基于机器学习方法的丙型肝炎病毒聚合酶NS5B非核苷抑制剂的定量构效关系研究

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作者 丛湧 薛英 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1639-1647,共9页

对89个苯并异噻唑和苯并噻嗪类丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶非核苷抑制剂进行了定量构效关系(QSAR)研究.采用遗传算法组合偏最小二乘(GA-PLS)和线性逐步回归分析(LSRA)两种特征选择方法选择最优描述符子集,然后建立多元线性回归和偏最... 对89个苯并异噻唑和苯并噻嗪类丙型肝炎病毒(HCV)NS5B聚合酶非核苷抑制剂进行了定量构效关系(QSAR)研究.采用遗传算法组合偏最小二乘(GA-PLS)和线性逐步回归分析(LSRA)两种特征选择方法选择最优描述符子集,然后建立多元线性回归和偏最小二乘线性回归模型.并首次尝试使用遗传算法耦合支持向量机方法(GA-SVM)对两种特征选择方法所选的描述符子集分别建立非线性支持向量机回归模型.三种机器学习方法所建模型均得到比较满意的预测效果.采用LSRA所选的6个描述符建立的三个QSAR模型对于测试集的相关系数为0.958-0.962,GA-SVM法给出最好的预测精度(0.962).采用GA-PLS所选的7个描述符建立的三个QSAR模型对于测试集的相关系数为0.918-0.960,偏最小二乘回归模型的结果最好(0.960).本工作提供了一种有效的方法来预测丙型肝炎病毒抑制剂的生物活性,该方法也可以扩展到其他类似的定量构效关系研究领域. 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒ns5b聚合酶 非核苷抑制剂 线性逐步回归分析 偏最小二乘法 遗传算法 支持向量机

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丙型肝炎病毒NS5b区酶切基因分型及其在干扰素治疗中的应用 被引量：3

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作者 许青田 杜绍财 +3 位作者 季颖 王会民 李新月 陶其敏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2001年第4期231-232,共2页

探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型及其与干扰素应答效果的关系。应用逆转录 -聚合酶链反应(RT -PCR)技术对 2 6 9例肝炎患者血清进行HCVNS5b区基因片段扩增 ,并对 5 6例阳性PCR产物进行酶切分型 ,同时观察干扰素α - 2b对其中 48例... 探讨丙型肝炎病毒 (HCV)感染的基因型及其与干扰素应答效果的关系。应用逆转录 -聚合酶链反应(RT -PCR)技术对 2 6 9例肝炎患者血清进行HCVNS5b区基因片段扩增 ,并对 5 6例阳性PCR产物进行酶切分型 ,同时观察干扰素α - 2b对其中 48例慢性丙型肝炎的疗效。HCV单纯 1b型感染、1b基因变异及 2a型感染对干扰素的应答率分别为 70 % (14/ 2 0 )、9 5 % (2 / 2 1)、71 4% (5 / 7) ;其中完全应答分别为 45 % (9/ 2 0 )、4 8% (1/ 2 1)、5 7 1% (4/ 7) ;部分应答分别为 2 5 % (5 / 2 0 )、4 8% (1/ 2 1)、14 3 % (1/ 7)。 1b基因变异组同单纯 1b型及 2a型感染组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ,而单纯 1b型感染组与 2a型感染组比较无明显差异 (P >0 0 5 )。HCV单纯 1b型感染或 2a型感染者对干扰素敏感 ,而 1b基因变异者干扰素治疗效果极差 ,可作为预测干扰素疗效的一项新的重要指标。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因分型 聚合酶链反应 干扰素 ns56区酶切分型

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丙型肝炎病毒5’-非编码区与NS 5b区酶切分型对比研究 被引量：1

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作者 许青田 李新月 +2 位作者 熊飞升 杜绍财 陶其敏 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2003年第1期20-21,共2页

探讨北京与河南地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况以及HCV 5’-NCR和HCV NS5b两区域分型结果之间的差异。对56例慢性丙型肝炎和80例有偿供血员的HCV RNA阳性血清。同时进行HCV 5’-NCR和HCV NS5b酶切分型研究。HCV 5’-NCR和HCV NS5... 探讨北京与河南地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型分布情况以及HCV 5’-NCR和HCV NS5b两区域分型结果之间的差异。对56例慢性丙型肝炎和80例有偿供血员的HCV RNA阳性血清。同时进行HCV 5’-NCR和HCV NS5b酶切分型研究。HCV 5’-NCR和HCV NS5b两区域的Ⅱ/1b型感染率北京地区分别占85.7％和87.5％,河南地区分别占68.8％和70.0％。HCV Ⅱ/lb型为北京和河南地区HCV感染的优势株,同时HCV 5’-NCR和HCV NS5b区酶切分型结果间具有良好的相互对应关系。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 HCV 基因型 5’-NCR区 ns5b区 HCVⅡ/1b型 酶切分型 北京 河南

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基于丙型肝炎病毒NS5B基因序列分析的基因分型 被引量：8

4

作者 张继明 尹有宽 +4 位作者 谢怡 卢清 张清波 邬祥惠 翁心华 《中国抗感染化疗杂志》 2003年第5期287-290,共4页

目的 :建立基于丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B基因序列分析的基因分型方法 ,对上海地区慢性丙型肝炎进行基因分型。方法 :用HCVRNA实时荧光定量检测试剂盒对慢性丙型肝炎患者血清标本的HCVRNA水平进行定量分析。用逆转录 聚合酶链反应 (RT P... 目的 :建立基于丙型肝炎病毒 (HCV)NS5B基因序列分析的基因分型方法 ,对上海地区慢性丙型肝炎进行基因分型。方法 :用HCVRNA实时荧光定量检测试剂盒对慢性丙型肝炎患者血清标本的HCVRNA水平进行定量分析。用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)和套式 PCR扩增HCVRNA阳性的 4 1份标本的部分HCVNS5B区基因 ,PCR产物经回收、纯化后直接进行测序分析。从GenBank中下载 2 5份不同基因型的HCV原型序列 ,用NS5B区 2 2 2bp的基因片段构建系统进化树 ,对临床标本相应的HCVNS5B区序列进行分析。结果 :基于HCVNS5B基因序列的系统进化树分析 ,可成功地对本组 4 1份标本进行基因分型。分型结果显示 ,1b型占 85 .4 % (35 / 4 1) ,2a型占 12 .2 0 % (5 / 4 1) ,3a型占 2 .4 4 % (1/ 4 1)。结论 :基于HCVNS5B区基因序列的系统进化树分析是一种可靠和方便的HCV基因分型方法。上海地区的HCV基因型以 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因型 系统进化树分析 ns5b基因 基因序列分析 基因分型

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丙型肝炎病毒NS5B在Hep3B细胞的表达及活性分析 被引量：2

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作者 孔令保 刘志文 +2 位作者 吴晓玉 刘好桔 王园秀 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期54-56,共3页

目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检... 目的丙型肝炎病毒NS5B基因转染人肝癌细胞系Hep3B细胞,检测NS5B的表达与细胞内RNA聚合酶活性。方法使用脂质体把包含全长丙型肝炎病毒NS5B基因的重组载体pcDNA-5B转染到Hep3B细胞。RT-PCR和Wes-tern blot鉴定NS5B基因的表达,荧光素酶检测NS5B的细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结果RT-PCR和Westernblot发现转染NS5B基因的Hep3B细胞产生NS5B mRNA和NS5B蛋白,荧光素酶分析表明Hep3B细胞表达的NS5B蛋白具有细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论人肝癌细胞系Hep3B细胞可以成功表达NS5B基因,且表达的NS5B蛋白具备细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 ns5b HEP3b细胞 活性

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丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量：1

6

作者 韩佩君 雷迎峰 +5 位作者 吕欣 杨敬 姚敏 乔卿华 党品香 尹文 《科学技术与工程》 北大核心 2013年第36期10794-10797,10805,共5页

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体... 通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒(hepatitis e virus HCV) ns3-5b蛋白 真核表达

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丙型肝炎病毒NS5B基因的克隆及在大肠杆菌的分泌表达 被引量：5

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作者 张跃红 段惠娟 鞠连才 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第8期696-698,共3页

由于全长丙型肝炎病毒NS5B的疏水性 ,其表达和纯化非常困难。为了分泌表达NS5B ,作者对NS5B进行截短 ,缺失其疏水部分从而在大肠杆菌细胞中分泌表达HCVNS5B基因 ,并测定其活性。用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)的方法 ,设计截去NS5B疏水... 由于全长丙型肝炎病毒NS5B的疏水性 ,其表达和纯化非常困难。为了分泌表达NS5B ,作者对NS5B进行截短 ,缺失其疏水部分从而在大肠杆菌细胞中分泌表达HCVNS5B基因 ,并测定其活性。用逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)的方法 ,设计截去NS5B疏水部分 ,PCR引物以HCV全长质粒pBRTM/HCV 1为模板 ,克隆到pGEM Teasy载体中 ,双酶切后回收连接到pET 2 1b中表达。大肠杆菌培养上清过柱纯化 ,进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析 ,并用液闪近端分析 (SPA)法分析NS5BRdRp活性。成功地构建了NS5B基因大肠杆菌表达载体 ,Western免疫印迹显示NS5B蛋白在大肠杆菌细胞中表达。表达产物在大肠杆菌培养上清中存在 ,分子量 6 8kD左右 ,而且 [3 H]总掺入率达 6 90 0cpm。NS5B蛋白在大肠杆菌上清中表达成功 ,经过活性测定 。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 ns5b基因 大肠杆菌 基因表达 逆转录多聚酶链反应

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“双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒NS_5基因 被引量：2

8

作者 李庆生 郭建平 陶其敏 《生物化学杂志》 CSCD 1996年第2期249-251,共3页

“双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒ＮＳ_５基因李庆生，郭建平，陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）我们在扩增丙型肝炎病毒ＮＳ５基因中，探讨了退火温度与扩增产物特异性之间的关系，发现“双退... “双退火温度”多聚酶链反应扩增丙型肝炎病毒ＮＳ_５基因李庆生，郭建平，陶其敏（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）我们在扩增丙型肝炎病毒ＮＳ５基因中，探讨了退火温度与扩增产物特异性之间的关系，发现“双退火温度”多聚酶链反应可很好地解决目?.. 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 ns5基因 聚合酶链反应

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丙型肝炎病毒依赖于RNA的RNA聚合酶(RdRp)研究进展 被引量：2

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作者 陈忠斌 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第6期605-608,共4页

由于缺乏合适的HCV感染细胞模型 ,严重制约了HCV复制 ,特别是HCV复制的关键因子依赖于RNA的RNA聚合酶 (RdRp)的研究 .对HCV序列比较分析并通过异源表达证明NS5B是HCV复制的RdRp .NS5BC端疏水性氨基酸区域以及NS5B与细胞膜形成复合体等影... 由于缺乏合适的HCV感染细胞模型 ,严重制约了HCV复制 ,特别是HCV复制的关键因子依赖于RNA的RNA聚合酶 (RdRp)的研究 .对HCV序列比较分析并通过异源表达证明NS5B是HCV复制的RdRp .NS5BC端疏水性氨基酸区域以及NS5B与细胞膜形成复合体等影响NS5B溶解性 .在合适的反应条件下NS5B可以多种RNA分子为模板催化RNA复制 ,特别是能有效复制HCV全长 (+ )RNA .高浓度GTP激活HCVRdRp活性 .NS5BN/C端缺失突变和保守性A、B、C区中的点突变影响RdRp活性 ,但D区 345位精氨酸突变为赖氨酸时RdRp活性明显升高 . 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 非结构蛋白ns5b RNA聚合酶

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重组西尼罗病毒NS5融合蛋白依赖RNA的RNA聚合酶特性鉴定

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作者 李晓峰 陈水平 +4 位作者 姜涛 邓永强 秦成峰 于曼 秦鄂德 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期630-636,共7页

西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板,PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区(NS5pol)及该蛋白完整的编码序列(NS5F),分别克隆于原核表达载体pET-28a并转化至... 西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)非结构蛋白NS5是病毒基因组复制的关键蛋白.以病毒全长cDNA克隆为模板,PCR扩增获得NS5的RNA依赖的RNA聚合酶(RdRp)活性区(NS5pol)及该蛋白完整的编码序列(NS5F),分别克隆于原核表达载体pET-28a并转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达.表达的可溶性重组蛋白经Ni柱亲和层析纯化后进行SDS-PAGE和Western印迹鉴定.结果显示,二者均为病毒特异蛋白,且纯度均在90%以上.进一步的体外RdRp分析及EMSA的结果表明,NS5pol和NSF5均有较高的RdRp活性,且该活性具有RNA模板序列和二级结构的特异性.获得的具有RdRp活性的NS5pol和NS5F为西尼罗病毒基因组复制相关元件的研究奠定了基础. 展开更多

关键词 西尼罗病毒 ns5蛋白 RNA依赖的RNA聚合酶

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截短型HCV NS5B RNA聚合酶在大肠杆菌中表达纯化及鉴定

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作者 田江红 雷迎峰 +7 位作者 尹文 陈任安 汪桦 吕欣 杨敬 孙梦宁 姚敏 徐志凯 《科学技术与工程》 2010年第4期863-867,共5页

为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱... 为构建HCV截短型ns5bΔ21基因的原核表达质粒;在大肠杆菌中表达NS5B蛋白并纯化,制备其抗体。运用软件设计引物,以BB7复制子为模板PCR扩增ns5bΔ21基因;克隆入原核表达载体pRSETA。将重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21转化BL21大肠杆菌,并诱导表达、可溶性分析及纯化;用纯化的NS5B蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体。结果酶切鉴定和序列测定表明成功的构建了重组表达质粒pRSETA-ns5bΔ21;其经IPTG诱导后行SDS-PAGE可见新生表达条带,Western-blot证实了其特异性和抗原性良好;利用镍离子亲和层析和电洗脱方法获得了纯化NS5B蛋白;用纯化蛋白免疫小鼠制备出了多价抗血清。说明表达和纯化的截短型HCV NS5B RNA聚合酶可用于下一步筛选单链抗体。 展开更多

关键词 HCV ns5b RNA聚合酶 大肠杆菌 蛋白表达

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HCV NS5b套式PCR在酶切基因分型研究中的应用 被引量：8

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作者 杜绍财 陶其敏 +2 位作者 冯百芳 孙炎 王豪 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第5期444-446,共3页

目的 :探讨HCVNS5b区酶切分型技术在临床上的应用。方法 :选用了HpaⅡ、Cfr10Ⅰ、AluⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ、ApaⅠ、AvaⅡ、TaqⅠ、BstNⅠ、Sau 3AⅠ、StuⅠ、BalⅠ、SmaⅠ等 13种限制性内切酶 ,对已知2 3例 1b型和 17例 2a型样品进行酶切... 目的 :探讨HCVNS5b区酶切分型技术在临床上的应用。方法 :选用了HpaⅡ、Cfr10Ⅰ、AluⅠ、HhaⅠ、HaeⅢ、ApaⅠ、AvaⅡ、TaqⅠ、BstNⅠ、Sau 3AⅠ、StuⅠ、BalⅠ、SmaⅠ等 13种限制性内切酶 ,对已知2 3例 1b型和 17例 2a型样品进行酶切分析和验证。结果 :40例NS5b分型结果表明 2 3例 1b型中有AluⅠ特异切点 ,无 1a的BalⅠ切点和 2b的MboⅠ切点 ,17例 2a型中无A1uⅠ切点和 1a的BalⅠ及 2b的MboⅠ切点。StuⅠ可用于 1b型中基因变异诊断。结论 :HCVNS5b分型结果提示应用该分型技术 ,不仅达到了基因分型效果 ,而且还可检测基因变异 ,证实了我国存在着 1b和 展开更多

关键词 丙型肝炎 酶切基因分型 HCV ns5b 聚合酶链反应

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用生物信息学方法确定丙型肝炎病毒基因分型的最佳区域 被引量：1

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作者 万祥辉 曾照芳 杨细媚 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期81-83,共3页

从Genbank中筛选出15条对各成熟肽区域有注释来源于不同国家地区的丙型肝炎病毒全基因组序列,分别对5′UTR区,core区,E1区,E2区及NS5B区建系统进化树。结果发现以5′UTR区建树,基因分型不完全正确而以core区、E1区、E2区及NS5B区建树,... 从Genbank中筛选出15条对各成熟肽区域有注释来源于不同国家地区的丙型肝炎病毒全基因组序列,分别对5′UTR区,core区,E1区,E2区及NS5B区建系统进化树。结果发现以5′UTR区建树,基因分型不完全正确而以core区、E1区、E2区及NS5B区建树,基因分型均完全正确,但同一基因型间的核苷酸演化距离存在差异。计算5条1a型序列的core区、E1区、E2区、NS5B区的核苷酸演化距离并和全基因组序列核苷酸演化距离比较。结果发现NS5B蛋白区基因分型最能反映病毒株的演化关系。用生物信息学方法,比较丙型肝炎病毒的5个常用的基因分型区域,确定NS5B区为丙型肝炎病毒基因分型的最佳区域。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 基因型 ns5b蛋白 生物信息学

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基于分子对接技术精细分析中药化学成分与新型冠状病毒RNA聚合酶之间的结合模式 被引量：8

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作者 彭安堂 苏彦雷 +6 位作者 刘倩 常希龙 汪俊松 霍长虹 王建荣 段绪红 师洋 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2021年第4期94-101,I0034-I0039,共14页

以SARS RNA聚合酶6NUR为模板,采用同源建模方法,构建出了新型冠状病毒RNA聚合酶的三维结构模型,以之为抗病毒的研究靶点,精细分析靶酶中NTPs结合位点处氨基酸与底物抑制剂的分子间相互作用,虚拟筛选得出黄酮类化合物为抗新型冠状病毒活... 以SARS RNA聚合酶6NUR为模板,采用同源建模方法,构建出了新型冠状病毒RNA聚合酶的三维结构模型,以之为抗病毒的研究靶点,精细分析靶酶中NTPs结合位点处氨基酸与底物抑制剂的分子间相互作用,虚拟筛选得出黄酮类化合物为抗新型冠状病毒活性较强成分,研究结果被证明与抗疫临床治疗实践具有非常高的关联性,亦与某些黄酮类化合物为NS5B抑制剂从而具有抗丙型肝炎病毒活性的现实相符合,故认为以黄酮类化合物为代表的某些中药成分是抗新型冠状病毒的有效成分,希望能引起国内外科研人员的注意,能进一步的实验验证,助力于早日研发成功更好的抗新型冠状病毒药物。 展开更多

关键词 新型冠状病毒 中医 RNA聚合酶 同源建模 6NUR 6M71 分子对接 抑制剂 瑞德西韦 法匹拉韦 黄酮 丙型肝炎病毒 ns5b

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NS5B与HCV负链RNA3′末端特异性结合的分析 被引量：1

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作者 黄志明 黄开红 +2 位作者 邓庆丽 王巍 邵静 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期392-395,共4页

NS5B是RNA依赖性RNA聚合酶 ,在病毒RNA合成过程中起到中心催化酶的作用 .在大肠杆菌中表达和提纯了GST NS5B融合蛋白 ,应用紫外交联试验 (UVcross linking)检测NS5B与丙型肝炎病毒 (HCV)负链RNA 3′末端的结合 ,确定NS5B是否参与HCV负链... NS5B是RNA依赖性RNA聚合酶 ,在病毒RNA合成过程中起到中心催化酶的作用 .在大肠杆菌中表达和提纯了GST NS5B融合蛋白 ,应用紫外交联试验 (UVcross linking)检测NS5B与丙型肝炎病毒 (HCV)负链RNA 3′末端的结合 ,确定NS5B是否参与HCV负链RNA 3′末端复制体的形成 .NS5B可与HCV负链RNA 3′末端发生结合 ,这种结合存在量效关系 ,比与正链RNA 3′UTRX区的结合强约 10倍 ,超大量的非同源性RNA和蛋白质不能竞争抑制NS5B与负链RNA 3′末端的结合 ,证明这种结合存在特异性 .结果提示NS5B是HCV负链RNA 3′末端复制体的成分之一 . 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 ns5b 复制体 负链

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索磷布韦联合利巴韦林±聚乙二醇干扰素治疗我国丙型肝炎患者的效果 被引量：1

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作者 侯飞飞 祁兴顺 +1 位作者 郭晓钟 Wei L 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期1516-1516,共1页

【据《J Gastroenterol Hepatol》2018年6月报道】题：索磷布韦联合利巴韦林±聚乙二醇干扰素治疗我国丙型肝炎患者的效果：一项3b期临床研究结果（作者Wei L等）索磷布韦是HCV NS5B RNA聚合酶的核苷类抑制剂。这项3b期临床研究旨... 【据《J Gastroenterol Hepatol》2018年6月报道】题：索磷布韦联合利巴韦林±聚乙二醇干扰素治疗我国丙型肝炎患者的效果：一项3b期临床研究结果（作者Wei L等）索磷布韦是HCV NS5B RNA聚合酶的核苷类抑制剂。这项3b期临床研究旨在评估索磷布韦联合利巴韦林±聚乙二醇干扰素治疗我国基因1、2、3或6型丙型肝炎患者的安全性和有效性。 展开更多

关键词 聚乙二醇干扰素 丙型肝炎患者 利巴韦林 治疗 磷 RNA聚合酶 临床研究 ns5b

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新型登革病毒RNA聚合酶小分子抑制剂Z1降低登革病毒复制和感染的研究 被引量：3

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作者 郭颂欣 何士俊 +2 位作者 黄翠红 姚新刚 刘叔文 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期790-796,共7页

目的 筛选新型的登革病毒RNA聚合酶抑制剂。方法 大肠杆菌原核表达DENV2 RNA聚合酶蛋白NS5RdRp。SPR高通量筛选小分子化合物库,寻找与NS5 RdRp蛋白结合的小分子化合物;CPE、LDH和空斑实验在细胞水平上验证化合物的抗病毒效果;实时荧... 目的 筛选新型的登革病毒RNA聚合酶抑制剂。方法 大肠杆菌原核表达DENV2 RNA聚合酶蛋白NS5RdRp。SPR高通量筛选小分子化合物库,寻找与NS5 RdRp蛋白结合的小分子化合物;CPE、LDH和空斑实验在细胞水平上验证化合物的抗病毒效果;实时荧光定量PCR法检测化合物对病毒RNA合成的影响;免疫荧光法检测病毒复制中间体dsRNA以及病毒蛋白合成;蛋白免疫印迹法检测化合物对病毒蛋白合成量的影响;时间点处理实验判断抗病毒作用阶段。结果 2,5-二氢-1,2-二苯基-4-环己氨基-5-氧代-1H-吡咯-3-甲酸乙酯(Z1)与NS5 RdRp具有结合活性,在细胞水平上具有抗DENV2活性,半数有效浓度(EC50)为4.75μmol·L-1。Z1抑制DENV2 RNA合成,抑制病毒dsRNA的合成,并抑制病毒蛋白的合成,其抑制作用发生在病毒进入后阶段。结论 Z1是新型的登革病毒NS5 RdRp抑制剂,其明显抑制登革病毒RNA的合成,并进一步抑制病毒蛋白的翻译合成,从而抑制子代病毒的复制和释放,其可作为新型的抗登革病毒先导化合物用于进一步的开发。 展开更多

关键词 ns5 RdRp抑制剂 登革病毒RNA聚合酶 2型登革病毒 抗病毒药物 SPR 病毒复制

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HCV非结构基因NS5分子生物学研究进展

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作者 罗雯 《科学技术与工程》 2003年第4期390-392,共3页

丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因5(NS5)区是RNA依赖的RNA聚合酶(RDRP)及一种磷蛋白的编码区,与HCV的复制、致病及抗药性关系密切。就HCV NS5区有关的分子生物学研究进展进行了综述。

关键词 丙型肝炎病毒 HCV 非结构基因 ns5基因 分子生物学 研究进展 RNA聚合酶 编码蛋白

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抗丙肝病毒药物研发的最新进展(英文) 被引量：5

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作者 刘佳 石爽 +1 位作者 庄辉 罗光湘 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1025-1036,共12页

丙型肝炎病毒(HCV)是引起慢性肝脏疾病的主要病因。目前尚无疫苗预防HCV感染。长效聚乙二醇I型干扰素(pegIFN-α)和利巴韦林(RBV)联合应用是近十年来治疗丙肝的最佳药物,但仍有一半以上基因1型HCV感染者对该联合抗病毒治疗无效,并且IFN... 丙型肝炎病毒(HCV)是引起慢性肝脏疾病的主要病因。目前尚无疫苗预防HCV感染。长效聚乙二醇I型干扰素(pegIFN-α)和利巴韦林(RBV)联合应用是近十年来治疗丙肝的最佳药物,但仍有一半以上基因1型HCV感染者对该联合抗病毒治疗无效,并且IFN和RBV的毒副作用较大且疗程长达1年,因此极大地限制了其在临床上的应用。近些年来,各制药公司相继研发出了多种HCV特异性的抗病毒药物,有些已经进入三期临床试验。今年美国食品药品管理局(FDA)批准了2种HCV蛋白酶抑制剂用于临床治疗丙肝,其他蛋白酶抑制剂、NS5A抑制剂及RNA聚合酶抑制剂也均处于三期临床试验阶段。因此,有望在不久的将来研发出不依赖于IFN、高效、安全、疗程短及服用次数少的理想治疗方案。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 抗病毒药物 ns3蛋白酶抑制剂 ns5A抑制剂 ns5b聚合酶抑制剂 联合治疗

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siRNA抑制感染细胞模型中HCV复制的研究 被引量：1

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作者 邢小康 何继亮 陈智 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期582-587,共6页

目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白... 目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达。将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平。结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达。40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58%、54%、29%、17%、17%、33%、22%、19%,明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活。 展开更多

关键词 肝炎病毒属/遗传学 RNA 小分子干扰/遗传学 丙型肝炎 RNA干扰 小干扰RNA(siRNA) HCV复制 ns5b 感染细胞

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