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芒果核苷二磷酸激酶(NDPK)基因克隆及表达分析 被引量:7
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作者 罗睿雄 赵志常 +2 位作者 黄建峰 党志国 高爱平 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第11期2183-2190,共8页
采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨... 采用3′RACE和RT-PCR技术克隆芒果核苷二磷酸激酶基因全长c DNA序列,并用实时荧光定量PCR分析该基因的表达模式。结果表明:Mi NDPK1基因c DNA全长1 019 bp,开放阅读框为447 bp,编码148个氨基酸。Mi NDPK1蛋白定位于细胞质,无信号肽和跨膜区域,具有典型的核苷二磷酸激酶活性结构域和其他磷酸化活性位点;与麻疯树、橡胶树同源性最高为89%,与菠菜同源性最低为82%。Mi NDPK1在芒果各组织中均有表达,以叶片中表达最高,其次是花和果皮;在芒果进入生殖时期的花芽分化期表达量最高,此后在芒果果实发育进程中逐渐降低并趋于平稳。结合病害处理转录组样本中的差异性表达结果,推测芒果Mi NDPK1基因在花芽分化进程、抗病性诱导及免疫应答通路上发挥重要作用。 展开更多
关键词 芒果 核苷二磷酸激酶 基因克隆 生物信息学分析 表达分析
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核苷二磷酸激酶A亚基的纯化、鉴定及其对顺铂抗癌作用的增强 被引量:5
2
作者 王一飞 邢少璟 +4 位作者 张美英 钱垂文 林锋 罗勇 李久香 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期40-43,共4页
目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ... 目的 了解核苷二磷酸激酶A亚基 (NDPK A)能否提高顺铂的抗癌效果。方法 利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western印迹杂交来监测和鉴定目标蛋白NDPK A ,利用离子交换、亲和层析结合高效液相色谱纯化分离目标蛋白 ;MTT比色法测定药物对细胞生长抑制率的影响。结果 获得NDPK A单体蛋白 ,酶比活为 8mmol·min- 1·g- 1蛋白质 ;细胞生长抑制率显示 ,NDPK A单独处理细胞时未见明显的细胞毒性 ,但与顺铂联合处理却能大大加强后者对鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 2的细胞毒性。结论 NDPK A与顺铂联用能增强顺铂对体外培养的鼠肺腺癌细胞LA795和人喉癌细胞Hep 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 顺铂 LA795 HEP-2 化学治疗
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甘蔗核苷二磷酸激酶(NDPK1)基因克隆及表达分析 被引量:7
3
作者 梁潘霞 李杨瑞 杨丽涛 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第12期2199-2205,共7页
采用RT-PCR技术克隆了甘蔗核苷二磷酸激酶基因全长cDNA,并用荧光定量PCR分析该基因的表达情况。结果表明:克隆得到的cDNA片段长度为686 bp,包括1个450 bp的开放阅读框,编码149个氨基酸,GenBank登录号为JQ712580。甘蔗与高粱NDPK基因cDN... 采用RT-PCR技术克隆了甘蔗核苷二磷酸激酶基因全长cDNA,并用荧光定量PCR分析该基因的表达情况。结果表明:克隆得到的cDNA片段长度为686 bp,包括1个450 bp的开放阅读框,编码149个氨基酸,GenBank登录号为JQ712580。甘蔗与高粱NDPK基因cDNA序列的同源性为96%,氨基酸序列同源性为98%;该基因推导的蛋白分子量大小为16.83 ku,等电点为6.58,疏水性分值在-2.089~2.033;蛋白二级结构中α-螺旋占44.3%,随机卷曲占24.83%,延伸链占20.13%,β-转角只占10.74%。实时荧光定量分析结果表明,随着甘蔗干旱胁迫时间的延长,NDPK1基因表达均呈先升高后降低的趋势,30 h达最大;在处理后的18、30、40 h,PEG与PEG+Si处理的NDPK1基因的表达量有显著差异。 展开更多
关键词 甘蔗 核苷二磷酸激酶 克隆 生物信息学分析 表达
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核苷二磷酸激酶A的异构及其分子机制 被引量:3
4
作者 熊盛 钱垂文 +6 位作者 王一飞 黄立 李久香 严玖凤 王小宁 张晓伟 毕志刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期815-821,共7页
对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液... 对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和38.3kD.RPHPLC发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础. 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶A 异构 多角度激光散射 飞行质谱 二硫键 分子机制
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植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)研究进展 被引量:6
5
作者 王文斌 王金胜 +1 位作者 邓西平 刘建东 《农学学报》 2011年第4期1-5,共5页
为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细... 为了给植物核苷二磷酸激酶NDPKs的进一步研究提供参考,总结了植物核苷二磷酸激酶(NDPKs)的分类、亚细胞定位、功能及其在植物基因工程中的应用。重点分析了NDPKs功能方面研究的最新进展,NDPKs不仅能够作为一种"看家酶",维持细胞NDP和NTP代谢平衡,而且还是一组多功能蛋白,参与植物细胞的生长与分化、光敏色素A、紫外线-B、热击响应及氧化胁迫响应中的信号传导等多种生命活动过程,甚至具有核酸酶活性。最后指出植物NDPKs的研究方向,并展望了其在植物抗逆基因工程方面良好的应用前景。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 分类 亚细胞定位 功能 基因工程
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尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸激酶的克隆、表达及纯化 被引量:2
6
作者 杨小猛 王俊轶 +2 位作者 陈涛 刘志刚 杨平常 《江西师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2014年第5期485-488,共4页
根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β... 根据GenBank中NDP kinase的基因序列,采用生物信息学方法将其中稀有密码子改造为大肠埃希菌常用密码子并进行二级结构优化,合成NDP kinase基因,构建原核表达载体pET28a-NDP kinase并酶切鉴定其序列,在大肠埃希菌BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,重组产物采用镍离子金属螯合亲和层析柱纯化.经密码子改造和二级结构优化后NDP kinase基因长度为490 bp,其编码蛋白理论分子量为21.5 kDa,重组表达载体经酶切鉴定与理论推测结果相符,在大肠埃希菌BL21(DE3)中该基因经IPTG诱导可高效表达,纯化后的重组蛋白分子量约为21.5 kDa,其单一蛋白纯度达95%以上.本研究成功构建了尘螨肠道微生物蛋白核苷二磷酸酶(NDP kinase)基因的pET28a原核重组质粒,为进一步研究NDP kinase在尘螨疫苗免疫治疗中的作用机理提供了基础. 展开更多
关键词 尘螨 肠道微生物 蛋白核苷二磷酸激酶
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重组人抑癌相关蛋白核苷二磷酸激酶A的原核表达 被引量:2
7
作者 冉延超 王一飞 +4 位作者 熊盛 张美英 黄文韬 罗林波 刘秋英 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期954-959,共6页
目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标... 目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 肿瘤抑制蛋白质类
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核苷二磷酸激酶A亚基(rhNDPK-A)对体内S_(180)、H_(22)、Lewis及H460肿瘤生长的影响 被引量:1
8
作者 邢少璟 熊盛 +2 位作者 张美英 李久香 王一飞 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1740-1743,共4页
目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传... 目的:观察rhNDPK-A对动物移植性肿瘤生长的抑制作用,为临床应用提供科学依据。方法:昆明种健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后8d的S180或H22瘤细胞5×106个,随机分为8组;C57BL/6健康小鼠85只,每只动物右前肢腋皮下接种传代后10d的Lewis瘤细胞2×105个,分组方法同上。给动物接种瘤细胞后24h开始给药。S180和H22模型用尾静脉注射,每日1次,连用8d;Lewis模型用腹腔注射,每日1次,连用10d。Balb/c/neu裸鼠38只,腋窝皮下接种H460瘤组织块1·5mm×1·5mm×1·5mm,当移植瘤体积生长至100mm×100mm×100mm分5组开始腹腔注射给药,每日1次共17次。每周两次测瘤径,计算相对瘤体积,同时称体重。于末次给药后48h处理各组动物,剖瘤称重,计算瘤重抑制率,并进行统计学处理。结果:rhNDPK-A单用,中剂量与高剂量对S180肿瘤生长较明显,抑制率>40%。3个剂量对H22肿瘤生长均具有不同程度的抑制作用,但rhNDPK-A单用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A20mg/kg与DDP(0·5mg/kg)合用,对H22肿瘤生长抑制率明显提高。20mg/kgrhNDPK-A对人肺腺癌H460裸鼠移植性肿瘤生长抑制达35·9%。结论:rhNDPK-A对S180、H22、H460肿瘤的生长具有一定的抑制作用,对Lewis肿瘤生长无明显的抑制作用。rhNDPK-A高剂量与DDP合用,对H22肿瘤生长的抑制具有协同作用。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 顺铂 肉瘤180 肝肿瘤 肺肿瘤
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海洋聚磷菌中核苷二磷酸激酶基因的克隆及序列分析 被引量:1
9
作者 任世英 肖天 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期61-63,共3页
以海洋聚磷茵 Halomonas YSR-3的总 DNA 为模板,用 PCR 法扩增核苷二磷酸激酶基因,将扩增片段克隆到 pGM-T 载体,转化 Escherichia coli TOP10菌株,经蓝白斑筛选、菌落 PCR 得到阳性克隆,测序后对序列进行 Blast 比对分析。得到的基因... 以海洋聚磷茵 Halomonas YSR-3的总 DNA 为模板,用 PCR 法扩增核苷二磷酸激酶基因,将扩增片段克隆到 pGM-T 载体,转化 Escherichia coli TOP10菌株,经蓝白斑筛选、菌落 PCR 得到阳性克隆,测序后对序列进行 Blast 比对分析。得到的基因序列长度为420 bp,翻译后的序列与 Loktanella yestfoldensisSKA53,Jannaschia sp.CCS1,Roseobacter sp.CCS2的核苷二磷酸激酶蛋白序列相似性分别为89%,86%,85%。 展开更多
关键词 盐单胞菌属 聚磷菌 核苷二磷酸激酶(NDPK)
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多角度激光散射测定重组人核苷二磷酸激酶A在溶液中的聚集状态
10
作者 熊盛 钱垂文 +7 位作者 黄立 王一飞 张美英 李久香 严玖凤 王小宁 张晓伟 毕志刚 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1584-1584,共1页
关键词 多角度激光散射 测定 重组人核苷二磷酸激酶A 溶液 聚集状态
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核苷二磷酸激酶B稳定表达细胞系的建立及其对新城疫病毒F48E9株复制的影响
11
作者 郭育培 班付国 +2 位作者 闫若潜 方先珍 丁壮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期2283-2288,共6页
为研究核苷二磷酸激酶B(nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B)蛋白表达对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,... 为研究核苷二磷酸激酶B(nucleoside diphosphate kinase B,NDPK B)蛋白表达对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)F48E9株复制与增殖的影响,本试验将真核表达重组质粒pEGFP-NDPK B转染Vero细胞,经G418压力筛选出了阳性细胞单克隆,并通过RT-PCR、Western blotting和倒置荧光显微镜观察鉴定了NDPK B mRNA和蛋白质的表达,在细胞系基础上,通过HA-HI、TCID50及实时荧光定量PCR检测NDPK B蛋白对NDV F48E9株复制和增殖的影响。结果表明,试验成功地构建了高表达NDPK B蛋白的Vero/NDPK B细胞系,并在此基础上,通过检测证明了NDPK B能抑制NDV F48E9株在Vero细胞中的复制与增殖,提示以NDPK B为基础有可能设计开发抗NDV的新药物或抗病毒增效剂,对NDV进行预防或治疗。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶B 表达 新城疫病毒 复制与增殖
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过表达核苷二磷酸激酶对透明质酸的产量和相对分子质量的影响
12
作者 虞菊萍 刘玮 +2 位作者 叶萌 唐东洋 高向东 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期232-238,共7页
为了考察核苷二磷酸激酶(NDK)对透明质酸合成过程的影响,将核苷二磷酸激酶基因(ndk)和透明质酸合成酶基因在重组枯草芽孢杆菌细胞内共同进行过表达,成功构建了两株工程菌株Hp8tg及Pn8tg,均获得了均一相对分子质量透明质酸(HA)。通过响... 为了考察核苷二磷酸激酶(NDK)对透明质酸合成过程的影响,将核苷二磷酸激酶基因(ndk)和透明质酸合成酶基因在重组枯草芽孢杆菌细胞内共同进行过表达,成功构建了两株工程菌株Hp8tg及Pn8tg,均获得了均一相对分子质量透明质酸(HA)。通过响应面分析试验对诱导条件进行了优化,通过单糖组成分析、傅里叶红外光谱分析及核磁共振波谱分析对HA进行了鉴定。ndk过表达使HA产量提高了1.3倍,相对分子质量提高了1.1倍。研究结果表明,核苷二磷酸激酶的过表达可消除尿苷二磷酸(UDP)蓄积对Ⅱ型透明质酸合成酶的抑制作用,从而提高了HA的产量及相对分子质量。此策略可以有效提高HA的产量和相对分子质量,也为其他多糖的制备提供了新的思路。 展开更多
关键词 透明质酸 核苷二磷酸激酶 透明质酸合成酶 尿苷二磷酸 产量 均一相对分子质量 枯草芽孢杆菌
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植物核苷二磷酸激酶研究进展 被引量:9
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作者 朱馨妮 汪珊珊 +1 位作者 周佳琴 朱世华 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期19-28,共10页
核苷二磷酸激酶(Nucleoside diphosphate kinases,NDPKs)是一类高度保守的蛋白,大小一般在70-100 k D,在生物体内大多数以六聚体形式存在,仅在少数原核生物中以四聚体形式存在。NDPK主要参与维持核苷二磷酸和核苷三磷酸的平衡。目前在... 核苷二磷酸激酶(Nucleoside diphosphate kinases,NDPKs)是一类高度保守的蛋白,大小一般在70-100 k D,在生物体内大多数以六聚体形式存在,仅在少数原核生物中以四聚体形式存在。NDPK主要参与维持核苷二磷酸和核苷三磷酸的平衡。目前在植物中已发现4种NDPK:NDPKⅠ、NDPKⅡ、NDPKⅢ和NDPKⅣ,相关研究主要集中在前3种。NDPKⅠ与植物生长发育、非生物胁迫、感病应激和激素响应有关;NDPKⅡ参与光合作用和活性氧清除;NDPKⅢ参与能量代谢和细胞程序性死亡;NDPKⅣ仅在拟南芥和水稻基因组中发现,预测定位于内质网,功能未知。除了上述的主要作用外,NDPK在某些植物中还有特殊功能,如参与DNA复制、参与淀粉和纤维素的合成、参与生长素调节和发挥核酶活性等。这些作用机制是否存在物种特异性还有待进一步的研究。对NDPK的系统进化、生物功能的最新进展进行了综述。最后对NDPK的发展趋势进行了展望,有助于将来对NDPK进行更深入和全面的研究。 展开更多
关键词 核苷二磷酸激酶 NDPK 系统进化 功能
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鲍曼不动杆菌核苷二磷酸激酶的结构和功能研究(英文) 被引量:2
14
作者 胡颖嵩 冯峰 刘迎芳 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2015年第3期260-267,共8页
近年来,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)在医院里越来越受到人们的关注,尤其是在重症监护病房(ICUs).它以强大的多重耐药性(multiresistance)而闻名.核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是一种进化上非常保守的酶... 近年来,鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii)在医院里越来越受到人们的关注,尤其是在重症监护病房(ICUs).它以强大的多重耐药性(multiresistance)而闻名.核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是一种进化上非常保守的酶,它能催化核苷之间磷酸基团的转移.我们解析了鲍曼不动杆菌NDK野生型和C端氨基酸残基Arg141-Thr142-Arg143(RTR)截短突变体的结构.通过和黄色黏菌(Myxococcus xanthus)NDK的三维结构进行比较,推断鲍曼不动杆菌NDK的催化机制和黄色黏菌类似.通过激酶活性实验和圆二色谱实验,发现鲍曼不动杆菌NDK E28A突变体二级结构发生了改变,从而导致蛋白催化活性降低,说明Glu28是鲍曼不动杆菌NDK结构中非常关键的氨基酸残基.鲍曼不动杆菌NDK C端RTR截短突变体显示出催化活性极大的降低,这可能与C端RTR残基介导的二体间相互作用有关.虽然RTR截短突变体中的Lys33伸向了和野生型中不同的方向,和Val15产生相互作用弥补了一部分因为RTR截短丢失的相互作用,维持了RTR截短突变体和野生型类似的结构.但是,Lys33产生的相互作用依然太弱,不足以维持蛋白在催化的动态过程中整体结构的高效转换.我们解析的鲍曼不动杆菌NDK晶体高分辨率结构将有助于科学家设计针对鲍曼不动杆菌的药物. 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 核苷二磷酸激酶(NDK) 晶体结构
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家蚕核苷二磷酸激酶基因的克隆和原核表达 被引量:1
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作者 钱家伟 蒋彩英 +5 位作者 陈建 聂作明 吕正兵 王丹 吴祥甫 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期477-481,共5页
核苷二磷酸激酶(NDPK)基因在进化中高度保守,却又呈现复杂多样的生物学功能。该酶除了催化腺苷三磷酸(ATP)和核苷二磷酸(NDP)之间高能磷酸基团的转移外,还具有NDP激酶活性和蛋白磷酸转移酶活性,并参与转录调控和信号转导。从家蚕蛹cDNA... 核苷二磷酸激酶(NDPK)基因在进化中高度保守,却又呈现复杂多样的生物学功能。该酶除了催化腺苷三磷酸(ATP)和核苷二磷酸(NDP)之间高能磷酸基团的转移外,还具有NDP激酶活性和蛋白磷酸转移酶活性,并参与转录调控和信号转导。从家蚕蛹cDNA文库中获得家蚕核苷二磷酸激酶的cDNA序列,该cDNA序列长575bp,含465 bp的开放阅读框序列,编码154个氨基酸残基的核苷二磷酸激酶。将克隆的家蚕核苷二磷酸激酶基因插入pET-28 a构建重组质粒,转化大肠杆菌后诱导表达重组蛋白,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组家蚕核苷二磷酸激酶。 展开更多
关键词 家蚕 核苷二磷酸激酶 序列分析 基因克隆 原核表达
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拟南芥核苷二磷酸激酶基因家族的生物信息学比较与分析 被引量:2
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作者 孙小洁 王增兰 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第4期38-44,共7页
为研究拟南芥核苷二磷酸激酶家族(AtNDPKs)5个成员之间的差异,对其在蛋白质结构、磷酸化位点、信号肽序列、功能区方面的差异进行了生物信息学的比较分析,并建立了系统进化树。结果显示,5个成员在等电点、吸光值和亲水性方面的差异明显... 为研究拟南芥核苷二磷酸激酶家族(AtNDPKs)5个成员之间的差异,对其在蛋白质结构、磷酸化位点、信号肽序列、功能区方面的差异进行了生物信息学的比较分析,并建立了系统进化树。结果显示,5个成员在等电点、吸光值和亲水性方面的差异明显。二级结构中,AtNDPK2的α螺旋比例与其他成员差异显著;在β转角和无规则卷曲方面,AtNDPK1a与AtNDPK3a表现出相反的情况。5个成员各含有1个NDK结构域,但分布位置不同。AtNDPK3a中酪氨酸磷酸化明显增多,AtNDPK1a的磷酸化位点与其他成员差异显著。AtNDPK1和AtNDPK2的信号肽裂解点位于第16和17位氨基酸之间,AtNDPK3和AtNDPK3a的位于第42和43位之间,而AtNDPK1a的位于第24和25位之间。AtNDPK1a的进化地位高于其他成员,AtNDPK3与AtNDPK3a的亲缘关系最近,而AtNDPK1与其他成员的亲缘关系较远。 展开更多
关键词 拟南芥 生物信息学 核苷二磷酸激酶家族 序列分析 系统分析
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地黄核苷二磷酸激酶基因的克隆及生物信息学分析 被引量:2
17
作者 李冰怡 李谦谦 +3 位作者 宫世萌 李娇娇 郑雪 段红英 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期492-500,共9页
核苷二磷酸激酶(NDPK)是一种高度保守的多功能蛋白,具有催化底物磷酸化的作用,能够参与植物的生长发育、非生物胁迫、感病应激、光合作用和能量代谢等过程。为了解地黄核苷二磷酸激酶基因(RgNDPKⅠ)的结构、功能和性质,该研究利用地黄... 核苷二磷酸激酶(NDPK)是一种高度保守的多功能蛋白,具有催化底物磷酸化的作用,能够参与植物的生长发育、非生物胁迫、感病应激、光合作用和能量代谢等过程。为了解地黄核苷二磷酸激酶基因(RgNDPKⅠ)的结构、功能和性质,该研究利用地黄转录组学数据,通过电子克隆的方法获得了RgNDPKⅠ基因的全长cDNA序列,长度为765 bp。生物信息学分析结果表明,RgNDPKⅠ基因的开放阅读框长度为447 bp,编码148个氨基酸,具有典型的核苷二磷酸激酶活性结构域和其他磷酸化活性位点。RgNDPKⅠ基因编码的蛋白质定位于细胞质,是无跨膜区域的亲水性蛋白,该蛋白质与芝麻、紫花风铃的核苷二磷酸激酶相似性较高,分别为97%和96%。在多种生物中已经克隆得到了核苷二磷酸激酶基因,且不同植物核苷二磷酸激酶氨基酸序列中存在多个相似的保守结构域,推测RgNDPKⅠ基因所编码的蛋白质为核苷二磷酸激酶超家族成员。该研究结果为进一步探明RgNDPKⅠ的性质、结构、功能及表达机制提供了重要的理论依据。 展开更多
关键词 地黄 核苷二磷酸激酶(NDPK) 电子克隆 生物信息学
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牙龈卟啉单胞菌通过NDK/ATP/P2X7影响口腔鳞状细胞癌恶性表型的实验研究
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作者 魏巍 谭小容 +2 位作者 李慕秋 龚忠诚 李晨曦 《口腔医学研究》 北大核心 2025年第5期378-385,共8页
目的:探索牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis,P.g)分泌的核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是否通过耗竭口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞外三磷酸腺苷(Adenosine triphosp... 目的:探索牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis,P.g)分泌的核苷二磷酸激酶(nucleoside diphosphate kinase,NDK)是否通过耗竭口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞外三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)调控P2X7门控从而影响OSCC的恶性表型。方法:收集2022年1月~2023年12月就诊于新疆医科大学第一附属医院(附属口腔医院)口腔颌面肿瘤外科30例患者临床资料和OSCC组织样本通过免疫组织化学染色检测OSCC组织中P.g与P2X7的表达。通过体外培养SCC 9和SCC 25细胞,培养P.g(W83型),敲除P.g(W83型)中的NDK(P.g-△NDK)后并培养,建立细胞/细菌的共培养模型(采用细胞免疫荧光观察共培养模型),加入或不加入ATP,运用CCK-8、细胞划痕、Transwell、乳酸脱氧酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放、检测P.g和P.g-△NDK对各组OSCC细胞增殖、迁移、侵袭能力及毒性的影响,并用蛋白质印迹实验验证其各组间P2X7蛋白的表达。结果:在OSCC组织中P.g与P2X7的表达显著高于癌旁组织(P<0.0001);细胞学实验中,感染P.g的SCC9和SCC 25细胞增殖、迁移、侵袭能力增强(P<0.01),细胞毒性也增强(P<0.0001),感染P.g-△NDK后,SCC 9和SCC 25细胞增殖、迁移、侵袭能力进一步增强(P<0.01),细胞毒性减弱(P<0.0001);各组加入ATP后,Control组、感染P.g组及感染P.g-△NDK组的细胞增殖、迁移、侵袭能力均增强(P<0.05),细胞毒性均减弱(P<0.0001),其中感染P.g组上清液中ATP含量明显减少(P<0.05),P2X7表达与ATP含量呈正相关关系。结论:P.g分泌的NDK具有耗竭SCC 9和SCC 25细胞外ATP的能力,敲除NDK后,P2X7表达上调,从而增强其增殖、迁移、侵袭能力,并降低细胞毒性。 展开更多
关键词 牙龈卟啉单胞菌 口腔鳞状细胞癌 核苷二磷酸激酶 磷酸腺苷 嘌呤能离子通道型受体7
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人类腺苷酸激酶家族中几个新亚型及其功能特点 被引量:3
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作者 孔凡志 沈欢欢 +2 位作者 姜楠 杨焕民 杨锐 《黑龙江八一农垦大学学报》 2016年第2期37-44,共8页
腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)是一种催化磷酸基团在腺嘌呤核苷酸之间相互转换,从而调节细胞内的不同部分腺嘌呤核苷酸比例的磷酸转移酶。近年来,越来越多的腺苷酸激酶同工酶新亚型被发现,现从编码腺苷酸激酶基因的定位、腺苷酸激酶... 腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)是一种催化磷酸基团在腺嘌呤核苷酸之间相互转换,从而调节细胞内的不同部分腺嘌呤核苷酸比例的磷酸转移酶。近年来,越来越多的腺苷酸激酶同工酶新亚型被发现,现从编码腺苷酸激酶基因的定位、腺苷酸激酶的底物偏好及其功能等几个方面做了综述,为全面深入了解腺苷酸激酶家族提供了良好的理论基础和新线索。 展开更多
关键词 腺嘌呤核苷 腺苷酸激酶 核苷二磷酸激酶
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注射用磷酸肌酸钠对体外培养人卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响及其机制 被引量:1
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作者 魏素菊 张凯 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期470-474,共5页
目的:观察注射用磷酸肌酸钠(CP)对人卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,随机分为空白对照组(生理盐水)及药物处理组(1、6和12 mmol.L-1CP);分别用生理盐水、CP处理细胞72 h后,采用MT... 目的:观察注射用磷酸肌酸钠(CP)对人卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,随机分为空白对照组(生理盐水)及药物处理组(1、6和12 mmol.L-1CP);分别用生理盐水、CP处理细胞72 h后,采用MTT比色法和Transwell小室法观察细胞黏附和迁移侵袭能力;采用RT-PCR和FCM测定nm23-h1、c-myc mRNA及蛋白表达和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。结果:与空白对照组比较,1 mmol.L-1CP组各项指标差异无统计学意义(P>0.05);6和12 mmol.L-1CP组细胞黏附、迁移侵袭抑制率明显增加(P<0.01),nm23-h1 mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.01),c-myc mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01);但6与12 mmol.L-1CP组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组比较,1、6和12 mmol.L-1CP组MMP-2、MMP-9蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:一定浓度注射用CP可抑制体外培养SKOV3细胞的黏附和迁移侵袭能力,其机制可能与上调nm23-h1、下调c-myc基因表达有关。 展开更多
关键词 磷酸肌酸钠 迁移侵袭 卵巢肿瘤 nm23核苷二磷酸激酶 基因 myc
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