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DRP1调控线粒体稳态对人视网膜色素上皮细胞上皮-间充质转化的影响
1
作者 汤中 唐云骢 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第6期443-448,共6页
目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)... 目的探讨线粒体动力相关蛋白(DRP1)对人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞上皮-间充质转化(EMT)进程的影响。方法构建H_(2)O_(2)干预ARPE-19细胞模型,将ARPE-19细胞分为3组,NG组:采用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养细胞6 h;H_(2)O_(2)组:先采用650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预细胞,此后培养方式及时间与NG组相同;H_(2)O_(2)+Mdivi-1组:先采用10μmol·L^(-1)Mdivi-1处理ARPE-19细胞2 h,再给予650μmol·L^(-1)H_(2)O_(2)干预,此后培养方式及时间与NG组相同。Western blot检测各组细胞p-DRP-1/DRP1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波型蛋白(Vimintin)及紧密连接蛋白(ZO-1)表达水平;线粒体红色荧光探针检测各组细胞线粒体形态;线粒体超氧化物红色荧光探针检测各组细胞线粒体活性氧(ROS)水平;JC-1染色试剂盒检测各组细胞线粒体膜电位;免疫荧光检测各组细胞中ZO-1表达水平。结果H_(2)O_(2)组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值高于NG组,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞p-DRP-1/DRP1蛋白表达比值低于H_(2)O_(2)组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞较H_(2)O_(2)组线粒体碎片化程度得到改善。H_(2)O_(2)组细胞线粒体ROS水平(4.42±0.29)与NG组(1.00±0.17)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(2.15±0.18)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞红/绿荧光强度比值(0.16±0.12)与NG组(1.00±0.09)及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组(0.42±0.05)比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞上皮样标志物表达下降,间质样标志物表达上升,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组细胞上皮样标志物表达上升,间质样标志物表达下降。各组细胞α-SMA、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、Vimintin及ZO-1相对表达量比较,H_(2)O_(2)组与NG组及H_(2)O_(2)+Mdivi-1组比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ZO-1免疫荧光染色实验显示,H_(2)O_(2)+Mdivi-1组的细胞连接紧密程度优于H_(2)O_(2)组。结论DRP1可调控线粒体动态平衡,靶向DRP1可改善线粒体功能并抑制EMT进展,从而减轻H_(2)O_(2)诱导的RPE细胞功能障碍。 展开更多
关键词 线粒体动力相关蛋白 线粒体功能 人视网膜色素上皮细胞 上皮-间充质转化 年龄相关性黄斑变性
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脂氧素A4对Ⅱ型肺泡上皮细胞-间质转化的抑制作用及其机制 被引量：1
2
作者 王贵佐 杨淑梅 刘璐 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第2期157-163,共7页
目的 探讨脂氧素A4(lipoxin A4, LXA4)对Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell, ATⅡ)间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及可能机制。方法 将A549细胞分为对照组、转化生长因子β1(transforming grow... 目的 探讨脂氧素A4(lipoxin A4, LXA4)对Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial typeⅡcell, ATⅡ)间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响及可能机制。方法 将A549细胞分为对照组、转化生长因子β1(transforming growth factor, TGF-β1)组、空质粒+TGF-β1组、pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组及LXA4+TGF-β1组。TGF-β1组以5 ng/mL TGF-β1干预A549细胞48 h;空质粒+TGF-β1组和pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组A549细胞先分别转染空质粒或Nrf2过表达质粒,再以5 ng/mL TGF-β1干预48 h;LXA4+TGF-β1组A549细胞先用100 nmol/L LXA4预处理6 h再给予5 ng/mL TGF-β1干预48 h。光镜观察细胞形态变化,免疫印迹及免疫荧光法检测上皮标志物E钙黏蛋白(E-cadherin)、间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)表达;免疫印迹法检测核因子红细胞2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)蛋白水平。结果 与对照组相比,TGF-β1组光镜下可见部分A549细胞形态从鹅卵石状变成细长不规则状,呈间质性改变,E-cadherin表达减少(P<0.05)、α-SMA表达增多(P<0.01),Nrf2蛋白水平下调(P<0.05)。与TGF-β1组相比,pcDNA3.1-Nrf2+TGF-β1组A549细胞E-cadherin表达增多(P<0.05)、α-SMA表达减少(P<0.01);LXA4+TGF-β1组A549细胞E-cadherin上调、α-SMA下调以及Nrf2蛋白水平增多(P<0.05)。结论 LXA4可抑制A549细胞发生EMT,其机制与上调Nrf2表达相关。 展开更多
关键词 肺纤维化 Ⅱ型肺泡上皮细胞 上皮细胞-间质转化 脂氧素A4 NRF2
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非小细胞肺癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达及对上皮间质转化进程的影响 被引量：1
3
作者 吴会丽 柴静 +2 位作者 李应龙 封敏 霍怡杉 《山东医药》 CAS 2024年第22期1-4,共4页
目的探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-363-3p(miR-363-3p)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)表达及对上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法收集行手术切除的84例非小细胞肺癌患者的癌及其癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌及癌旁组织... 目的探讨非小细胞肺癌组织中微小RNA-363-3p(miR-363-3p)、性别决定区Y框蛋白4(SOX4)表达及对上皮间质转化(EMT)进程的影响。方法收集行手术切除的84例非小细胞肺癌患者的癌及其癌旁组织。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌及癌旁组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,免疫组化SP法检测癌及癌旁组织中E-cadherin、Vimentin表达。比较不同病理特征患者癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达,采用Spearman秩相关分析癌组织miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与E-cadherin、Vimentin相关性。使用相对超危险度比(RERI)、归因比(AP)、交互作用指数(SI)分析miR-363-3p、SOX4参与EMT进程的交互作用。结果癌组织中miR-363-3p表达低于癌旁组织,SOX4 mRNA表达高于癌旁组织(P均<0.05);癌组织中miR-363-3p、SOX4 mRNA表达与性别、年龄、吸烟史、肿瘤最大径无关(P均>0.05),与分化程度、TNM分期有关(P均<0.05);癌组织E-cadherin阳性表达率低于癌旁组织,Vimentin阳性表达率高于癌旁组织(P均<0.05);癌组织miR-363-3p与E-cadherin表达呈正相关(r=0.491,P<0.05),与Vimentin表达呈负相关(r=-0.506,P<0.05);癌组织SOX4 mRNA与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.527,P<0.05),与Vimentin表达呈正相关(r=0.463,P<0.05)。癌组织miR-363-3p、SOX4对EMT进程存在负向交互作用(RERI=29.639,AP=70.91,SI=3.656)。结论非小细胞肺癌组织中miR-363-3p、SOX4异常表达与EMT有关,且二者对EMT进程存在负向交互作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 微小RNA-363-3p 性别决定区Y框蛋白4 上皮间质转化
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红景天苷预处理对高糖诱导的ARPE-19细胞上皮-间充质转化的作用与机制研究
4
作者 韩淼 隋海娟 庞东渤 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第8期607-612,共6页
目的探讨红景天苷(SAL)对高糖诱导的ARPE-19细胞的上皮-间充质转化的作用及机制。方法采用MTT法筛选刺激ARPE-19细胞增殖的合适的葡萄糖浓度,确定为50 mmol·L^(-1)。将ARPE-19细胞分为正常对照组(Control组)(5 mmol·L^(-1)的D... 目的探讨红景天苷(SAL)对高糖诱导的ARPE-19细胞的上皮-间充质转化的作用及机制。方法采用MTT法筛选刺激ARPE-19细胞增殖的合适的葡萄糖浓度,确定为50 mmol·L^(-1)。将ARPE-19细胞分为正常对照组(Control组)(5 mmol·L^(-1)的D-葡萄糖和45 mmol·L^(-1)甘露醇培养)、高糖组(HG组)(50 mmol·L^(-1)葡萄糖培养)、HG+低SAL组、HG+中SAL组、HG+高SAL组,低、中、高SAL浓度分别为20μmol·L^(-1)、80μmol·L^(-1)、320μmol·L^(-1),SAL预处理4 h后,加50 mmol·L^(-1)葡萄糖,作用48 h。采用MTT法观察细胞增殖率;划痕实验观察细胞迁移活性;免疫荧光检测细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达;Western blot法检测细胞中α-SMA、Vimentin、纤维粘连素(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、p-Smad2及p-Smad3蛋白的表达水平。结果与Control组相比,HG组ARPE-19细胞增殖率与伤口愈合百分比均增加,细胞内a-SMA、Vimentin、FN、Col I蛋白相对表达量均增加,E-cadherin蛋白相对表达量降低,细胞内TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白相对表达量均增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与HG组相比,HG+低SAL组、HG+中SAL组及HG+高SAL组ARPE-19细胞增殖率与伤口愈合百分比均降低,细胞内a-SMA、Vimentin、FN、Col I、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白相对表达量均呈浓度依赖性降低,E-cadherin蛋白相对表达量呈浓度依赖性增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论SAL能够降低高糖诱导的ARPE-19细胞的增殖、迁移能力,以及干预其上皮-间充质转化进程,这可能与SAL抑制了ARPE-19细胞的TGF-β/Smads信号通路有关。 展开更多
关键词 红景天苷 高糖 人视网膜色素上皮细胞 上皮-间充质转化 转化生长因子-Β1
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二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞增殖、迁移及上皮间质转化的影响
5
作者 张昀昀 郑柳 +2 位作者 王舒 杨彬彬 丁芝祥 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第9期692-696,共5页
目的研究二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)增殖、迁移及上皮间质转化的影响。方法选择永生化人LEC(HLEB-3细胞)作为细胞来源;将细胞融合度80%的人LEC置于含10 mg·L^(-1)TGF-β_(2)的DMEM低... 目的研究二甲双胍对转化生长因子-β_(2)(TGF-β_(2))诱导的人晶状体上皮细胞(LEC)增殖、迁移及上皮间质转化的影响。方法选择永生化人LEC(HLEB-3细胞)作为细胞来源;将细胞融合度80%的人LEC置于含10 mg·L^(-1)TGF-β_(2)的DMEM低糖培养基中培养24 h作为对照组,经TGF-β_(2)处理再加入不同浓度二甲双胍进一步作用后的细胞作为实验组。处理后在倒置显微镜下观察各组细胞的形态变化。采用CCK-8实验检测细胞毒性,计算细胞存活率,Western blot法检测细胞中辅助激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)、大肿瘤抑制因子1(LATS1)、波型蛋白(Vimentin)的表达,实时荧光定量PCR检测YAP1、LATS1、哺乳动物STE20样激酶1(MST1)、Vimentin、E-钙黏蛋白mRNA的表达。结果二甲双胍细胞毒性检测结果显示,当二甲双胍浓度大于15.0 mmol·L^(-1)时,人LEC的存活率明显降低,表明二甲双胍浓度对LEC存活影响较大,因此选择15.0 mmol·L^(-1)进行后续实验。二甲双胍对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖有显著的抑制作用,且呈明显的剂量依赖性(均为P<0.001)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin蛋白相对表达量均低于对照组(均为P<0.05);LATS1蛋白相对表达量高于对照组(P<0.05)。15.0 mmol·L^(-1)二甲双胍作用于人LEC 24 h后细胞中YAP1和Vimentin mRNA相对表达量均低于对照组,LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论二甲双胍在体外能够对TGF-β_(2)诱导的人LEC增殖、迁移及上皮间质转化产生抑制作用,同时可下调YAP1和Vimentin mRNA的表达,上调LATS1、MST1、E-钙黏蛋白mRNA的表达;该作用机制可能与其激活Hippo信号通路有关。 展开更多
关键词 二甲双胍 转化生长因子-β_(2) 细胞增殖 细胞迁移 上皮间质转化
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Twist对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化、肿瘤干细胞表型转化、化疗抵抗的影响 被引量：4
6
作者 邓君健 张帆 +4 位作者 包文婷 熊琳 刘远识 范黎 徐细明 《山东医药》 CAS 2019年第28期7-11,共5页
目的研究Twist对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)、肿瘤干细胞表型转化、化疗抵抗的影响。方法选取人结肠癌HCT116细胞,分为空载体组及Twist过表达组(Twist组),空载体组及Twist组分别将2μg的空载体pcDNA3.1或pcDNA3.1-Twist载体... 目的研究Twist对结直肠癌HCT116细胞上皮-间质转化(EMT)、肿瘤干细胞表型转化、化疗抵抗的影响。方法选取人结肠癌HCT116细胞,分为空载体组及Twist过表达组(Twist组),空载体组及Twist组分别将2μg的空载体pcDNA3.1或pcDNA3.1-Twist载体转染至HCT116细胞。通过形态学观测、Transwell实验检测细胞的侵袭能力,Western blotting法、免疫荧光法检测EMT标志物E-钙黏蛋白、波形蛋白表达,Western blotting法检测肿瘤干细胞标志物Bmi-1、Nanog、CD44表达,给予HCT116细胞化疗药物奥沙利铂(0~10μmol/L梯度浓度)刺激,于570 nm波长处测定细胞活力。Western blotting法检测P-gp蛋白表达。采用荧光定量PCR法检测化疗抵抗相关分子ABCB1、ABCC1、ABCC2、ABCC3、ABCC4、ABCC5、ABCG2、ERCC1、XRCC1、MSH2、TUBB3、POLH、GSTπ、γ-GT1表达。结果Twist组HCT116细胞的形态由圆形向长梭形态分化,空载体组与Twist组HCT116细胞穿膜细胞数分别为(6.24±0.89)、(26.83±1.02)个/HP,两组比较,P<0.05。空载体组与Twist组EMT相关分子蛋白E-钙黏蛋白相对表达量分别为0.82±0.09、0.24±0.04,波形蛋白相对表达量分别为0.12±0.02、1.05±0.12,两组E-钙黏蛋白、波形蛋白表达比较,P均<0.05。空载体组与Twist组HCT116细胞成球数量分别为(2.43±0.14)、(10.19±0.58)个/HP,两组比较,P<0.05。空载体组与Twist组肿瘤干细胞相关分子Nanog相对表达量分别为0.06±0.01、0.88±0.07,Bmi1相对表达量分别为0.23±0.04、1.26±0.88,CD44相对表达量分别为1.45±0.09、8.92±0.89,两组Nanog、Bmi1、CD44表达比较,P均<0.05。Twist组在奥沙利铂浓度0、0.1、1、5、10μmol/L刺激HCT116细胞后细胞活力分别为1.00±0.08、0.84±0.09、0.70±0.10、0.53±0.07、0.48±0.06,空载体组分别为1.00±0.07、0.76±0.08、0.58±0.05、0.27±0.04、0.08±0.04,奥沙利铂各浓度刺激HCT116细胞后两组细胞活力比较,P均<0.05。奥沙利铂刺激HCT116细胞后,Twist组肿瘤化疗抵抗相关调控分子ABCB1、ABCC1、ABCC2、ABCC3、ABCC4、ABCC5、ABCG2、ERCC1、XRCC1、MSH2、TUBB3、POLH、GSTπ、γ-GT1相对表达量分别为3.20±0.35、1.10±0.11、1.14±0.18、1.09±0.09、0.88±0.09、1.09±0.12、1.30±0.14、0.98±0.10、1.02±0.13、1.13±0.08、1.42±0.25、1.09±0.08、0.92±0.10、1.29±0.35,空载体组分别为1±0.10、1±0.14、1±0.13、1±0.15、1±0.09、1±0.12、1±0.11、1±0.15、1±0.14、1±0.13、1±0.15、1±0.09、1±0.15、1±0.17,两组ABCB1表达比较,P<0.05。结论Twist可促使结直肠癌HCT116细胞发生EMT、干细胞表型转换,上调HCT116细胞的化疗抵抗能力。 展开更多
关键词 结直肠癌 扭曲因子 上皮细胞-间充质转化 肿瘤干细胞 化疗抵抗
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TGF-β/Smad信号通路诱导肾上皮细胞间充质转化机制的研究进展 被引量：15
7
作者 孙雪 梅峰 《山东医药》 CAS 北大核心 2017年第30期102-104,共3页
上皮细胞间充质转化(EMT)是导致细胞增殖、进而出现肾纤维化的主要原因之一,与肾脏疾病的进展密切相关。转化生长因子β_1(TGF-β_1)是纤维形成生长因子,是诱导多种肾损伤出现进行性肾衰竭的关键介质。近年研究发现,TGF-β_1/Sma和Mad... 上皮细胞间充质转化(EMT)是导致细胞增殖、进而出现肾纤维化的主要原因之一,与肾脏疾病的进展密切相关。转化生长因子β_1(TGF-β_1)是纤维形成生长因子,是诱导多种肾损伤出现进行性肾衰竭的关键介质。近年研究发现,TGF-β_1/Sma和Mad相关蛋白(Smad)信号通路可介导EMT的发生,促进肾纤维化的发生发展。TGF-β/Smad信号通路可通过直接介导、调控整合素连接激酶(ILK)、激活小分子G蛋白(RhoA)、上调纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)等机制,使肾小球发生EMT,在肾脏纤维化过程中起到关键作用。 展开更多
关键词 肾间质纤维化 转化生长因子Β1 SMAD信号 肾小球 上皮细胞间充质转化
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下调miR-153促进高糖诱导的肾小管上皮细胞-间充质转化 被引量：4
8
作者 王筱霞 姜珍珍 +6 位作者 汪年松 陈玉强 李军辉 范瑛 刘玉梅 鲍宏达 程东生 《中国中西医结合肾病杂志》 2013年第10期850-854,I0001,共6页
目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路。方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与S... 目的:探讨miR-153调控高糖诱导肾小管上皮细胞(HK2)-间充质转化(EMT)的机制,为研究糖尿病肾病(DN)间质纤维化机制提供新思路。方法:采用生物信息学方法预测调控Snail的候选miRNAs;在db/db小鼠肾组织中验证所有候选miRNAs的表达并分别与Snail做pearson相关性分析,筛选出与Snail负相关最显著的miRNA;以高糖诱导的HK2细胞为载体,转染该miRNA mimics 72 h后,采用real-time PCR、western blot方法,观察该miRNAs、Snail以及E-cadherin的表达改变。结果:调控Snail的候选miRNAs共7个,分别是:miR-153、miR-30e、miR-30d、miR-30b、miR-384-5p、miR-30a、miR-30c;与db/m相比,miR-153、miR-30d及miR-30e在db/db小鼠肾皮质中表达显著下调(P<0.05),其中miR-153与Snail表达水平负相关最显著(r=-0.501 56);高糖诱导HK2细胞下调miR-153,肾小管上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达减少;过表达miR-153抑制HK2细胞表达Snail,而E-cadherin水平增加。结论:MiR-153可能通过靶基因Snail参与调控高糖诱导的HK2细胞EMT。 展开更多
关键词 近端肾小管上皮细胞(HK2) 上皮细胞-间充质转化(EMT) miR-153 SNAIL 生物信息学
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口腔鳞状细胞癌患者循环肿瘤细胞上皮-间充质转化状态的研究 被引量：2
9
作者 李杨 李雯 +2 位作者 陈茁 李帅泽 乔彬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期34-38,共5页
目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者与外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)状态的关系。方法:采用CanPatrolTM CTC-二代捕获技... 目的:探讨口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者与外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)状态的关系。方法:采用CanPatrolTM CTC-二代捕获技术联合RNA多重原位杂交分析(RNA in situ hybridization,RNA-ISH),检测32例OSCC患者术前1 d外周循环血中的肿瘤细胞。CTCs将根据EMT的相关标志物进行分型鉴定。结果:根据EMT相关标志物的表达情况,将检测出的CTCs分为上皮型CTCs(epithelial CTCs,e-CTCs),混合型CTCs(epithelial-mesenchymal-mixed CTCs,mix-CTCs)及间质型CTCs(mesenchymal CTCs,m-CTCs)。CTCs总数为198,其中e-CTCs为56(28.3%),mix-CTCs为128(64.6%),m-CTCs为14(7.1%)。每位患者的CTCs平均数值为(6.19±6.07),其中包括e-CTCs为(1.75±1.91),mix-CTCs为(4.00±5.77)和m-CTCs为(0.44±0.63)。CTCs总体数值与mix-CTCs数值相关(r^(2)=0.908,P<0.001)。e-CTCs数值与淋巴结有无转移(r^(2)=0.278,P<0.05)和TNM分期(r^(2)=0.278,P<0.05)相关。CTCs总体数值与患者术后发生复发或转移(r^(2)=0.252,P<0.05)相关。结论:mix-CTCs和e-CTCs数值可能对OSCC的进展其重要作用,CTCs可能作为OSCC预测预后的潜在指标。 展开更多
关键词 口腔鳞状细胞癌 循环肿瘤细胞 上皮-间充质转化
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整合素连接激酶在缺氧晶状体上皮细胞中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化的影响 被引量：3
10
作者 朱艳 朱玉广 +4 位作者 曹智 滕兴波 孙海霞 刘宪金 杨伟舟 《山东医药》 CAS 2019年第8期29-32,共4页
目的观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl_2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl_2作用浓度。以100μmol/L的CoCl_2作用于HL... 目的观察整合素连接激酶(ILK)在缺氧晶状体上皮细胞(HLECs)中的表达变化及其对细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养HLEC-B3,以不同浓度CoCl_2培养液进行干预,CCK-8法筛选最佳的CoCl_2作用浓度。以100μmol/L的CoCl_2作用于HLECs建立缺氧模型,分别于缺氧0、6、12、24、48 h时以Western blotting法检测HLECs中的ILK。将HLECs分为CoCl_2组、ILK抑制剂组、对照组,其中CoCl_2组和ILK抑制剂组加入100μmol/L的CoCl_2制作缺氧模型,ILK抑制剂组用ILK特异性抑制剂QLT0267(10 nmol/L)预处理1 h,对照组常规培养。三组继续培养24 h后采用Western blotting法检测细胞中的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤维连接蛋白(FN),采用实时荧光定量PCR法检测α-SMA、FN mRNA。结果缺氧6、12、24、48 h时ILK蛋白相对表达量均增高,其中缺氧12、24 h时ILK蛋白相对表达量高于缺氧6、48 h时(P均<0.05)。CoCl_2组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN蛋白相对表达量低于CoCl_2组(P均<0.01)。CoCl_2组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量高于对照组,ILK抑制剂组细胞中α-SMA、FN mRNA相对表达量低于CoCl_2组(P均<0.01)。结论 CoCl_2诱导的缺氧HLECs中ILK表达增高;抑制ILK表达后,HLECs中EMT标志蛋白表达下调,EMT过程受到抑制。 展开更多
关键词 整合素连接激酶 晶状体上皮细胞 上皮-间充质转化 Α-平滑肌肌动蛋白 纤维连接蛋白 氯化钴
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前列消癥汤对前列腺癌PC-3细胞上皮-间充质转化的影响
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作者 张奇 于慧兰 +3 位作者 刘昭文 祁雷磊 巩瑛杰 宋竖旗 《中国医药导报》 CAS 2022年第34期34-38,共5页
目的探讨前列消癥汤对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及上皮-间充质转化的影响。方法选取前列腺癌PC-3细胞作为研究对象,设置空白组、阳性药组(PC-SPESⅡ62.3μl/100 ml)及前列消癥汤低(62.5μl/100 ml)、中(125.0μl/100 ml)、高(250.0μl... 目的探讨前列消癥汤对前列腺癌PC-3细胞侵袭、迁移及上皮-间充质转化的影响。方法选取前列腺癌PC-3细胞作为研究对象,设置空白组、阳性药组(PC-SPESⅡ62.3μl/100 ml)及前列消癥汤低(62.5μl/100 ml)、中(125.0μl/100 ml)、高(250.0μl/100 ml)剂量组。采用侵袭、划痕实验观察五组细胞侵袭和迁移变化。采用蛋白质印迹法及PCR测定上皮-间充质转化相关蛋白与基因表达。结果前列消癥汤中、高剂量组侵袭细胞计数、迁移率低于空白组及前列消癥汤低剂量组,前列消癥汤高剂量组侵袭细胞计数低于前列消癥汤中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。前列消癥汤低、中、高剂量组神经钙黏素蛋白表达低于空白组,前列消癥汤低、高剂量组SLUG蛋白表达低于空白组,前列消癥汤高剂量组SLUG蛋白表达低于前列消癥汤中剂量组,前列消癥汤高剂量组上皮钙黏素蛋白表达高于空白组及前列消癥汤低、中剂量组,差异有高度统计学意义(P<0.01)。前列消癥汤低、中剂量组SLUG、TWIST、神经钙黏素基因表达均低于空白组,前列消癥汤高剂量组上皮钙黏素基因表达高于空白组及前列消癥汤低、中剂量组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论前列消癥汤可能通过调控PC-3细胞上皮-间充质转化抑制肿瘤细胞侵袭和迁移,延缓转移性前列腺癌的进展。 展开更多
关键词 前列消癥汤 前列腺癌 PC-3细胞 上皮-间充质转化
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缓激肽对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化的影响 被引量：3
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作者 梁秀玮 何梦梅 +4 位作者 蔡雯婷 张瑞玲 金惠子 范佳淇 于靖 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第11期1005-1009,共5页
目的制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)细胞模型,研究缓激肽(bradykinin,BK)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞发生... 目的制作增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation,EMT)细胞模型,研究缓激肽(bradykinin,BK)对视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞发生EMT的影响,并探讨BK对PVR的影响机制。方法体外培养人RPE细胞株ARPE-19细胞,采用不同浓度转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)分别作用于ARPE-19细胞24 h、48 h,于倒置显微镜下观察细胞形态变化;采用CCK-8检测细胞增殖情况,确定TGF-β1浓度及作用时间;利用Western blot和细胞免疫荧光检测EMT标志蛋白E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和波形蛋白(Viminten)表达情况;细胞划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移能力。同时采用Western blot检测TGF/Smad通路下游pSmad3和Smad7的表达。结果TGF-β1刺激ARPE-19细胞后可以成功诱导EMT体外细胞模型。当TGF-β1浓度为10μg·L^(-1)、作用时间为48 h时,细胞增殖最明显。BK在TGF-β1诱导的EMT中可以降低α-SMA、Viminten的表达,升高E-钙黏素的表达并且降低细胞迁移能力。这些影响能被BK-2受体拮抗剂HOE-140逆转。TGF-β1诱导ARPE-19细胞发生EMT时,pSmad3表达量升高;TGF-β1刺激前给予BK刺激,pSmad3表达量减少;加入BK前预敷HOE-140,然后给予TGF-β1刺激,BK作用减弱,pSmad3表达量升高。Smad7表达趋势与pSmad3表达趋势相反。结论10μg·L-1 TGF-β1可导致ARPE49细胞发生EMT。BK通过TGF-/Smad信号通路上调Smad7的表达、下调pSmad3的表达,从而逆转TGF-β1诱导的EMT。提示BK可能是一种新的、有效的治疗PVR的方法。 展开更多
关键词 缓激肽 转化生长因子-Β1 视网膜色素上皮细胞 上皮间充质转化
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抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮-间充质转化的研究进展
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作者 李铎 沈涵 +1 位作者 袁松涛 刘庆淮 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2018年第12期2160-2164,共5页
视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是增殖性玻璃体视网膜疾病(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的主要发病机制,也是治疗脉络膜新生血管(choroidal neo... 视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)的上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是增殖性玻璃体视网膜疾病(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的主要发病机制,也是治疗脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)时,造成抗血管内皮生长因子(anti-vascular endothelial growth factor,anti-VEGF)疗效降低的重要因素。除此之外,随着细胞替代治疗作为年龄相关性黄斑变性(age-related macular degeneration,ARMD)的新型治疗方式而兴起,人类胚胎干细胞(hESC-RPE)、体细胞诱导多能干细胞(iPSC-RPE)定向诱导分化的RPE细胞以及来自于流产胎儿的胎儿视网膜色素上皮细胞(fetal RPE,fRPE)逐渐受到了研究者们的关注。为了发挥最好的治疗效果,保证治疗用细胞的稳定增殖及高效分化是极其重要的。但是在传代扩增的过程中,由于上皮间充质转化的存在,导致这些细胞出现增殖困难以及再分化能力下降,从而影响治疗效果并阻碍了治疗人群的普及,使细胞替代治疗难以推广。所以,鉴于上皮间充质转化在视网膜疾病的发生和治疗中都造成了重要影响,抑制视网膜色素上皮细胞发生上皮间充质转化就显得尤为重要,为此,我们将阻止上皮间充质转化研究的最新进展综述如下。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 上皮间充质转化 综述
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基于上皮-间质转化标记的循环肿瘤细胞表型检测对原发性乳腺癌的预后评估意义 被引量：6
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作者 李军成 何升东 +3 位作者 孙鹏 黄涛 李凌帆 薛刚 《成都医学院学报》 CAS 2021年第2期165-168,172,共5页
目的探讨基于上皮-间质转化(EMT)标记的循环肿瘤细胞(CTCs)表型检测对原发性乳腺癌的预后评估意义。方法回顾性分析16例具有化疗前后两次Canpatrol CTCs分型与计数结果的乳腺癌患者的临床病理及生存资料。结果肿瘤直径越大者(P=0.021)... 目的探讨基于上皮-间质转化(EMT)标记的循环肿瘤细胞(CTCs)表型检测对原发性乳腺癌的预后评估意义。方法回顾性分析16例具有化疗前后两次Canpatrol CTCs分型与计数结果的乳腺癌患者的临床病理及生存资料。结果肿瘤直径越大者(P=0.021)、淋巴结有转移者(P=0.017)、TNM分期越高者(P=0.020)的化疗前CTCs数量更多;P53阳性者(P=0.003)、表皮生长因子受体(EGFR)阳性者(P=0.027)的化疗前CTCs表型以混合型为主;复发/转移者的化疗后CTCs数量较多(P<0.001),且表型以混合型为主(P=0.041);化疗后CTCs表型以混合型为主的患者总体预后较差(DFS:P=0.021,OS:P=0.061)。化疗后CTCs总数减少者的预后较好,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于EMT的CTCs表型检测对原发性乳腺癌预后具有预测价值,并能为治疗方案的选择、疗效的评估提供重要信息。 展开更多
关键词 原发性乳腺癌 循环肿瘤细胞 上皮-间质转化 预后
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养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产小鼠子宫内膜上皮细胞间质转化及蜕膜化的作用研究
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作者 姚伟洁 闫仕祺 +2 位作者 袁偲偲 贡磊磊 冯欣 《中国药物警戒》 2024年第5期547-552,共6页
目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(... 目的探讨养血安胎方调节自噬改善复发性自然流产(RSA)小鼠子宫内膜上皮细胞-间质转化(EMT)及蜕膜化的作用。方法构建肾虚血瘀型RSA小鼠以及正常妊娠小鼠,正常妊娠小鼠分别腹腔注射2 mg·kg^(-1)雷帕霉素(Rapa)溶液或15 mg·kg^(-1)3-甲基腺嘌呤(3-MA)溶液进行干预;另设置相同方法处理的RSA小鼠、Rapa及3-MA干预的小鼠组,并同时灌胃给药浓度为28.08 g·kg^(-1)的养血安胎溶液进行干预,收集小鼠子宫内膜。通过Western blot法测定小鼠子宫内膜EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、N-cadherin和Fibronectin的表达,以及蜕膜化相关蛋白BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的表达。结果与正常妊娠组比较,RSA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;Rapa组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著增加,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著降低;3-MA组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,HOXA10的蛋白表达显著增加。与RSA组比较,RSA+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。与Rapa组比较,Rapa+养血安胎组小鼠子宫内膜中E-cadherin的蛋白表达显著降低,Vimentin、N-cadherin、Fibronectin、BMP2、HOXA10、PRL和IGFBP1的蛋白表达均显著增加。结论养血安胎方能够抑制自噬,从而促进妊娠小鼠子宫内膜的EMT及蜕膜化过程,降低流产率。 展开更多
关键词 养血安胎方 雷帕霉素 3-甲基腺嘌呤 复发性自然流产 自噬 胚胎植入 上皮细胞-间质转化 蜕膜化 中药复方 小鼠
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肾小管上皮细胞表型转化在肾小管间质纤维化中的作用 被引量：10
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作者 何玉华 冯梅 +2 位作者 梁勇 李飞燕 叶传蕙 《中国中西医结合肾病杂志》 2005年第5期308-310,共3页
关键词 肾小管 上皮细胞 表型转化 间质纤维化 TIF 肾脏疾病
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止消通脉宁干预转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究 被引量：4
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作者 杨丽霞 李晓东 +3 位作者 程涛 刘铜华 吴丽丽 Margetts Peter Joseph 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2013年第1期37-39,42,共4页
目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空... 目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)表型转化的影响,并探讨其机制。方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β110 ng/mL)、空白血清对照组(TGF-β110 ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF-β110 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清)、干预2组(TGF-β110 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清)、干预3组(TGF-β110 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清)。药物干预24 h后,免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和纤连蛋白(FN)的含量。结果正常HK-2细胞表达E-cadherin,不表达α-SMA,经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变,E-cadherin的表达明显减弱,α-SMA表达明显增强,且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。止消通脉宁药物血清干预后α-SMA表达明显减弱,E-cadherin表达明显增强;同时抑制了ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌,与TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论止消通脉宁在一定程度上能够抑制人肾小管上皮细胞表型转化,减少细胞外基质成分的分泌,具有防治肾间质纤维化的作用。 展开更多
关键词 止消通脉宁 转化生长因子-β1 人肾小管上皮细胞 表型转化 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 纤连蛋白
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胃癌组织来源MSC以旁分泌方式促进胃癌细胞系HGC-27增殖、迁移及上皮-间质转化 被引量：2
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作者 王梅 黄锋 +5 位作者 朱梦楚 蔡洁 杨婷婷 张强 钱晖 许文荣 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期672-675,共4页
目的研究胃癌组织来源的间充质干细胞(GC-MSC)培养上清液对胃癌细胞系HGC-27的作用。方法以GC-MSC培养的上清液和HGC-27常规培养基等体积混合配制后培养的HGC-27作为处理组;GC-MSC培养基与高糖DMEM培养基等体积混合配制后培养的HGC-27... 目的研究胃癌组织来源的间充质干细胞(GC-MSC)培养上清液对胃癌细胞系HGC-27的作用。方法以GC-MSC培养的上清液和HGC-27常规培养基等体积混合配制后培养的HGC-27作为处理组;GC-MSC培养基与高糖DMEM培养基等体积混合配制后培养的HGC-27作为对照组。收集处理组与对照组中HGC-27细胞,用平板克隆形成和MTT增殖试验检测细胞增殖能力;Transwell法检测细胞迁移能力;western blot检测细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白质的表达。结果处理组HGC-27细胞的克隆形成能力、细胞增殖活力和迁移能力均明显强于对照组(P均<0.01)。EMT相关蛋白检测分析显示,处理组HGC-27细胞中vimentin、N-cadherin和α-SMA蛋白表达水平显著增高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P均<0.01)。结论GC-MSC可通过旁分泌的作用方式促进胃癌细胞的增殖、迁移及EMT。 展开更多
关键词 肿瘤微环境 间充质干细胞 旁分泌 胃癌 上皮-间质转化
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转化生长因子-β_2(TGF-β_2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义 被引量：4
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作者 刘亚军 闫峰 +2 位作者 叶巍 朱欣悦 黄振平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第11期1001-1005,共5页
目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后... 目的探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义。方法使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达。采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L^(-1))刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达。结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变。在一定浓度范围内(1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。TGF-β2在一定浓度范围内(0μg·L^(-1)、1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1))以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L^(-1)、5μg·L^(-1)、10μg·L^(-1)组与对照组(0μg·L^(-1))相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L^(-1)时miRNA-29b表达量最低。TGF-β2在一定时间范围内(0 h、3 h、6 h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3 h、6 h、12 h、24 h、48 h组与0 h相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础。 展开更多
关键词 人视网膜色素上皮层细胞 上皮-间质转分化 转化生长因子-Β2 miRNA-29b 增生性玻璃体视网膜病变
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Wnt-7a蛋白通过wnt/β-catenin通路抑制单侧输尿管梗阻小鼠肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化 被引量：3
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作者 王国勤 包佩玲 +3 位作者 芮宏亮 杨敏 程虹 谌贻璞 《中国中西医结合肾病杂志》 2015年第7期579-582,I0002,共5页
目的:观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用及其可能机制。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,术后7 d行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾组织E-钙黏素、α... 目的:观察Wnt-7a蛋白对单侧输尿管梗阻模型小鼠肾脏纤维化的拮抗作用及其可能机制。方法:雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、UUO模型组和Wnt-7a蛋白治疗组,术后7 d行Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化染色检测肾组织E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白、波形蛋白的表达,免疫印迹法测定肾皮质中E-钙黏素、α-平滑肌肌动蛋白及β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白质表达。结果:与模型组相比,治疗组肾组织间质纤维化相对面积显著减少,α-平滑肌肌动蛋白及波形蛋白的表达显著减少,E-钙黏素表达显著增多(P<0.05)。同时,治疗组肾组织中β-catenin表达较模型组显著减少(P<0.05)。结论:Wnt-7a蛋白可以抑制肾脏上皮细胞-间充质细胞转分化的发生而减轻肾脏纤维化,其可能是通过抑制经典的wnt/β-catenin通路。 展开更多
关键词 Wnt-7a 单侧输尿管梗阻模型 上皮细胞-间充质细胞转分化 肾间质纤维化
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