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大肠杆菌中可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21及制备 被引量:1
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作者 范开 谭克海 +1 位作者 张淳 张益 《重庆理工大学学报(自然科学)》 CAS 2011年第5期18-22,50,共6页
为在大肠杆菌中高效、非融合、可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF-21),研究了纯化方法,以获得具有较高生物活性的rhFGF-21。全基因合成人成纤维细胞生长因子21cDNA序列,克隆进原核表达载体pET-3c,在转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys... 为在大肠杆菌中高效、非融合、可溶性表达重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF-21),研究了纯化方法,以获得具有较高生物活性的rhFGF-21。全基因合成人成纤维细胞生长因子21cDNA序列,克隆进原核表达载体pET-3c,在转化大肠杆菌BL21(DE3)PlysS中进行表达。表达产物经盐析、层析等方法纯化后,利用3T3-L1细胞鉴定其促葡萄糖摄取的生物学活性。结果表明:rhFGF-21在BL21(DE3)PlysS实现了高效、非融合、可溶性表达,目的蛋白占菌体总蛋白的20%左右;表达产物经纯化后,纯度可达95%以上;表达产物能够明显促进3T3-L1细胞对葡萄糖的吸收。该方法成功实现了rhFGF-21在大肠杆菌中高效可溶性表达。 展开更多
关键词 人成纤维细胞生长因子21 可溶性表达 葡萄糖摄取
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不同理化因素对重组人成纤维细胞生长因子21蛋白纯度的影响
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作者 王长文 刘敏 +4 位作者 刘磊 姜勇 张磊 李艳 王会岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期506-509,共4页
目的:研究重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法:rhFGF21在不同温度(-20℃、4℃和25℃)、不同pH值缓... 目的:研究重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)在不同保存条件下的稳定性,阐明温度、pH值、缓冲溶液和反复冻融因素对rhFGF21稳定性的影响,进一步完善纯化rhFGF21的工艺。方法:rhFGF21在不同温度(-20℃、4℃和25℃)、不同pH值缓冲液(醋酸-醋酸钠缓冲液pH 4.0和pH 5.0、柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液pH 5.0和pH 6.0、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液pH 6.0、pH 6.5和pH 7.0,TrisHCl缓冲液pH 7.5和pH 8.0)中及反复冻融条件下分别保存,采用高效液相色谱法(HPLC)检测rhFGF21纯度,同时观察外观性状。结果:于-20℃和4℃分别保存时,rhFGF21的各项性质在观察期内均无明显变化;25℃时,rhFGF21存放14d纯度由0d时(100.00±0.00)%下降至(15.20±0.14)%(P〈0.01);在pH 4.0和pH 5.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 5.0和pH 6.0缓冲液中25℃条件下保存7d,溶液出现浑浊;在pH 6.5和pH 8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中,溶液澄清透明;rhFGF21原液反复冻融后其纯度变化差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:rhFGF21在低温和pH 6.5-8.0磷酸盐和Tris-HCl缓冲液中溶液较稳定,反复冻融处理对rhFGF21稳定性也有明显影响。 展开更多
关键词 重组人成纤维细胞生长因子21 纯度 稳定性 理化因素
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利用转基因番茄表达人成纤维细胞生长因子21(FGF21) 被引量:5
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作者 付宏岐 李海燕 +7 位作者 庞实锋 杨晶 李洪志 薛萍 刘秀明 李营 王艳芳 李校堃 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第7期163-170,共8页
【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMB... 【目的】在番茄中表达人成纤维细胞生长因子-21(Fibroblast growth factor-21,FGF21),为利用植物反应器规模化生产FGF21奠定基础。【方法】以甘露糖-6-磷酸异构酶基因(pmi)作为转基因植物的选择标记,将人源fgf21基因克隆至表达载体pCAMBIA1390RⅡ(简写为p1390RⅡ)上,构建重组表达质粒p1390 RⅡMFGF21。采用冻融法将质粒p1390RⅡMFGF21转入根瘤农杆菌EHA105,叶盘法转化番茄(Lycopersicon esculentum)"中蔬6号",采用PCR检测、Southern杂交筛选转基因番茄阳性植株,并对FGF21蛋白在转基因番茄叶片中的表达进行了Western blot分析。【结果】成功构建了带pmi安全选择标记基因的植物双元表达载体p1390RⅡMFGF21,在番茄中初步建立了以pmi为选择标记基因的遗传转化体系,共获得了26株转基因番茄植株,其中5株为阳性克隆,转化率为19.2%。采用PCR扩增和Southern blot分析进行检测,结果表明,重组fgf21基因已整合到转基因番茄基因组中。Western blot分析检测结果显示,FGF21蛋白在转基因番茄叶片中有一定水平的表达,并具有良好的抗原性。【结论】获得了以pmi为选择标记成功表达FGF21蛋白的转基因番茄遗传体系。 展开更多
关键词 农杆菌 纤维细胞生长因子-21 甘露糖-6-磷酸异构酶 生物反应器 番茄 遗传转化
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马铃薯X病毒载体介导的人成纤维细胞生长因子21(hFGF21)在烟草中的表达 被引量:4
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作者 付宏岐 薛萍 +1 位作者 杨莉芳 庞实锋 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第4期45-51,共7页
【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的... 【目的】利用马铃薯X病毒(PVX)表达载体(pgR107),在本氏烟草中表达人成纤维细胞生长因子21(Fibroblast growth factor 21,FGF21),旨在寻求一种低成本、方便、安全,且保持hFGF21蛋白生物活性的方法。【方法】将包含组氨酸(His)标签序列的hFGF21-smGFP融合基因和hFGF21基因克隆进PVX表达载体,构建重组表达质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。采用冻融法将质粒pgR107-His-hFGF21-smGFP、pgR107-smGFP和pgR107-His-hFGF21转入根瘤农杆菌GV3101中,通过农杆菌介导注射侵染接种本氏烟的叶片,采用SDS-PAGE、Western blotting和ELISA检测hFGF21-smGFP和hFGF21蛋白的表达情况。烟草叶片表达的融合蛋白经Ni-NTA柱纯化后,再用重组牛肠激酶(rbEK)裂解,获得纯度较高的重组hFGF21活性蛋白。hFGF21调节葡萄糖吸收活性用微量化的GOD-POD法检测。【结果】成功构建了植物病毒双元表达载体pgR107-His-hFGF21-smGFP和pgR107-His-hFGF21。表型观察发现,侵染第7天,烟草外源蛋白积累最高,smGFP和hFGF21-smGFP蛋白的积累主要在细胞质中。SDS-PAGE、Western blotting和ELISA分析表明,hFGF21重组蛋白可在烟草中有效表达,表达量高达500μg/g(鲜叶质量)。生物活性检测结果表明,纯化的hFGF21蛋白可以促进3T3-L1脂肪细胞对葡萄糖的吸收。【结论】利用PVX病毒载体,在本氏烟草中表达的重组hFGF21蛋白具备生物活性。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21(FGF21) 融合蛋白 烟草 马铃薯X病毒
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人成纤维细胞生长因子21基因的克隆及在毕赤酵母中的表达 被引量:1
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作者 邵明龙 赵宏鑫 +4 位作者 杨苹 万晓珊 孔祥鑫 王会岩 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期644-650,F0002,共8页
目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方... 目的:以毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115和SMD1168为宿主菌表达人源成纤维细胞生长因子21(hFGF21),为开发治疗糖尿病药物提供一定的实验基础。方法:根据毕赤酵母基因偏爱密码子和hFGF21氨基酸序列,设计多条寡核苷酸引物。利用融合PCR方法获得人工合成的成纤维细胞生长因子21(FGF21)基因,定向克隆到质粒pPIC9K中,电转化Pichia pastorisGS115和SMD1168。MD、MM平板筛选表型Mut+,YPD/G418平板进一步筛选高拷贝转化子。甲醇诱导表达,硫酸铵沉淀、分子筛、离子交换方法纯化目的蛋白。结果:PCR扩增出约569bp的特异性片段,测序分析正确;诱导表达上清经SDS-PAGE和Western blotting分析表明:FGF21在宿主菌GS115中不表达,而在SMD1168表达上清中出现相对分子质量为20000的特异性条带,且与抗FGF21抗体产生特异性反应,阴性对照在该处无特异性带,证明hFGF21蛋白在SMD1168菌株中成功分泌表达。结论:成功克隆FGF21基因,并在Picha pastorisSMD1168中获得表达。 展开更多
关键词 人成纤维生长因子21 毕赤酵母 PPIC9K 基因克隆
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重组人成纤维细胞生长因子21调节成牙骨质细胞矿化作用及其机制研究 被引量:3
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作者 邬浩 李莹 +3 位作者 王玉琢 于继泽 包幸福 胡敏 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期140-148,共9页
目的探讨重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布... 目的探讨重组人成纤维细胞生长因子21(rhFGF21)对成牙骨质细胞增殖和矿化的作用及其机制。方法采用苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色和免疫荧光法检测成纤维细胞生长因子21(FGF21)在大鼠牙周组织和成牙骨质细胞OCCM-30中的表达和分布;采用CCK-8法检测经不同浓度rhFGF21处理OCCM-30的增殖情况;采用碱性磷酸酶染色和茜素红染色分别检测OCCM-30矿化诱导3、7 d后的矿化状态;通过实时定量聚合酶链反应(PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测成骨相关基因Runx2和Osterix的转录及蛋白表达情况;通过PCR阵列分析评估OCCM-30内转化生长因子β(TGFβ)/骨形态发生蛋白(BMP)信号通路基因的表达变化。结果FGF21在大鼠牙周组织和OCCM-30中存在表达;rhFGF21对OCCM-30的增殖能力无明显影响,但50 ng/mL rhFGF21能促进OCCM-30矿化能力增强(P<0.001);实时定量PCR结果显示Runx2和Osterix的转录水平在50 ng/mL rhFGF21矿化诱导3 d时上升,5 d时下降;Western blot结果显示,Runx2及Osterix的蛋白表达水平在矿化诱导过程中增强,rhFGF21上调细胞内Bmpr1b的表达。结论rhFGF21能够促进OCCM-30矿化,这与TGFβ/BMP信号通路的激活有关。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21 牙骨质再生 牙骨质细胞 转化生长因子β/骨形态发生蛋白信号通路
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无代谢综合征组分的体检人群人成纤维细胞生长因子21与促甲状腺激素的关系研究
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作者 符天旭 苑姗姗 +6 位作者 高莹 屈晨雪 陈澜 惠岩 卢桂芝 高燕明 郭晓蕙 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第36期4422-4427,共6页
目的检测无代谢综合征组分的体检人群人成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平、脂代谢、糖代谢相关指标及促甲状腺激素(TSH)水平,探讨FGF21与TSH的相关性。方法收集2012年10月—2013年4月北京大学第一医院体检人群中无任何代谢综合征组... 目的检测无代谢综合征组分的体检人群人成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平、脂代谢、糖代谢相关指标及促甲状腺激素(TSH)水平,探讨FGF21与TSH的相关性。方法收集2012年10月—2013年4月北京大学第一医院体检人群中无任何代谢综合征组分,无糖尿病、高血压、慢性肾脏病、多囊卵巢综合征、自身免疫性疾病及垂体和下丘脑疾病病史者356例,记录年龄、性别,测量身高、体质量、腰围、臀围、血压、体脂含量,检测空腹血浆血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、空腹血糖(FBG)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,检测空腹血清胰岛素(FINS)、TSH、甲状腺球蛋白抗体(Tg Ab)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、FGF21、游离脂肪酸(FFA)水平。计算体质指数(BMI)、腰臀比、稳态模型评估胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果 356例无代谢综合征组分者TSH 0.00~12.08 m U/L,其中TSH降低组(〈0.55 m U/L)8例,TSH正常组(0.55~4.78 m U/L)320例,TSH升高组(〉4.78 m U/L)28例;Tg Ab、TPOAb任一阳性组75例,Tg Ab和TPOAb均阴性组280例。FGF21 0~1 757 ng/L,FGF21水平与腰围(r=0.110,P=0.038)、腰臀比(r=0.119,P=0.025)、TC(r=0.113,P=0.012)、LDL-C(r=0.175,P=0.001)呈极弱正相关,FGF21水平与年龄(r=0.324,P〈0.001)、TG(r=0.302,P〈0.001)呈低度正相关。多元线性逐步回归分析结果显示,TG与FGF21独立相关(P〈0.001),标准化回归方程为:Y_(FGF21)=230.84X_(TG)+5.26X_(年龄)。TSH水平与Tg Ab(r=0.147,P=0.006)、TPOAb(r=0.168,P=0.001)呈极弱正相关;TSH水平与FFA(r=0.840,P〈0.001)呈高度正相关。TSH降低组、TSH正常组、TSH升高组FFA水平比较,差异有统计学意义(P〈0.05);其中TSH正常组、TSH升高组FFA水平高于TSH降低组(P〈0.05);TSH升高组FFA水平高于TSH正常组(P〈0.05)。Tg Ab、TPOAb任一阳性组FGF21水平为〔331(314)ng/L〕,Tg Ab和TPOAb均阴性组FGF21水平为〔318(324)ng/L〕,差异无统计学意义(Z=-0.311,P=0.755)。结论在无代谢综合征组分的体检人群中,FGF21可能与TSH不相关,且其可能与甲状腺自身免疫无关。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子 促甲状腺激素 自身免疫 脂肪酸类 非酯化
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饲粮维生素D_(3)缺乏或过量时蛋鸡成纤维细胞生长因子23/克洛索蛋白轴的响应及其对蛋品质的影响
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作者 王梦瑶 曹林鹏 +5 位作者 秦林 朱子均 刘福 谢越盛 郭辉 曹满湖 《动物营养学报》 北大核心 2025年第8期5475-5485,共11页
本研究从成纤维细胞生长因子23/克洛索蛋白(FGF23/Klotho)轴出发,探究蛋鸡饲粮维生素D_(3)缺乏或过量与维生素D代谢的相关性及其对蛋品质的影响。采用单因素完全随机设计,选取96只42周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复3... 本研究从成纤维细胞生长因子23/克洛索蛋白(FGF23/Klotho)轴出发,探究蛋鸡饲粮维生素D_(3)缺乏或过量与维生素D代谢的相关性及其对蛋品质的影响。采用单因素完全随机设计,选取96只42周龄罗曼粉蛋鸡,随机分为4组,每组8个重复,每个重复3只鸡。各组试验鸡分别饲喂在基础饲粮中添加0(缺乏)、2000(低水平)、4000(正常水平)和8000 IU/kg(过量)维生素D_(3)的饲粮。试验期4周。结果表明:1)0 IU/kg组蛋鸡蛋壳强度和蛋壳比重低于2000和4000 IU/kg组,但差异不显著(P>0.05);胫骨脱脂重显著低于2000和4000 IU/kg组(P<0.05);血清碱性磷酸酶活性显著高于其他3组(P<0.05),血清1,25-二羟基维生素D_(3)[1,25(OH)_(2)D_(3)]、FGF23含量显著低于其他3组(P<0.05),血清Klotho含量也低于其他3组,但差异不显著(P>0.05)。0和2000 IU/kg组蛋鸡十二指肠核维生素D受体(nVDR)的mRNA相对表达量显著低于4000和8000 IU/kg组(P<0.05),十二指肠钠依赖Ⅱb型磷转运蛋白(Na/Pi-Ⅱb)的mRNA相对表达量显著低于8000 IU/kg组(P<0.05);0 IU/kg组蛋鸡肾脏FGF23和细胞色素P450家族27亚家族B成员1(CYP27B1)的mRNA相对表达量显著高于其他3组(P<0.05),肾脏Klotho的mRNA相对表达量显著高于2000和8000 IU/kg组(P<0.05)。2)8000 IU/kg组蛋鸡蛋壳强度、蛋壳比重、胫骨灰分重均低于2000和4000 IU/kg组,但差异不显著(P>0.05);胫骨脱脂重显著低于2000和4000 IU/kg组(P<0.05);血清1,25(OH)_(2)D_(3)含量显著低于4000 IU/kg组(P<0.05),血清FGF23和Klotho含量也均低于4000 IU/kg组,但差异不显著(P>0.05)。8000 IU/kg组蛋鸡十二指肠膜维生素D受体(mVDR)、nVDR和Na/Pi-Ⅱb的mRNA相对表达量显著高于其他3组(P<0.05);肾脏FGF23、Klotho和CYP27B1的mRNA相对表达量与2000和4000 IU/kg组无显著差异(P>0.05)。综上所述,饲粮维生素D_(3)缺乏或过量均会导致蛋品质下降,且与FGF23/Klotho轴及维生素D代谢有关,但这2种情况下蛋鸡体内的响应指标和调控机制存在差异。当饲粮维生素D_(3)缺乏时,蛋鸡肾脏FGF23、Klotho和CYP27B1作为内在响应指标,参与蛋品质及钙磷代谢的调控;而当饲粮维生素D_(3)过量时,蛋鸡十二指肠nVDR、mVDR和Na/Pi-Ⅱb为参与蛋品质和钙磷代谢调控的内在响应指标。 展开更多
关键词 蛋鸡 维生素D_(3) 纤维细胞生长因子23/克洛索蛋白轴 蛋品质
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牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化 被引量:4
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作者 张含林 林辉 郭航远 《中国心血管杂志》 北大核心 2024年第1期56-64,共9页
目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将... 目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预,用Western blot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达,探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Western blot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默Herpud1的表达及用Transwell和Western blot检测沉默Herpud1后CFs纤维化指标的表达,探讨Herpud1在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Western blot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确Herpud1在TUDCA抑制CFs活化中的作用,用Western blot检测过表达Herpud1后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上,TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达;Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞;敲除Herpud1可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化;TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平;此外,过表达Herpud1还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调Herpud1基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。 展开更多
关键词 心肌纤维细胞 Herpud1 牛磺熊去氧胆酸 转化生长因子Β1 纤维
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基于成纤维细胞生长因子1的药物治疗肥胖相关并发症 被引量:2
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作者 姬卫秀 李萌 赵云罡 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1341-1356,共16页
目前,超重和肥胖的发生率已在全球范围内达到流行病的程度,这对慢性代谢性疾病预防和控制造成了巨大挑战。肥胖是包括2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、心血管病、神经退行性疾病、睡眠呼吸暂停和某些类型的癌症等在内的一系列代谢疾病... 目前,超重和肥胖的发生率已在全球范围内达到流行病的程度,这对慢性代谢性疾病预防和控制造成了巨大挑战。肥胖是包括2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、心血管病、神经退行性疾病、睡眠呼吸暂停和某些类型的癌症等在内的一系列代谢疾病的主要危险因素。然而,治疗肥胖及其相关并发症的药物选择仍然有限,大多数抗肥胖药物因严重不良反应而退出市场,迫切需要开发有效的长期治疗方法来应对肥胖相关并发症。成纤维细胞生长因子1(fibroblast growth factor 1,FGF1)是全身能量稳态、糖脂代谢和胰岛素敏感性的重要调节因子。FGF1对于肥胖及2型糖尿病、非酒精性脂肪性肝病、癌症、心脏病等肥胖相关并发症具有一定的治疗益处,但长期使用导致的肿瘤发生风险增加限制了其应用。本综述总结了基于FGF1治疗肥胖相关并发症的生物药物开发的最新进展,强调了临床实施中的主要挑战,并讨论了克服这些障碍的可能策略。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子1 肥胖 脂代谢 糖尿病 非酒精性脂肪性肝病 癌症
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成纤维细胞生长因子在阿尔茨海默病中的作用机制 被引量:1
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作者 吴嘉静 李岩 +2 位作者 梁玉霞 华卉娟 赵波 《协和医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第5期1131-1136,共6页
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,目前发病群体已呈现年轻化趋势,多数患者一旦发病,认知功能将呈进行性减退,给社会和家庭带来沉重负担。研究表明,成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF... 阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是最常见的神经退行性疾病,目前发病群体已呈现年轻化趋势,多数患者一旦发病,认知功能将呈进行性减退,给社会和家庭带来沉重负担。研究表明,成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,FGF)可通过多种机制参与AD的发病过程。本文就FGF在AD中的作用进行综述,以期为阐明AD的发病机制及早期诊断提供新思路。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子 纤维细胞生长因子受体 阿尔茨海默病
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成纤维细胞生长因子2重组蛋白对鸡原代成肌细胞增殖和分化的影响 被引量:1
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作者 孙梦 郑钢 +3 位作者 吴俊锋 王沁园 陈佳华 连玲 《中国家禽》 北大核心 2024年第12期24-30,共7页
为研究成纤维细胞生长因子2(FGF2)对鸡原代成肌细胞增殖和分化的影响,试验以鸡原代成肌细胞为研究对象,体外培养使其增殖并分化为肌管。在成肌细胞中添加不同浓度的FGF2重组蛋白,通过EdU和CCK8技术检测FGF2对原代成肌细胞增殖的影响,通... 为研究成纤维细胞生长因子2(FGF2)对鸡原代成肌细胞增殖和分化的影响,试验以鸡原代成肌细胞为研究对象,体外培养使其增殖并分化为肌管。在成肌细胞中添加不同浓度的FGF2重组蛋白,通过EdU和CCK8技术检测FGF2对原代成肌细胞增殖的影响,通过荧光定量PCR检测分化因子MYOD、MYOG的表达情况,分析FGF2对成肌细胞分化的影响。进一步通过转录组测序分析FGF2处理组和对照组的基因表达差异,挖掘调节肌肉发育的潜在分子机制。结果显示:添加FGF2重组蛋白能够显著促进成肌细胞增殖,抑制成肌细胞分化,在5 ng/mL时对细胞增殖促进效果最强。转录组测序数据显示,在FGF2处理组和对照组中存在424个差异表达基因,GO富集分析结果显示差异基因富集到细胞增殖、分化等通路,KEGG分析结果显示差异基因富集到MAPK通路。研究表明,FGF2可能通过影响MAPK通路进而调控成肌细胞的增殖和分化。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子2 细胞 肌肉发育
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小于胎龄儿生后血清Klotho和成纤维细胞生长因子23水平变化及其与生长发育的关系
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作者 李晓沛 王鑫 +3 位作者 王婵 郑有宁 罗雷 程亚颖 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期804-811,共8页
目的:探讨小于胎龄儿(SGA)生后血清Klotho和成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平变化,并阐明其与生长发育的关系。方法:选取35例SGA和53例适于胎龄儿(AGA)作为研究对象,分为SGA组(n=35)和AGA组(n=53),其中早产儿组51例,早产SGA组20例,早产... 目的:探讨小于胎龄儿(SGA)生后血清Klotho和成纤维细胞生长因子23(FGF23)水平变化,并阐明其与生长发育的关系。方法:选取35例SGA和53例适于胎龄儿(AGA)作为研究对象,分为SGA组(n=35)和AGA组(n=53),其中早产儿组51例,早产SGA组20例,早产AGA组31例;足月儿组37例,足月SGA组15例,足月AGA组22例。收集各组新生儿的临床资料,分别检测新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平及临床生化指标,分析新生儿生后第7和14天血清Klotho及FGF23水平与新生儿体质量、身长、头围、胸围和考普氏(Kapu)指数等各项生长发育指标及钙磷代谢的相关性。结果:与AGA组比较,SGA组新生儿出生体质量、身长、头围、胸围和Kapu指数均明显降低(P<0.05)。生后第7和14天,与早产儿组比较,足月儿组新生儿血清Klotho和FGF23水平均明显升高(P<0.01);与生后第7天比较,生后第14天早产儿组和足月儿组新生儿血清Klotho水平均明显升高(P<0.01),FGF23水平均明显降低(P<0.01)。与AGA组比较,SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平明显降低(P<0.05或P<0.01);与生后第7天比较,生后第14天AGA组和SGA组新生儿血清Klotho水平明显升高(P<0.01),FGF23水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。与早产AGA组比较,早产SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与足月AGA组比较,足月SGA组新生儿生后第7和14天血清Klotho和FGF23水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。SGA组新生儿生后第7天血清Klotho和FGF23水平与胎龄、体质量、身长、头围、胸围和Kapu指数等生长发育指标均呈正相关关系(P<0.05或P<0.01),血清Klotho水平与FGF23水平呈正相关关系(P<0.05)。钙磷代谢方面,SGA组新生儿生后第7天血清Klotho水平与血清磷水平呈正相关关系(P<0.01);FGF23水平与血清钙和磷水平均呈正相关关系(P<0.05或P<0.01)。结论:Klotho和FGF23蛋白与新生儿生长发育及磷酸盐代谢有密切关联。SGA新生儿生后血清Klotho和FGF23水平较低,但随着各器官发育逐渐完善,Klotho分泌增加,而FGF23水平降低可能是机体的代偿性反应。 展开更多
关键词 KLOTHO蛋白 纤维细胞生长因子23 小于胎龄儿 适于胎龄儿 生长发育
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鼠源成纤维细胞生长因子-21对脂肪细胞糖代谢的作用 被引量:18
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作者 姜媛媛 刘铭瑶 +3 位作者 任桂萍 王文飞 刘晓民 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期157-164,共8页
成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导... 成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)是FGF家族的成员之一.近年发现FGF-21是一种新的代谢调节因子.从小鼠肝脏克隆FGF-21cDNA,经测序正确后亚克隆至具有羟胺切割位点的小泛素相关修饰物表达载体上,转化宿主菌Rosetta,得到的转化子经IPTG诱导后获得稳定、高效、可溶的表达产物.表达产物经羟胺切割、透析、复性、柱层析纯化后,在每升宿主菌中可获得4mg纯度为95%的成熟鼠源FGF-21蛋白,利用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶(POD-GOD)法在小鼠3T3-L1脂肪细胞中进行生物学活性检测.结果表明,鼠源FGF-21具有促进脂肪细胞吸收葡萄糖的作用,短期作用(1h)与胰岛素相似,长期作用(8和12h)明显优于胰岛素.这一结果为以鼠源FGF-21为模型进一步研究FGF-21的生物学活性及其在糖代谢方面的作用机理奠定了基础. 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子-21 糖尿病 糖代谢 3T3-L1
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成纤维细胞生长因子21对1型糖尿病动物模型的肝糖代谢影响及机制研究 被引量:15
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作者 孙国鹏 叶贤龙 +2 位作者 任桂萍 李晋南 李德山 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第10期953-960,共8页
成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改... 成纤维细胞生长因子(FGF)-21是FGF家族的成员之一.作为近年发现的一种新的糖代谢调节因子,大量研究表明,FGF-21是一种不依赖胰岛素,能够独立降糖的2型糖尿病治疗潜力型药物.但是,能否应用于1型糖尿病的治疗,国内外目前尚无报道.通过改良传统造模方法,诱导小鼠缓慢产生糖耐量异常,研究FGF-21对此类模型的糖代谢影响及肝糖代谢机制.通过检测FGF-21短期注射和长期注射后模型动物血糖的变化,研究FGF-21在模型动物上对血糖的调控效果.采用实时定量PCR检测FGF-21对模型动物肝脏中葡萄糖转运蛋白(GLUT)1、4 mRNA的表达影响.利用蒽酮法检测模型动物肝脏中糖原合成量.实验结果显示,FGF-21能够调节1型糖尿病动物的血糖水平,并呈剂量依赖性.同时,首次在1型糖尿病动物模型上证实了低剂量FGF-21(0.125 mg/kg)与胰岛素的协同作用效果优于相同剂量FGF-21和胰岛素单独注射的效果.治疗结果表明,FGF-21能够维持1型糖尿病动物模型血糖在正常范围,效果优于胰岛素.实时定量PCR结果发现,与胰岛素上调GLUT4 mRNA表达量不同的是,FGF-21作用动物模型8周后,GLUT1 mRNA表达量显著提高,长期的FGF-21与胰岛素协同注射使GLUT1、4 mRNA表达量同时显著提高.长期FGF-21与胰岛素协同注射组和高剂量FGF-21注射均可显著提高模型动物肝糖原的合成.结果表明,FGF-21促进动物模型糖代谢机制与增加GLUT1表达、增加糖原合成作用有关.为临床应用FGF-21治疗1型糖尿病,增加胰岛素敏感性提供了理论依据. 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21 迟发性1型糖尿病动物模型 糖代谢 胰岛素协同作用 糖尿病治疗药物
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成纤维细胞生长因子21通过抑制肥胖小鼠肝脏氧化应激改善胰岛素抵抗 被引量:9
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作者 周博 郭秦乐 +2 位作者 李会霞 徐琳 李红霞 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期161-165,187,共6页
目的探索成纤维细胞生长因子21(FGF21)改善胰岛素抵抗的可能机制以及在氧化应激过程中的作用。方法构建高脂饮食小鼠模型后分组,干预组小鼠注射FGF21,进行糖耐量及胰岛素耐量实验测定,运用免疫印迹分析和免疫共沉淀检测肝脏组织氧化应... 目的探索成纤维细胞生长因子21(FGF21)改善胰岛素抵抗的可能机制以及在氧化应激过程中的作用。方法构建高脂饮食小鼠模型后分组,干预组小鼠注射FGF21,进行糖耐量及胰岛素耐量实验测定,运用免疫印迹分析和免疫共沉淀检测肝脏组织氧化应激标志物(iNOS)和胰岛素信号通路分子的蛋白(IRS-1和Akt)表达情况,同时运用油红O染色评估肝脂肪变性水平。结果与模型组比较,FGF21干预组的体重、血糖及胰岛素水平降低,胰岛素敏感性提高。同时,在FGF21干预组小鼠肝脏组织的iNOS及TNF-α蛋白表达降低,IRS-1酪氨酸和Akt丝氨酸的磷酸化水平增高;FGF21组较对照组的肝脏脂质积聚明显减少,改善了肥胖小鼠的肝脂肪变性。结论 FGF21可作为一个重要的糖脂代谢调控子,通过抑制肝脏氧化应激,重建其受损的胰岛素信号通路,减少肝脏脂肪积聚,改善肥胖小鼠的胰岛素抵抗,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21(FGF21) 氧化应激 肝脂肪变性 胰岛素抵抗
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2型糖尿病肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21水平及其临床价值研究 被引量:11
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作者 张楠 姜天 +2 位作者 孙莉 代芳 章秋 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2018年第5期521-525,共5页
目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2D... 目的研究2型糖尿病(T2DM)肥胖或超重患者血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)的水平,并探讨其与体质指数(BMI)、稳态胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)等因素的相关性。方法选取2014年1月—2016年7月安徽医科大学第一附属医院内分泌科住院治疗的T2DM患者213例,根据BMI分为T2DM肥胖超重组(BMI≥24.0 kg/m^2,127例)和T2DM非肥胖超重组(BMI<24.0 kg/m^2,86例),另选取同期本院体检健康者为健康对照组(114例)。记录受试者血压、BMI、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、HOMA-IR及FGF21水平。结果各组舒张压、体质量、BMI、TG、HDL-C、LDL-C、Hb A1c、FBG、FINS、HOMA-IR比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。T2DM非肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组,T2DM肥胖超重组FGF21水平高于健康对照组、T2DM非肥胖超重组(P<0.05)。Spearman相关分析显示,T2DM肥胖超重组FGF21水平与BMI、FINS、HOMA-IR呈正相关(rs=0.312、0.311、0.243,P<0.05)。多元线性回归分析显示,BMI[b=3.654,95%CI(1.543,5.764)]、FINS[b=1.310,95%CI(0.537,2.082)]是T2DM肥胖超重组FGF21水平的影响因素(P<0.05)。结论 T2DM肥胖或超重患者血清FGF21水平升高,且与BMI、胰岛素抵抗等因素有关;FGF21可能用于预测糖尿病、肥胖的发生,并成为治疗糖尿病、肥胖的新一代药物。 展开更多
关键词 糖尿病 2型 肥胖症 纤维细胞生长因子21 体脂肪率 胰岛素抵抗
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长期注射成纤维细胞生长因子21对二乙基亚硝胺诱发肝癌的预防作用 被引量:7
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作者 李德山 张瑛杰 +4 位作者 徐鹏飞 袁清艳 任桂萍 刘铭瑶 刘芝航 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期17-22,30,共7页
研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 ... 研究成纤维细胞生长因子21(FGF21)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导肝癌模型的预防作用及机制。健康雄性wistar大鼠随机分3组:FGF21组,模型对照组及正常对照组。FGF21组大鼠每天注射一次FGF21,注射20周。2周后,FGF21组大鼠和模型组大鼠同时每3 d注射一次DEN,直至试验结束。给药结束后,取各组大鼠血清样本测定肝功,统计各组大鼠肝癌发生率,比较各组大鼠肝脏内氧化应激水平。结果表明,FGF21治疗组肝功显著低于模型对照组,接近正常水平。通过分析各组大鼠肝脏变化发现,FGF21治疗组大鼠肝癌发生率为18.1%,而注射生理盐水的模型对照组肝癌发生率为60.0%。FGF21治疗组肝脏内的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量显著低于模型对照组,接近正常对照组;FGF21治疗组肝脏内超氧化物歧化酶(SOD)活性与正常对照组持平,显著高于模型对照组。Real-time PCR结果显示,FGF21治疗组肝脏的抗氧化酶基因(G6pdh,GCL-c,Gpx-1,Sod2)表达水平显著高于模型对照组。结果表明,长期注射FGF21可通过抑制肝脏内氧化应激水平预防DEN诱导的肝癌。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21 二乙基亚硝胺 肝癌 氧化应激
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慢性肾脏病患者及动物模型中成纤维细胞生长因子21的表达及意义 被引量:5
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作者 陈琰 高依依 +3 位作者 李占园 叶菡洋 郑育 周志宏 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第21期2462-2466,共5页
目的:观察慢性肾脏病(CKD)患者和CKD动物模型中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与肾功能等因素的相关性,以探讨FGF21在CKD进展中的意义。方法临床研究:选取2012年在温州医科大学附属第二医院就诊的CKD患者200例,根据估... 目的:观察慢性肾脏病(CKD)患者和CKD动物模型中成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达及其与肾功能等因素的相关性,以探讨FGF21在CKD进展中的意义。方法临床研究:选取2012年在温州医科大学附属第二医院就诊的CKD患者200例,根据估算肾小球滤过率(eGFR)将患者分为CKD1~2期组(76例)、 CKD3~4期组(56例)和CKD5期组(68例);另选取本院同期体检健康者40例(对照组)。检测所有受检者一般资料及外周血空腹血糖、空腹胰岛素、血脂、清蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸、脂联素和FGF21水平。实验研究:取清洁级雄性8周龄C57BL/6小鼠36只,将其随机分为正常对照组( C组)、模型组( M组)、低剂量FGF21干预组( M+L组)和高剂量FGF21干预组( M+H组),每组9只,观察小鼠给药期间的生存状况,4周后处死小鼠,检测小鼠血清肌酐、尿素氮、尿酸、清蛋白水平,观察肾组织病理改变,并采用免疫组化方法检测肾组织中FGF21的表达情况。结果临床研究结果:对照组、 CKD1~2期组、 CKD3~4期组、 CKD5期组血清FGF21水平〔(147.3±12.2)、(402.9±35.0)、(845.8±238.7)、(1447.9±146.5) ng/L〕依次增加(P<0.05)。 CKD患者中,合并糖尿病者血清FGF21水平高于非糖尿病者〔(1253.0±170.1) ng/L与(714.0±82.1) ng/L, P<0.05〕。通过对年龄、性别、 BMI、糖尿病校正后, Pearson相关分析显示血清FGF21水平与三酰甘油、血肌酐、尿素氮、脂联素呈正相关( P<0.05),与低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、 eGFR呈负相关( P<0.05)。实验研究结果: M组小鼠血肌酐、尿素氮、血尿酸水平较C组升高;与M组比较, FGF21干预后小鼠血肌酐、尿素氮、血尿酸水平升高,且M+H组上述3项肾功能指标较M+L组恶化( P<0.05)。光镜下肾组织病理显示M+H组小鼠肾脏损伤较M+L组加重;免疫组化检测显示, M组小鼠肾组织中FGF21表达较C组升高; FGF21干预后,随着FGF21干预剂量的增加,肾组织中FGF21表达亦升高。结论随着CKD病情的进展,患者血清FGF21水平逐渐升高。随着FGF21干预剂量的升高, CKD小鼠肾脏损伤加重。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21 肾功能不全 慢性 模型 动物 Fibroblastgrowthfactor21
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人成纤维细胞生长因子-21基因的克隆表达及蛋白的纯化 被引量:7
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作者 王会岩 田海山 +6 位作者 赵宏鑫 张耀方 万晓姗 邵明龙 杨苹 肖业臣 李校堃 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期81-85,共5页
目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接... 目的:构建和表达人成纤维细胞生长因子-21(FGF21)的基因工程菌,为治疗2型糖尿病的新药开发提供实验数据。方法:通过PCR方法,以质粒pET20b-FGF21为模板扩增FGF21全长,将其与分子伴侣SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET20b连接后转化至BL21(Rosetta)宿主细胞中,通过IPTG诱导获得可溶性表达。将融合蛋白经Ni-NTA、分子筛等进行纯化,获得的蛋白纯度在95%以上。结果:经酶切和基因测序证实获得的FGF21基因序列与GenBank(登录号NM019113)报道的完全一致,构建的pET20b-SUMO-FGF21表达载体在BL21大肠杆菌中成功表达FGF21蛋白,蛋白表达量在15%以上,经SDS-PAGE证实其相对分子质量为19401,与理论预期值相符。Western blotting分析该表达产物与人FGF21多克隆抗体具有特异性结合能力,经SUMO酶酶切后获得纯度大于95%以上的纯蛋白。结论:成功构建表达人FGF21融合蛋白的基因工程菌,经IPTG诱导、Ni-NTA、分子筛等进行纯化后获得了FGF21纯蛋白。 展开更多
关键词 纤维细胞生长因子21 pET-20b 小泛素相关修饰蛋白质类
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