支气管扩张症合并感染患者血清人分泌型磷脂酶A2-X表达情况及其与炎性指标的相关性研究 被引量：33

1

作者 徐琳 路苹 +1 位作者 姚红梅 张翊玲 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2020年第24期3034-3039,共6页

背景支气管扩张症是呼吸系统常见病、多发病,感染是引起支气管扩张症的最常见原因。人分泌型磷脂酶A2-X(sPLA2-X)在炎性反应中发挥重要作用,并可促进炎性反应的发生、发展,而支气管扩张症合并感染患者血清sPLA2-X表达情况及其与重要炎... 背景支气管扩张症是呼吸系统常见病、多发病,感染是引起支气管扩张症的最常见原因。人分泌型磷脂酶A2-X(sPLA2-X)在炎性反应中发挥重要作用,并可促进炎性反应的发生、发展,而支气管扩张症合并感染患者血清sPLA2-X表达情况及其与重要炎性指标如降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白介素(IL)-6、IL-17、IL-33是否存在相关性尚未见相关报道。目的研究支气管扩张症合并感染患者血清sPLA2-X表达情况及其与炎性指标——PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33的相关性,并进一步研究血清sPLA2-X对支气管扩张症合并感染的影响。方法选取2017年2月—2019年1月在贵州省人民医院呼吸与危重症医学科住院治疗的支气管扩张症合并感染患者47例为病例组,选取同期在贵州省人民医院健康体检中心体检的健康志愿者21例为健康对照组。收集研究对象一般资料,分别检测健康对照组体检当天、观察组治疗前(入院当天)与治疗后(出院前1天)血清sPLA2-X、白细胞计数、PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33。比较两组治疗前后观察指标,分析病例组治疗前血清sPLA2-X与PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33的相关性。结果病例组治疗前血清sPLA2-X、白细胞计数、PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33均高于健康对照组(P<0.05);病例组治疗后血清sPLA2-X、PCT、CRP、iNOS、IL-17均高于健康对照组(P<0.05);两组治疗后白细胞计数、IL-6、IL-33比较,差异无统计学意义(P>0.05)。病例组治疗后血清sPLA2-X、白细胞计数、PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33均低于本组治疗前(P<0.05)。病例组治疗前血清sPLA2-X与PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-17、IL-33均呈正相关(r=0.5262、0.6401、0.5507、0.5168、0.6099、0.3574,P值均<0.01)。结论支气管扩张症合并感染患者血清sPLA2-X升高,且其与PCT、CRP、iNOS、IL-6、IL-7、IL-33呈正相关,表明血清sPLA2-X与支气管扩张症合并感染有重要的关联,血清sPLA2-X可作为评估支气管扩张症合并感染的参考指标。 展开更多

关键词 支气管扩张症 感染 磷脂酶a2 分泌型 人分泌型磷脂酶a2-x 降钙素原 C反应蛋白 诱导型一氧化氮合酶 白细胞介素

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眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A_2的研究进展 被引量：8

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作者 杨亚萍 梁中琴 +1 位作者 顾振纶 秦正红 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期1045-1048,共4页

眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)作为眼镜蛇毒中的一个重要成分,有着广泛的生物学活性,近年来的研究热点正日益从眼镜蛇粗毒转向毒素中的某个单体,如sPLA2的研究。该文简要综述了眼镜蛇毒sPLA2的结构特征、分离纯化以及分子生物学特性,... 眼镜蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)作为眼镜蛇毒中的一个重要成分,有着广泛的生物学活性,近年来的研究热点正日益从眼镜蛇粗毒转向毒素中的某个单体,如sPLA2的研究。该文简要综述了眼镜蛇毒sPLA2的结构特征、分离纯化以及分子生物学特性,着重论述了sPLA2多样的药理毒理作用,并对其作用机制和发展前景进行了探讨。 展开更多

关键词 眼镜蛇毒 分泌型磷脂酶a2 约理作用 肿瘤

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七氟醚对单肺通气致肺损伤兔肺组织胞质型磷脂酶A_2和clara细胞分泌蛋白表达的影响(英文) 被引量：8

3

作者 刘睿 杨泳 +4 位作者 李艳华 李江 马庆杰 赵艳花 王殿华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期469-473,共5页

目的探讨七氟醚对单肺通气(OLV)兔肺组织胞质型磷脂酶A2(C-PLA2)及clara细胞分泌蛋白(CCSP)表达的影响。方法36只健康日本大耳白兔随机分为假手术组(S组)、OLV组(O组)和OLV+七氟醚组(OS组)。OS组据所给七氟醚浓度(体积分数)不同分为1%... 目的探讨七氟醚对单肺通气(OLV)兔肺组织胞质型磷脂酶A2(C-PLA2)及clara细胞分泌蛋白(CCSP)表达的影响。方法36只健康日本大耳白兔随机分为假手术组(S组)、OLV组(O组)和OLV+七氟醚组(OS组)。OS组据所给七氟醚浓度(体积分数)不同分为1%、2%、3%和4%亚组。Western blotting和定量PCR分别用于检测肺组织中CCSP和C-PLA2蛋白及mRNA的表达水平。ELISA检测肺组织花生四烯酸(AA)含量。通过观察肺湿/干(W/D)和肺组织的形态学改变评价肺损伤的严重程度。结果 OLV后兔肺组织CCSP蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05),而C-PLA2蛋白和mRNA表达水平、肺组织AA含量和肺损伤程度均明显增加(P<0.05);OLV+七氟醚组中肺组织CCSP蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),而C-PLA2蛋白和mRNA表达水平和肺组织AA含量降低(P<0.05),肺损伤减轻(P<0.05);OLV+不同浓度七氟醚组中肺组织CCSP蛋白和mRNA表达水平无显著性差异,但肺组织C-PLA2蛋白和mRNA表达水平、肺组织AA含量和肺损伤程度随浓度的增加而逐渐降低(P<0.05)。结论 OLV可使兔肺组织中CCSP蛋白和mRNA表达水平降低,肺组织C-PLA2蛋白和mRNA表达水平和AA含量增加,引起急性肺损伤。七氟醚可通过逆转OLV的上述效应而发挥抗急性肺损伤作用。 展开更多

关键词 七氟醚 单肺通气 急性肺损伤 胞质型-磷脂酶a2 CLARA细胞分泌蛋白

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分泌型磷脂酶A_2非酶活性依赖的神经元保护作用

4

作者 黎明涛 马驰 +11 位作者 谢元斌 叶彦颖 朱小南 闫霞 施乐瑜 袁衡新 陈汝筑 李文明 皮荣标 韩怡凡 Igor Krizaj 黄守坚 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期523-527,共5页

【目的】鉴定中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制。【方法】连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子。用EdmanN-末端测序法取得蛋白质一级序列,BLAST软件进行蛋白质鉴定。使用低钾诱导体外培养... 【目的】鉴定中华眼镜蛇(Najanajaatra)蛇毒中的神经保护因子,研究其抗神经元凋亡作用机制。【方法】连续柱层析法分离、纯化蛇毒神经保护因子。用EdmanN-末端测序法取得蛋白质一级序列,BLAST软件进行蛋白质鉴定。使用低钾诱导体外培养小脑颗粒神经元凋亡模型,研究其神经元保护作用。【结果】从中华眼镜蛇蛇毒中分离出一种,可浓度依赖性地抑制低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡。神经保护因子(Cobravenomneu-ronalprotectivefactor,CVNPF)此神经保护因子N-末端20个氨基酸序列为NLYQFKNMIQCTVPSRSWWD-,BLAST序列同源比对确定该保护因子为中华眼镜蛇分泌型磷脂酶A2(secretedphospholipaseA2,sPLA2)。进一步发现来源于蜂毒、莫桑比克眼镜蛇(Njajanajamossambica)蛇毒、西部菱斑响尾蛇(Crotalusatroxalso)蛇毒的sPLA2也对小脑颗粒神经元具有保护作用;其作用不为磷脂酶A2酶活性抑制剂7,7-Dimethyleicosadienoicacid(DEDA)和Manoalide阻断。【结论】CVNPF属于sPLA2。多种sPLA2可以抗神经元凋亡,其保护机制与磷脂酶A2的酶活性无关。 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶a2 非酶活性依赖 神经元 保护作用 蛇毒 神经保护因子

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分泌型磷脂酶A_2亚家族:结构与功能 被引量：7

5

作者 杨武 郭薇 黄春洪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期932-940,共9页

分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)是磷脂代谢酶中最大的一个亚家族,具有多种生理功能.迄今为止,在人体中总共发现11种sPLA2亚型,它们具有不同的组织分布、水解活性和底物特异性.由于其水解产物主要为花生四烯酸和溶血... 分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,sPLA2)是磷脂代谢酶中最大的一个亚家族,具有多种生理功能.迄今为止,在人体中总共发现11种sPLA2亚型,它们具有不同的组织分布、水解活性和底物特异性.由于其水解产物主要为花生四烯酸和溶血磷脂,sPLA2常通过影响这两个通路调节细胞功能、炎症反应、抗菌等.本文结合近几年国际上关于sPLA2的研究报道,对于sPLA2的结构、功能、组织定位及与疾病发生发展的关系做一简要概述. 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶a2 脂质介质 炎症 花生四烯酸 结构与功能

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支气管扩张症合并非结核分枝杆菌感染患者血清和肽素、分泌型磷脂酶A2-X及致炎-抑炎因子谱的变化 被引量：11

6

作者 汝触会 陈爱凤 +2 位作者 何飞 鲍志坚 丁士标 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1098-1103,共6页

目的探讨支气管扩张症(BCS)合并非结核分枝杆菌(NTM)感染患者血清和肽素(CPP)、分泌型磷脂酶A2-X(sPLA2-X)及致炎-抑炎因子谱的变化。方法纳入2017年1月-2020年6月浙江大学医学院附属杭州市胸科医院呼吸科收治的BCS患者110例,根据是否合... 目的探讨支气管扩张症(BCS)合并非结核分枝杆菌(NTM)感染患者血清和肽素(CPP)、分泌型磷脂酶A2-X(sPLA2-X)及致炎-抑炎因子谱的变化。方法纳入2017年1月-2020年6月浙江大学医学院附属杭州市胸科医院呼吸科收治的BCS患者110例,根据是否合并NTM感染分为单纯BCS组(n=73)与NTM感染组(n=37),将NTM感染组患者根据其BCS程度分为轻度组(n=10)、中度组(n=16)与重度组(n=11),另选健康志愿者40名为对照组。检测各组血清CPP、sPLA2-X、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A水平并进行组间比较。结果单纯BCS组及NTM感染组的血清CPP、sPLA2-X、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10及IL-17A水平均高于对照组,且NTM感染组高于单纯BCS组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重度组的血清CPP、sPLA2-X、TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10及IL-17A水平均明显高于轻度组和中度组,且中度组的上述指标(除IL-6和IL-10外)高于轻度组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论BCS合并NTM感染患者血清CPP、sPLA2-X及致炎-抑炎因子谱呈明显高表达,有助于病情严重程度的评估及指导临床用药。 展开更多

关键词 支气管扩张症 非结核分枝杆菌 和肽素 分泌型磷脂酶a2-x 炎性因子

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未足月胎膜早破患者外周血中分泌型磷脂酶A2的表达与羊膜腔感染的相关性 被引量：20

7

作者 周洋 周佳任 +2 位作者 徐漫飞 张怡舜 赵岩 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期520-523,共4页

目的研究外周血中分泌型磷脂酶A2(sPLA2)在未足月胎膜早破及羊膜腔感染中的作用及其意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测30例未足月胎膜早破患者(实验组)分娩发动前后、30例未发生胎膜早破的未足月正常妊娠患者(正常对照组)及30例足... 目的研究外周血中分泌型磷脂酶A2(sPLA2)在未足月胎膜早破及羊膜腔感染中的作用及其意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测30例未足月胎膜早破患者(实验组)分娩发动前后、30例未发生胎膜早破的未足月正常妊娠患者(正常对照组)及30例足月胎膜早破患者(足月对照组)分娩发动后外周血中sPLA2 mRNA的表达水平。未足月胎膜早破患者结束妊娠后取胎膜行病理学检查,以确定有无组织学绒毛膜羊膜炎。结果未分娩发动时sPLA2 mRNA的表达水平实验组为1.079±0.746,正常对照组为0.651±0.481,实验组与同孕周正常对照组相比sPLA2 mRNA的表达水平升高,差异有统计学意义(P=0.011)。分娩发动时外周血中sPLA2 mRNA的表达水平实验组为2.439±0.086,足月对照组为2.575±0.036,实验组与足月对照组相比sPLA2 mRNA的表达水平无统计学差异(P=0.787)。实验组中分娩发动时s PLA2的含量与是否患绒毛膜羊膜炎有关(P=0.008)。结论 sPLA2升高可能参与未足月胎膜早破的发病,并与羊膜腔的感染有关。 展开更多

关键词 胎膜早破 分泌型磷脂酶a2 绒毛膜羊膜炎 分娩发动

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分泌型磷脂酶PLA2G5的生物学功能及其抑制剂研究进展 被引量：3

8

作者 慈钰莹 张伟东 +2 位作者 蔺勇 苏晶 张扬 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第9期1006-1015,共10页

分泌型磷脂酶PLA2G5属于磷脂酶A2超家族的一员,在免疫细胞和非免疫细胞中均有表达.研究表明,PLA2G5参与生物学事件的发生发展,在特定的病理条件下具有诱导作用.本文简要阐述了PLA2G5的来源、结构特征、生物学功能和在疾病中的作用,以及... 分泌型磷脂酶PLA2G5属于磷脂酶A2超家族的一员,在免疫细胞和非免疫细胞中均有表达.研究表明,PLA2G5参与生物学事件的发生发展,在特定的病理条件下具有诱导作用.本文简要阐述了PLA2G5的来源、结构特征、生物学功能和在疾病中的作用,以及现有或潜在的PLA2G5抑制剂,以期探索基于PLA2G5的治疗新靶标. 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶PLa2G5 信号传导 脂质代谢 气道炎症疾病 关节炎 抑制剂

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人分泌型磷脂酶A2-ⅡA的功能性动力学特征研究 被引量：1

9

作者 张珊 巩卫康 +1 位作者 张娜 李春华 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2022年第7期1318-1324,共7页

目的 人分泌型磷脂酶A-ⅡA (secretory phospholipase Agroup ⅡA,sPLA-ⅡA)在调节细胞脂质代谢和信号传导中具有重要作用,参与了多种急、慢性炎症反应。研究其动力学和变构与功能的关系具有重要意义。方法 利用弹性网络模型(elastic ne... 目的 人分泌型磷脂酶A-ⅡA (secretory phospholipase Agroup ⅡA,sPLA-ⅡA)在调节细胞脂质代谢和信号传导中具有重要作用,参与了多种急、慢性炎症反应。研究其动力学和变构与功能的关系具有重要意义。方法 利用弹性网络模型(elastic network model, ENM)、微扰响应扫描(perturbation-response scanning, PRS)和蛋白质结构网络(protein structure network,PSN)方法对来自人sPLA-ⅡA的31个分子的结构动力学和变构效应进行分析,并探索其动力学共性和特异性与功能的关系。结果 结果表明,对酶的催化和结构稳定起关键作用的催化残基和参与二硫键形成的半胱氨酸残基具有低运动性,这是对酶共有功能的要求;而涉及与钙离子或膜结合的5个结构区域具有高运动性,它们体现了酶成员的特异性。另外,高运动性区域在PRS分析中显示出对外界微扰响应的高敏感性,表明其在变构调节中起重要作用,而低敏感性残基则在维持结构稳定方面发挥了重要作用。残基运动相关性分析发现,人sPLA分子催化位点周围的强相关运动有利于酶催化功能的发挥。结论 本研究有助于深入理解人sPLA-ⅡA成员分子的动力学及功能性变构机制,可为药物设计和准确设计具有精细调节活性的蛋白质提供指导。 展开更多

关键词 人分泌型磷脂酶a2-ⅡA(sPLa2-ⅡA) 弹性网络模型 微扰响应扫描 结构动力学 变构机制

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鸡分泌型磷脂酶A2可预示鸡肺部发生炎症

10

《中国家禽》 北大核心 2012年第5期68-68,共1页

鸡在发生炎症过程中会释放分泌型磷脂酶A2（sPLA2），为分析健康鸡和发病鸡（传染性支气管炎和肺部炎症鸡）sPLA2基因表达情况，突尼斯斯法克斯大学的研究人员首次应用人sPLA2序列扫描鸡基因组来鉴定鸡分泌型磷脂酶A2（ChPLA2），运用RT... 鸡在发生炎症过程中会释放分泌型磷脂酶A2（sPLA2），为分析健康鸡和发病鸡（传染性支气管炎和肺部炎症鸡）sPLA2基因表达情况，突尼斯斯法克斯大学的研究人员首次应用人sPLA2序列扫描鸡基因组来鉴定鸡分泌型磷脂酶A2（ChPLA2），运用RT-PCR扩增鸡mRNA，并对同源性cDNAs测序。 展开更多

关键词 磷脂酶a2 分泌型 病鸡 炎症 肺部 传染性支气管炎 PCR扩增 CDNAS

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乳腺浸润性导管癌组织中磷脂酶A2蛋白的表达 被引量：2

11

作者 曲蕴慧 庞霞 +3 位作者 赵乐 李晟磊 陈奎生 贺付成 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2011年第3期360-363,共4页

目的:探讨分泌型磷脂酶A2(sPLA2)-Ⅱa及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)蛋白的表达与乳腺浸润性导管癌发生发展及浸润、转移的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测57例乳腺浸润性导管癌组织、15例乳腺纤维腺瘤组织及15例正常乳腺组织中sPLA2-Ⅱa... 目的:探讨分泌型磷脂酶A2(sPLA2)-Ⅱa及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)蛋白的表达与乳腺浸润性导管癌发生发展及浸润、转移的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测57例乳腺浸润性导管癌组织、15例乳腺纤维腺瘤组织及15例正常乳腺组织中sPLA2-Ⅱa及cPLA2蛋白的表达。结果:乳腺浸润性导管癌组织中sPLA2-Ⅱa(75.4%)及cPLA2蛋白(68.4%)的阳性表达率与乳腺纤维腺瘤组织(20.0%,26.7%)及正常乳腺组织(13.3%,13.3%)比较,差异均有统计学意义(χ2=27.585及18.989,P均<0.001)。乳腺浸润性导管癌组织中sPLA2-Ⅱa及cP-LA2蛋白的阳性表达率与临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移均有关(sPLA2-Ⅱa:χ2=6.428、16.336和6.007,P均<0.05;cPLA2:χ2=10.072、7.140和3.959,P均<0.05),且二者表达有关(rp=0.373,P=0.002)。结论:sPLA2-Ⅱa及cPLA2在乳腺浸润性导管癌的浸润、转移及癌变过程中起重要作用,有望成为早期诊断和判断预后的分子指标。 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶a2 胞浆型磷脂酶a2 乳腺浸润性导管癌

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咳嗽变异性哮喘患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系研究 被引量：14

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作者 张翊玲 路苹 +1 位作者 郑梦凝 姚红梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1352-1357,共6页

目的:研究咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系,进一步研究sPLA2-X对CVA的影响。方法:选择贵州省人民医院呼吸与危重症医学科2018年6月至2019年11月门诊经确诊CVA的患者为研究对象及同期在我院... 目的:研究咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO的关系,进一步研究sPLA2-X对CVA的影响。方法:选择贵州省人民医院呼吸与危重症医学科2018年6月至2019年11月门诊经确诊CVA的患者为研究对象及同期在我院健康体检中心体检的健康志愿者为对照组,分为CVA治疗前组(41例)和健康对照组23例。CVA治疗前组经规范化治疗3月后成CVA治疗后组(41例)。采用ELISA方法检测咳嗽变异性哮喘(CVA)患者血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33、IL-17、总IgE的含量;采用肺功能仪检测肺功能;呼出气一氧化氮检测仪检测FeNO。结果:与健康对照组相比,CVA治疗前组血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33的表达显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。同时,CVA经规范治疗后,CVA治疗后组血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33及总IgE显著降低,FeNO明显降低、肺功能改善,差异均具有统计学意义(P<0.05)。而CVA治疗前组血清中IL-17与健康对照组相比,无显著差异。CVA治疗前组血清中sPLA2-X含量与CysLT、FeNO、iNOS、IL-33呈正相关(r=0.854 7、0.622 9、0.644 9、0.778 9,P<0.001),IL-17与血清中sPLA2-X含量无相关性(r=0.058 5,P=0.127 6)。结论:CVA患者为支气管哮喘特殊类型,其血清中sPLA2-X与CysLT、iNOS、IL-33均显著升高,同时FeNO显著升高。经治疗后血清中sPLA2-X、CysLT、iNOS、IL-33显著降低。血清中sPLA2-X含量与CysLT、iNOS、IL-33及FeNO呈正相关。 展开更多

关键词 分泌型磷脂酶a2-x 咳嗽变异性哮喘 CysLT半胱氨酰白三烯 白介素33 iNOS诱生型一氧化氮合酶

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鲤鱼PLA2g3a1催化活性区的原核表达及酶活性分析 被引量：4

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作者 王钦 李建林 +4 位作者 唐永凯 李红霞 张磊 沈泽恩 俞菊华 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期339-346,共8页

[目的]本文旨在获得可溶的鲤鱼(Cyprinus carpio)groupⅢ分泌型磷脂酶A 2(PLA2g3a1)催化活性区(PLA 2 bee venom like region,PBVR)原核重组蛋白,并测定该蛋白的磷脂酶活性。[方法]分别构建标签蛋白小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquiti... [目的]本文旨在获得可溶的鲤鱼(Cyprinus carpio)groupⅢ分泌型磷脂酶A 2(PLA2g3a1)催化活性区(PLA 2 bee venom like region,PBVR)原核重组蛋白,并测定该蛋白的磷脂酶活性。[方法]分别构建标签蛋白小分子泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)、硫氧还原蛋白(thioredoxin A,TrxA)、N利用物质A(N-utilization substance A,NusA)、麦芽糖结合蛋白(maltose-binding protein,MBP)与PBVR的重组表达质粒,转化入大肠杆菌感受态细胞Transetta(DE3)进行原核表达,比较不同标签蛋白的促溶作用;使用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,与BSA蛋白标准品电泳比对确定纯化后蛋白的浓度;采用偶联氧脂合酶法测定PBVR重组蛋白的磷脂酶活性。[结果]促溶作用最高的标签蛋白是NusA,可溶性重组蛋白占总蛋白的95%,其次是MBP和TrxA,分别占87%和47%。综合考量可溶性重组蛋白的得率,选择MBP融合蛋白。重组原核表达蛋白MBP-PBVR的磷脂酶比活力[(13.68±0.12)U·μmol-1]显著高于TrxA-PBVR[(0.94±0.01)U·μmol^-1]和NusA-PBVR[(0.93±0.04)U·μmol^-1](P<0.05)。MBP-PBVR酶促反应最适pH值为7.5,在鲤鱼适宜生长温度(20~30℃)内酶活性无差异,微量Ca^2+即能显著提高MBP-PBVR的磷脂酶活性,K d为0.0153 mmol·L^-1;MBP-PBVR磷脂酶的米氏方程参数V m为2.2μmol·L^-1·min^-1,K m为31.9μmol·L^-1。[结论]获得了可溶的具有磷脂酶活性的原核重组表达蛋白PBVR,揭示了MBP-PBVR磷脂酶活性特征。 展开更多

关键词 鲤鱼 GroupⅢ分泌型磷脂酶a2催化活性区(PBVR) 标签蛋白 原核表达 磷脂酶活性特征

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炎性因子对星形胶质细胞的活化及sPLA2-ⅡA表达的机制及影响 被引量：4

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作者 李雪粉 陈文武 +3 位作者 李青 郭安臣 王拥军 王群 《中国卒中杂志》 2018年第10期1012-1018,共7页

目的探索在炎性因子作用下,星形胶质细胞的活性变化及其产生的分泌型磷脂酶A2-ⅡA(secretory phospholipase A2 of groupⅡA,sPLA2-ⅡA)表达量的变化,进一步探讨其可能存在的机制。方法在体外原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的基础上... 目的探索在炎性因子作用下,星形胶质细胞的活性变化及其产生的分泌型磷脂酶A2-ⅡA(secretory phospholipase A2 of groupⅡA,sPLA2-ⅡA)表达量的变化,进一步探讨其可能存在的机制。方法在体外原代培养大鼠大脑皮质星形胶质细胞的基础上,取第4代培养的细胞用于实验。随机分为对照组和实验组,实验组分别为:10 ng/ml白介素-1β(interleukin-1beta,IL-1β)组,100 ng/ml IL-1β组,10 ng/ml肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor,TNF-α)组,100 ng/mlTNF-α组,10 ng/ml IL-1β+10 ng/mlTNF-α组,100 ng/mlIL-1β+100 ng/mlTNF-α组。24 h后用细胞增殖-毒性检测试剂盒检测细胞活力。选取10 ng/mlIL-1β+10 ng/mlTNF-α组继续进行实验。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitativereal-timepolymerasechainreaction,qRT-PCR)和酶联免疫吸附测定,检测sPLA2-ⅡA的表达量变化,并通过qRT-PCR检测核因子κB(nuclearfactor-kappaB,NF-κB)、NF-κB抑制蛋白激酶α(inhibitor of NF-κB kinaseα,IKKα)、NF-κB抑制蛋白激酶β(inhibitor of NF-κB kinaseβ,IKKβ)的mRNA变化。结果通过分离、纯化获得了形态典型的大鼠大脑皮质星形胶质细胞,细胞形态不规则,突起较多较长,呈放射状。胶质纤维酸性蛋白免疫染色显示纯度达95%以上。实验组细胞的活性均高于对照组。其中,100 ng/mlIL-1β组、100 ng/mlTNF-α组、10 ng/mlIL-1β+10 ng/mlTNF-α组和100 ng/ml IL-1β+100 ng/mlTNF-α组的细胞活性明显高于对照组(t=0.07、0.12、0.53、0.39,P<0.05)。与对照组相比,10 ng/ml IL-1β+10 ng/ml TNF-α组sPLA2-ⅡA的mRNA和蛋白水平表达量显著升高(t=9.615、11.635,P<0.05),NF-κB、IKKα、IKKβ的mRNA均增高(t=4.015、4.719、6.509,P<0.05)。结论炎性因子IL-1β与TNF-α联合应用可刺激星形胶质细胞活化,并能够不同程度地刺激sPLA2-ⅡA的表达,该过程可能与NF-κB通路有关。 展开更多

关键词 星形胶质细胞 炎性因子 分泌型磷脂酶a2-ⅡA

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鲤sPLA2-Ⅲ基因结构、系统发育和表达特征 被引量：1

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作者 许迪辉 李红霞 +5 位作者 李建林 唐永凯 王钦 张磊 沈泽恩 俞菊华 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1172-1181,共10页

磷脂酶A2在磷脂代谢、炎症反应、细胞增殖和动脉粥样硬化等生理病理过程中发挥作用。为了探究sPLA2-Ⅲ在鲤(Cyprinus carpioLinnaeus)中的生物学功能,实验使用BLAST同源搜索和线性分析在鲤(Cyprinus carpio)基因组中挖掘得到5个sPLA2-... 磷脂酶A2在磷脂代谢、炎症反应、细胞增殖和动脉粥样硬化等生理病理过程中发挥作用。为了探究sPLA2-Ⅲ在鲤(Cyprinus carpioLinnaeus)中的生物学功能,实验使用BLAST同源搜索和线性分析在鲤(Cyprinus carpio)基因组中挖掘得到5个sPLA2-Ⅲ基因,分别位于5个连锁群,分别命名为Ccpla2g3a1、Ccpla2g3a2、Ccpla2g3b、Ccpla2g3c1和Ccpla2g3c2。基因结构和序列分析显示Ccpla2g3as含有7个外显子,Ccpla2g3b和Ccpla2g3cs则均含有4个外显子,分别编码530、525、461、752和753个氨基酸,均含有PLA2beevenomlike region和sPLA2-Ⅲ特征序列。线性分析显示, Ccpla2g3a1和Ccpla2g3a2, Ccpla2g3c1和Ccpla2g3c2来自鲤特异的染色体加倍事件。从2R (Two rounds of genome duplication)鱼雀鳝(Lepisosteus oculatus)到3R(Fish-specific genome duplication, FSGD)鱼斑马鱼(Danio rerio)等,雀鳝的pla2g3a(b)加倍为3R鱼的pla2g3a和pla2g3b, pla2g3c因在3R鱼的一个连锁群上丢失,故3R鱼中只保留一个基因。同源性分析表明已有鱼类Pla2g3a、Pla2g3b和Pla2g3c垂直同源蛋白之间相似性分别为48.8%-93.2%、37.6%-74.3%和49.6%-97.6%,鲤和斑马鱼的垂直同源基因之间相似性最高。系统发育结果显示,鱼类及其祖先雀鳝的Pla2g3c以100%的置信值归在一支,雀鳝Pla2g3a(b)与除了鲤科鱼类(鲤和斑马鱼) Pla2g3b外的Pla2g3a和Pla2g3b以96%置信值在一支,鲤和斑马鱼Pla2g3b单独形成一支表明在进化过程中该基因变异较大。荧光定量PCR结果表明Ccpla2g3as在整个鲤早期发育阶段表达量均较低,在成鱼肝脏中表达量最高(P<0.01);Ccpla2g3b在鲤受精后0.5h的表达量显著高于之后各取样点(P<0.05),在成鱼卵巢中表达量最高(P<0.01);Ccpla2g3cs在120h表达量达到最高,在成鱼脑中表达量最高(P<0.01)。实验比较全面地揭示了鲤sPLA2-Ⅲ亚家族基因结构、系统发育和表达特征。 展开更多

关键词 鲤 分泌型磷脂酶a2-Ⅲ 基因结构 系统发育 基因表达

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七氟醚对单肺通气致肺损伤保护作用研究 被引量：5

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作者 种朋贵 丁瑜 高鸿 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期82-87,共6页

目的探讨七氟醚对单肺通气(one-lung ventilation,OLV)所致兔急性肺损伤后的保护作用及机制。方法采用36只白兔随机分为3组,分别为假手术组、单肺通气组、单肺通气+七氟醚组。其中单肺通气+七氟醚组按七氟醚浓度不同分为几个亚组。采用E... 目的探讨七氟醚对单肺通气(one-lung ventilation,OLV)所致兔急性肺损伤后的保护作用及机制。方法采用36只白兔随机分为3组,分别为假手术组、单肺通气组、单肺通气+七氟醚组。其中单肺通气+七氟醚组按七氟醚浓度不同分为几个亚组。采用ELISA法检测兔肺组织中花生四烯酸(arachidonic acid,AA)含量,同时测定肺W/D值,通过HE染色观察肺组织形态学变化;采用RT-qPCR法检测肺组织中Clara细胞分泌蛋白(CCSP)和胞质型磷脂酶A2(C-PLA2) mRNA表达水平;采用Western blot法检测肺组织中CCSP和C-PLA2蛋白表达。结果单肺通气组肺组织中花生四烯酸含量、肺损伤程度及C-PLA2蛋白和mRNA表达水平均较假手术组明显增加(P<0.05),而CCSP蛋白和mRNA表达水平明显降低(P<0.05);单肺通气+七氟醚组兔肺组织中花生四烯酸、肺损伤及肺组织C-PLA2蛋白和mRNA表达水平较单肺通气组下降(P<0.05),而CCSP蛋白和mRNA表达增加;单肺通气+不同浓度七氟醚组肺组织中花生四烯酸含量、肺损伤程度及C-PLA2蛋白和mRNA表达水平随浓度的增加而逐渐降低(P<0.05),而CCSP蛋白及mRNA表达无显著性差异。结论七氟醚保护单肺通气所致肺损伤的作用机制可能与下调C-PLA2途径,减少肺组织中AA生成有关。 展开更多

关键词 花生四烯酸 七氟醚 胞质型磷脂酶a2 CLARA细胞分泌蛋白

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单肺通气诱发兔肺损伤时花生四烯酸代谢通路变化及丹参多酚酸盐的干预研究 被引量：1

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作者 陈华 张柏盛 龙小平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第1期21-25,共5页

目的探讨丹参多酚酸盐对单肺通气(OLV)致兔肺损伤后的保护作用及机制。方法24只白兔随机分为3组:对照、模型和治疗组,每组8只。测定肺湿/干值(W/D值),通过HE染色及电镜观察肺组织变化;采用ELISA法检测兔肺组织中花生四烯酸(AA)、白三烯B... 目的探讨丹参多酚酸盐对单肺通气(OLV)致兔肺损伤后的保护作用及机制。方法24只白兔随机分为3组:对照、模型和治疗组,每组8只。测定肺湿/干值(W/D值),通过HE染色及电镜观察肺组织变化;采用ELISA法检测兔肺组织中花生四烯酸(AA)、白三烯B4(LTB4)、血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)含量;采用RT-qPCR法检测肺组织环氧化酶-2(COX-2)和5-脂氧化酶(5-LOX)mRNA表达水平;采用Western blot法检测肺组织中COX-2、5-LOX、Clara细胞分泌蛋白(CCSP)和胞质型磷脂酶A2(C-PLA2)蛋白表达。结果模型组肺W/D比值较对照组升高,而治疗后下降(P<0.05);HE染色显示,模型组毛细血管扩张充血,肺泡腔内有红色渗出物,肺泡壁增厚,炎性细胞浸润,而丹参多酚酸盐治疗后有所减轻;透射电镜下观察模型组线粒体肿胀,嵴断裂甚至消失,治疗组AT-I超微结构损伤较模型组明显改善;模型组和治疗组肺组织AA、LTB4、TXA2和PGI2含量均高于对照组,经治疗后AA、LTB4、TXA2和PGI2含量下降(P<0.05);RT-qPCR结果显示,模型组COX-2、5-LOX mRNA表达均高于对照组(P<0.05),而治疗后表达下降(P<0.05);Western blot结果显示,治疗组COX-2、5-LOX和C-PLA2蛋白表达均低于模型组,而CCSP蛋白表达上升(P<0.05)。结论丹参多酚酸盐具有保护OLV所致肺损伤的作用,其机制可能与下调COX-2、5-LOX和C-PLA2表达,上调CCSP表达有关。 展开更多

关键词 丹参多酚酸盐 单肺通气 环氧化酶-2 5-脂氧化酶 CLARA细胞分泌蛋白 胞质型磷脂酶a2

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