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人成骨样细胞SaOS-2向成骨分化过程中GNAS1基因的表达变化 被引量：1
1
作者 李兴暖 汪涛 +2 位作者 吴萍 刘建云 李卫东 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期307-310,共4页
目的:对成骨分化过程中GNAS1基因的表达进行研究.方法:对人成骨样细胞Sa OS-2进行成骨定向分化,采用茜素红染色、实时定量PCR和免疫印迹检测成骨分化效果和分化过程中GNAS1的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示,RUNX2基因在成骨分化第3... 目的:对成骨分化过程中GNAS1基因的表达进行研究.方法:对人成骨样细胞Sa OS-2进行成骨定向分化,采用茜素红染色、实时定量PCR和免疫印迹检测成骨分化效果和分化过程中GNAS1的表达变化.结果:实时定量PCR结果显示,RUNX2基因在成骨分化第3天表达最高,之后呈下降趋势,而实时定量PCR和免疫印迹均检测到GNAS1基因在成骨分化第3天表达最低,之后呈升高趋势.结论:GNAS1基因在成骨分化过程中表达存在差异,提示对成骨细胞分化具有调控作用. 展开更多
关键词 GM4S7基因 成骨分化 人成骨样saos-2细胞
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芦丁促进人乳牙牙髓干细胞的增殖及成骨分化
2
作者 冯妮 李月红 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第4期369-374,共6页
目的探讨芦丁对人乳牙牙髓干细胞(SHEDs)增殖及成骨分化的影响及其与Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的调节关系。方法体外分离培养SHEDs,经鉴定后将SHEDs随机分为control组(正常培养),芦丁低、中、高... 目的探讨芦丁对人乳牙牙髓干细胞(SHEDs)增殖及成骨分化的影响及其与Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的调节关系。方法体外分离培养SHEDs,经鉴定后将SHEDs随机分为control组(正常培养),芦丁低、中、高剂量组(0.1、0.5、1μmol/L)和抑制剂组(1μmol/L芦丁+10μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂AG490),茜素红染色检测矿化结节数量,MTT法检测细胞增殖情况,试剂盒检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性,实时定量PCR检测Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)mRNA表达,Western blotting检测Runx2、OCN、ALP及JAK2/STAT3信号通路蛋白的表达。结果与control组相比,芦丁低、中、高剂量组SHEDs光密度值、矿化结节数量、ALP活性、Runx2、OCN、ALP mRNA和蛋白水平、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3显著升高(P<0.05);JAK2/STAT3通路抑制剂AG490减弱了芦丁对SHEDs增殖和成骨分化能力的增强作用(P<0.05)。结论芦丁可促进SHEDs增殖和成骨分化,其机制与激活JAK2/STAT3信号通路有关。 展开更多
关键词 芦丁 Janus蛋白酪氨酸激酶2 信号转导及转录激活蛋白3 人乳牙牙髓干细胞 增殖 成骨分化
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IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用 被引量：3
3
作者 李冬 董晓俊 徐成栋 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期668-672,共5页
目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐... 目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 丝裂原活化蛋白激酶信号通路 C3H10T1/2细胞 成骨分化
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miR-210-5p对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响及作用机制分析
4
作者 郑世雄 杨巍 刘合亮 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期127-133,共7页
[目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8... [目的]观察miR-210-5p在小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化中的作用并探讨其作用机制.[方法]将小鼠脂肪干细胞分空白对照组、miR-210-5p模拟物阴性对照组、miR-210-5p模拟物组、miR-210-5p抑制物阴性对照组和miR-210-5p抑制物组,采用CCK-8细胞计数法检测细胞增殖能力,茜素红染色观察钙盐矿化结节形成能力,用实时荧光定量PCR检测miR-210-5p水平及成骨分化标志物BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA表达水平,进而用蛋白免疫印迹法检测BMP2、Smad1、Smad5和Runx2蛋白表达水平.[结果] miR-210-5p模拟物组细胞增殖活力显著升高(P<0.01),矿化结节显著增加,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01);miR-210-5p抑制物组细胞增殖活力显著降低(P<0.01),矿化结节显著降低,BMP2、Smad1、Smad5和Runx2 mRNA和蛋白表达水平显著下调(P<0.01).[结论] miR-210-5p可能通过调控BMP2/Smad信号通路促进小鼠脂肪干细胞增殖和成骨分化. 展开更多
关键词 miR-210-5p BMP2/Smad信号通路 小鼠脂肪干细胞 成骨分化
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藤黄健骨胶囊通过SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路抑制绝经后骨质疏松大鼠成骨细胞凋亡 被引量：5
5
作者 安方玉 王霞霞 +10 位作者 颜春鲁 孙柏 汪春梅 柳颖 常伟荣 宋佳眙 王玉洁 马海珍 张蕊 陈振东 袁万英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期383-392,共10页
藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质... 藤黄健骨胶囊可以提高绝经后骨质疏松模型鼠的骨密度来改善其骨微结构损害,但具体机制尚未阐明。本文主要研究藤黄健骨胶囊抑制绝经后骨质疏松症大鼠成骨细胞凋亡与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路的关系,旨在探讨藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松症的作用机制。采用去卵巢法建立绝经后骨质疏松大鼠模型,分别给予藤黄健骨胶囊(0.09、0.18、0.36 g/kg)灌胃,连续干预8周后进行指标检测。采用TUNEL染色观察股骨组织凋亡情况,结果发现,藤黄健骨胶囊各剂量组股骨组织凋亡阳性细胞和凋亡率均减少(P<0.01)。采用双重免疫荧光染色观察股骨组织成骨细胞中SIRT1、PGC-1α和Nrf2表达水平表达情况,结果发现,藤黄健骨胶囊中、高剂量组成骨细胞PGC-1α表达荧光面积明显升高,各剂量组成骨细胞SIRT1和Nrf2表达荧光面积也明显升高(P<0.01)。qPCR和Western印迹检测股骨组织SIRT1、PGC-1α、Nrf2、Runx2、Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的mRNA表达水平和翻译水平变化,结果显示,藤黄健骨胶囊中、高剂量组股骨组织Runx2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2蛋白质水平均明显升高,Caspase-9蛋白质水平明显下降,各剂量组股骨组织SIRT1、PGC-1α、Bcl-2 mRNA水平和蛋白质水平、Nrf2 mRNA水平也均明显升高,而其各剂量组股骨组织Caspase-3mRNA水平、蛋白质水平和Caspase-9 mRNA水平均则明显降低(P<0.01)。综上,本研究初步揭示了藤黄健骨胶囊对绝经后骨质疏松模型鼠成骨细胞凋亡的抑制与SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路有关,SIRT1可能是调控成骨细胞凋亡的重要靶点。 展开更多
关键词 藤黄健骨胶囊 绝经后骨质疏松 SIRT1/PGC-1α/Nrf2信号通路 大鼠 成骨细胞凋亡
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红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响 被引量：3
6
作者 朱光昭 方璐 +1 位作者 严婕 李琴 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期803-809,共7页
目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-... 目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。 展开更多
关键词 红景天苷 miR-20a-5p 金属蛋白酶组织抑制剂-2 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 迁移
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流动剪切力作用下原代大鼠成骨样细胞PGE_2的表达 被引量：7
7
作者 乔鞠 陈伟辉 +4 位作者 李声伟 罗颂椒 田卫东 张敏 李强 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期86-88,共3页
目的 :探讨流动剪切力调节成骨细胞增殖和分化的信号转导过程中PGE2 的作用机制。方法 :对体外培养的大鼠成骨样细胞施加 0 12mN cm2 的流动剪切力 ,采用放射免疫法检测细胞受力 5、10、15、30、6 0、12 0min后不同时段的PGE2 的表达... 目的 :探讨流动剪切力调节成骨细胞增殖和分化的信号转导过程中PGE2 的作用机制。方法 :对体外培养的大鼠成骨样细胞施加 0 12mN cm2 的流动剪切力 ,采用放射免疫法检测细胞受力 5、10、15、30、6 0、12 0min后不同时段的PGE2 的表达。结果 :大鼠成骨样细胞受到 0 12mN cm2 流动剪切力作用后PGE2 的生成与空白对照组相比明显提高 (P <0 0 1) ,PGE2 的生成在受力后 10min开始显著增加 (P <0 0 1) ,6 0min后达到高峰 (P <0 0 1)。结论 :PGE2 途径是将流动剪切力刺激信号转导进入成骨细胞 ,促进骨改建的信号转导途径之一。 展开更多
关键词 流动剪切力 成骨样细胞 PGE2 信号转导 大鼠 细胞增殖
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抑制Hmga2促进小鼠脂肪间充质干细胞成骨分化并加速骨缺损修复 被引量：1
8
作者 柯志勇 黄子城 +4 位作者 何若琳 张倩 陈思旭 崔忠凯 丁晶 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1227-1235,共9页
目的探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在脂肪间充质干细胞(ADSCs)成骨分化进程中的作用及其在骨缺损修复中的应用。方法通过GEO数据库和Rstudio软件,挖掘出在ADSCs“成脂-成骨”分化平衡中的关键节点因子HMGA2,并通过在线蛋白互作网络分析工... 目的探讨高迁移率族蛋白A2(HMGA2)在脂肪间充质干细胞(ADSCs)成骨分化进程中的作用及其在骨缺损修复中的应用。方法通过GEO数据库和Rstudio软件,挖掘出在ADSCs“成脂-成骨”分化平衡中的关键节点因子HMGA2,并通过在线蛋白互作网络分析工具String和绘图软件Cytoscape,绘制HMGA2在成骨分化中的互作关系网络,预测其下游作用靶点。设计Hmga2 siRNA并转染小鼠原代脂肪间充质干细胞(mADSCs),诱导其体外成骨分化,在不同时间点(Day 3,Day 7,Day 14)收集样本,通过碱性磷酸酶染色和茜素红染色评估成骨分化能力,并通过RT-qPCR和Western blotting检测成骨特异性标志物Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)的表达。将敲低Hmga2的mADSCs移植至小鼠不可自愈合颅骨缺损处,术后6周通过μCT扫描、骨组织学染色检测成骨标志物,评价骨缺损修复效果。结果GEO数据库分析结果显示HMGA2在ADSCs成脂分化进程中表达上调。蛋白互作网络分析提示在ADSCs成骨分化中,HMGA2的潜在作用靶点包括SMAD7、CDH1、CDH2、SNAI1、SMAD9、IGF2BP3、ALDH1A1。抑制Hmga2后,mADSCs中成骨分化相关标志物RUNX2、OPN和OCN的表达显著上调,且碱性磷酸酶的表达和钙结节的形成增加(P<0.05)。在小鼠颅骨缺损模型中,敲低Hmga2促进了骨缺损部位的新骨形成(P<0.05)。结论HMGA2是调控ADSCs成骨分化的重要因子,抑制Hmga2能显著促进ADSCs成骨分化,并加速体内骨缺损的修复。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 高迁移率族蛋白A2 成骨分化 骨缺损修复
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1α，25双羟维生素D_3对成骨样细胞增殖与分化的影响 被引量：16
9
作者 薛延 王红霞 +4 位作者 袁润英 相东 魏文 张双喜 邢惠清 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 1996年第1期28-31,F003,共5页
采用同位素掺入，细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了１α，２５双羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］对人及大鼠成骨样细胞ＯＳ－７３２和ＲＯＳ１７／２．８增殖及分化的影响。结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＳ－... 采用同位素掺入，细胞周期、细胞化学和扫描电镜等方法观察了１α，２５双羟维生素Ｄ３［１，２５（ＯＨ）２Ｄ３］对人及大鼠成骨样细胞ＯＳ－７３２和ＲＯＳ１７／２．８增殖及分化的影响。结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＯＳ－７３２细胞增殖的抑制作用呈明显的时效和量效关系。在给１０－７ｍｏｌ／Ｌ的１，２５（ＯＨ）２Ｄ３后第４和第６天，对ＯＳ－７３２细胞生长的抑制率分别为４０％和６０％；对ＤＮＡ，ＲＮＡ和蛋白质合成的抑制作用分别为５９％，４１％和２２％。流式细胞计测定结果表明：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３使ＤＮＡ合成受阻；扫描电镜显示：１，２５（ＯＨ）２Ｄ３有抑制ＲＯＳ１７／２．８细胞表面微绒毛的作用。此外，细胞化学染色表明：该激素有增加成骨样细胞碱性磷酸酶活性和促进骨形态形成蛋白合成的作用，即刺激骨形成的作用。 展开更多
关键词 成骨样细胞 增殖 ROS 维生素D3 分化 抑制作用 细胞表面 细胞化学染色 影响 骨形成
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张力对成骨样细胞PGE_2表达的影响 被引量：5
10
作者 龙洁 田卫东 +2 位作者 郑晓辉 樊瑜波 李声伟 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期160-162,共3页
目的:探讨不同应变强度的机械张力刺激对体外培养的成骨样细胞PGE2表达的影响。方法:采用四点弯曲细胞力学加载仪对人成骨样细胞MG 63分别以 1 000、2 000、3 000、4 000、6 000、8 000μstrain的力学应变强度进行张力刺激,采用放射免... 目的:探讨不同应变强度的机械张力刺激对体外培养的成骨样细胞PGE2表达的影响。方法:采用四点弯曲细胞力学加载仪对人成骨样细胞MG 63分别以 1 000、2 000、3 000、4 000、6 000、8 000μstrain的力学应变强度进行张力刺激,采用放射免疫法对受不同强度张力作用后成骨样细胞PGE2 的表达分别进行检测并相互比较。结果:成骨样细胞MG 63在受到强度为 1 000μstrain的张力刺激后,其PGE2 的生成量略降低但与对照组无显著性差别,随着张力强度的增加,其PGE2 的生成量显著升高。结论:不同强度的机械张力刺激能够不同程度的增强成骨样细胞PGE2 的表达,PGE2 信号转导途径是将力学刺激信号转入成骨细胞并促进成骨样细胞增殖的重要信号转导途径。 展开更多
关键词 张力 强度 成骨样细胞 前列腺素E2
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胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响 被引量：9
11
作者 梁东春 王宝利 +2 位作者 左爱军 郭刚 张镜宇 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2004年第1期45-47,共3页
目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩... 目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-7基因cDNA,同时扩增管家基因β-actin作为内对照。扫描PCR产物电泳照片,计算BMP-2/β-actin及BMP-7/β-actin的积分光密度比值,推算BMP-2及BMP-7基因的相对表达水平。结果 IGF-1可以在转录水平增加大鼠成骨细胞中BMP-2及BMP-7基因的表达,并呈明显的剂量依赖关系。结论IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的作用可能是通过增加BMP-2及BMP-7基因的表达来实现的。 展开更多
关键词 胰岛素样生长因子1 成骨细胞 BMP-2 BMP-7 基因表达 细胞增殖 细胞分化 骨质疏松症
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成纤维生长因子-2联合骨形态发生蛋白-2体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞的分化 被引量：4
12
作者 孙微 王海萍 +2 位作者 吕洋 李柔 陈晓依 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第1期47-52,共6页
目的:观察纤维生长因子-2(FGF-2)与骨形态发生蛋白-2(BMP-2)单一及联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的效果。方法:从SD大鼠骨髓中分离提取BMMSCs,细胞传至第2代时加入诱导物质,分组(FGF-2诱导组、BMP-2诱导组、联... 目的:观察纤维生长因子-2(FGF-2)与骨形态发生蛋白-2(BMP-2)单一及联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)向心肌样细胞分化的效果。方法:从SD大鼠骨髓中分离提取BMMSCs,细胞传至第2代时加入诱导物质,分组(FGF-2诱导组、BMP-2诱导组、联合诱导组及空白对照组)培养。应用免疫细胞化学法对培养至第28天时4组细胞中cTnT、desmin、α-actin、p38mapk蛋白表达情况进行检测;应用RT-PCR法对4组细胞中GATA-4、Nkx2.5及α-MHC mRNA的表达量进行测定。结果:常规养至第28天时,联合诱导组细胞中cTnT、desmin、α-actin和p38mapk蛋白表达的阳性率依次为(30.14±8.66)%、(45.30±6.96)%、(60.95±7.73)%和(43.50±7.32)%,且FGF-2诱导组、BMP-2诱导组各指标的阳性率均低于联合诱导组(P<0.05)。FGF-2诱导组、BMP-2诱导组细胞中Nkx2.5及GATA-4 mRNA的表达量在第7、14、28天均呈现"高-低-高"的变化趋势;而联合诱导组中以上两种基因的表达量呈现"低-高-高"的表达趋势;且第28天时联合诱导组中以上两种基因的表达量明显高于单一诱导组(P<0.05);各组细胞均未见α-MHC mRNA表达。结论:BMMSCs可在FGF-2与BMP-2单一及联合诱导下发育为心肌样细胞,且两者联合诱导效果更佳。 展开更多
关键词 成纤维生长因子-2 骨形态发生蛋白-2 大鼠 骨髓间充质干细胞 心肌样细胞
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骨形态蛋白2 siRNA靶向抑制对体外培养人脐动脉平滑肌细胞成骨样分化及钙化的影响 被引量：1
13
作者 孙明姝 郭永平 +3 位作者 顾乐怡 严玉澄 倪兆慧 钱家麒 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1329-1333,1347,共6页
目的研究骨形态蛋白2(BMP2)小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)由白介素6(IL-6)诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响。方法以体外培养的原代HUASMC作为实验对象。建立RNA干扰(RNAi)实验平台,通过FAM标记阴... 目的研究骨形态蛋白2(BMP2)小分子干扰RNA(siRNA)靶向抑制对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)由白介素6(IL-6)诱导刺激的成骨样分化和细胞层钙化的影响。方法以体外培养的原代HUASMC作为实验对象。建立RNA干扰(RNAi)实验平台,通过FAM标记阴性对照siRNA优化转染条件;将BMP2基因的4条候选siRNA分别转染原代HUASMC,Real-TimePCR检测BMP2mRNA表达,筛选有效抑制siRNA。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组(转染有效抑制siRNA)和模拟转染组(对照组,不转染siRNA),两组均加入重组人IL-6(rhIL-6)(10ng/mL)刺激孵育,Real-TimePCR检测刺激孵育12、48h时点成骨样转化相关基因BMP2、骨特异性碱性磷酸酶(BAP)、骨钙素(OC)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达。将复苏的原代HUASMC分为siRNA转染组、对照组和空白组(不予rhIL-6刺激孵育,其余处理与对照组相同),siRNA转染组和对照组均加入rhIL-6(50ng/mL)刺激孵育,甲氧-酚酞络合酮法检测rhIL-6刺激孵育前及孵育后2、4d时点各组HUASMC细胞层钙盐含量,以总蛋白含量校正。结果成功建立合适的RNAi实验平台。10ng/mLrhIL-6刺激孵育后12h时点,siRNA转染组HUASMC BMP2和BAPmRNA表达明显低于对照组(P<0.05);刺激孵育后48h时点,siRNA转染组OC和OPNmRNA表达显著低于对照组(P<0.05)。加入50ng/mLrhIL-6刺激孵育前,siRNA转染组、对照组和空白组HUASMC细胞层钙盐含量比较差异无统计学意义(P>0.05);在siRNA转染组,50ng/mLrhIL-6刺激孵育后2、4d时点的细胞层钙盐含量均明显低于对照组(P<0.05),刺激孵育后2d时点的细胞层钙盐含量明显高于空白组(P<0.05)。结论体外培养的原代HUASMC能够实现BMP2基因的siRNA靶向抑制,能显著抑制由IL-6诱导刺激的成骨样分化和钙化。 展开更多
关键词 骨形态蛋白2 RNA干扰 成骨细胞分化 钙化 人脐动脉平滑肌细胞
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甲状旁腺素对人成骨肉瘤细胞株SaOS-2内cAMP,IP3,Ca^(2+)的作用研究 被引量：1
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作者 韩志岩 程锦轩 刘景生 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期326-328,共3页
目的通过研究ｈＰＴＨ（１～３４）对人成骨肉瘤细胞株ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ、ＩＰ３、Ｃａ２＋的影响，来阐明ＰＴＨ与其膜上特异受体结合后的胞浆内主要信息传递途径。方法利用蛋白竞争结合法测定胞浆内ｃＡＭＰ，以Ｆｌｕｏ－... 目的通过研究ｈＰＴＨ（１～３４）对人成骨肉瘤细胞株ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ、ＩＰ３、Ｃａ２＋的影响，来阐明ＰＴＨ与其膜上特异受体结合后的胞浆内主要信息传递途径。方法利用蛋白竞争结合法测定胞浆内ｃＡＭＰ，以Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ作为荧光指示剂，激光共聚焦显微系统显示ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ的变化，离子交换层析法测定ｈＰＴＨ（１～３４）作用下胞浆内ＩＰ３的改变。结果ｈＰＴＨ（１～３４）可使ＳａＯＳ－２胞浆内ｃＡＭＰ明显升高且与其浓度呈正相关，其最佳作用时间为１０ｍｉｎ。ｈＰＴＨ（１～３４）能迅速提高ＳａＯＳ－２内［Ｃａ２＋］ｉ，而且作用３０ｓ时ＳａＯＳ－２胞浆内ＩＰ３升高即达最高峰，未发现百日咳毒素对此现象有抑制作用。 展开更多
关键词 甲状旁腺素 成骨肉瘤细胞株 CAMP saos-2
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毛喉萜对大鼠成骨样细胞内Ca^（2＋）释出的影响 被引量：2
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作者 杨非易 鲁朋 杜国光 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第6期707-711,共5页
毛喉萜是一种二萜类化合物，为细胞中腺苷酸环化酶的激活剂。用毛喉萜处理大鼠成骨样细胞，发现它可即时激发细胞内Ｃａ^（２＋）水平的增高。当细胞经毛喉萜长期处理（１－２天）后，其对ＰＴＨ激发细胞内Ｃａ^（２＋）释出的效应也呈... 毛喉萜是一种二萜类化合物，为细胞中腺苷酸环化酶的激活剂。用毛喉萜处理大鼠成骨样细胞，发现它可即时激发细胞内Ｃａ^（２＋）水平的增高。当细胞经毛喉萜长期处理（１－２天）后，其对ＰＴＨ激发细胞内Ｃａ^（２＋）释出的效应也呈增高反应。但毛喉萜的即刻反应与其长期效应的作用机理可能并不相同。鉴于毛喉萜具有抑制增殖的作用，其对细胞内Ｃａ^（２＋）水平的调节作用或与其对细胞的抑增殖促分化有关。 展开更多
关键词 毛喉萜 成骨样细胞 钙离子
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周期性机械拉伸对类风湿关节炎和骨关节炎成纤维样滑膜细胞BMP-2表达的影响 被引量：6
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作者 周薇 吕永钢 +5 位作者 Gurinder K Singh 颜艳 刘万钱 杨宁宁 张非飞 杨力 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2011年第2期121-127,共7页
目的研究周期性拉伸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响,探讨力学刺激在... 目的研究周期性拉伸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和骨关节炎(osteoarthritis,OA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)中骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)表达的影响,探讨力学刺激在不同病理过程中对滑膜组织的作用。方法在正常条件和炎症条件下使用Flex cell 4000周期性力学加载系统,分别对正常、RA、OA来源的人膝关节FLS施加连续2 h和6 h的6%、0.5 Hz的拉应力,比较测定BMP-2 mRNA表达的差异性。结果2 h的机械拉伸对3种FLS中BMP-2 mRNA的水平均无显著性影响6,h的机械拉伸能够显著升高RA FLS中BMP-2 mRNA的水平。炎症因子(IL-1β)作用2 h对正常FLS无显著影响,作用6 h使其中BMP-2 mRNA的水平显著升高;IL-1β作用2 h和6 h均使RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,但只有作用2 h才使OA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6 h对OA FLS中BMP-2 mRNA的水平无显著影响;炎症因子和力学刺激共同作用2 h使正常和RA FLS中BMP-2 mRNA的水平显著升高,作用6 h使正常、RA、OAFLS中BMP-2 mRNA水平均显著升高。结论正常、RA、OA FLS中BMP-2 mRNA对于力学刺激和炎症因子的响应不同,结果提示在RA和OA发病机制中,炎症因子的影响可能比力学刺激更强;力学刺激和IL-1β共同作用6 h后对OA FLS中BMP-2 mRNA产生协同效应,提示两者联合作用对OA病情发展具有一定作用。 展开更多
关键词 周期性拉伸 力学刺激 拉应力 类风湿性关节炎 骨关节炎 成纤维样滑膜细胞 骨形态发生蛋白-2 炎症因子 病理学
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Toll样受体2和4在细胞成骨向分化中的作用 被引量：1
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作者 黄奕华 凌均棨 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第4期492-495,共4页
Toll样受体(TLR)4是人类发现的第一个TLR相关蛋白质,主要介导格兰阴性细菌的免疫过程。TLR2具有相对广泛的配体特异性,可识别多种病原体相关分子模式,协助TLR4参与人体内对脂多糖的反应。研究显示,TLR2和TLR4参与多种细胞成骨向分化的... Toll样受体(TLR)4是人类发现的第一个TLR相关蛋白质,主要介导格兰阴性细菌的免疫过程。TLR2具有相对广泛的配体特异性,可识别多种病原体相关分子模式,协助TLR4参与人体内对脂多糖的反应。研究显示,TLR2和TLR4参与多种细胞成骨向分化的调控。譬如TLR2和TLR4即可通过促进主动脉瓣间质细胞的成骨向分化参与主动脉瓣钙化过程,也可通过上调冠状动脉内皮细胞中骨形态发生蛋白2的表达参与冠状动脉粥样硬化,还可参与骨髓间质干细胞的成骨向分化。在牙髓组织中,有TLR4表达的成牙本质细胞样细胞可向成牙本质细胞受损处迁移并形成修复性牙本质;而TLR2和TLR4作为参与牙髓防御反应的成员,在牙髓组织受损时,不仅可调节炎症因子的表达,还参与牙髓细胞成牙本质向分化的调控。由此可见,TLR2和TLR4在细胞成骨向分化中的作用机制值得进一步的探讨。 展开更多
关键词 TOLL样受体2 TOLL样受体4 成骨向分化
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β联蛋白参与骨形成蛋白9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化 被引量：1
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作者 房松华 刘书霞 陈沅 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期750-754,759,共6页
目的探讨骨形成蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化过程β联蛋白(β-catenin)的作用。方法利用重组腺病毒BMP9(Ad-BMP9)诱导C3H10T1/2细胞分化,通过Western blot法检测Ad-BMP9及不同剂量XAV-939处理后β-catenin的激活情... 目的探讨骨形成蛋白9(BMP9)诱导C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化过程β联蛋白(β-catenin)的作用。方法利用重组腺病毒BMP9(Ad-BMP9)诱导C3H10T1/2细胞分化,通过Western blot法检测Ad-BMP9及不同剂量XAV-939处理后β-catenin的激活情况;在完全抑制β-catenin的情况下,Ad-BMP9诱导1周,通过实时定量PCR法检测心肌细胞增强因子2C(MEF2C)、心肌组织特异性转录因子GATA结合蛋白4(GATA4);Ad-BMP9处理3周后,通过Western blot法及免疫荧光技术检测心肌连接子蛋白43(Cx43)、心肌肌钙蛋白T(c Tn T)的表达。结果在感染效率约50%的情况下,BMP9可过度激活β-catenin,使其磷酸化水平增高;在XAV-939抑制β-catenin后,Ad-BMP9诱导的C3H10T1/2细胞表达的c Tn T、GATA4、Cx43和MEF2C均受到抑制。结论β-catenin能被BMP9激活并参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞向心肌细胞样细胞分化。 展开更多
关键词 骨形成蛋白9 心肌细胞样细胞 C3H10T1/2细胞 Β-CATENIN
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基因沉默组织型转谷氨酰胺酶抑制SaOS-2细胞成骨分化
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作者 余慧镭 殷晓雪 +3 位作者 陈仲强 冷慧杰 宋纯理 刘忠军 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期448-453,共6页
目的研究组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,TG2)是否参与人SaOS-2细胞系成骨分化过程。方法使用携带短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒转染SaOS-2细胞以敲减TG2表达,以SaOS-2细胞及转染了含阴性对照shRNA病毒的SaO... 目的研究组织型转谷氨酰胺酶(tissue transglutaminase,TG2)是否参与人SaOS-2细胞系成骨分化过程。方法使用携带短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)的慢病毒转染SaOS-2细胞以敲减TG2表达,以SaOS-2细胞及转染了含阴性对照shRNA病毒的SaOS-2作为对照组,分别进行体外成骨诱导培养,并进行以下检测:诱导14 d后各组矿化情况(茜素红染色);诱导4、7 d后碱性磷酸酶活性及I型胶原、骨钙素、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的mRNA表达,并与诱导前的表达水平相比较。结果 SaOS-2细胞组及转染阴性对照shRNA组在体外成骨诱导过程中I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达和ALP活性逐渐增加,14 d时形成明显矿化结节,而TG2敲减后的SaOS-2细胞在诱导14 d时矿化水平显著低于对照组,诱导7 d时ALP活性及I型胶原、骨钙素、BMP-2的mRNA表达水平显著低于对照组。结论组织型转谷氨酰胺酶参与SaOS-2细胞体外成骨分化及矿化。 展开更多
关键词 组织型转谷氨酰胺酶 saos-2细胞 成骨分化
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中性鞘磷脂酶2/神经酰胺调节高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞成骨样分化和钙化 被引量：5
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作者 梁青春 宋艳 +1 位作者 陈燕亭 陆立鹤 《中山大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期329-334,共6页
【目的】阐明nSMase2是否调控高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞钙化。【方法】采用人血管平滑肌细胞钙化体外模型,用高磷高钙诱导血管平滑肌细胞钙化。分别用鞘磷脂酶抑制剂GW4869和siRNA干扰敲低nSMase2处理血管平滑肌细胞,检测骨相关蛋白... 【目的】阐明nSMase2是否调控高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞钙化。【方法】采用人血管平滑肌细胞钙化体外模型,用高磷高钙诱导血管平滑肌细胞钙化。分别用鞘磷脂酶抑制剂GW4869和siRNA干扰敲低nSMase2处理血管平滑肌细胞,检测骨相关蛋白BMP2、Runx2、Osterix的表达和细胞钙化程度。【结果】在细胞钙化过程中nSMase2的表达水平和神经酰胺的含量增高(P<0.05);GW4869药理抑制或nSMase2 siRNA敲低nSMase2均能减轻高磷高钙诱导的细胞钙化和下调Runx2、BMP2、Osterix的表达水平(P<0.05)。相反,ceramide可加速高磷高钙诱导的细胞钙化和增加ALP的活性(P<0.05)。【结论】nSMase2/ceramide促进高磷高钙诱导的血管平滑肌细胞钙化,提示nSMase2/ceramide可能参与慢性肾病血管钙化的过程。 展开更多
关键词 血管钙化 血管平滑肌细胞 鞘磷脂酶2 成骨样分化
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