检测其分层层数及分化程度。结果 胚胎龄16d的胎鼠皮片经气液界面培养3d后,其表皮基底上角质形成细胞由2层增加为5层;经气液界面培养7d后,胎鼠皮片表皮基底上角质形成细胞的局部区域分层已可达8层,细胞呈现更为分化的形态。在高浓度Ca2 + (1 5mmol L)条件下培养7d后,培养角质形成细胞发生了分层,分化标记物角蛋白K10在分层角质形成细胞中的表达明显增加。结论 气液界面培养法及高浓度钙离子能诱导表皮角质形成细胞的体外分层,同时促进其分化。 展开更多
关键词 表皮角质形成细胞 表皮分层 体外诱导
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人表皮角质形成细胞Toll样受体表达 被引量:4
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作者 刘苏俊 张彩萍 +2 位作者 周武庆 陈敏 林麟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期296-300,共5页
目的研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱。方法培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞... 目的研究人表皮角质形成细胞Toll样受体表达谱。方法培养人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞和正常人表皮角质形成细胞(NHEK),采用分散酶分离表皮。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测10种Toll样受体mRNA表达,流式细胞仪检测HaCaT细胞和NHEK表面Toll样受体2和4蛋白的表达。结果HaCaT细胞、NHEK以及分离的表皮均有全部10种Toll样受体mRNA表达,其表达强弱各不相同。流式细胞仪检测显示HaCaT细胞和NHEK表面有Toll样受体4蛋白的表达,而Toll样受体2无明显表达。结论人表皮角质形成细胞中有Toll样受体1~10mRNA的组成性表达。 展开更多
关键词 表皮角质形成细胞 TOLL样受体 表达
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基于太极阴阳鱼图探讨表皮角质形成细胞的阴阳变化 被引量:2
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作者 李东海 李勇 +2 位作者 齐庆 肖红丽 陈罗娣 《辽宁中医杂志》 CAS 2012年第9期1736-1737,共2页
基于太极阴阳鱼图的特点,即圆运动的连续性、阴阳消长的动态平衡及阴阳互藏性,探讨表皮角质形成细胞演变过程中的阴阳变化,认为基底层、棘层表现出阳的属性,颗粒层、角质层表现出阴的属性,棘层与颗粒层是由阳转阴,重阳必阴关键。
关键词 太极 圆运动阴阳 表皮角质形成细胞
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窄谱中波紫外线对角质形成细胞肝素结合表皮生长因子样生长因子mRNA的影响 被引量:2
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作者 罗素菊 彭振辉 +3 位作者 郑焱 张路坤 王国荣 徐浩翔 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期211-214,共4页
目的研究窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)mRNA表达的影响。方法用50 mJ/cm2和100 mJ/cm2NB-UVB照射正常人KC后继续培养12 h,用MTT法和实时荧光定量RT-PCR法分别检... 目的研究窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)mRNA表达的影响。方法用50 mJ/cm2和100 mJ/cm2NB-UVB照射正常人KC后继续培养12 h,用MTT法和实时荧光定量RT-PCR法分别检测KC增殖和HB-EGF mRNA的改变。结果NB-UVB照射正常人KC后,可剂量依赖抑制KC的增殖和上调HB-EGF mRNA的表达。50 mJ/cm2和100 mJ/cm2NB-UVB照射后,分别使KC增殖抑制5.4%和8.7%,使HB-EGF mRNA增加到正常对照组的1.7倍和2.5倍。结论NB-UVB抑制KC的增殖部分是通过上调HB-EGF的表达介导的。 展开更多
关键词 表皮生长因子 角质形成细胞 窄谱中波紫外线
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依曲替酸对角质形成细胞肝素结合表皮生长因子样生长因子mRNA的影响 被引量:1
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作者 罗素菊 彭振辉 +3 位作者 郑焱 张路坤 王蔚 王国荣 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期319-321,333,共4页
目的研究依曲替酸对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)mRNA表达的影响。方法0.1和1μmol/L伊曲替酸处理正常人KC 12 h后,用噻唑蓝比色法(MTT法)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分... 目的研究依曲替酸对培养的正常人角质形成细胞(KC)增殖和肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)mRNA表达的影响。方法0.1和1μmol/L伊曲替酸处理正常人KC 12 h后,用噻唑蓝比色法(MTT法)和实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测KC增殖和HB-EGF mRNA表达的改变。结果依曲替酸处理12 h后,可剂量依赖抑制KC的增殖和上调HB-EGF mRNA的表达。0.1和1μmol/L伊曲替酸分别使KC增殖抑制10.2%和14.4%,使HB-EGF mRNA增加到正常对照组的3.2和7.1倍。与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论依曲替酸可剂量依赖上调HB-EGF mRNA的表达,其可能参与依曲替酸对KC增殖的抑制作用。 展开更多
关键词 表皮生长因子 角质形成细胞 维甲酸
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小鼠表皮角质形成细胞中Ca^(2+)对组织型纤溶酶原激活剂表达的调节 被引量:1
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作者 连小华 杨恬 曾益军 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期262-265,I005,共5页
目的 探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca^(2+)对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系。方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca^(2+)( 0.05 mmol/L)及高Ca^(2+)(1.5 mmol/L)浓度对tPA、tPA mRNA... 目的 探讨小鼠表皮角质形成细胞(KC)中Ca^(2+)对组织型纤溶酶原激活剂(tPA)表达的调节作用及其与分化的关系。方法采用免疫组化及原位杂交技术定性、定量检测低Ca^(2+)( 0.05 mmol/L)及高Ca^(2+)(1.5 mmol/L)浓度对tPA、tPA mRNA的表达及表皮KC分化的影响。结果与未经Ca^(2+)处理的对照相比,低Ca^(2+)浓度下培养的表皮KC中,tPA mRNA及tPA量均增加(P< 0.05),KC分化标记物K10抗原表达为弱阳性,KC胞体较小,细胞形态趋于圆形;而高Ca^(2+)浓度下的培养表皮KC中,tPA mRNA及tPA量显著增加(P< 0.001),K10抗原呈强阳性表达,KC胞体增大,形态为典型的多角形。结论Ca^(2+)浓度的增高促进了tPA mRNA及tPA的表达,并与KC分化有关。 展开更多
关键词 组织型纤溶酶原激活剂 CA^2+ 表皮角质形成细胞 表达 调节 皮肤疾病
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小鼠表皮角质形成细胞中TNF-α对PAI-2表达的调节 被引量:1
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作者 连小华 杨恬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1069-1072,共4页
目的 探讨表皮角质形成细胞中TNF α对PAI 2表达的调节及其生物学意义。方法 利用免疫细胞化学、TUNEL反应及免疫细胞化学 TUNEL双标等方法 ,观察TNF α作用下 ,培养的表皮角质形成细胞及其脱落细胞中PAI 2表达的变化及凋亡发生的情... 目的 探讨表皮角质形成细胞中TNF α对PAI 2表达的调节及其生物学意义。方法 利用免疫细胞化学、TUNEL反应及免疫细胞化学 TUNEL双标等方法 ,观察TNF α作用下 ,培养的表皮角质形成细胞及其脱落细胞中PAI 2表达的变化及凋亡发生的情况。结果 在TNF α作用下 ,脱落细胞中PAI 2的表达明显增加 ,凋亡细胞的数量增多 ,PAI 2在凋亡细胞中的表达也增强 ,而在一些胞体较大、形态呈多角形的凋亡细胞中PAI 2表达的增加更为明显。结论 在高度分化的表皮角质形成细胞中 ,TNF α可促进PAI 2的表达并可诱导凋亡的产生 ,就与KC凋亡的关系而言 ,TNF α所诱导的PAI 2可分为两种 ,一种与KC凋亡有关 ,另一种与KC凋亡无关。 展开更多
关键词 PAI-2 TNF-α表皮角质形成细胞 表达调节
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哺乳动物生殖细胞的形成、性分化和永生化
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作者 刘善荣 胡凯猛 +1 位作者 刘厚奇 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期960-962,共3页
小鼠原始生殖细胞产生于原肠胚形成阶段 ,迁移到生殖嵴位置后获得性别分化决定。体外培养时原始生殖细胞可大量增殖 ,现在已经建立了人类EG细胞株 ,这些永生的EG细胞具有正常的核型和多向分化能力 ,它可分化为某些特定的细胞类型 。
关键词 原始生殖细胞 哺乳动物 生殖细胞 形成 性分化 生化
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表皮角质形成细胞分化中tPA分泌的研究
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作者 连小华 杨恬 蔡绍皙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第15期1357-1359,共3页
目的 探讨表皮角质形成细胞中 ,tPA分泌的变化及其对细胞分化的影响。方法 利用免疫细胞化学、酶联免疫吸附测定等方法 ,检测高浓度Ca2 + 作用下 ,培养的小鼠分化表皮角质形成细胞表面及培养上清中tPA表达的变化。结果 高Ca2 + 浓度... 目的 探讨表皮角质形成细胞中 ,tPA分泌的变化及其对细胞分化的影响。方法 利用免疫细胞化学、酶联免疫吸附测定等方法 ,检测高浓度Ca2 + 作用下 ,培养的小鼠分化表皮角质形成细胞表面及培养上清中tPA表达的变化。结果 高Ca2 + 浓度下 ,KC分化标记物K10在培养 2 4h即有较强的表达 ,与此同时 ,在培养上清中检测到大量分泌tPA ;培养 2 4h以后 ,随着培养时间的延长 ,KC培养上清中分泌tPA的含量呈现出降低趋势 ,KC表面tPA量则呈现出增加趋势 ,当有L 精氨酸存在时 ,上述两种趋势均明显减弱。结论 小鼠表皮KC分化过程中存在tPA的分泌 ,分泌tPA能通过其赖氨酸位点进一步吸附于KC表面 。 展开更多
关键词 表皮角质形成细胞 分化 TPA 分泌
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微小RNA-203下调诱导人角质形成细胞向表皮干细胞去分化的研究
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作者 彭燕 宋志芳 +3 位作者 刘德伍 李津 章志伟 宁璞 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2017年第B12期53-58,共6页
目的观察微小RNA-203抑制物(miRNA-203 inhibitor)转染诱导人角质形成细胞向表皮干细胞去分化的可能性及机制。方法(1)取包皮环切术后的人正常包皮组织5例,分离培养人角质形成细胞。倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用免疫细胞化学染... 目的观察微小RNA-203抑制物(miRNA-203 inhibitor)转染诱导人角质形成细胞向表皮干细胞去分化的可能性及机制。方法(1)取包皮环切术后的人正常包皮组织5例,分离培养人角质形成细胞。倒置显微镜下观察细胞的生长状况,采用免疫细胞化学染色法对人角质形成细胞行角蛋白1(CK1)、CK10、CK19、β1整合素(ITGB1)单克隆抗体检测鉴定。(2)通过脂质体Lipofectamine 2000将miR-203单链抑制物分子转染人角质形成细胞作为实验组,将对照micro RNA抑制物转染人角质形成细胞作为对照组。(3)对转染后的实验组和对照组细胞行CK1、CK10、CK19、ITGB1单克隆抗体检测鉴定;采用实时荧光定量RT-PCR技术检测实验组和对照组转染前后细胞miR-203、P63、CK1、CK10、CK19、ITGB1的mRNA表达量;Western blot法检测实验组和对照组转染前后细胞P63、CK1、CK10、CK19、ITGB1的蛋白表达量。(4)对转染前后miR-203的mRNA表达量与P63的mRNA表达量和蛋白表达量分别行Pearson相关分析。结果(1)转染前人角质形成细胞CK1、CK10表达阳性,转染后CK19、ITGB1表达阳性;(2)实验组转染后细胞miR-203、CK1、CK10 mRNA相对表达量较转染前和对照组显著降低(P<0.05),P63、CK19、ITGB1mRNA相对表达量较转染前和对照组明显升高(P<0.05);而对照组与转染前比较无明显变化(P>0.05)。(3)实验组转染后细胞CK1、CK10蛋白相对表达量显著低于转染前和对照组(P<0.05);CK19、ITGB1蛋白相对表达量显著高于转染前和对照组(P<0.05);而对照组与转染前比较无明显变化(P>0.05)。(4)miR-203的基因表达与P63的基因和蛋白表达均成显著负相关,转染前相关系数r值分别为-0.907(t=3.730,P=0.038)及-0.956(t=5.644,P=0.012);转染后r值分别为-0.924(t=4.185,P=0.028)及-0.931(t=4.418,P=0.023)。结论 miR-203下调能诱导人角质形成细胞去分化为表皮干细胞,靶基因p63表达上调可能是其重要机制之一。 展开更多
关键词 角质形成细胞 表皮细胞 去分化 微小RNA-203 P63
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白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究 被引量:5
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作者 张巍 史晓蔚 +1 位作者 呼蕾 王刚 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期199-202,共4页
目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响。方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0~100μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA表达水... 目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响。方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0~100μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17蛋白表达水平的变化。结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0μg/L的IL-22作用后,均出现不同程度的K17表达。与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0μg/L组的mRNA及蛋白表达则明显上升(P<0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多。免疫荧光染色图片显示,随着IL-22浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强。结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17。 展开更多
关键词 白介素22 角蛋白17 人永生化角质形成细胞
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苯并芘对人角质形成细胞Caspase-14和Filaggrin表达的影响 被引量:2
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作者 张芳芳 车雅敏 +2 位作者 刘原君 王晶晶 刘全忠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2013年第6期940-942,共3页
目的:研究苯并芘(BaP)对永生化人角质形成细胞(HaCaT)中的Caspase-14和Filaggrin mRNA表达的影响,探讨其与BaP所致的细胞损伤的关系。方法:体外培养HaCaT;噻唑蓝法(MTT)检测BaP对HaCaT增殖活性的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测... 目的:研究苯并芘(BaP)对永生化人角质形成细胞(HaCaT)中的Caspase-14和Filaggrin mRNA表达的影响,探讨其与BaP所致的细胞损伤的关系。方法:体外培养HaCaT;噻唑蓝法(MTT)检测BaP对HaCaT增殖活性的影响;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同浓度的BaP对HaCaT中Caspase-14和Filaggrin mRNA表达的影响。结果:不同浓度的BaP对HaCaT细胞体外增殖均有抑制作用,随其浓度增加对细胞的抑制更为明显,且存在量效关系;BaP对Caspase-14和Filaggrin mRNA表达起到明显的上调作用,成浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:BaP可以引起皮肤屏障功能的损伤。 展开更多
关键词 苯并芘 Caspase-14 FILAGGRIN 生化角质形成细胞
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DNMT1在不同年龄组人群角质形成细胞中的表达及意义 被引量:1
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作者 刘朝东 桂万里 张恒术 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1055-1059,共5页
目的:检测不同年龄组非曝光部位表皮组织的角质形成细胞中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白和m RNA的表达水平,初步探讨DNMT1在人表皮年龄衰老过程中的意义。方法:收集40例手术患者非曝光部位的表皮标本,根据... 目的:检测不同年龄组非曝光部位表皮组织的角质形成细胞中DNA甲基化转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)蛋白和m RNA的表达水平,初步探讨DNMT1在人表皮年龄衰老过程中的意义。方法:收集40例手术患者非曝光部位的表皮标本,根据年龄分为4组:儿童组(0~14岁)、青年组(15~39岁)、中年组(40~59岁)和老年组(60岁及以上),用免疫组织化学、RTPCR及Western blot检测每例表皮组织中DNMT1蛋白和DNMT1 m RNA表达量,分析不同年龄组之间DNMT1表达水平的差异。结果:DNMT1主要表达于各组人表皮角质形成细胞的细胞核内,角质形成细胞DNMT1蛋白及m RNA表达依次在儿童组、青年组、中年组和老年组中呈下降趋势。儿童组、青年组、中年组和老年组角质形成细胞DNMT1阳性表达率分别为84.7%、69.4%、51.1%、12.3%,表达率得分分别为:23.10分、19.30分、14.40分和3.80分,采用LSD检验法对4组间进行两两比较,表明角质形成细胞DNMT1阳性表达率随年龄的增长呈递减趋势(均P〈0.05)。DNMT1 m RNA相对表达量为1.347、0.817、0.567和0.202,DNMT1蛋白的相对表达量为1.102、0.494、0.320和0.088,统计学分析DNMT1随着年龄的增长表达量降低(两两对比,均P〈0.05)。结论:随着年龄的增长,DNMT1的表达水平下降,推测人表皮衰老可能与DNMT1的表达下调有一定的关联。 展开更多
关键词 DNMT1 表皮衰老 角质形成细胞 甲基化
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EGF对小鼠角质形成细胞中组织型纤溶酶原激活剂表达的调节
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作者 连小华 杨恬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期1094-1097,共4页
目的 探讨小鼠表皮角质形成细胞 (KC)中 ,EGF对组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)表达的影响。方法 应用免疫组化及原位杂交技术 ,结合图像分析 ,定性及定量检测在EGF作用下的小鼠表皮角质形成细胞中 ,tPAmRNA/蛋白质的表达。结果 小鼠表... 目的 探讨小鼠表皮角质形成细胞 (KC)中 ,EGF对组织型纤溶酶原激活剂 (tPA)表达的影响。方法 应用免疫组化及原位杂交技术 ,结合图像分析 ,定性及定量检测在EGF作用下的小鼠表皮角质形成细胞中 ,tPAmRNA/蛋白质的表达。结果 小鼠表皮KC经EGF处理 12、2 4、48、72h后 ,tPAmRNA/蛋白质的量均增加 (P <0 .0 1) ,tPAmRNA表达的高峰出现于EGF作用 2 4h时 ,tPA蛋白质表达的高峰则出现于EGF作用 48h时。EGF联合 0 .5、1.0、1.5mmol/LCa2 + 作用小鼠表皮KC 48h ,与EGF单独作用小鼠表皮KC 48h时 ,tPAmRNA/蛋白质的表达 ,均显著降低 (P <0 .0 0 1)。结论 小鼠表皮KC中 ,EGF可以时间依赖方式促进tPAmR NA/蛋白质的表达 ,但受Ca2 + 浓度的影响。 展开更多
关键词 TPA EGF 基因表达 调节 表皮角质形成细胞 组织型纤溶酶原激活剂
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蒿秦化斑方对紫外线损伤角质形成细胞黏附分子及PI3K/AKTAKT/GSK-3β通路的影响 被引量:5
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作者 王思艺 孙丽蕴 《世界中医药》 CAS 2021年第19期2876-2880,共5页
目的:观察蒿秦化斑方对HaCat细胞紫外线B(UVB)急性损伤模型细胞黏附分子及PI3K/AKT/GSK-3β通路的影响,探讨该方治疗光敏感性皮肤病的作用机制。方法:采用300 mJ/cm2 UVB建立HaCat细胞急性光损伤模型,使用不同剂量蒿秦化斑方干预,分为... 目的:观察蒿秦化斑方对HaCat细胞紫外线B(UVB)急性损伤模型细胞黏附分子及PI3K/AKT/GSK-3β通路的影响,探讨该方治疗光敏感性皮肤病的作用机制。方法:采用300 mJ/cm2 UVB建立HaCat细胞急性光损伤模型,使用不同剂量蒿秦化斑方干预,分为空白对照组、UVB模型组、及蒿秦化斑方高、中、低剂量组。采用RT-PCR法检测细胞黏附分子ICAM-1、ELAM-1、VCAM-1相对表达量,采用蛋白质免疫印迹法分析PI3K/AKT/GSK-3β通路相关节点p-AKT(Ser-473)、p-AKT(Thr-308)、GSK-3β、PI3K相对表达量。结果:UVB急性光损伤可有效减少HaCat细胞ICAM-1的表达(P<0.01),对VCAM-1及ELAM-1表达影响不显著;蒿秦化斑方高剂量组能有效抑制HaCat细胞3种细胞黏附分子的表达(P<0.05);蒿秦化斑方中剂量组能有效抑制HaCat细胞内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)及血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)的表达(P<0.01)。UVB急性光损伤对HaCat细胞AKT磷酸化、PI3K表达影响不显著,蒿秦化斑方低剂量处理对HaCat细胞AKT磷酸化具有促进作用(P<0.05)。UVB急性光损伤使HaCat细胞糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)表达水平升高(P<0.01),蒿秦化斑方高、中、低剂量处理均对HaCat细胞GSK-3β表达水平有所抑制(P<0.01)。结论:蒿秦化斑方能降低由UVB急性损伤造成的HaCat细胞ICAM-1、ELAM-1、VCAM-1等黏附分子的表达进而缓解局部炎症和迟发型超敏反应的发生,并且能够激活HaCat细胞PI3K/AKT/GSK-3β通路,在UVB造成的急性光损伤中起到抗氧化、抗凋亡和降低炎症反应的作用。 展开更多
关键词 光敏感性皮肤病 蒿秦化斑方 蛋白激酶B 糖原合成酶激酶-3Β 细胞黏附分子 人永生化角质形成细胞 紫外线B 紫外线损伤
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成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的原代培养及其与乳鼠角质形成细胞的对比性研究 被引量:1
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作者 邓颖 王雪儿 张琳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期753-761,共9页
目的:探索成年小鼠背部皮肤角质形成细胞有效且高生长率的原代培养方法;对比乳鼠和成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的增殖、集落形成效率与凋亡能力。方法:取正常成年小鼠背部皮肤,分别利用4种方法分离其表皮与真皮,取表皮分离培养角质形... 目的:探索成年小鼠背部皮肤角质形成细胞有效且高生长率的原代培养方法;对比乳鼠和成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的增殖、集落形成效率与凋亡能力。方法:取正常成年小鼠背部皮肤,分别利用4种方法分离其表皮与真皮,取表皮分离培养角质形成细胞;免疫荧光进行细胞鉴定;调整种板密度、种板方式观察细胞生长状况;利用CCK-8、EdU、结晶紫染色法和TUNEL染色检测乳鼠与成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的增殖、集落形成效率与凋亡情况。结果:4种成年小鼠表皮-真皮分离方式中,二步消化法获得的细胞量最大、细胞增殖能力最强、集落形成效率高;水滴状种板法较普通平铺种板法集落形成率高;乳鼠角质形成细胞最适种板密度约为3.2×10^4/cm^2,成年小鼠背部皮肤角质形成细胞最适种板密度约为1.6×10^4/cm^2;与成年小鼠背部皮肤角质形成细胞相比,乳鼠角质形成细胞增殖能力较强、集落形成效率较高。结论:成功建立了较为完善的成年小鼠背部皮肤角质形成细胞原代培养体系。 展开更多
关键词 角质形成细胞 原代培养 小鼠 细胞凋亡 表皮
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