携载人基质金属蛋白酶组织抑制剂-2基因重组腺病毒载体的构建 被引量：1

1

作者 赵新 景在平 +1 位作者 廖明芳 张素贞 《介入放射学杂志》 CSCD 2003年第4期287-290,共4页

目的　构建携载人基质金属蛋白酶组织抑制剂 2 (hTIMP 2 )基因的重组腺病毒载体 ,为基因治疗提供实验基础。方法　利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1以及线性化的重组穿梭质粒 pTrack CMV hTIMP 2共转化BJ5 183受体菌并在其... 目的　构建携载人基质金属蛋白酶组织抑制剂 2 (hTIMP 2 )基因的重组腺病毒载体 ,为基因治疗提供实验基础。方法　利用基因重组技术将腺病毒骨架质粒 pAdEasy 1以及线性化的重组穿梭质粒 pTrack CMV hTIMP 2共转化BJ5 183受体菌并在其中发生同源重组 ,利用重组前后抗性的改变筛选出重组子 ,重组腺病毒质粒AdhTIMP 2经过 2 93细胞的包装 ,扩增和纯化后 ,测定病毒滴度。一步法提取细胞总RNA ,RT PCR检测hTIMP 2的mRNA。收集细胞上清 ,进行Western杂交检测TIMP 2蛋白。结果　得到了携带hTIMP 2基因的重组腺病毒 ,纯化后滴度为 4× 10 11pfu/ml,应用RT PCR和Westernblot方法 ,在转染 2 93细胞后 2 4h即可检测到hTIMP 2的表达。结论　成功地构建了携带hTIMP 2的重组腺病毒载体 ,为下一步的基因治疗提供了基础。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶组织抑制剂-2 基因重组 腺病毒载体 基因治疗 RT-PCR Western BLOT

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选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化影响的实验研究 被引量：2

2

作者 郭远林 陈纪林 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期148-151,共4页

目的:观察选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法:8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠分为塞来昔布(celecoxib)组及安慰剂组,均予高脂饮食喂养,分别以特异性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布及安慰剂灌胃8周;同... 目的:观察选择性环氧化酶-2抑制剂对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展的影响。方法:8周龄载脂蛋白E基因敲除小鼠分为塞来昔布(celecoxib)组及安慰剂组,均予高脂饮食喂养,分别以特异性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布及安慰剂灌胃8周;同龄野生型小鼠为正常对照组。酶法分析测定血脂,油红O染色观察主动脉根部粥样硬化斑块大小。结果:塞来昔布组与安慰剂组之间实验前后血脂水平均无差异,但均高于正常对照组(胆固醇水平P<0.01,甘油三酯水平P<0.05)。油红O染色显示,塞来昔布组及安慰剂组可见明显粥样硬化斑块形成;前者的斑块面积及斑块面积/原管腔面积均较后者显著降低(P均<0.01)。结论:用选择性环氧化酶-2抑制剂塞来昔布进行抗炎干预可抑制动脉粥样硬化的进展,其机制与调脂无关。针对炎症机制有望有效控制动脉粥样硬化的发生发展。 展开更多

关键词 选择性环氧化酶-2抑制剂 载脂蛋白E 基因敲除 小鼠 动脉粥样硬化 塞来昔布

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基质金属蛋白酶-2组织抑制剂基因多态性与慢性阻塞性肺病易感性研究 被引量：2

3

作者 王伟 徐敏 胡克 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第22期3812-3814,共3页

目的:研究基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)基因多态性与慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性。方法:采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP... 目的:研究基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases-2,TIMP-2)基因多态性与慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)易感性。方法:采用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测92例COPD患者(COPD组)及80例健康对照者(对照组)TIMP-2基因启动子区域(-418位点)和外显子3区域(+853位点)单核苷酸多态性(SNPs),统计各基因型频率进行分析比较。结果:TIMP-2基因+853位点COPD组基因型频率为G/G83.7%、G/A15.2%、A/A1.1%,基因型分布两组间差异有显著性(P=0.002);等位基因G在COPD组为91.3%,对照组为78.1%,等位基因频率相比两组差异有显著性(P=0.001);-418位点基因型和等位基因频率分布在两组间差异无显著性(P>0.05)。结论:(1)TIMP-2基因+853位点G/A等位基因改变在吸烟时与COPD易感性相关。(2)TIMP-2基因-418位点等位基因G/C的改变与COPD易感性无关。 展开更多

关键词 肺疾病 慢性阻塞性 基质金属蛋白酶-2组织抑制剂 基因多态性

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广东汉族人纤溶酶原激活剂抑制物-1基因4G/5G多态性与2型糖尿病肾病的相关性 被引量：3

4

作者 刘仕群 薛耀明 +2 位作者 杨光彩 何飞英 赵小山 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第8期904-907,共4页

目的探讨纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)基因4G/5G多态性与广东汉族人2型糖尿病肾病(DN)发病的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析,对147例病史7年以上的2型糖尿病患者[其中DN患者77例,糖尿病非肾病(DNN)患者70例]和2... 目的探讨纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)基因4G/5G多态性与广东汉族人2型糖尿病肾病(DN)发病的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析,对147例病史7年以上的2型糖尿病患者[其中DN患者77例,糖尿病非肾病(DNN)患者70例]和26名健康人进行了PAI-1基因4G/5G多态性分析.结果DNN组PAI-1基因的4G/4G基因型、基因频率显著高于DN组(x2=13.008,P＜0.01);与5G/5G基因型相比,DNN组PAI-1基因4G/4G型对DN组的比数比为1.447,95%的可信区间:0.533～3.934(P＜0.05),差异有显著性.而DN与DNN组PAI-1基因4G等位基因频率无显著差异(x2=1.22,P＞0.05);结论PAI-1基因4G/4G基因型与广东汉族人2型DN的发病有关联,4G/4G基因型广东汉族2型糖尿病人易发生DN. 展开更多

关键词 纤溶酶原激活剂抑制物-1 基因型 等位基因频率 遗传多态性 2型糖尿病肾病

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血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1基因启动子多态性与2型糖尿病、高血压病、冠心病的关系 被引量：3

5

作者 丁国宪 沈捷 陈家伟 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期4-7,共4页

目的:探讨中国人群中血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)基因变异和2型糖尿病(DM)、高血压病、冠心病的关系。方法:对281例门诊及住院病例,根据口服糖耐量试验(OGTT)分为非DM组(糖耐量正常者,糖耐量低减者)和2型DM组;并根据血压分为... 目的:探讨中国人群中血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)基因变异和2型糖尿病(DM)、高血压病、冠心病的关系。方法:对281例门诊及住院病例,根据口服糖耐量试验(OGTT)分为非DM组(糖耐量正常者,糖耐量低减者)和2型DM组;并根据血压分为高血压病(HT)组和非高血压病(NGT)组。分析他们PAI-1基因启动子多态性。结果:2型DM者和非DM者相比:PAI-1基因型频率及等位基因频率有明显的统计学差异(x2分别为6.0和6.3,P<0.05);在DM组中冠心病者和非冠心病者相比:冠心病者PAI-1基因型频率及等位基因频率具有明显的统计学差异(x2分别为6.9和7.6,P<0.05和P<0.01);非条件多因素Logistic回归发现:冠心病和年龄有显著关系(P<0.001),与PAI-1基因多态性也有显著意义(P<0.01),与肥胖也有明显意义(P<0.05)。结论:PAI-1基因启动子多态性可能是冠心病的遗传因素;PAI-1基因突变可能是2型DM并发冠心病的危险因素;年龄、肥胖可能是冠心病的危险环境因素。 展开更多

关键词 血浆纤溶酶原激活物抑制因子-1 基因启动子 2型糖尿病 高血压病 冠心病 基因变异 DM HT CHD

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基质金属蛋白酶-2及其组织抑制因子在原发性胆囊癌的表达及意义 被引量：2

6

作者 范跃祖 张景涛 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期675-678,共4页

目的:探讨MMP-2、TIMP-2蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法:应用免疫组化SABC法结合图像分析技术,定量检测45例胆囊癌和15例胆囊息肉样病变的MMP-2和TIMP-2蛋白表达。结果:胆囊癌MMP-2表达量显著高于胆囊息肉样病变(P=0.002);MMP-2... 目的:探讨MMP-2、TIMP-2蛋白在原发性胆囊癌的表达及意义。方法:应用免疫组化SABC法结合图像分析技术,定量检测45例胆囊癌和15例胆囊息肉样病变的MMP-2和TIMP-2蛋白表达。结果:胆囊癌MMP-2表达量显著高于胆囊息肉样病变(P=0.002);MMP-2表达与胆囊癌组织学类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肝脏浸润等均无相关性,但不同分期的MMP-2表达量差异显著;胆囊癌TIMP-2表达虽与胆囊息肉样病变无差异(P=0.295),但不同Nevin分期间、浸润深度不同、有无局部淋巴结转移及肝脏浸润的胆囊癌,TIMP-2表达量有显著差异。结论:TIMP-2表达能较准确地反映胆囊癌的生物学特点,在胆囊癌的早期诊断、浸润转移和患者预后有重要的意义。 展开更多

关键词 原发性胆囊癌 基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶组织抑制因子-2 基因表达

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2型糖尿病合并冠心病患者纤溶酶原激动抑制剂-1基因多态性分析 被引量：1

7

作者 王旭东 樊峥 +6 位作者 傅研 殷红 翟艳玲 祁雅慧 朱宇清 王瑾 赵相印 《首都医科大学学报》 CAS 2004年第2期223-226,共4页

为探讨纤溶酶原激活抑制剂 1 (PAI 1 )基因调节区 -675bp位点 4G/5G多态性与 2型糖尿病、2型糖尿病合并冠心病 (CAD)的关系 ,采用特异性引物聚合酶链反应 (PCR)方法 ,测定 4G/5G基因型 ,并检测PAI 1抗原水平 ,共观察了 1 2 1例单纯 2型... 为探讨纤溶酶原激活抑制剂 1 (PAI 1 )基因调节区 -675bp位点 4G/5G多态性与 2型糖尿病、2型糖尿病合并冠心病 (CAD)的关系 ,采用特异性引物聚合酶链反应 (PCR)方法 ,测定 4G/5G基因型 ,并检测PAI 1抗原水平 ,共观察了 1 2 1例单纯 2型糖尿病 (typeⅡdiabetes)患者、87例 2型糖尿病合并CAD患者和 1 0 0例对照者。结果 :合并CAD组的 4G/4G基因型携带者明显高于对照组 ( 4 9.4%比 3 7.0 % ,P <0 .0 5 ) ,CAD组中PAI 1与三酰甘油 (TG)呈正相关 ,并与 4G/5G多态性有关 ,表现为 4G/4G基因型携带者的PAI 1质量浓度明显高于 5G/5G基因型携带者〔( 3 9.82× 1 0 - 3± 3 .1 1× 1 0 - 3)ng/L比 ( 3 8.0 4× 1 0 - 3± 2 .73× 1 0 - 3)ng/L ,P <0 .0 5〕。提示 :PAI 1基因 4G/5G多态性与TG的联合作用与PAI 1抗原水平相关 ,并与 2型糖尿病合并CAD的发病过程有关。 展开更多

关键词 2型糖尿病 冠心病 纤溶酶原激动抑制剂-1 基因多态性

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外泌体miR-574-5P通过下调大肿瘤抑制基因2促进胶质瘤增殖、侵袭和迁移 被引量：4

8

作者 冯瑞军 郑远航 +4 位作者 盛智梅 李可欣 董杰 肖钦沛 张宝刚 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1520-1527,共8页

外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发... 外泌体可参与肿瘤细胞侵袭、迁移和血管生成等生物学过程,而侵袭是胶质瘤患者死亡的主要原因。研究表明,肿瘤细胞分泌的外泌体能够携带miRNA到受体细胞中,调控受体细胞增殖、迁移和侵袭等生物学功能。miR-574-5P在多种肿瘤发生发展中发挥关键作用,但胶质瘤细胞来源的外泌体是否表达miR-574-5P,以及其在胶质瘤细胞生长和侵袭迁移中的作用未见报道。本研究将探讨胶质瘤细胞来源的外泌体miR-574-5P在细胞增殖、迁移和侵袭过程中的作用机制。运用电镜、纳米粒径跟踪和Western印迹表征外泌体。结果显示,所提取的圆形颗粒是外泌体,直径为30~100 nm;经免疫荧光检测外泌体的内化,结果显示,外泌体内化到LN229细胞中;运用生物信息学和网上数据找出胶质瘤细胞来源的外泌体差异miRNA,结果显示,外泌体差异miRNA为miR-574-5P,并预测大肿瘤抑制基因2(LATS2)可能是miR-574-5P的靶基因;双荧光素酶报告基因结果证实,miR-574-5P与LATS2的3′UTR区互补结合;转染实验、qRT-PCR和Western印迹检测miR-574-5P与LATS2的关系,结果显示,过表达miR-574-5P后,LATS2 mRNA的含量与对照组无显著差异(P>0.05),表明miR-574-5P对LATS2的调控作用通过抑制其翻译实现(P<0.05)。转染实验、CCK-8法、Transwell迁移和侵袭实验,检测miR-574-5P对LN229细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果显示,过表达miR-574-5P可显著促进LN229细胞的增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。此外,Western印迹检测信号通路LATS2/YAP关键激酶蛋白质的表达情况,观察外泌体对此信号通路的影响。结果显示,外泌体下调LATS2表达,减少p-YAP磷酸化。综上所述,外泌体miR-574-5P通过靶向下调LATS2,激活LATS2/YAP信号通路,从而促进胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,这可为胶质瘤的诊断和治疗提供一个科学可靠的靶点。 展开更多

关键词 胶质瘤 外泌体 miR-574-5P 大肿瘤抑制基因2

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IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性和免疫抑制治疗疗效的关系 被引量：1

9

作者 曾强 常红 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1500-1504,共5页

目的:探讨IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性及免疫抑制治疗疗效的关系。方法:收集四川大学华西医院血液科确诊的103例汉族再生障碍性贫血患者的静脉血标本,其中有46例患者接受免疫抑制治疗且观察期超过4个月,100例汉族... 目的:探讨IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性及免疫抑制治疗疗效的关系。方法:收集四川大学华西医院血液科确诊的103例汉族再生障碍性贫血患者的静脉血标本,其中有46例患者接受免疫抑制治疗且观察期超过4个月,100例汉族健康成人作为对照组。采用PCR、琼脂糖凝胶电泳和DNA测序法检测再生障碍性贫血患者和健康对照者IL-2-330T/G单核苷酸多态性。结果:再生障碍性贫血组中IL-2-330 GG基因型频率和G等位基因的分布频率分别为12.6%和27.7%,与健康对照组的12.0%和33.5%均无明显差异(P>0.05)。46例再生障碍性贫血患者中,29例免疫抑制治疗有效,其中携带IL-2-330T/G位点GG基因型和G等位基因者的有效率分别为31.0%和64.8%,与携带TT基因型和T等位基因者的48.3%和61.8%相比较,均无明显差异(P>0.05)。结论:IL-2-330T/G基因多态性与再生障碍性贫血遗传易感性和免疫抑制治疗疗效可能无关。 展开更多

关键词 IL-2-330T/G 基因多态性 再生障碍性贫血 免疫抑制治疗

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NDRG2通过抑制β-catenin表达和入核调控乳腺癌细胞增殖 被引量：6

10

作者 周晓雷 朱重悦 +3 位作者 张世光 周志艳 李海潮 邹卫 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期981-988,共8页

背景与目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控... 背景与目的:乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤之一,肿瘤细胞的恶性增殖是造成患者死亡的重要原因。本研究利用具有相同遗传背景但不同增殖能力的乳腺癌细胞模型,研究N-myc下游调节基因2(N-myc downstream regulated gene 2,NDRG2)调控乳腺癌细胞增殖的作用及分子机制。方法:通过蛋白[质]印迹法(Western blot)检测MCF-7/LM-MCF-7细胞中NDRG2蛋白表达水平;构建NDRG2真核表达载体及si RNA干扰片段,通过转染上调或沉默NDRG2表达,流式细胞实验检测细胞增殖能力,Western blot检测β-连环蛋白(β-catenin)表达,免疫荧光染色检测β-catenin细胞定位;共转染MCF-7细胞NDRG2 si RNA和pCMV-Tcfδ,流式细胞实验检测细胞增殖能力。结果:NDRG2的蛋白表达水平同乳腺癌细胞增殖能力负相关;在增殖的LMMCF-7细胞中上调NDRG2表达,细胞增殖指数(proliferation index,PI)由47.18%下降至31.78%(P<0.001);在低增殖的MCF-7细胞中沉默NDRG2表达,PI由32.00%上升至52.59%(P<0.001);Western blot及免疫荧光结果显示,NDRG2可抑制β-catenin表达,并抑制其聚集入核;流式细胞检测结果显示,共转染si RNA和pCMV-Tcfδ的MCF-7细胞增殖能力未增强,进一步说明NDRG2是通过抑制β-catenin的转录调节作用抑制肿瘤细胞增殖。结论:在乳腺癌细胞中,NDRG2的表达水平下调,导致β-catenin聚集入核,并激活下游靶基因,促进乳腺癌细胞增殖。此分子机制对阐明乳腺癌细胞增殖调控机制具有重要意义。 展开更多

关键词 乳腺肿瘤 N-myc下游调节基因2 β-连环蛋白 细胞增殖

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选择性环氧化酶-2抑制剂调节Egr-1作用机制的研究 被引量：7

11

作者 江兵 蒋幼凡 +1 位作者 秦光梅 李良兰 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期1787-1790,共4页

目的:以肺腺癌细胞株A549为研究对象,观察不同浓度的塞来昔布对A549细胞的生长周期及凋亡率的影响,以及对早期反应基因-1(Early growth response-1,Egr-1)表达的影响,探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂调节Egr-1的具体机制... 目的:以肺腺癌细胞株A549为研究对象,观察不同浓度的塞来昔布对A549细胞的生长周期及凋亡率的影响,以及对早期反应基因-1(Early growth response-1,Egr-1)表达的影响,探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂调节Egr-1的具体机制,从分子水平上寻找COX-2抑制剂抗肿瘤作用的具体机制,进一步指导临床治疗。方法:体外培养肺腺癌细胞A549,经25.0、50.0、100.0μmol/L浓度的塞来昔布处理细胞,24 h后采用流式细胞仪(Flowcytometer,FCM)测定细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测Egr-1、Fas基因的表达。结果:25.0、50.0、100.0μmol/L赛来昔布作用24 h后,A549细胞不同程度的阻滞在G0/G1期,A549细胞凋亡指数分别是10.67%±1.46%、18.33%±2.54%、25.67%±2.10%,差异具有统计学意义(P<0.05);随着塞来昔布药物浓度的增加,Egr-1和Fas的mRNA表达量逐步增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:高度选择性COX-2抑制剂塞来昔布可通过调节细胞周期和细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过上调细胞中Egr-1的表达,进而上调Fas的表达,使细胞周期阻滞于G0/G1,最终促进细胞凋亡,这可能是环氧化酶抑制剂发挥抗癌作用的分子生物学基础。 展开更多

关键词 环氧化酶-2抑制剂 肺癌 早期反应基因-1

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根癌农杆菌介导反义fad2-1基因转化大豆的研究 被引量：4

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作者 周延清 刘艳菊 +4 位作者 李敏 段红英 周春娥 王芳 苑保军 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期17-21,共5页

通过根癌农杆菌介导法将反义fad2-1基因导入大豆子叶节,研究了农杆菌菌液浓度、预培养时间、共培养时间、恢复培养时间、乙酰丁香酮浓度和pH值对大豆子叶节形成丛生芽的影响,建立了有效的转化体系,获得了转基因大豆再生植株。PCR、PCR-S... 通过根癌农杆菌介导法将反义fad2-1基因导入大豆子叶节,研究了农杆菌菌液浓度、预培养时间、共培养时间、恢复培养时间、乙酰丁香酮浓度和pH值对大豆子叶节形成丛生芽的影响,建立了有效的转化体系,获得了转基因大豆再生植株。PCR、PCR-Southern blotting检测结果表明,反义fad2-1基因成功转入并整合于大豆基因组。GC检测结果表明,转反义fad2-1基因大豆种子油酸含量比非转基因大豆种子的油酸含量提高了14.44%,而亚油酸含量降低了20.27%。 展开更多

关键词 大豆 根癌农杆菌 反义fad2-1基因 遗传转化 反义抑制

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转染Smad2基因的大鼠肾系膜细胞MMP-2及TIMP-2表达的改变 被引量：2

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作者 于鸿 王小刚 +3 位作者 陈琦 张秀荣 张志刚 郭慕依 《复旦学报（医学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第6期549-552,共4页

目的 通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MsC)转染Smad2基因,观察转染阳性细胞克隆MMP-2和TIMP-2表达的改变,以进一步阐明TGF-β介导肾小球硬化发生的作用机制。方法 经磷酸钙介导将含Smad2重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及... 目的 通过对大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cell,MsC)转染Smad2基因,观察转染阳性细胞克隆MMP-2和TIMP-2表达的改变,以进一步阐明TGF-β介导肾小球硬化发生的作用机制。方法 经磷酸钙介导将含Smad2重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及Western blot鉴定;又分别采用Western blot、酶谱分析法和RT-PCR法,检测转染阳性细胞克隆MMP-2和TIMP-2表达改变。结果 成功建立高表达Smad2的阳性MsC克隆(T-12、T-31、T-35与T-40),并证实其MMP-蛋白分泌和酶活性明显升高,同时TIMP-2 mRNA及其蛋白的表达也明显上调。结论 TGF-β可能通过上调Smad2而增强肾组织内MMP-2/TIMP-2的表达,从而促进肾小球损伤和硬化的发生发展过程。 展开更多

关键词 基因转染 SMAD2基因 大鼠 MMP-2 TIMP-2 肾小球系膜细胞 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶组织抑制因子-2 肾脏疾病

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肿瘤抑制因子DACT2在神经胶质瘤细胞上皮间质转化中的作用机制 被引量：3

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作者 卢雅丽 万宏军 +2 位作者 王琳 刘君星 王翀 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期387-392,共6页

目的探讨肿瘤抑制因子β-连环蛋白抑制基因2(DACT2)对神经胶质瘤细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法以神经胶质瘤细胞U87、U251、A172和SHG44为研究对象,5-Aza处理后RT-PCR检测细胞中DACT2基因表达,甲基化特异PCR法(MSP)检测细胞中... 目的探讨肿瘤抑制因子β-连环蛋白抑制基因2(DACT2)对神经胶质瘤细胞上皮间质转化的影响及潜在机制。方法以神经胶质瘤细胞U87、U251、A172和SHG44为研究对象,5-Aza处理后RT-PCR检测细胞中DACT2基因表达,甲基化特异PCR法(MSP)检测细胞中DACT2启动子甲基化状态,Western blot检测细胞中DACT2蛋白表达;构建过表达DACT2的U87细胞株,并用Western blot进行验证。Transwell实验检测细胞迁移侵袭能力,Western blot检测细胞中上皮间质标记物E-cadherin、Vimentin、MMP2及Wnt/β-cadherin通路蛋白active-β-cadherin、p-β-cadherin和totalβ-cadherin的表达变化。结果 5-Aza处理后4株细胞中均观察到DACT2基因表达,而未处理的U87和U251细胞中无DACT2基因表达,A172和SHG44细胞中DACT2有微弱表达。U87和U251细胞中DACT2启动子区完全甲基化,而A172和SHG44细胞中部分甲基化。U87和U251细胞中DACT2蛋白和mRNA表达低于A172和SHG44细胞(P<0.05)。转染pcDNA3.1-DACT2载体后,U87细胞中DACT2表达显著增加(P<0.05),过表达DACT2的U87细胞构建成功。过表达DACT2能抑制U87细胞上皮间质转化、侵袭迁移并阻断Wnt/β-catenin通路激活(P<0.05)。结论神经胶质瘤细胞中DACT2启动子呈高度甲基化状态,外源过表达DACT2能够促进胶质瘤细胞U87上皮间质转化和侵袭迁移,其机制可能与DACT2调控Wnt/β-catenin信号通路有关。 展开更多

关键词 神经胶质瘤 β-连环蛋白抑制基因2(dact2) 上皮间质转化 WNT/β-CATENIN通路

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胰腺占位性病灶细针穿刺活检标本中ppENK和TFPI-2基因甲基化检测的可行性及其应用 被引量：8

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作者 齐灿 黄强 +3 位作者 刘臣海 吕向微 刘振 汪超 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第1期86-92,共7页

目的检测胰腺组织ppENK和TFPI-2基因甲基化状态,探讨胰腺占位性病灶细针穿刺活检标本中ppENK和TFPI-2基因甲基化检测的可行性及其应用。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法检测86例胰腺占位性病变组织中ppENK和TFPI-2基因启动子区CPG岛... 目的检测胰腺组织ppENK和TFPI-2基因甲基化状态,探讨胰腺占位性病灶细针穿刺活检标本中ppENK和TFPI-2基因甲基化检测的可行性及其应用。方法采用重亚硫酸盐测序PCR(BSP)法检测86例胰腺占位性病变组织中ppENK和TFPI-2基因启动子区CPG岛的甲基化状态,采用单因素及多因素回归Logistic回归分析ppENK基因和TFPI基因甲基化检测的诊断价值,以及EUS-FNA联合基因甲基化检测在胰腺占位性病变中的诊断意义。结果本研究86例病例中,甲基化成功率为91.9%(79/86),TFPI-2和ppENK基因的甲基化检测率分别为95.9%(75/79)和91.1%(72/79)。肿瘤组与炎症组以及肿瘤组和对照组的甲基化率差异均有统计学意义(P<0.05),而炎症组与对照组甲基化率差异无统计学意义。受试者工作特征曲线结果显示:TFPI-2基因、ppENK基因甲基化水平诊断胰腺癌的敏感度分别为83.6%、74.6%,特异度分别为81.8%、86.4%,诊断率分别为89.7%、81.2%,以TFPI-2基因或ppENK基因甲基化水平诊断胰腺癌的敏感度为92.5%,特异度为79.8%,而以基因TFPI-2和ppENK甲基化水平进行诊断,其敏感度为74.6%,特异度为91.7%。结论TFPI-2和ppENK基因在胰腺肿瘤组织中具有高甲基化水平,且具有良好的敏感性和特异性,是胰腺癌的有利诊断指标,结合EUS-FNA,能够有效提高胰腺占位性病变的术前诊断。 展开更多

关键词 胰腺肿瘤 胰腺癌 前脑啡肤肽基因 组织因子途径抑制物-2基因 甲基化 超声内镜

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合并炎症性肠病的糖原累积病-Ⅰb型5例患儿SGLT2抑制剂治疗效果分析 被引量：3

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作者 夏瑜 葛文松 +6 位作者 杜陶子 龚自珍 肖冰 梁黎黎 王瑞芳 杨奕 邱文娟 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期294-299,共6页

目的分析5例合并炎症性肠病(IBD)的糖原累积病-Ⅰb型(GSD-Ⅰb)患儿接受钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂的治疗效果。方法回顾性分析2021—2022年接受治疗并随访的5例合并IBD的GSD-Ⅰb型患儿,SGLT2抑制剂治疗前后的临床表现、实验室及... 目的分析5例合并炎症性肠病(IBD)的糖原累积病-Ⅰb型(GSD-Ⅰb)患儿接受钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂的治疗效果。方法回顾性分析2021—2022年接受治疗并随访的5例合并IBD的GSD-Ⅰb型患儿,SGLT2抑制剂治疗前后的临床表现、实验室及辅助检查。结果5例患儿IBD发作中位年龄为5.0岁。5例均有口腔溃疡、腹痛、腹泻及肛周脓肿。SGLT2抑制剂治疗前,5例的中位儿童克罗恩病活动指数(PCDAI)为55.0。SGLT2抑制剂中位治疗12.0月后[末次随访中位剂量0.31 mg/(kg·d)],中位PCDAI(10.0)显著降低(P=0.043),5例均获得临床应答。治疗中,2例出现低血糖,4例出现会阴部或尿道口瘙痒。发现2种新SLC 37A4变异(c.2delT,c.1065delG)。c.446G>A(p.G 149E)为热点变异(70%)。结论SGLT2抑制剂可明显改善GSD-Ⅰb型患儿的IBD活动度,且安全性良好。 展开更多

关键词 糖原累积病-Ⅰb型 SLC 37A4基因 炎症性肠病 中性粒细胞减少症 SGLT2抑制剂

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细胞因子信号传导抑制蛋白1对肿瘤坏死因子-α诱导的肾小管细胞凋亡的影响 被引量：3

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作者 杜春阳 史永红 +4 位作者 崔立文 任韫卓 王月华 赵松 段惠军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1378-1382,共5页

目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给... 目的观察细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS-1)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肾小管上皮细胞(HKC)凋亡的影响。方法体外培养人肾小管上皮细胞(HKC),应用脂质体2000分别转染pCR3.1/SOCS-1表达质粒和pCR3.1空质粒载体,G418筛选阳性克隆。给予TNF-α(20μg.L-1)进行刺激。采用Western blot检测SOCS-1、Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、Caspase-3、Janus酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导和转录活化因子1(STAT1)、磷酸化JAK2(p-JAK2)和磷酸化STAT1(p-STAT1)的表达;流式细胞术和原位缺口末端标记法(TUNEL)观察HKC细胞凋亡情况。结果与对照组相比,TNF-α组肾小管上皮细胞凋亡明显增加,凋亡相关Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调,Bax/Bcl-2蛋白比率升高;SOCS-1过表达能够抑制TNF-α刺激引起的HKC细胞的凋亡,下调JAK2和STAT1的磷酸化水平及Cleavedcaspase-3蛋白的表达,降低Bax/Bcl-2蛋白比率。结论 SOCS-1过表达抑制TNF-α诱导的肾小管上皮细胞凋亡可能是通过抑制JAK/STAT信号通路活化实现的。 展开更多

关键词 细胞因子信号传导抑制蛋白1 肿瘤坏死因子-Α 肾小管上皮细胞 JAK2/STAT1 凋亡 基因转染

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子宫腺肌病患者内膜组织中PTTG的表达及与MMP-2和TIMP-1的关系 被引量：7

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作者 闫丽萍 惠京 《实用妇产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期174-177,I0001,共5页

目的:检测子宫腺肌病患者内膜组织中垂体肿瘤转化基因(PTTG)的表达,并分析其与基质金属蛋白-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的相关性。方法:采用免疫组化SP方法检测35例子宫腺肌病组、在位内膜组和24例非子宫腺肌病患... 目的:检测子宫腺肌病患者内膜组织中垂体肿瘤转化基因(PTTG)的表达,并分析其与基质金属蛋白-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的相关性。方法:采用免疫组化SP方法检测35例子宫腺肌病组、在位内膜组和24例非子宫腺肌病患者正常内膜组中PTTG、MMP-2及TIMP-1蛋白的表达水平。结果:①PTTG在子宫腺肌病组、在位内膜组和正常内膜组间的表达差异有高度统计学意义(P<0.001),其中子宫腺肌病组和在位内膜组表达强度显著高于正常内膜组(P<0.001),子宫腺肌病组与在位内膜组间差异无统计学意义(P>0.05);②MMP-2在子宫腺肌病组和在位内膜组中的表达强度高于正常内膜组(P<0.05);③TIMP-1在子宫腺肌病组中的表达比正常内膜组低,两组相比差异有高度统计学意义(P<0.001);④PTTG与MMP-2的表达呈正相关,与TIMP-1的表达无相关性。结论:子宫腺肌病内膜中PTTG高表达,导致MMP-2表达上调,并可能影响TIMP-1的表达,从而使子宫内膜的增殖活性增强、侵袭力增高,致使子宫内膜向下浸润性生长,提示PTTG参与了子宫腺肌病的发生。 展开更多

关键词 子宫腺肌病 垂体肿瘤转化基因 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶组织抑制因子-1

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氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2 mRNA表达的影响 被引量：2

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作者 宛霞 黄湖辉 李劲高 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第12期1391-1394,共4页

目的观察糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)及组织2型金属蛋白酶抑制物(TIMP2)mRNA表达的变化及氯沙坦对它们的影响。方法建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+氯沙坦组(C组)。饲养18周后... 目的观察糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶(MT3-MMP)及组织2型金属蛋白酶抑制物(TIMP2)mRNA表达的变化及氯沙坦对它们的影响。方法建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组(A组)、糖尿病组(B组)、糖尿病+氯沙坦组(C组)。饲养18周后取出肾脏以RT-PCR法检测MT3-MMP、TIMP2及TGF-β1mRNA的表达,电镜观察大鼠肾小球基底膜厚度及系膜基质密度(系膜基质面积/系膜面积),收集24h尿检测尿白蛋白。结果B组大鼠肾组织MT3-MMPmRNA、TIMP2mRNA和TGFβ1mRNA表达以及均显著高于A组,C组显著低于B组,但与A组无显著差异。B组尿白蛋白、基底膜厚度及系膜基质密度显著高于A组,C组均显著低于B组。P<0.05。结论氯沙坦治疗可延缓糖尿病肾病的发生,并可抑制糖尿病大鼠肾组织MT3-MMP及TIMP2mRNA表达。 展开更多

关键词 糖尿病肾病/药物作用 基因表达 膜3型基质金属蛋白酶 2型基质金属蛋白酶抑制物 转化生长因子-Β1

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胃癌组织中I2PP2A基因表达量及基因沉默对胃癌细胞恶性生物学的影响

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作者 吕栋 崔培林 徐有青 《海南医学院学报》 CAS 2015年第12期1608-1610,1614,共4页

目的:研究胃癌组织中蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(I2PP2A)基因表达量及基因沉默对胃癌细胞恶性生物学的影响。方法:采集胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织,培养胃癌细胞株BGC-823并转染I2PP2A的siRNA,检测组织标本中I2PP2A的mRNA含量和蛋白含... 目的:研究胃癌组织中蛋白磷酸酶2A抑制剂-2(I2PP2A)基因表达量及基因沉默对胃癌细胞恶性生物学的影响。方法:采集胃癌患者的胃癌组织及癌旁正常组织,培养胃癌细胞株BGC-823并转染I2PP2A的siRNA,检测组织标本中I2PP2A的mRNA含量和蛋白含量;检测细胞样本中的凋亡细胞比例、不同细胞周期比例、Cyclin B2、Cyclin D1、CDK1、Bcl-2、Survivin的蛋白含量。结果:胃癌组织中I2PP2A的mRNA含量和蛋白含量均高于癌旁正常组织;转染I2PP2A-siRNA后,胃癌细胞的G0/G1期细胞比例、凋亡细胞比例高于阴性对照组,S期细胞和G2/M期细胞比例低于阴性对照组,Cyclin B2、Cyclin D1、CDK1、Bcl-2、Survivin的蛋白含量均低于阴性对照组。结论:胃癌组织中I2PP2A基因的表达量异常增多;沉默I2PP2A基因能够通过抑制Cyclin B2、Cyclin D1、CDK1、Bcl-2、Survivin的表达来诱导胃癌细胞凋亡并使细胞周期停滞于G0/G1期。 展开更多

关键词 胃癌 蛋白磷酸酶2A抑制剂-2 基因沉默 恶性生物学行为

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