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应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
来大志
翁少洁
+4 位作者
于长明
齐连权
付玲
于婷
陈薇
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期118-126,共9页
表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增...
表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖 ,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实 .而人延伸因子 1α亚基启动子 (PEF 1α)不受细胞周期限制 ,且启动子强度高于PCMV IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想 .首先构建了基于PEF 1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5 ,在增殖缓慢的CHO细胞中 ,此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV IE启动子表达载体的 4 1倍 .由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平 ,而转录激活因子 (transcriptionactivators)对基因转录的影响更大 ,所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端 ,它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF 1α启动子的TATA框上游约 2 0 0bp的λ噬菌体OR2 OR1序列上 ,而被“征募”到PEF 1α启动子TATA框附近 ,从而促进基因的转录 .把上述元件均整合进一个表达载体中 ,构建了两个新型表达载体pER AH和pER VP2 .pER AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高 ,而pER VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高
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关键词
人工转录激活
因子
人延伸因子1α亚基启动子
基因表达
cI蛋白
CHO细胞
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职称材料
生防长枝木霉菌培养特性及形态学与系统发育学鉴定
被引量：
3
2
作者
池玉杰
伊洪伟
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期103-106,119,共5页
采用宏观观察法和显微镜镜检的方法,在PDA和MEA培养基上对1株自我采集的具有生防价值的木霉菌株T05进行了培养特性和形态学研究。结果表明：该菌株在PDA平板培养基上生长较快,产分生孢子较早且多,也能产生厚垣孢子;在MEA上能产生分生孢...
采用宏观观察法和显微镜镜检的方法,在PDA和MEA培养基上对1株自我采集的具有生防价值的木霉菌株T05进行了培养特性和形态学研究。结果表明：该菌株在PDA平板培养基上生长较快,产分生孢子较早且多,也能产生厚垣孢子;在MEA上能产生分生孢子,但不产生厚垣孢子。该菌株产孢簇为松散羊毛状到紧实的疱状结构;分生孢子梗具有较简单的分枝系统,通常呈直角的1～2次分枝,单生或有时成对。瓶梗不规则地在侧面分布,时常单生,安瓿形或柱形,基部常缩缢但不明显;分生孢子单细胞、长方形到椭圆形、绿色、光滑,大小为（2.0～3.0）μm×（2.0～6.0）μm。根据这些形态特征将菌株T05鉴定为长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）。在此基础上,对T05的r DNA转录间区序列ITS和翻译延伸因子基因tef1-α的第5内含子序列进行了扩增、测序。系统发育学的研究表明,该菌株的ITS序列和tef1-α的第5内含子序列与长枝木霉的多个菌株都具有最大的相似性,因此属于长枝木霉。
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关键词
长枝木霉
培养特性
形态学
r
DNA的转录间区序列
翻译
延伸
因子
1-
α亚基
蛋白基因
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职称材料
题名
应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达
被引量：
4
1
作者
来大志
翁少洁
于长明
齐连权
付玲
于婷
陈薇
机构
北京微生物流行病研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004年第2期118-126,共9页
文摘
表达载体的设计对于提高外源基因在哺乳动物细胞中的表达量十分重要 .而表达载体中最为重要的元件是启动子 .一些常用病毒来源的启动子 ,如巨细胞病毒即早期启动子 (PCMV IE)仅在S期激活 ,应用这类启动子表达外源蛋白需要宿主细胞不停增殖 ,这对于连续持久大规模培养的宿主细胞不现实 .而人延伸因子 1α亚基启动子 (PEF 1α)不受细胞周期限制 ,且启动子强度高于PCMV IE,对于大规模外源蛋白的生产较为理想 .首先构建了基于PEF 1α启动子的哺乳动物细胞表达载体pED5 ,在增殖缓慢的CHO细胞中 ,此载体表达外源蛋白的能力是应用PCMV IE启动子表达载体的 4 1倍 .由于启动子一般仅能决定基因转录的本底水平 ,而转录激活因子 (transcriptionactivators)对基因转录的影响更大 ,所以另把两个人工转录激活结构域AH和VP2接到λ噬菌体cⅠ蛋白的C端 ,它们通过cⅠ蛋白结合于已插入到PEF 1α启动子的TATA框上游约 2 0 0bp的λ噬菌体OR2 OR1序列上 ,而被“征募”到PEF 1α启动子TATA框附近 ,从而促进基因的转录 .把上述元件均整合进一个表达载体中 ,构建了两个新型表达载体pER AH和pER VP2 .pER AH表达外源蛋白的能力比不含转录激活因子的表达载体略高 ,而pER VP2表达外源蛋白的能力则比不含转录激活因子的表达载体高
关键词
人工转录激活
因子
人延伸因子1α亚基启动子
基因表达
cI蛋白
CHO细胞
Keywords
transcription activator, promoter, gene expression, cⅠ protein, CHO cells
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
生防长枝木霉菌培养特性及形态学与系统发育学鉴定
被引量：
3
2
作者
池玉杰
伊洪伟
机构
东北林业大学
重庆市农业科学院果树研究所
出处
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第1期103-106,119,共5页
基金
国家林业局科技成果推广项目([2004]57号)
黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD200901)
文摘
采用宏观观察法和显微镜镜检的方法,在PDA和MEA培养基上对1株自我采集的具有生防价值的木霉菌株T05进行了培养特性和形态学研究。结果表明：该菌株在PDA平板培养基上生长较快,产分生孢子较早且多,也能产生厚垣孢子;在MEA上能产生分生孢子,但不产生厚垣孢子。该菌株产孢簇为松散羊毛状到紧实的疱状结构;分生孢子梗具有较简单的分枝系统,通常呈直角的1～2次分枝,单生或有时成对。瓶梗不规则地在侧面分布,时常单生,安瓿形或柱形,基部常缩缢但不明显;分生孢子单细胞、长方形到椭圆形、绿色、光滑,大小为（2.0～3.0）μm×（2.0～6.0）μm。根据这些形态特征将菌株T05鉴定为长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）。在此基础上,对T05的r DNA转录间区序列ITS和翻译延伸因子基因tef1-α的第5内含子序列进行了扩增、测序。系统发育学的研究表明,该菌株的ITS序列和tef1-α的第5内含子序列与长枝木霉的多个菌株都具有最大的相似性,因此属于长枝木霉。
关键词
长枝木霉
培养特性
形态学
r
DNA的转录间区序列
翻译
延伸
因子
1-
α亚基
蛋白基因
Keywords
Trichoderma Iongibrachiatum
Cultural characteristics
Morphology
ITS
Translation factor
1
-alpha（ tefl-α）
分类号
S718.81 [农业科学—林学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用人延伸因子1α亚基启动子和人工转录激活因子提高外源基因在CHO细胞中的表达
来大志
翁少洁
于长明
齐连权
付玲
于婷
陈薇
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2004
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
生防长枝木霉菌培养特性及形态学与系统发育学鉴定
池玉杰
伊洪伟
《东北林业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
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0
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