目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根...目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据转染质粒将实验细胞分为:miR-24高表达组、miR-24干扰组和空白质粒对照组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力,人工基底膜检测细胞的管腔形成能力;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测eNOS和Sp1转录因子m RNA和蛋白表达水平。结果:(1)与空白质粒对照组比较,miR-24高表达组细胞增殖能力降低45.45%(0.36±0.04 vs 0.66±0.08,P<0.05);miR-24高表达组细胞迁移速度明显减缓,且迁移数目降低74.75%(30.25±3.78 vs 119.80±10.94,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。(2)与空白质粒对照组比,miR-24高表达组eNOS m RNA降低46.2%(0.49±0.02vs 0.91±0.01,P<0.05),蛋白表达减少49.07%(0.55±0.05 vs 1.08±0.05,P<0.05);同时Sp1 m RNA降低44.9%(0.49±0.01 vs 0.89±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量也相应减少54.90%(0.46±0.02 vs 1.02±0.04,P<0.05)。在miR-24抑制组中,上述指标较空白质粒对照组降低,但比miR-24高表达组显著升高,特别是小管形成数量、及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:miR-24显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并且与miR-24对eNOS的表达调控有关;miR-24明显抑制eNOS表达,Sp1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。展开更多
的 在新生鼠缺氧性脑损伤的模型基础上 ,测定损伤脑组织细胞内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)与结构型一氧化氮合酶 (c NOS)的 m RNA表达变化 ,以期阐明它们在发病中的作用。方法 取新生 SD鼠随机分组制作模型并行病理鉴定 ;采用 RT- PC...的 在新生鼠缺氧性脑损伤的模型基础上 ,测定损伤脑组织细胞内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)与结构型一氧化氮合酶 (c NOS)的 m RNA表达变化 ,以期阐明它们在发病中的作用。方法 取新生 SD鼠随机分组制作模型并行病理鉴定 ;采用 RT- PCR测定脑缺氧时脑组织细胞内 i NOS m RNA、c NOS m RNA表达的变化。辉度扫描获取数值。结果 鼠缺氧 1h后脑组织中 c NOS m RNA表达显著上升 (P<0 .0 1) ,4 h组较前下降 (P<0 .0 1) ,但仍显著高于对照组 (P<0 .0 1)。鼠缺氧 1h后脑组织中 i NOS m RNA表达与对照组相比有所上升 ,但无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,4 h组表达明显上升 (P<0 .0 1) ,与前 2组相比有显著差别 (P<0 .0 1)。结论 脑缺氧早期 c NOS m RNA表达增加 ,由其合成的 NO对受损脑组织可能起保护作用 ;晚期i NOS m RNA表达明显增加 ,其所产生的展开更多
文摘目的:探讨微小核糖核酸(microRNA)-24(miR-24)对内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因表达调节的分子机制及其对血管内皮细胞增殖、迁移和管腔形成能力的影响。方法:构建miR-24及其反义序列的高表达质粒,分别转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),根据转染质粒将实验细胞分为:miR-24高表达组、miR-24干扰组和空白质粒对照组。用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测HUVECs增殖能力,划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力,人工基底膜检测细胞的管腔形成能力;分别用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测eNOS和Sp1转录因子m RNA和蛋白表达水平。结果:(1)与空白质粒对照组比较,miR-24高表达组细胞增殖能力降低45.45%(0.36±0.04 vs 0.66±0.08,P<0.05);miR-24高表达组细胞迁移速度明显减缓,且迁移数目降低74.75%(30.25±3.78 vs 119.80±10.94,P<0.01),未能形成明显管腔样结构。(2)与空白质粒对照组比,miR-24高表达组eNOS m RNA降低46.2%(0.49±0.02vs 0.91±0.01,P<0.05),蛋白表达减少49.07%(0.55±0.05 vs 1.08±0.05,P<0.05);同时Sp1 m RNA降低44.9%(0.49±0.01 vs 0.89±0.02,P<0.05),其蛋白质表达量也相应减少54.90%(0.46±0.02 vs 1.02±0.04,P<0.05)。在miR-24抑制组中,上述指标较空白质粒对照组降低,但比miR-24高表达组显著升高,特别是小管形成数量、及管腔长度与空白质粒对照组相近。结论:miR-24显著抑制HUVECs的增殖、迁移和管腔形成的能力,并且与miR-24对eNOS的表达调控有关;miR-24明显抑制eNOS表达,Sp1的参与可能是这一调节过程的重要分子机制之一。
文摘的 在新生鼠缺氧性脑损伤的模型基础上 ,测定损伤脑组织细胞内诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)与结构型一氧化氮合酶 (c NOS)的 m RNA表达变化 ,以期阐明它们在发病中的作用。方法 取新生 SD鼠随机分组制作模型并行病理鉴定 ;采用 RT- PCR测定脑缺氧时脑组织细胞内 i NOS m RNA、c NOS m RNA表达的变化。辉度扫描获取数值。结果 鼠缺氧 1h后脑组织中 c NOS m RNA表达显著上升 (P<0 .0 1) ,4 h组较前下降 (P<0 .0 1) ,但仍显著高于对照组 (P<0 .0 1)。鼠缺氧 1h后脑组织中 i NOS m RNA表达与对照组相比有所上升 ,但无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,4 h组表达明显上升 (P<0 .0 1) ,与前 2组相比有显著差别 (P<0 .0 1)。结论 脑缺氧早期 c NOS m RNA表达增加 ,由其合成的 NO对受损脑组织可能起保护作用 ;晚期i NOS m RNA表达明显增加 ,其所产生的
