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犬少突胶质前体细胞的制备及嗜神经病毒感染模型的建立
1
作者 杨晓媛 薛雨佳 +5 位作者 杜文乐 崔赛赛 刘家森 康洪涛 姜骞 曲连东 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期327-332,共6页
为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型,本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构,收集并处理大脑皮质后,利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离,采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观... 为建立研究嗜神经病毒致病机制的可靠细胞模型,本实验将健康幼犬剖杀无菌去除其脑膜、脑干及血管等结构,收集并处理大脑皮质后,利用神经组织解离试剂盒及配套设备对大脑组织解离,采用3次差速贴壁法从犬大脑皮质中纯化细胞。3次贴壁后观察可见,贴壁细胞体积较大,突起数量增加,突起变长有分支,分支呈交叉状态。进一步采用间接免疫荧光试验(IFA)和RT-PCR鉴定纯化后的细胞,结果显示,纯化的细胞中少突胶质前体细胞标记物CSPG4抗体和基因检测均为阳性,而其他细胞标记物的抗体和基因检测均为阴性,表明获得了纯化的犬少突胶质前体细胞(OPC),纯度约97%。对分离纯化后的OPC采用PCR/RT-PCR检测常见犬外源病毒,结果显示,犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒5型(CPIV5)、犬细小病毒(CPV)均为阴性结果,表明获得的OPC无常见犬外源病毒感染。将犬源嗜神经病毒CDV和CPIV5分别感染OPC,感染后24 h和48 h观察细胞形态,并采用IFA鉴定两种病毒的感染状况。细胞形态观察可见,接种CDV 24 h出现细胞病变,48 h后的细胞病变更为明显,大部分细胞圆缩、聚堆、甚至脱落;接种CPIV524 h的细胞无明显病变,48 h出现圆缩、聚堆,但无明显脱落,与自然感染的细胞形态一致。IFA结果显示,CDV和CPIV5感染的细胞均出现绿色荧光,但CDV感染细胞出现的绿色荧光多于CPIV5感染的细胞。上述结果表明犬源OPC可作为CDV、CPIV5等嗜神经病毒感染的细胞模型。本研究获得了犬大脑皮质OPC的体外分离、纯化及培养方法,建立了嗜神经病毒感染的细胞模型,为该类病毒致病机制的研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞(opc) 原代细胞培养 犬 嗜神经病毒
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人少突胶质前体细胞移植对血管性痴呆小鼠脑白质的影响
2
作者 周杰 刘卫鹏 +4 位作者 杨辉 汪兆艳 王倩 栾佐 屈素清 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第5期843-850,共8页
目的:观察人少突胶质前体细胞(human oligodendrocyte precursor cells,hOPC)在血管性痴呆(vascular dementia,VaD)小鼠脑内的存活、迁移和分化能力,研究hOPC对小鼠脑白质的影响并初步探索其机制。方法:通过双侧颈总动脉狭窄法构建VaD... 目的:观察人少突胶质前体细胞(human oligodendrocyte precursor cells,hOPC)在血管性痴呆(vascular dementia,VaD)小鼠脑内的存活、迁移和分化能力,研究hOPC对小鼠脑白质的影响并初步探索其机制。方法:通过双侧颈总动脉狭窄法构建VaD小鼠模型,随机分为sham组、VaD组和hOPC组。VaD组和hOPC组在建模后8周经胼胝体立体定位移植等体积PBS或hOPC溶液。移植后4周和12周,通过免疫荧光染色观察hOPC在脑内的存活、迁移和分化。移植后12周,通过髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)、髓磷脂相关糖蛋白(myelinassociated glycoprotein,MAG)、神经丝蛋白200(neurofilament protein 200,NF200)和非磷酸化神经丝H(其单克隆抗体为SMI32)免疫荧光染色和水迷宫实验研究hOPC对小鼠脑白质的影响,利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)免疫荧光染色探索hOPC的旁分泌机制。结果:hOPC可以在VaD小鼠脑内存活12周,迁移至受损的白质区,并部分分化为成熟的少突胶质细胞(约63%)。移植后12周,hOPC显著提高MBP、MAG和NF200的荧光强度(P<0.05或P<0.01),降低SMI32的荧光强度(P<0.01);hOPC组VEGF的表达显著高于sham组和VaD组(P<0.01)。在水迷宫实验中,hOPC组与sham组的结果差异无统计学意义(P>0.05),hOPC组的潜伏期较VaD组缩短(P<0.05或P<0.01),hOPC组穿越平台的次数较VaD组增多(P<0.05)。结论:hOPC可以在VaD小鼠脑内存活、迁移和分化,减轻脑白质病变,改善认知功能,这可能与细胞替代和旁分泌有关。 展开更多
关键词 血管性痴呆 白质 少突胶质前体细胞 干细胞移植 旁分泌
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星形胶质细胞通过Cx47调控外泌体介导的CHI3L1分泌并促进少突胶质前体细胞增殖
3
作者 张笑妍 程楠楠 彭彦 《中南大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期573-585,共13页
目的:神经退行性变性疾病与髓鞘缺失紧密相关,而少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的增殖和分化是髓鞘修复的关键,但其调控机制尚未完全明确。本研究旨在探讨星形胶质细胞(astrocytes,ASTs)通过间隙连接蛋白47(co... 目的:神经退行性变性疾病与髓鞘缺失紧密相关,而少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)的增殖和分化是髓鞘修复的关键,但其调控机制尚未完全明确。本研究旨在探讨星形胶质细胞(astrocytes,ASTs)通过间隙连接蛋白47(connexin 47,Cx47)调控外泌体介导的几丁质酶3样蛋白1(chitinase-3-like protein 1,CHI3L1)分泌及其对OPCs增殖的影响机制。方法:采用清洁的出生后第1天斯普拉格-道利(postnatal day 1 Sprague-Dawley,P1SD)乳鼠原代细胞,建立OPCs与ASTs上清液共培养组(A组)、ASTs与OPCs直接接触培养组(C组)及OPCs单独培养组(O组)。采用光学显微镜、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)掺入及流式细胞术评估细胞状态和增殖能力。采用转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)和生物信息学分析(bioinformatics analysis,BA)筛选3组中OPCs的差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)。采用蛋白质印迹(Western blotting,WB)和流式细胞术分析各培养组蛋白质表达和细胞周期。采用差速离心法分离、提纯外泌体,通过纳米颗粒追踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)、透射电子显微镜分析观察OPCs分泌的外泌体数量和质量,采用WB验证外泌体中CHI3L1的表达水平。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术敲除Cx47,评估敲除后OPCs增殖能力和外泌体分泌情况。构建包裹CHI3L1的小单层脂质体(single unilamellar vesicles,SUVs)作为人工外泌体模型,采用NTA和电子显微镜鉴定其结构和尺寸。在敲除Cx47后,补充人工外泌体并采用流式细胞术和EdU试验检测OPCs增殖情况。结果:在直接接触共培养条件下,相较于O组和A组,C组OPCs增殖最为显著(P<0.05)。RNA-Seq和WB分析结果显示,ASTs通过Cx47显著促进OPCs的增殖,并增强富含CHI3L1的外泌体的分泌。在采用siRNA技术抑制Cx47表达后,OPCs增殖活性以及外泌体释放量均显著降低(P<0.05);再次补充分离提纯的外泌体和外源性CHI3L1后,采用siRNA技术敲除Cx47对OPCs细胞增殖的抑制作用被削弱。结论:本研究揭示了ASTs通过Cx47调控OPCs增殖的新途径,ASTs在直接接触OPCs时通过Cx47增强富含CHI3L1的外泌体分泌,将细胞间接触信号转化为分泌信号,从而促进OPCs增殖。CHI3L1作为外泌体中的关键分子,在神经系统中的功能和髓鞘修复中的作用机制值得深入研究。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 星形胶质细胞 间隙连接蛋白47 外泌体 几丁质酶3样蛋白1 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 转录组测序 差异表达基因 细胞增殖
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奥沙利铂化疗对小鼠行为及内侧前额叶皮层中少突胶质细胞前体细胞的影响
4
作者 岳亮 李坤 +1 位作者 庞金卫 熊源长 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2025年第1期1-8,共8页
目的探究奥沙利铂化疗对小鼠行为的影响,并进一步分析这种影响与小鼠内侧前额叶皮层(mPFC)中的少突胶质细胞前体细胞(OPCs)之间的潜在联系。方法构建奥沙利铂诱导的小鼠抑郁模型,采用随机数字表法将26只小鼠随机分为对照组和奥沙利铂组... 目的探究奥沙利铂化疗对小鼠行为的影响,并进一步分析这种影响与小鼠内侧前额叶皮层(mPFC)中的少突胶质细胞前体细胞(OPCs)之间的潜在联系。方法构建奥沙利铂诱导的小鼠抑郁模型,采用随机数字表法将26只小鼠随机分为对照组和奥沙利铂组,每组13只小鼠。在每组中随机选取10只小鼠进行行为学实验,以评估其抑郁样行为,具体通过强迫游泳实验、糖水偏好实验和悬尾实验来完成,另外3只小鼠进行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu)标记实验。在行为学试验结束后,每组随机取4只小鼠,应用免疫荧光技术检测小鼠mPFC中OPCs的密度和增殖情况。将来自SD大鼠的体外培养OPCs用随机数字表法分为对照和不同浓度奥沙利铂处理组(0.25、0.5、1、2μmol/L),每组4孔,应用免疫荧光技术检测体外大鼠OPCs的增殖情况。结果奥沙利铂组小鼠的强迫游泳实验中不动时间较对照组延长,蔗糖偏好指数较对照组降低,悬尾实验中不动时间较对照组延长,差异均有统计学意义(P<0.05)。第22天时,奥沙利铂组小鼠mPFC区内每平方毫米的OPCs数量及OPCs占总细胞数的比例较对照组明显减少(P<0.05)。第9天时,奥沙利铂组小鼠mPFC区OPCs每平方毫米的数量相较于对照组明显减少(P<0.05),奥沙利铂组小鼠mPFC区域中Brdu+OPCs占OPCs的比例相较于对照组显著减少(P<0.05)。体外实验显示,各浓度奥沙利铂Brdu+OPCs占OPCs的比例及Ki67+OPCs占OPCs的比例较对照明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。结论奥沙利铂化疗可诱导小鼠出现抑郁样行为,降低了小鼠mPFC中OPCs的密度,并抑制了其增殖,OPCs增殖受损与奥沙利铂化疗导致的抑郁样行为之间存在潜在的联系。 展开更多
关键词 奥沙利铂 抑郁 内侧前额叶皮层 少突胶质细胞前体细胞
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少突胶质前体细胞在神经发育及疾病中的作用 被引量：1
5
作者 王银峰 陈文利 罗富成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1809-1821,共13页
少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)中普遍存在的胶质细胞,参与维持正常神经功能并在多种疾病中发挥重要作用。OPC功能异常在多种疾病中均有观察,包括多发性硬化症、阿... 少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)是中枢神经系统(central nervous system,CNS)中普遍存在的胶质细胞,参与维持正常神经功能并在多种疾病中发挥重要作用。OPC功能异常在多种疾病中均有观察,包括多发性硬化症、阿尔茨海默病、帕金森病以及精神障碍。这些细胞不仅可以分化为少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL),形成髓鞘,发挥保护轴突和加速电信号传导等关键作用,还参与调节神经发育、神经环路形成以及神经可塑性,对环境因素做出响应,与神经系统疾病密切相关。OPC同时呈现显著的异质性,受到发育程序、刺激特异性的细胞反应、CNS位置、细胞间相互作用和其他调控机制的影响。本文全面综述了OPC的起源、增殖、迁移、分化等多个方面,以及其在神经发育和神经系统疾病中的关键作用。深入了解OPC的生物学功能和临床意义有助于更好地理解神经系统发育及其疾病机制,为神经系统疾病的治疗提供新的思路和策略。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 髓鞘 神经炎症 神经可塑性 神经退行性疾病 精神疾病
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高纯度少突胶质前体细胞改良培养方法的建立 被引量：5
6
作者 王兴启 刘轩 +3 位作者 杨丽华 戚大石 刘静 姚瑞芹 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1444-1447,共4页
目的对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法新生1～2d Sprague-Dawley(SD)大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,... 目的对传统培养方法进行改良,以获得更高纯度的少突胶质前体细胞(OPCs)。方法新生1～2d Sprague-Dawley(SD)大鼠的大脑皮质混合胶质细胞原代培养8d后,采用恒温摇床振荡分离法、差速贴壁法和胰酶消化法结合条件限定培养基纯化培养细胞,台盼蓝染色光学显微镜观察细胞形态;纯化培养2d后进行A2B5和DAPI免疫荧光染色鉴定和细胞纯度分析。结果光学显微镜观察发现纯化培养细胞的胞膜完整,细胞无损伤;免疫荧光染色后细胞纯度分析显示,A2B5染色阳性细胞占DAPI染核细胞的百分比为98.14%。结论通过对传统的混合胶质细胞培养及振荡分离和纯化方法的改进,能够培养出高纯度的OPCs。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 细胞培养 纯化 鉴定 大鼠
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少突胶质前体细胞与髓鞘形成及再生的研究进展 被引量：7
7
作者 林晓静 赵廷宝 刘少君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期786-789,共4页
脱髓鞘病变可阻碍神经系统电传导,导致功能障碍。髓鞘再生由广泛分布于成体的少突胶质前体细胞(OPC)介导。理解少突胶质细胞生理学,了解髓鞘形成与维稳机制,了解在某些主要神经系统病变(如多发性硬化)CNS髓鞘再生失败与内源性OPC数量、... 脱髓鞘病变可阻碍神经系统电传导,导致功能障碍。髓鞘再生由广泛分布于成体的少突胶质前体细胞(OPC)介导。理解少突胶质细胞生理学,了解髓鞘形成与维稳机制,了解在某些主要神经系统病变(如多发性硬化)CNS髓鞘再生失败与内源性OPC数量、迁移以及形成髓鞘能力的关系,对于改善髓鞘修复策略具有重要意义。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 髓鞘形成 髓鞘再生 脱髓鞘 多发性硬化
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新生大鼠少突胶质前体细胞低糖缺氧损伤模型的建立 被引量：3
8
作者 姚瑞芹 王兴启 +3 位作者 刘轩 于红丽 袁红花 杨丽华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期135-139,共5页
目的:利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)低糖缺氧损伤模型。方法:取新生1 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质,体外混合及纯化培养获得OPCs,O4免疫荧光染色鉴定;取纯化2 d的OPCs,分... 目的:利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)低糖缺氧损伤模型。方法:取新生1 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质,体外混合及纯化培养获得OPCs,O4免疫荧光染色鉴定;取纯化2 d的OPCs,分为正常组和Na2S2O4损伤组,Na2S2O4损伤组又分为0.5、1 h和1.5 h三组,倒置显微镜下观察各组细胞形态;CCK-8法检测细胞存活率;透射电镜观察细胞超微结构。结果:免疫荧光染色鉴定显示纯化的细胞绝大部分为O4阳性;形态学观察显示,缺氧0.5 h,大部分细胞突起回缩,胞体变圆,颜色变暗,随低糖缺氧损伤时间的延长OPCs逐渐脱壁,1.5 h时只有少数贴壁细胞;CCK-8法检测显示损伤0.5、1 h和1.5 h组细胞的存活率显著降低,与正常组比较均有统计学意义,损伤后1.5 h与0.5 h比较,细胞的存活率具有显著性差异;电镜观察损伤1.5 h后的细胞,线粒体肿胀,有些细胞胞核固缩成块,细胞器破碎。结论:用浓度为2mmol/L Na2S2O4的低糖培养基处理OPCs 1.5 h可以建立有效的低糖缺氧损伤模型。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 细胞培养 连二亚硫酸钠 低糖 大鼠
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少突胶质细胞前体细胞在双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型中的变化特点 被引量：3
9
作者 黄嘉璐 穆建坤 +2 位作者 孟召友 周振华 陈康宁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1237-1241,共5页
目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0... 目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0.2%CPZ的混合鼠粮,连续饲养6周;髓鞘再生组在连续喂养6周CPZ鼠粮后,换用正常鼠粮2周。实验过程中通过卢卡斯快蓝染色及透射电镜技术判断脑组织胼胝体区髓鞘脱失及恢复程度,通过免疫组化及免疫荧光技术检测脑内NG2,Olig2和GFAP的表达来评估少突胶质细胞前体细胞及星形胶质细胞的变化特点。结果与正常组相比,急性脱髓鞘组胼胝体髓鞘脱失明显,Olig2、GFAP表达明显升高(P<0.05),侧脑室旁外侧隔核(LSD)NG2升高水平较胼胝体区(CC)更为明显(P<0.05,P<0.01);髓鞘再生组髓鞘有所修复,Olig2、GFAP表达仍高于正常组,但较急性脱髓鞘组有一定程度降低(P<0.05)。结论髓鞘损伤期少突胶质细胞前体细胞不能有效迁移至受损部位,修复期Olig2表达降低,星形胶质细胞持续高水平表达可能是髓鞘修复障碍的影响因素。 展开更多
关键词 双环己酮草酰二腙 脱髓鞘 髓鞘再生 少突胶质细胞前体细胞 OLIG2 星形胶质细胞
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低氧条件下PSB603干预后少突胶质前体细胞的改变 被引量：3
10
作者 马全瑞 周惠惠 +2 位作者 孙金萍 马江波 刘娟 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期661-665,共5页
目的:探讨在低氧条件下,经腺苷受体A2b(A2b AR)拮抗剂PSB603干预后少突胶质前体细胞(OPC)的改变。方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为对照组、低氧组、PSB603组及实验组,实验组在2%低氧条件下再给予PSB603处理,4 d后用倒置相差... 目的:探讨在低氧条件下,经腺苷受体A2b(A2b AR)拮抗剂PSB603干预后少突胶质前体细胞(OPC)的改变。方法:原代培养新生SD大鼠脑皮层OPC,随机分为对照组、低氧组、PSB603组及实验组,实验组在2%低氧条件下再给予PSB603处理,4 d后用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态学差异,并用MTS检测各组细胞吸光值的差异。结果:与对照组比较,PSB603组的吸光值和形态均无明显差异,而低氧组的吸光值明显升高,且具有多分支或网状的细胞明显增多;与低氧组比较,实验组的吸光值明显下降(P<0.01),且具有多分支或网状的细胞明显减少。结论:低氧能够加速OPC的分化,PSB603能部分阻断低氧所诱导OPC的分化,提示A2b AR在低氧所诱导的OPC分化过程中发挥着重要的作用。这将对治疗脱髓鞘相关疾病以及进一步认识A2b AR在神经系统疾病中的作用具有重要意义。 展开更多
关键词 腺苷受体A2b PSB603 低氧 少突胶质前体细胞
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改良传代法获取大量高纯度大鼠少突胶质前体细胞 被引量：2
11
作者 陈婧 史明 +2 位作者 王静 黄建 刘之荣 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期141-145,共5页
目的：对少突胶质前体细胞（oligodendrocyteprecursor cell，OPC）的传代方法进行改良，以建立一种低成本高效获取大量高纯度OPC的培养方法。方法：新生SD大鼠大脑皮层混合胶质细胞原代培养，待到细胞长满约65～75％培养瓶底，每日更... 目的：对少突胶质前体细胞（oligodendrocyteprecursor cell，OPC）的传代方法进行改良，以建立一种低成本高效获取大量高纯度OPC的培养方法。方法：新生SD大鼠大脑皮层混合胶质细胞原代培养，待到细胞长满约65～75％培养瓶底，每日更换改良OPC生长培养基以刺激OPC的增殖，5～7d后OPC的密度足以进行传代时，采用EDTA化学分离为基础的机械振荡法获取oPc，并与传统的振荡分离法以及近年提出的单用化学分离法进行对比。结果：通过EDTA化学分离为基础的机械振荡法分离所得的OPC纯度明显高于另外两种分离方法，且数量显著多于传统的培养方法。结论：采用EDTA化学分离为基础的机械振荡改良传代法能高效获取大量高纯度体外培养的OPC。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞(opc) 传代 EDTA 化学分离 振荡 纯度 大鼠
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槲皮素对大鼠缺氧损伤体外培养少突胶质前体细胞增殖的作用 被引量：2
12
作者 刘轩 王兴启 +3 位作者 何荣 徐俊 周洁洁 姚瑞芹 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期225-229,共5页
目的:探讨槲皮素(Quercetin,Qu)对大鼠缺氧损伤后少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的作用。方法:取新生1～2 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质细胞进行原代培养,振荡分离后纯化3 d行Olig2和A2B5免疫荧光染... 目的:探讨槲皮素(Quercetin,Qu)对大鼠缺氧损伤后少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的作用。方法:取新生1～2 d Sprague-Dawley(SD)大鼠大脑皮质细胞进行原代培养,振荡分离后纯化3 d行Olig2和A2B5免疫荧光染色鉴定。纯化的细胞分为正常对照组、模型组(缺氧9 h)和Qu处理组(3,9,27,81μmol/L)。缺氧后3 d光镜下观察细胞形态学变化,CCK-8法检测细胞存活率,Olig2免疫荧光染色计数阳性细胞数。结果:纯化培养3 d的细胞胞体呈圆形,有双极或三极突起。免疫荧光染色显示,绝大部分细胞为A2B5和Olig2阳性,A2B5/DAPI阳性细胞率为98.54%。缺氧9 h后,模型组很多细胞出现突起皱缩或崩解,细胞密度较Qu处理组明显降低;培养至3 d,光镜下计数和CCK-8检测结果均表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组细胞数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05);Olig2免疫细胞化学染色结果进一步表明9μmol/L和27μmol/L Qu处理组OPCs数较模型组显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:9μmol/L和27μmol/L Qu有促进缺氧损伤OPCs增殖的作用。 展开更多
关键词 槲皮素 少突胶质前体细胞 缺氧 细胞增殖 大鼠
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血管内皮生长因子促进少突胶质前体细胞增殖及其机制的初步研究 被引量：2
13
作者 张波 胡俊 +2 位作者 焦岩 黄河清 陈康宁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1036-1039,共4页
目的观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对少突胶质前体细胞(oli-godendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响,探索VEGF促进OPCs体外增殖与Notch信号通道上相关蛋白的关系。方法分离纯化培养OPC... 目的观察不同浓度血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对少突胶质前体细胞(oli-godendrocyte precursor cells,OPCs)增殖的影响,探索VEGF促进OPCs体外增殖与Notch信号通道上相关蛋白的关系。方法分离纯化培养OPCs,MTT法检测不同浓度VEGF(50、100、200 ng/ml)促进OPCs增殖的作用以及加入Notch通路γ-分泌酶抑制剂DAPT(VEGF 100 ng/ml+DAPT50μmol/ml)后OPCs增殖变化情况,RT-PCR、Western blot技术检测VEGF处理OPCs后Notch信号通道上Notch-1、Hes-1的基因表达和蛋白表达情况。结果 50、100、200 ng/ml VEGF处理组的细胞增殖率分别为(107±2)%、(124±2)%、(142±7)%,与空白对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);VEGF+DAPT处理组的增殖率下降至(103±4)%(P<0.05)。RT-PCR及Western blot分析显示VEGF处理OPCs后,Notch-1、Hes-1蛋白在基因水平和蛋白水平表达均增加(P<0.05),γ-分泌酶抑制剂DAPT能抑制其表达(P<0.05)。结论 VEGF对OPCs具有促进增殖的作用,其促增殖作用与Nocth信号通路相关蛋白有关。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 少突胶质前体细胞 增殖 NOTCH
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少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响 被引量：2
14
作者 吴波 郭树章 +1 位作者 蒋涛 任先军 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期534-536,共3页
目的研究少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法采用Allen's打击法制作大鼠脊髓损伤(T10)模型。96只SD大鼠随机分为移植组、对照组、单纯损伤组及假手术组,每组24只。脊髓损伤后第7天时移植组进行少突胶质前... 目的研究少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响。方法采用Allen's打击法制作大鼠脊髓损伤(T10)模型。96只SD大鼠随机分为移植组、对照组、单纯损伤组及假手术组,每组24只。脊髓损伤后第7天时移植组进行少突胶质前体细胞移植治疗,对照组给予等量生理盐水,单纯损伤组未予任何治疗。通过运动功能评分及运动诱发电位、体感诱发电位检测评价少突胶质前体细胞移植对神经功能恢复的影响。结果脊髓损伤后大鼠脊神经功能明显障碍,运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果明显低于假手术组。随伤后时间延长,脊髓损伤大鼠神经功能均有不同程度的恢复,但运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果显示,少突胶质前体细胞移植治疗组大鼠的神经功能恢复情况明显优于对照组。结论少突胶质前体细胞移植治疗能够促进大鼠脊髓损伤神经功能的恢复。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 细胞移植 脊髓损伤
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少突胶质前体细胞在青老年大鼠慢性脑灌注不足中的活化改变 被引量：2
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作者 叶建宁 李露斯 +4 位作者 赵士福 帅杰 杨忠 陆建华 程赛宇 《中国脑血管病杂志》 CAS 2007年第3期133-136,共4页
目的观察少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPC)在大鼠慢性脑缺血损害中反应性变化及老化对此过程的影响。方法分别在青年(3个月龄)与老年(24个月龄)大鼠慢性灌注不足模型中,运用免疫组化方法检测NG2抗体标记的阳性OP... 目的观察少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPC)在大鼠慢性脑缺血损害中反应性变化及老化对此过程的影响。方法分别在青年(3个月龄)与老年(24个月龄)大鼠慢性灌注不足模型中,运用免疫组化方法检测NG2抗体标记的阳性OPC在灌注不足2周、1个月和3个月后形态数量及分布等改变。结果慢性灌注不足大鼠脑内存在NG2标记的免疫组化染色的阳性OPC明显反应性增生,与非缺血青老年对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),在皮质、皮质下、海马、胼胝体及室下区等处均有分布,以皮质下接近白质区域以及海马齿状回最为显著,2周、1个月最为明显,但于灌注不足后青年大鼠脑内NG2标记的免疫组化染色的阳性OPC染色强度和数量仍高于老年组(P<0.05)。结论慢性灌注不足过程中脑内OPC具有明显增殖活化,其反应性受月龄因素影响,并可能为慢性脑缺血损伤后的一种代偿适应或修复机制。 展开更多
关键词 脑缺血 少突胶质前体细胞 免疫组织化学 大鼠
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少突胶质前体细胞分离培养方法的改进及其谱系限定细胞体外分化模型的建立 被引量：4
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作者 李莹 富赛里 马政文 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1500-1504,共5页
目的对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质谱系限制细胞的体外分化模型,以模拟体内OPCs的发育过程。方法通过非特异性差异黏附法与A2B5-IgM抗体免疫筛选法结合,从胚胎大鼠脊髓来源的细胞悬液中分离... 目的对少突胶质前体细胞(OPCs)的分离、培养及传代方法进行改良,并建立少突胶质谱系限制细胞的体外分化模型,以模拟体内OPCs的发育过程。方法通过非特异性差异黏附法与A2B5-IgM抗体免疫筛选法结合,从胚胎大鼠脊髓来源的细胞悬液中分离、纯化OPCs,用含成纤维细胞生长因子-2和血小板源性生长因子的培养液作扩增培养;再以三碘甲状腺氨酸和神经营养因子-3诱导OPCs分化,最终分化为成熟的少突胶质细胞(OLs)。OPCs及其分化细胞的特性通过形态学观察和免疫化学染色法鉴定。结果 95%以上的细胞具有双极或三极突起的典型OPCs形态,并表达A2B5;在一定的培养条件下,OPCs可持续扩增和反复传代,且扩增的OPCs仍能维持其特有的形态和自我增殖的特性;进入分化进程的细胞将依次表达O4、O1、受体反应蛋白及髓鞘碱性蛋白等特异性分化抗原。结论分离的OPCs在形态、增殖以及分化格局等方面均与存在于胚胎脑区的O2A前体细胞(体内OPCs)相类似。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 杂交瘤细胞株 成纤维细胞生长因子-2 血小板源性生长因子 细胞培养
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大鼠少突胶质细胞前体细胞的生后发育特点及围生期电生理特性的研究 被引量：2
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作者 陈鹏慧 蔡文琴 王丽雁 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1783-1786,共4页
目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果... 目的研究少突胶质细胞前体细胞(OPC)的发育特点及围生期电生理特性。方法应用免疫组化及Western blot,观察生后不同发育阶段大鼠大脑皮质、海马等区域OPC细胞数量。应用脑片膜片钳记录出生后7d大鼠皮层白质和海马OPC电生理学特性。结果出生后0、7、14、21、35、50d、18个月大鼠大脑皮层及海马区域均有OPC细胞表达。在发育生后7d,细胞数量密度最高,成年大鼠也有较高数量OPC的分布。P7d大鼠海马OPC有小的内向Na+电流,而白质区域OPC仅表现外向K+电流和细胞膜被动反应。结论P7d大鼠皮层及海马区域OPC细胞数量及NG2蛋白表达量最大,海马和白质区域的OPC表现电生理学特性的异质性。 展开更多
关键词 少突胶质细胞前体细胞 NG2 发育 膜片钳
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新生大鼠少突胶质前体细胞的培养与鉴定 被引量：2
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作者 王丽雁 蔡文琴 陈鹏慧 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期489-491,共3页
目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞... 目的在体外培养条件下获取纯度较高的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte progenitor cells,OPCs)。方法原代混合胶质培养,利用振荡法和差速贴壁法分离纯化少突胶质前体细胞,再用无血清化学条件培养基培养。免疫荧光法及膜片钳记录细胞电生理特性进行鉴定。结果振荡分离后超过90%细胞为NG2阳性OPCs;OPCs电生理特性:输入阻抗Ra相对较高;电压依赖的K+电流具有外向整流特性;对河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)敏感的小的内向Na+流,不能产生动作电位。结论振荡法结合差速贴壁可以获得纯度较高的OPCs;OPCs具有区别于神经元、星型胶质细胞、小胶质细胞的独有电生理特性。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 细胞培养 大鼠
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一种分离培养少突胶质前体细胞的改进方法 被引量：1
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作者 阙海萍 赵沉浮 +1 位作者 刘勇 刘少君 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期435-439,共5页
目的:对少突胶质前体细胞的分离培养方法进行改良,为今后细胞移植治疗研究提供基础。方法:在大鼠少突胶质前体细胞分离纯化培养过程中添加不同浓度bFGF(5、10、20 ng/ml),显微镜观察少突胶质前体细胞在体外的生长情况,台盼蓝实验检测细... 目的:对少突胶质前体细胞的分离培养方法进行改良,为今后细胞移植治疗研究提供基础。方法:在大鼠少突胶质前体细胞分离纯化培养过程中添加不同浓度bFGF(5、10、20 ng/ml),显微镜观察少突胶质前体细胞在体外的生长情况,台盼蓝实验检测细胞存活率和获得率,免疫细胞化学技术进行细胞鉴定,流式细胞术检测细胞纯度。结果:在少突胶质前体细胞培养过程中添加10 ng/ml的bFGF,可明显提高少突胶质前体细胞的产出率和纯度。分离的少突胶质前体细胞呈A2B5、NG2阳性,能进一步分化为成熟少突胶质细胞且表达MBP和O4。结论:在培养中添加适当浓度的bFGF的方法能有效获得高纯度的少突胶质前体细胞。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 BFGF 纯化 鉴定 细胞培养
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少突胶质前体细胞中枢神经系统相关功能研究进展 被引量：2
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作者 陈鹏慧 蔡文琴 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期275-278,共4页
胶质细胞在中枢神经系统中的重要作用已经逐渐得到认可,其中特异表达NG2硫酸软骨素蛋白多糖的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)是中枢神经系统发现的一种具有典型双极突起、胞体小而不规则的细胞,在胚胎发育过程... 胶质细胞在中枢神经系统中的重要作用已经逐渐得到认可,其中特异表达NG2硫酸软骨素蛋白多糖的少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cell,OPC)是中枢神经系统发现的一种具有典型双极突起、胞体小而不规则的细胞,在胚胎发育过程中能够增殖及可分化为成髓鞘的少突胶质细胞而命名。体外培养条件下证实OPC可增殖及分化成为少突胶质细胞及Ⅱ型星状胶质细胞,甚至可能分化为神经元,因而认为这类细胞可能是一种多潜能的干细胞。但是在成年脑白质和灰质均发现有大量OPC的表达,细胞形态和电生理功能表明其具有成熟依赖特性,可能不严格属于少突胶质细胞系,而是少突胶质细胞、星状胶质细胞之外的中枢神经系统大胶质细胞类型。由于OPC与神经退行性疾病、毒性物质作用、营养代谢障碍,尤其是新生儿缺氧缺血所致的脑瘫等多种神经系统疾病相关,成为神经科学研究的热点。本文主要对中枢神经系统OPC的发现、研究近况和在髓鞘再生、神经网络、轴突生长、参与突触可塑性中的相关功能做综述。 展开更多
关键词 少突胶质前体细胞 发育 髓鞘 突触 神经网络
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