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人参皂苷酶Ⅲ型转化制备人参稀有皂苷Gyp17和Gyp75 被引量:3
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作者 庄子瑜 刘春莹 +3 位作者 李秋宏 李鹏飞 徐龙权 鱼红闪 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期42-47,共6页
为了高效制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75,利用大肠杆菌克隆表达人参皂苷酶Ⅲ型酶,转化低活性人参皂苷Rb1,制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75。结果表明,将20 g/L的Rb1皂苷在37℃酶反应24 h,4 g Rb1底物制备了3.1 g稀有皂苷Gyp17,其摩尔得率为... 为了高效制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75,利用大肠杆菌克隆表达人参皂苷酶Ⅲ型酶,转化低活性人参皂苷Rb1,制备稀有人参皂苷Gyp17和Gyp75。结果表明,将20 g/L的Rb1皂苷在37℃酶反应24 h,4 g Rb1底物制备了3.1 g稀有皂苷Gyp17,其摩尔得率为90.8%。5 g/L的皂苷Rb1在37℃酶反应60 h,4 g Rb1底物制备了2.1 g Gyp75单体和0.45 g Gyp17单体,其摩尔得率分别为74.2%和13.1%。经HPLC检测,所得到Gyp75和Gyp17皂苷单体纯度均在90%以上。该研究为人参稀有皂苷Gyp17和Gyp75的产业化提供依据。 展开更多
关键词 人参皂苷 生物转化 人参皂苷Gyp17 人参皂苷Gyp75 人参皂苷RB1
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模拟微重力对肺微血管内皮细胞窖蛋白-1和内皮型一氧化氮合酶表达的影响 被引量:5
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作者 康春燕 袁明 +4 位作者 邹琳 章烨 李天志 王俊锋 刘长庭 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1322-1324,共3页
目的探讨回转模拟微重力对肺微血管内皮细胞(PMVEC)窖蛋白-1(caveolin-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法以肺微血管内皮细胞为研究对象,采用回转器模拟微重力效应。将细胞分为回转12h组、回转24h组(在30r/min条件下回转培... 目的探讨回转模拟微重力对肺微血管内皮细胞(PMVEC)窖蛋白-1(caveolin-1)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法以肺微血管内皮细胞为研究对象,采用回转器模拟微重力效应。将细胞分为回转12h组、回转24h组(在30r/min条件下回转培养12、24h),以及对照12h组、对照24h组(放置于细胞回转器旁静置培养12、24h)。采用Griess法检测细胞的NO释放量,透射电镜观察细胞胞膜窖的超微结构变化,Western blotting检测eNOS和caveolin-1的表达。结果回转12h组较对照12h组NO产量和eNOS蛋白表达均有增加,回转24h组较对照24h组NO产量和eNOS蛋白表达也有增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。由透射电镜可见,对照12h组和对照24h组PMVEC细胞膜表面均可见典型的希腊字母Ω状胞膜窖,较丰富,结构清晰;回转12h组PMVEC细胞膜上胞膜窖的结构破坏,数量减少;回转24h组PMVEC细胞膜上很难发现胞膜窖的特征性结构,数量进一步减少。Western blotting检测发现,回转12h组与对照12h组相比,回转24h组与对照24h组相比,PMVEC中caveolin-1表达均显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论回转模拟微重力可抑制肺微血管内皮细胞中caveolin-1的表达,增强eNOS表达,提高细胞内NO的释放量。 展开更多
关键词 失重模拟 内皮细胞 毛细血管 胞膜窖 窖蛋白1 一氧化氮合
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去乙酰化酶抑制剂VPA对巨噬细胞极化过程的影响 被引量:5
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作者 张颖 白力 +4 位作者 张文兰 尹学红 张伟 庞春艳 王永福 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期307-312,317,共7页
目的:本研究通过分析去乙酰化酶抑制剂对巨噬细胞极化过程中组蛋白修饰的影响,以及对巨噬细胞极化过程的影响,分析去乙酰化酶抑制剂是否可以通过改变巨噬细胞的组蛋白修饰,进而影响巨噬细胞极化的过程,旨在为治疗自身免疫性疾病提供新... 目的:本研究通过分析去乙酰化酶抑制剂对巨噬细胞极化过程中组蛋白修饰的影响,以及对巨噬细胞极化过程的影响,分析去乙酰化酶抑制剂是否可以通过改变巨噬细胞的组蛋白修饰,进而影响巨噬细胞极化的过程,旨在为治疗自身免疫性疾病提供新的思路。方法:利用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和干扰素γ(Interferon-γ,IFN-γ)诱导J774.1巨噬细胞24 h,白细胞介素4(Interleukin-4,IL-4)诱导J774.1巨噬细胞24 h,并在诱导过程中加入2 mmol/L丙戊酸(Valproic acid,VPA),收集巨噬细胞,实时免疫荧光定量PCR和ELISA法检测巨噬细胞极化的特异性标记基因的表达,流式细胞术和细胞免疫荧光法检测组蛋白修饰情况。结果:J774.1细胞经LPS和IFN-γ诱导24 h极化为M1型巨噬细胞;经IL-4刺激24 h极化为M2型巨噬细胞,VPA处理后的M1型巨噬细胞组蛋白H3K9的乙酰化程度升高,标记基因白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、诱导性一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,i NOS)、CC趋化因子配体2[Chemokine(C-C motif)ligand 2,CCL2]的表达量降低,CD86的表达量升高;VPA处理后的M2型巨噬细胞组蛋白H3K9的乙酰化程度也升高,标记基因精氨酸酶(Arginase-1,Arg-1)、Fizz-1(Found in inflammatory zone-1,Fizz-1)、甘露糖受体(CD206)、Ym1的表达量升高。结论:巨噬细胞的极化状态和组蛋白的修饰具有一定的相关性,VPA在M1型巨噬细胞诱导体系中可以促使M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化,但是在M2型巨噬细胞诱导体系中,却抑制了M1型巨噬细胞的特异性基因的表达。 展开更多
关键词 组蛋白修饰 巨噬细胞极化 去乙酰化抑制剂 M1巨噬细胞 M2巨噬细胞
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炎症因子IFN-γ调控小鼠成肌细胞FoxO1乙酰化及活性的机制研究 被引量:1
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作者 方明明 吴晓燕 +1 位作者 李平 袁艺标 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1316-1320,共5页
目的 :在炎症信号IFN-γ作用下,研究小鼠成肌细胞(C2C12)内Fox O1的活性和乙酰化水平的改变,探讨炎症在2型糖尿病发病过程中的机制。方法:免疫共沉淀分析Ⅲ型脱乙酰化酶沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)激动剂... 目的 :在炎症信号IFN-γ作用下,研究小鼠成肌细胞(C2C12)内Fox O1的活性和乙酰化水平的改变,探讨炎症在2型糖尿病发病过程中的机制。方法:免疫共沉淀分析Ⅲ型脱乙酰化酶沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)激动剂白藜芦醇对IFN-γ升高Fox O1乙酰化水平的影响。通过荧光素酶报告基因活性实验分析IFN-γ、CⅡTA对Fox O1转录活性的影响,同时用小RNA干扰内源性CⅡTA后再检测IFN-γ作用下Fox O1转录活性的改变。结果:蛋白实验显示,IFN-γ处理后Fox O1乙酰化水平明显升高,白藜芦醇降低该效应。报告基因实验显示IFN-γ抑制野生型Fox O1的转录活性,对赖氨酸突变的Fox O1作用不大。过表达CⅡTA抑制了Fox O1靶基因FHRE启动子的活性,且在同时转染Fox O1时抑制60%左右。IFN-γ抑制Fox O1的转录活性,内源性CⅡTA干扰后再给予IFN-γ,抑制作用消失。结论 :IFN-γ通过激活CⅡTA降低SIRT1酶活性,使SIRT1对Fox O1的去乙酰化作用减弱,提高了Fox O1乙酰化水平,抑制了Fox O1的转录活性。本研究为临床2型糖尿病的治疗提供了新思路。 展开更多
关键词 IFN-Γ CⅡTA 乙酰化(SIRT1) FOX O1
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SIRT-1在不同宫颈组织中的表达及其临床意义 被引量:5
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作者 张惠文 马德花 +1 位作者 张磊 赵淑萍 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期697-701,共5页
目的:探讨Ⅲ型去乙酰化酶SIRTUIN1(SIRT-1)蛋白在正常宫颈组织及不同级别宫颈病变组织中的表达及其临床意义。方法:应用Western-blot方法及免疫组化(SP)法检测正常宫颈组织(24例)、低级别鳞状上皮内病变组织(LSIL)26例、高级别鳞状上皮... 目的:探讨Ⅲ型去乙酰化酶SIRTUIN1(SIRT-1)蛋白在正常宫颈组织及不同级别宫颈病变组织中的表达及其临床意义。方法:应用Western-blot方法及免疫组化(SP)法检测正常宫颈组织(24例)、低级别鳞状上皮内病变组织(LSIL)26例、高级别鳞状上皮内病变组织(HSIL)35例及宫颈癌组织55例中SIRT-1蛋白的表达情况;并分析SIRT-1蛋白的表达与宫颈癌组织各临床病理参数间的关系。结果:(1)SIRT-1蛋白的高表达率在正常宫颈组织为0、LSIL为15.38%、HSIL为37.14%及宫颈癌组织为40.00%,差异有统计学意义(χ~2=16.82,P<0.05);(2)宫颈癌组织中SIRT-1蛋白的高表达率在不同组织学分化程度(G1~G3)(χ~2=6.87,P<0.05)、有无淋巴结转移(χ~2=7.73,P<0.05)、不同临床分期(χ~2=7.39,P<0.05)间差异均有统计学意义。结论:SIRT-1随宫颈病变的加重表达逐渐增强,与宫颈癌组织学分化程度、有无淋巴结转移、临床分期有关。可能在宫颈癌的发生和发展过程中起促进作用。 展开更多
关键词 ⅲ型去乙酰化酶sirtuin1 免疫组化 宫颈病变 宫颈癌
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胰腺癌细胞PANC-1中LSD1负向调控抑癌基因SIRT3的实验研究 被引量:5
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作者 徐近 秦毅 +5 位作者 张波 吉顺荣 许文彦 施思 刘江 虞先濬 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期87-92,共6页
背景与目的:组蛋白赖氨酸去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)是重要的染色质修饰蛋白之一,可以通过调节染色质的结构调节基因的转录调控,进而影响肿瘤的发生、发展、侵袭、转移以及代谢异常等恶性潜能,是判断肿瘤预后的... 背景与目的:组蛋白赖氨酸去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)是重要的染色质修饰蛋白之一,可以通过调节染色质的结构调节基因的转录调控,进而影响肿瘤的发生、发展、侵袭、转移以及代谢异常等恶性潜能,是判断肿瘤预后的生物标志物。Sirtuins家族去乙酰化酶3(sirtuin3,SIRT3)基因是位于线粒体内的抑癌基因,通过调控肿瘤代谢异常以及氧化损伤行使抑癌基因的功能。本研究通过基因转录调控的手段,研究胰腺癌细胞PANC-1中LSD1与SIRT3的关系。方法:通过RNA干扰(RAN interference,RNAi)、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CoIP)、染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation assay,ChIP)及启动子活性分析等分子生物学实验手段,探讨LSD1与SIRT3在PANC-1细胞中的关系。结果:通过RNAi的手段干扰LSD1的表达,发现SIRT3基因转录水平和蛋白水平明显上升;通过蛋白相互作用的手段,发现LSD1可以与SIRT3转录调控的重要转录因子过氧化物酶增殖体激活受体辅激动子-1α(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,coactivator 1 alpha,PGC-1α)相互作用;通过ChIP方法,发现LSD1与PGC-1α共同募集到SIRT3基因的启动子区域染色质上;通过启动子活性分析,发现LSD1基因可以显著抑制PGC-1α对SIRT3基因的转录调控。结论:LSD1可以表观遗传调控抑癌基因SIRT3的转录,为深入研究LSD1与肿瘤代谢异常以及氧化应激提供了理论依据。 展开更多
关键词 胰腺癌 PANC-1 组蛋白赖氨酸去甲基化1 过氧化物增殖体激活受体辅激动子-1α sirtuins家族去乙酰化3 表观遗传调控
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激素抵抗型哮喘发病机制的研究进展 被引量:9
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作者 朱桂萍(综述) 叶伶 金美玲(审校) 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期680-684,共5页
激素抵抗型哮喘治疗困难,一直是哮喘研究的重点和难点。研究发现糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)异常、组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase,HDAC2)活性降低等经典机制在激素抵抗型哮喘发病中起重要作用。此外,Th细胞免... 激素抵抗型哮喘治疗困难,一直是哮喘研究的重点和难点。研究发现糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)异常、组蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase,HDAC2)活性降低等经典机制在激素抵抗型哮喘发病中起重要作用。此外,Th细胞免疫失衡、感染、肥胖及非编码RNA、细胞自噬等因素在激素抵抗型哮喘中的作用也是近年研究的热点。本文对以上激素抵抗型哮喘发病机制的研究进展予以综述,以提高对激素抵抗型哮喘的认识,为未来的治疗提供方向。 展开更多
关键词 激素抵抗哮喘 糖皮质激素受体(GR) 组蛋白去乙酰化2(HDAC2) TH1 TH17 感染 肥胖
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乳腺癌转移抑制因子1的研究进展 被引量:1
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作者 朱佳芳 顾鸣敏 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期121-125,共5页
乳腺癌转移抑制因子1(BRMS1)能抑制肿瘤转移并与肿瘤预后密切相关。BRMS1的卷曲螺旋结构能与分选连接蛋白6(SNX6)富含AT的结构域一起形成六聚体,而核定位信号2(NLS2)帮助BRMS1发挥转移抑制作用。BRMS1作为mSin3:组蛋白去乙酰化酶复合体(... 乳腺癌转移抑制因子1(BRMS1)能抑制肿瘤转移并与肿瘤预后密切相关。BRMS1的卷曲螺旋结构能与分选连接蛋白6(SNX6)富含AT的结构域一起形成六聚体,而核定位信号2(NLS2)帮助BRMS1发挥转移抑制作用。BRMS1作为mSin3:组蛋白去乙酰化酶复合体(mSin3:HDAC)中的一员,能抑制核转录因子-κB(NF-κB)及其下游的尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、骨桥蛋白(OPN)和表皮生长因子受体(EGFR)等信号通路,恢复同型间细胞连接蛋白的表达,促进或抑制肿瘤转移相关的miRNA表达,从而对卵巢癌、黑色素瘤、非小细胞肺癌等多种肿瘤的转移起到抑制作用。该文对有关BRMS1介导的抑制肿瘤转移及其主要机制作一综述。 展开更多
关键词 乳腺癌转移抑制因子1 mSin3 组蛋白去乙酰化复合体 核转录因子-ΚB 尿激纤溶原激活剂 骨桥蛋白
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