亲环蛋白A在肺部感染性疾病中的研究进展

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作者 陈娟 邓旺 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1980-1984,共5页

亲环蛋白A(CyPA)是一种具有肽基脯氨酸顺式/反式异构酶(PPIase)活性的免疫亲和蛋白,广泛表达于肺等多种组织和器官中。在炎症反应或外部细胞因子刺激下,CyPA分泌到细胞外,通过与CD147等受体结合,激活ERK/NF-κB等信号通路,促进炎症细胞... 亲环蛋白A(CyPA)是一种具有肽基脯氨酸顺式/反式异构酶(PPIase)活性的免疫亲和蛋白,广泛表达于肺等多种组织和器官中。在炎症反应或外部细胞因子刺激下,CyPA分泌到细胞外,通过与CD147等受体结合,激活ERK/NF-κB等信号通路,促进炎症细胞趋化及炎症因子释放,参与多种炎症性疾病的病理生理过程。CyPA表达水平与慢性气道炎症、急性呼吸窘迫综合征、新型冠状病毒肺炎等肺部疾病的炎症程度呈正相关,且靶向CyPA治疗能够减轻疾病的炎症水平及改善预后,本文介绍CyPA在常见肺部感染性疾病中的研究进展,为了解其在肺部感染性疾病中的作用机制提供参考。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 慢性气道炎症 急性呼吸窘迫综合症 病毒性肺炎

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家蚕亲环蛋白A基因(BmCyPA)的克隆与表达分析 被引量：1

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作者 王丹 唐田娟 +9 位作者 刘悦 吕正兵 陈健 盛清 刘立丽 张文平 聂作明 全滟平 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期792-800,共9页

亲环蛋白(CyP)能与免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)结合而作为CsA的胞内受体。在已构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了家蚕亲环蛋白A(BmCyPA)基因的cDNA序列。利用生物信息学方法对此序列的开放阅读框(ORF)和序列同源性等进行分析,并以家蚕蛹总RNA... 亲环蛋白(CyP)能与免疫抑制剂环孢霉素A(CsA)结合而作为CsA的胞内受体。在已构建的家蚕蛹cDNA文库中获得了家蚕亲环蛋白A(BmCyPA)基因的cDNA序列。利用生物信息学方法对此序列的开放阅读框(ORF)和序列同源性等进行分析,并以家蚕蛹总RNA反转录的cDNA为材料克隆了BmCyPA,通过原核表达目的蛋白后,将纯化的BmCyPA融合蛋白免疫新西兰兔得到抗血清,Western blotting检测目的蛋白在蚕体中得到表达。利用荧光定量PCR方法检测家蚕5龄幼虫各组织中BmCyPA mRNA的转录水平,由高到低依次为脂肪体、丝腺、中肠、马氏管、表皮、头部、气门、卵巢;Western blotting检测BmCyPA在5龄幼虫各组织中的表达水平,由高到低依次为脂肪体、气门、表皮、马氏管、中肠、丝腺、头部和卵巢。亚细胞定位显示Bm-CyPA在细胞质与细胞核中均有分布。推测BmCyPA与家蚕的生长发育以及促进蛋白质折叠和介导免疫应答等有密切联系。 展开更多

关键词 家蚕 亲环蛋白A 基因克隆 组织表达 亚细胞定位

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嗜水气单胞菌诱导的池蝶蚌血细胞cDNA文库的构建和亲环蛋白基因序列的初步分析 被引量：5

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作者 谢凯 徐灵 +3 位作者 盛军庆 曾柳根 王军花 洪一江 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期783-789,共7页

实验利用灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)诱导处于四龄池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)14h,将诱导后的池蝶蚌血细胞的总RNA进行逆转录,用LD-PCR法合成双链cDNA,从而首次成功构建池蝶蚌血细胞的全长cDNA文库。原始文库的滴度为4&... 实验利用灭活的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)诱导处于四龄池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)14h,将诱导后的池蝶蚌血细胞的总RNA进行逆转录,用LD-PCR法合成双链cDNA,从而首次成功构建池蝶蚌血细胞的全长cDNA文库。原始文库的滴度为4×106 cfu/cm3,重组率为90%,扩增后文库的滴度为3.55×109 pfu/mL。目前文库已随机测序672个样品,将所得双向序列进行拼接,去除载体,并多序列比对去除重复序列后,发现436条为已知功能序列,其余为未知功能序列。序列中最小长度270 bp,最大长度为2153 bp,平均大小608.6 bp,表明插入片段大小理想。从文库中筛选获得免疫相关基因池蝶蚌亲环蛋白A(HsCyp A)全长基因并进行序列分析。结果显示,HsCyp A全长1229 bp,序列包括52 bp的5′非编码区、495 bp的开放阅读框、682 bp的3′非编码区和29 bp的poly(A)尾,没有明显的加尾信号。对Cyp A氨基酸序列二级结构进行了较详细的分析并进行了三维建模,同时构建了其系统进化树,分析表明亲环蛋白家族是一个在进化上非常保守的蛋白家族。综合分析,Cyp A在水生动物中不仅仅只是一种组成型蛋白,而是可能在病原感染防御中发挥重要作用。 展开更多

关键词 池蝶蚌 血细胞 CDNA文库 嗜水气单胞菌 亲环蛋白

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亲环蛋白A对动物病毒感染的调控及其分子机制

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作者 吴甜甜 王笑梅 祁小乐 《畜牧兽医科技信息》 2019年第7期4-6,共3页

传统的抗病毒策略多以病毒自身为靶点,随着天然免疫研究的不断深入,宿主的一系列抗病毒靶点相继被鉴定。亲环蛋白A(Cyclophilin A, CypA)是亲环蛋白(Cyclophilins, Cyps)家族中含量最丰富、被研究最多的一个成员。CypA不仅具有多种生理... 传统的抗病毒策略多以病毒自身为靶点,随着天然免疫研究的不断深入,宿主的一系列抗病毒靶点相继被鉴定。亲环蛋白A(Cyclophilin A, CypA)是亲环蛋白(Cyclophilins, Cyps)家族中含量最丰富、被研究最多的一个成员。CypA不仅具有多种生理功能,也广泛参与到多种病毒的感染过程中,其作为抗病毒制剂的靶点近来也不断被关注。本文综述了CypA对不同动物病毒感染的调控作用及其分子机制,对于新型抗病毒策略的探索具有重要意义。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 动物病毒 抗病毒

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细胞亲环蛋白A对猪瘟病毒增殖的影响 被引量：2

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作者 戴雅娟 李江南 +3 位作者 郭焕成 冯烨 任立群 涂长春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期432-435,共4页

细胞亲环蛋白A(CyPA)在多种病毒感染中起重要的调控作用。本实验室前期蛋白质组学研究表明,猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15后细胞的CyPA明显上调表达。为研究CyPA在CSFV增殖中的作用,本研究首先采用环孢素A(CsA)处理PK-15细胞,特异性地抑制CyP... 细胞亲环蛋白A(CyPA)在多种病毒感染中起重要的调控作用。本实验室前期蛋白质组学研究表明,猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15后细胞的CyPA明显上调表达。为研究CyPA在CSFV增殖中的作用,本研究首先采用环孢素A(CsA)处理PK-15细胞,特异性地抑制CyPA顺反异构酶活性,观察对CSFV的影响,在CsA处理后24 h、48 h、72 h收集细胞和细胞冻融上清,进行病毒基因组拷贝数和病毒滴度测定。结果表明CsA处理能够抑制CSFV在PK-15细胞中的增殖。同时,采用RNA干扰方法,下调PK-15细胞中CyPA的表达,结果也能够抑制CSFV在细胞中的增殖。本研究结果证明CyPA对CSFV在PK-15细胞中的增殖具有调控作用,对进一步阐明CSFV与宿主细胞蛋白的相互作用具有重要意义。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 亲环蛋白A 环孢素A RNA干扰 复制

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小球藻亲环蛋白A(CyPA)基因克隆及表达特性分析 被引量：2

6

作者 王旭辉 乔坤 +2 位作者 汪振娟 管清杰 柳参奎 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期245-251,共7页

亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对N... 亲环蛋白广泛存在于生物体中,并发挥着重要的作用。本研究从小球藻cDNA文库中筛选获得亲环蛋白A(CyPA Gene);通过提取转化35S::CyPA::GFP融合质粒拟南芥的原生质体研究表明,CyPA定位于叶绿体中;过表达CyPA基因的酵母能够增强InV酵母对NaCl、NaHCO3胁迫的生长能力;通过实时定量PCR研究表明,在非生物胁迫的条件下,CyPA基因的表达量升高,推测CyPA基因与非生物胁迫抗性相关,亲环蛋白A参与生物体的抗逆生存能力。 展开更多

关键词 小球藻 亲环蛋白 实时定量PCR 基因表达特性

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重组亲环蛋白A的可溶性表达 被引量：1

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作者 闫啸 徐立仁 +1 位作者 关怡新 姚善泾 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期363-369,共7页

为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源... 为获得高表达量的可溶亲环蛋白A(cyclophilin A,CypA),对重组CypA质粒表达和工程菌的培养过程进行研究.首先将pRSET-CypA质粒转入EscherichiacoliBL21菌株,获得表达CypA的重组工程菌;然后以2×YT为基本培养基,对培养基组成包括碳源、氮源和氨苄青霉素浓度进行优化,并考察接种量和诱导条件(诱导剂浓度、诱导时机、诱导后培养时间)等对目标蛋白表达量的影响.结果表明:通过控制培养温度和转速可大大减少CypA包涵体的量;以甘露醇为碳源能显著提高目标蛋白的表达量;优化的培养基组成为蛋白胨16 g?L-1,酵母提取物10 g?L-1,NaCl 5 g?L-1,甘露醇10 g?L-1,Amp50 mg?L-1;在对数生长期中期OD600为1.3时加入1 mmol?L-1IPTG诱导,然后在30℃、180 r?min-1条件下继续培养9 h收获菌体;优化后目标蛋白CypA产量为66.7 mg?L-1发酵液,与优化前相比提高了76.6%. 展开更多

关键词 亲环蛋白A 可溶表达 培养优化

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家蚕亲环蛋白基因家族(BmCyPs)

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作者 刘文明 周泽扬 《蚕学通讯》 2008年第1期1-8,共8页

家蚕亲环蛋白基因家族(CyPs)在全基因组水平由18条相似序列组成,与人CyPA在氨基酸序列上具有较高的同源性。结构域分析显示家蚕CyP基因家族可分为单一结构域(SD)和多结构域(MD)两类,无根进化树将18个家族基因分为两枝。本论文根据功能... 家蚕亲环蛋白基因家族(CyPs)在全基因组水平由18条相似序列组成,与人CyPA在氨基酸序列上具有较高的同源性。结构域分析显示家蚕CyP基因家族可分为单一结构域(SD)和多结构域(MD)两类,无根进化树将18个家族基因分为两枝。本论文根据功能元件相似性预测了家蚕CyP单一结构域(SD)和多结构域(MD)基因的功能,并通过序列氨基酸位点的置换、缺失和插入分析推测位于胞质Cyclophilin基因的功能差异,这些功能差异使蛋白质在三维结构上发生或小或大的变化导致与底物结合的特异性。 展开更多

关键词 家蚕 亲环蛋白 基因家族 序列分析

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亲环蛋白A与口腔恶性肿瘤间的关系 被引量：1

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作者 马兰 沈士倩 +2 位作者 王珍 张维伟 曹正国 《国际口腔医学杂志》 CAS 2009年第3期329-331,共3页

亲环蛋白A是一类在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质,有多种生物学功能并参与多种生理病理过程。下面就其在肿瘤尤其是在口腔鳞状细胞癌的发生、侵袭、增殖、血管生长等过程中的作用作一综述。

关键词 亲环蛋白A 肿瘤发生 口腔鳞状细胞癌

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小鼠抗人亲环蛋白A(CypA)单克隆抗体的制备和应用 被引量：1

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作者 乔璐 洪欣 +3 位作者 李时孟 何成彦 高申 王海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期746-751,共6页

目的原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用。方法根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组... 目的原核表达人亲环蛋白A (CypA)、制备抗人亲环蛋白A (CypA)单克隆抗体(mAb)并初步探索其在结肠癌发生发展中的作用。方法根据CypA基因序列,以原核表达系统表达CypA重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,免疫小鼠,杂交瘤法制备mAb;采用免疫组织化学染色法检测CypA在结直肠癌与癌旁组织中的差异表达,并分析与临床病理参数的相关性。结果成功构建了CypA原核表达载体,获得纯化的目的蛋白;获得1株稳定分泌抗人CypA mAb的杂交瘤细胞株;研究表明,结直肠癌组织CypA阳性染色率显著增高并与肿瘤分化程度及淋巴结转移相关。结论成功制备了小鼠抗人CypA mAb,并发现CypA在结直肠癌组织中高表达,与低分化和淋巴结转移呈正相关。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 结直肠癌 单克隆抗体(mAb)

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重组人亲环蛋白CypB的制备及活性鉴定

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作者 章琪 吴佳伟 周爱武 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1723-1725,共3页

目的·构建人源亲环蛋白B(hCypB)的表达载体,通过原核表达体系制备有活性的hCypB。方法·通过双酶切法将编码hCypB基因构建到p GEX-6p-1表达载体中,采用亲和层析法一步纯化hCypB,最后通过GST-pulldown验证过表达的hCypB的活性... 目的·构建人源亲环蛋白B(hCypB)的表达载体,通过原核表达体系制备有活性的hCypB。方法·通过双酶切法将编码hCypB基因构建到p GEX-6p-1表达载体中,采用亲和层析法一步纯化hCypB,最后通过GST-pulldown验证过表达的hCypB的活性。结果·经DNA测序验证,成功构建了hCypB的表达质粒。通过GST柱纯化可以从1 L过夜诱导的大肠埃希菌菌液中获得26 mg,纯度达到90%的GST-hCypB融合蛋白,且GST-pulldown试验证明该重组蛋白可以与脯氨酸-3-羟化酶1(P3H1)及软骨相关蛋白(CRTAP)形成三元复合物。结论·利用该实验方法可以在短期内获得大量高纯度、有活性的人源亲环蛋白CypB。 展开更多

关键词 亲环蛋白B P3H1/CRTAP/CypB 复合物 蛋白重组 原核表达体系

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小球藻亲环蛋白A的酶活性及过表达拟南芥抗盐性分析 被引量：1

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作者 廖栩 何明良 +4 位作者 张素艳 马海燕 王旭辉 罗秋香 管清杰 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期722-729,共8页

在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsC... 在前期研究中分离到噬碳酸盐小球藻(Chlorella sp.X1)的亲环蛋白基因CsCyp1A(登录号:KY207381),编码CsCyp1A蛋白是否具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性功能是进一步研究它参与小球藻耐盐生物学过程的基础。通过His标签的p QE-30-CsCyp1A原核蛋白表达载体,经IPTG诱导它的E.coli M15菌株表达融合蛋白,Nitra-柱纯化后获得纯化的30 kDa左右的His-CsCyp1A融合蛋白质,Western杂交检测到His CsCyp1A蛋白的杂交信号。酶活性分析显示,HisCsCyp1A融合蛋白中生色基团的产生速度明显快于对照,表明CsCyp1A蛋白可以催化底物N-succinyl-Xaa-Pro-Phe-p-nitroanilide中Xaa-Pro肽键的顺反折叠,说明纯化的CsCyp1A蛋白具有PPIase活性。典型的亲环蛋白家族成员具有肽酰脯氨酰顺反异构酶(PPIase)活性,参与折叠和转运、信号转导、免疫调节、细胞凋亡等生物学过程。真空渗入法侵染转化的拟南芥在35S启动子驱动下超表达CsCyp1A基因,耐盐性研究表明它提高了过表达株系对NaCl胁迫的耐性,揭示小球藻CsCyp1A基因的抗盐性功能,它将成为抗逆育种的基因资源。本研究也为探索小球藻亲环蛋白A的抗盐碱胁迫生物学作用和分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 噬碳酸盐小球藻 盐碱地 亲环蛋白A 肽脯氨酰顺反异构酶 原核表达蛋白

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亲环蛋白A在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及对细胞增殖和侵袭的影响

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作者 夏晓杨 方飞 +3 位作者 刘燕 车超 柯锦娟 姜胜军 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期164-169,共6页

目的探讨亲环蛋白A(CyPA)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,以及下调SCC-25细胞中CyPA基因对细胞增殖和侵袭的影响。方法选取OSCC患者77例,检测OSCC及癌旁组织中CyPA蛋白表达,培养SCC-25细胞并分为CyPA干扰序列组、阴性对照组和空白... 目的探讨亲环蛋白A(CyPA)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达,以及下调SCC-25细胞中CyPA基因对细胞增殖和侵袭的影响。方法选取OSCC患者77例,检测OSCC及癌旁组织中CyPA蛋白表达,培养SCC-25细胞并分为CyPA干扰序列组、阴性对照组和空白组,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应技术和Western blot技术检测细胞中CyPA mRNA和蛋白表达,细胞增殖能力检测采用甲基噻唑基四唑(MTT)法和平板集落形成实验,细胞侵袭能力检测采用Transwell法。结果OSCC组织中CyPA蛋白阳性表达率为76.62%,高于癌旁组织(P<0.05);CyPA蛋白在TNM分期T_(3)+T_(4)期、临床分期Ⅲ+Ⅳ期、中低分化和发生淋巴结转移组织中阳性表达率升高(P<0.05);与阴性对照组和空白组比较,CyPA干扰序列组细胞中CyPA mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),24、48、72和96 h细胞光密度值降低(P<0.05),细胞集落数和侵袭细胞数均降低(P<0.05)。结论CyPA蛋白在OSCC组织中呈高表达,下调SCC-25细胞中CyPA基因表达可抑制细胞增殖和侵袭能力。 展开更多

关键词 口腔鳞状细胞癌 亲环蛋白A 细胞增殖 侵袭力

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液相色谱-串联质谱法测定SD大鼠全血中新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001浓度

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作者 赵磊 孙丽华 +1 位作者 俞巧玲 邱云良 《分析科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期377-382,共6页

建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,... 建立了液相色谱-串联质谱法测定新型亲环蛋白D抑制剂RN-0001在SD大鼠全血中的浓度。样品前处理采用简单的蛋白沉淀法,色谱分离在Gemini C18110,色谱柱(50 mm×2 mm,5μm)上进行,以含10 mmol/L乙酸铵和0.1%甲酸的水溶液作为流动相A,含0.1%甲酸的甲醇溶液作为流动相B,在0.8 mL/min流速下梯度洗脱。待测物RN-0001和内标环孢菌素A的检测采用正离子电喷雾多反应监测模式,其检测离子对分别为m/z 645.4/156.2和m/z 601.8/156.1。RN-0001在30.0 ng/mL~30.0μg/mL浓度范围内线性关系良好(r 2>0.9961),定量下限为30.0 ng/mL,批内和批间的精密度小于5.2%,批内和批间准确度在-3.6%~6.7%之间。RN-0001基质样品在室温放置18 h,-80℃冰箱放置40天以及经过5次冻融循环后均稳定。SD大鼠尾静脉注射3 mg/kg的RN-0001注射液进行药代动力学研究,RN-0001的半衰期t 1/2为3.53 h,峰浓度C 0为9370 ng/mL,血药浓度-时间曲线下面积AUC 0-24 h为5300 h·ng/mL。结果表明,所建方法适用于RN-0001在SD大鼠体内的药代动力学研究。 展开更多

关键词 亲环蛋白D抑制剂 急性肾损伤 液相色谱-串联质谱 方法学验证

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吉富罗非鱼CypA蛋白的表达与纯化

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作者 吴秋 崔智昊 +2 位作者 孔秀东 韦信贤 韦友传 《当代水产》 2025年第7期63-66,共4页

1引言罗非鱼(Oreochromis)是丽鱼科(Cichlidae)下的一个重要属,现已被广泛引种至全球热带和亚热带140多个国家和地区进行养殖,总养殖量在水产养殖业中是仅次于鲤科的第二大淡水鱼类。中国于1958年开始引进罗非鱼,目前中国罗非鱼主要养... 1引言罗非鱼(Oreochromis)是丽鱼科(Cichlidae)下的一个重要属,现已被广泛引种至全球热带和亚热带140多个国家和地区进行养殖,总养殖量在水产养殖业中是仅次于鲤科的第二大淡水鱼类。中国于1958年开始引进罗非鱼,目前中国罗非鱼主要养殖品种为吉富罗非鱼,2023年总养殖量达到181.68万t。亲环蛋白A(CypA)能够催化脯氨酰亚胺肽键的顺-反异构化,以此促进细胞蛋白的折叠和转运,并对蛋白质活性进行调节,维持细胞正常功能。 展开更多

关键词 折叠 细胞蛋白 CypA蛋白 亲环蛋白A 纯化

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人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的差异蛋白质组学研究 被引量：2

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作者 锁爱莉 姚煜 张王刚 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期545-549,共5页

目的应用蛋白质组学技术探讨人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的蛋白质差异表达谱,筛选肝细胞癌的特异性标志物。方法应用双向电泳(2-DE)方法对细胞总蛋白进行分离和分析,用质谱(MS)鉴定差异表达蛋白,并用免疫组化方法验证部分差异表... 目的应用蛋白质组学技术探讨人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的蛋白质差异表达谱,筛选肝细胞癌的特异性标志物。方法应用双向电泳(2-DE)方法对细胞总蛋白进行分离和分析,用质谱(MS)鉴定差异表达蛋白,并用免疫组化方法验证部分差异表达蛋白。结果与7702细胞相比,在HepG2细胞中鉴定出17种差异表达蛋白,10种上调,7种下调,主要涉及物质代谢酶和抗凋亡、调节应激和细胞间信号传导的蛋白质;免疫组化结果验证了膜联蛋白A1(annexin A1)和亲环蛋白A(cyclophilin A)在肝细胞癌病理组织中均明显上调,且主要定位于胞质内。结论人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞7702的蛋白质表达差异显著,其中膜联蛋白A1和亲环蛋白A可作为肝细胞癌诊断及治疗的分子标志物。 展开更多

关键词 肝细胞性肝癌 双向电泳 蛋白质组学 免疫组化 膜联蛋白Al 亲环蛋白A

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三角帆蚌CypA基因的克隆及其在嗜水气单胞菌感染后的表达分析

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作者 夏虎 雷婷 +7 位作者 杨品红 刘良国 余嘉 张运生 邓以国 陈福艳 陈秀荔 贺欢乐 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期859-866,共8页

为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(U... 为研究亲环蛋白A(Cyclophilin A,CypA)在三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)免疫系统中的作用,研究利用PCR与RACE技术克隆获得三角帆蚌CypA基因全长cDNA序列(基因序列登录号:MN121742)。三角帆蚌CypA基因cDNA序列全长1237 bp,其5′非编码区(UTR)长度为57 bp,3′非编码区长度为688 bp,三角帆蚌CypA基因的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)长度为492 bp,编码164个氨基酸,CypA蛋白质理论等电点为8.9,相对分子量为17.29 kD。在GenBank中进行同源序列检索,三角帆蚌CypA氨基酸序列与其他贝类CypA的相似性依次为池蝶蚌(Hyriopsis schlegelii)(99.39%)、青蛤(Cyclina sinensis)(77.44%)、菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)(78.05%)、近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)(78.66%)和大竹蛏(Solen grandis)(75.05%)。通过SWISS-MODEL预测三角帆蚌CypA含有8个β折叠和2个α螺旋,可能形成CypA的活性中心区域。利用MEGA 5.1软件将三角帆蚌CypA与其他物种CypA基因进行序列比对并构建系统进化树,分析发现三角帆蚌CypA与池蝶蚌的CypA聚为一支,其与池蝶蚌CypA具有最近的亲源关系。通过qRT-PCR检测CypA基因在三角帆蚌不同组织中表达,发现三角帆蚌性腺中CypA基因的表达量最高,肝脏、肾和鳃中的表达量次之。对三角帆蚌浸泡感染嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),CypA基因在肝脏、性腺、肠和鳃中的表达水平在感染72h先升高后降低,其表达量在性腺和鳃中6h最高,肝脏中12h达到峰值,肠中24h达到最高值,表明三角帆蚌感染嗜水气单胞菌后,可显著诱导CypA基因的表达。CypA基因在性腺中的表达量到达峰值的时间要早于肠与肝脏,且到达峰值时的相对表达量(14.91)也显著高于肝脏(9.89)、肠(9.78)和鳃(7.53),推测CypA在三角帆蚌性腺中具有防御细菌感染的重要作用,三角帆蚌性腺可能不仅具有生殖的功能,同时在免疫防御系统中也发挥着重要的作用。 展开更多

关键词 亲环蛋白A 嗜水气单胞菌 免疫应答 三角帆蚌

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长柄链格孢AlCyP1基因的克隆及其在渗透胁迫适应中的作用 被引量：2

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作者 罗义勇 祝明亮 +3 位作者 路则宝 毕薇 张克勤 杨金奎 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期133-141,共9页

为了阐明烟草赤星病（tobaccobrown-spotdisease）病原真菌长柄链格孢（Alternarialongipes）对二甲酰亚胺类杀菌剂抗性的分子机制，以不同抗性水平的长柄链格孢菌株为实验材料，通过基因钓鱼（GeneFishing）技术进行基因差异表达分析... 为了阐明烟草赤星病（tobaccobrown-spotdisease）病原真菌长柄链格孢（Alternarialongipes）对二甲酰亚胺类杀菌剂抗性的分子机制，以不同抗性水平的长柄链格孢菌株为实验材料，通过基因钓鱼（GeneFishing）技术进行基因差异表达分析；并利用基因敲除技术对已克隆到的AlCyP1基因进行功能分析．结果表明：一个亲环蛋白基因AlCyP1的表达量在不同抗性水平的长柄链格孢中存在明显差异；应用DNA步移（DNAwalking）方法克隆得到AlCyP1基因的DNA序列，其开放阅读框中存在2个翻译起始密码子，可以编码产生2种不同长度的多肽，长、短多肽产物分别具有222和188个氨基酸，其中短多肽起始于长多肽的第35个密码子；另外，氨基酸序列同源性分析发现，AlCyP1和其他真菌的亲环蛋白具有很高的同源性，达50．0％～61.3％；利用基因敲除技术对AlCyP1基因进行功能分析发现，该基因通过表达水平的改变参与了长柄链格孢对渗透胁迫的适应调节过程． 展开更多

关键词 长柄链格孢 基因差异表达 亲环蛋白AlCyP1 渗透胁迫 二甲酰亚胺类杀菌剂

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SARS-CoV-2靶向CypA/CD147受体途径诱导心肌细胞凋亡

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作者 马明仁 马凌 +1 位作者 刘燕 王菲 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期734-740,共7页

目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(... 目的探究SARS-CoV-2靶向亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147)受体途径诱导心肌细胞凋亡的可能机制。方法构建pEncmv-SARS-CoV-2 S-3xflag重组载体质粒转染H9c2细胞,TUNEL实验、流式细胞术和DNA ladder分析细胞凋亡,免疫共沉淀(CoIP)验证CD147与SARS-CoV-2 S蛋白之间相互作用,Western blotting法检测细胞凋亡信号通路相关蛋白表达。结果与对照组比较,TUNEL实验和流式细胞术结果显示转染组细胞凋亡显著增加(P<0.05),DNA ladder分析发现DNA降解明显。Western blotting法检测显示Caspase12、DR3表达显著升高(P<0.001),FAS表达升高(P<0.01),TRF1、DR4表达降低(P<0.01)。结论SARS-CoV-2 S蛋白靶向CypA/CD147受体入侵宿主细胞,激活内质网通路(Caspase12)和死亡受体通路(DR3、FAS),以内源性和外源性凋亡途径诱导心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 新型冠状病毒肺炎(COVID-19) 亲环素A(CypA)/细胞外金属蛋白酶诱导剂(CD147) 心肌细胞 信号通路 凋亡

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低温胁迫下花生差异表达基因的分离与分析 被引量：12

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作者 于树涛 于洪波 +7 位作者 苏君伟 赵立仁 史普想 赵艳 唐月异 王秀贞 吴琪 王传堂 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期569-576,共8页

筛选74个花生种质材料,最后以发芽率在80%以上的9650作为试验材料。对9650分别进行2℃和25℃(对照)处理,分别提取2、6和8h花生样品的总RNA。利用GeneFishing随机引物,克隆测序,获得34个独特的基因序列。经BLAST2GO注释,包括参与细胞合... 筛选74个花生种质材料,最后以发芽率在80%以上的9650作为试验材料。对9650分别进行2℃和25℃(对照)处理,分别提取2、6和8h花生样品的总RNA。利用GeneFishing随机引物,克隆测序,获得34个独特的基因序列。经BLAST2GO注释,包括参与细胞合成的组分、应激蛋白反应、代谢过程中的转运与运输、蛋白质的合成、以及耐低温相关的基因序列。进一步利用定量RT-PCR证实了4个基因的相对表达量,选择其中亲环蛋白基因相关序列,通过5'-RACE获得cDNA全长,为通过转基因技术对其进行功能分析奠定了基础。 展开更多

关键词 花生 低温 GeneFishing 差异表达 亲环蛋白

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