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干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片SSH文库构建及CkWRKY1基因克隆 被引量:20
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作者 杨杞 张涛 +6 位作者 王颖 李高 尹佳佳 韩晓敏 齐力旺 李国婧 王瑞刚 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第7期62-68,共7页
为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制,挖掘干旱响应相关基因,成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑制性差减杂交(SSH)文库,获得1286条高质量的EST序列,平均长度475bp,拼接得到Unigenes645条。对这些Unigenes进行Blast比对注释后发现很多抗... 为研究柠条锦鸡儿抗旱的分子机制,挖掘干旱响应相关基因,成功构建干旱胁迫下柠条锦鸡儿叶片的抑制性差减杂交(SSH)文库,获得1286条高质量的EST序列,平均长度475bp,拼接得到Unigenes645条。对这些Unigenes进行Blast比对注释后发现很多抗旱相关基因,例如LEA蛋白、DHN蛋白编码基因,MYB、bZIP、WRKY、NAC和bHLH转录因子等。通过RACE技术克隆其中1个WRKY转录因子的cDNA全长,命名为CkWRKY1,GenBank登录号为JX987095。CkWRKY1编码330个氨基酸的蛋白质,氨基酸序列中有1个"WRKYGQK"的WRKY转录因子家族保守序列,属于第Ⅱ类WRKY转录因子。利用实时荧光定量PCR技术检测发现,CkWRKY1基因在干旱处理后mRNA的表达水平明显上升,预示该转录因子可能与柠条锦鸡儿抗旱的分子机制相关。 展开更多
关键词 柠条锦鸡儿 干旱胁迫 抑制性差减杂交(ssh)文库 WRKY 基因克隆
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SSH法获取水稻矮化突变体相关的cDNA片段 被引量:7
2
作者 王永胜 王景 +2 位作者 李发强 刘筱斌 刘良式 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第5期20-24,共5页
利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69... 利用抑制性消减杂交 (Suppressivesubtractionhybridization ,SSH)分离水稻矮化突变体dwarf69与其野生型对照品系特光矮 2 (Oryzasativa ,TGA 2indica)间表达有差异的cDNA片段。分别以dwarf69作为驱赶子 ,TGA 2为检测子 ,以及以dwarf69作为检测子 ,TGA 2为驱赶子建立了两个差异表达cDNA文库 ,分别代表在TGA 2和dwarf69特异表达的cDNA。经反式Northern检测这两个文库共得到 1 0个阳性克隆。序列分析表明有两个序列为水稻中首次报道 ,一个序列有相应的基因组序列报道 ,但其cDNA序列是首次报道。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 ssh 矮化突变体 反式Northern CDNA片段 水稻
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水稻抗稻瘟病SSH-cDNA抗性文库中差异表达基因的鉴定及分析 被引量:2
3
作者 姜兆远 郭晓莉 +4 位作者 刘晓梅 邹晓威 孙辉 李宏伟 任金平 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第28期17179-17181,共3页
[目的]鉴定、分析水稻抗稻瘟病SSH-cDNA文库中的差异表达基因。[方法]以接种稻瘟菌小种E1的水稻品种吉粳88和四丰43为材料,构建SSH-cDNA文库,随机挑选138个阳性克隆测序并进行Blast比对分析。[结果]聚类后得到78条非冗余ESTs,其中18条(2... [目的]鉴定、分析水稻抗稻瘟病SSH-cDNA文库中的差异表达基因。[方法]以接种稻瘟菌小种E1的水稻品种吉粳88和四丰43为材料,构建SSH-cDNA文库,随机挑选138个阳性克隆测序并进行Blast比对分析。[结果]聚类后得到78条非冗余ESTs,其中18条(23.1%)未找到同源性匹配,12条(15.4%)与未知功能蛋白同源性较高;其余48条与已知功能蛋白同源性较高。[结论]该研究可为控制和防治稻瘟病提供新的理论和途径。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟菌 抑制消减杂交
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抑制性消减杂交(SSH)技术及其应用 被引量:1
4
作者 刘静 赵颖 《河北化工》 2008年第7期31-32,37,共3页
抑制性消减杂交技术(SSH)是一种高效检测差异表达基因的方法。详细论述了抑制性消减杂交的基本原理及过程,并简要介绍了其在工业生产菌种改良中的应用。
关键词 抑制性消减杂交 ssh 差异表达 消减文库
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Characterization of expressed sequence tags obtained by SSH during root formation in Larix cuttings
5
作者 FENG Jian QI Li-wang +2 位作者 SUN Xiao-mei DONG Jian ZHANG Shou-gong 《Forestry Studies in China》 CAS 2010年第3期137-141,共5页
SSH was used to analyze gene transactivation during root formation of Larix cuttings. Two subtractive cDNA libraries were constructed from clone 31-6 as tester or driver and clone 15-4 as driver or tester. The SSH PCR... SSH was used to analyze gene transactivation during root formation of Larix cuttings. Two subtractive cDNA libraries were constructed from clone 31-6 as tester or driver and clone 15-4 as driver or tester. The SSH PCR products from the libraries were cloned into a pGEM-T easy vector and after PCR and dot blot analysis, positive clones were selected, sequenced and compared to the database in GenBank with BLASTX. The results of a sequence assembly in two libraries show that 521 UniEST (expressed sequence tag) were obtained. These 521 UniEST belong to metabolism, signal pathways, transport, resistance, developmental processes, local- ization, unknown proteins and "no hits found". All of these suggest that subtractive cDNA libraries during root formation of Larix cuttings were constructed successfully. 展开更多
关键词 suppression subtractive hybridization (ssh Larix cuttings root formation
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用抑制消减杂交法分离巴西橡胶树胶乳特异表达基因 被引量:8
6
作者 邓柳红 罗明武 +2 位作者 曾会才 杨卫帆 张春发 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期32-36,共5页
采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段... 采用巴西橡胶树常割树胶乳的Poly(A+)RNA为Tester,叶片Poly(A+)RNA为Driver,通过抑制消减杂交法(suppressivesubtractivehybridization,SSH)构建了一个胶乳特异表达基因差减文库,通过菌落PCR及反式NorthernDot-Blot筛选鉴定阳性差异片段,获得79个胶乳特异表达阳性克隆,部分阳性克隆还通过NorthernBlot杂交及RT-PCR进一步验证。随机挑选部分阳性克隆序列比较分析,结果表明有部分克隆与巴西橡胶树中已知的基因相同,而多数克隆在巴西橡胶树中是新发现,它们与橡胶生物合成、物质代谢运输、信号传导和形态建成等相关。 展开更多
关键词 巴西橡胶树 抑制消减杂交法 胶乳 反式Northern Dot—Blot
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茶树休眠芽与萌动芽抑制消减杂交文库的构建与初步分析 被引量:14
7
作者 王新超 杨亚军 +2 位作者 陈亮 马春雷 姚明哲 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期129-135,共7页
为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消... 为了解茶树越冬芽休眠及其解除的分子机理,以休眠芽和萌动芽为材料,构建了茶树休眠芽与萌发芽的正、反向抑制消减杂交文库,并从两个文库各随机挑选96个阳性克隆进行序列测定和生物信息学分析。建库质量分析结果表明,所构建的正、反向消减文库有效富集了差异基因,消减效率达到要求,插入片段集中于250-750bp之间,文库质量较好。对正、反向文库随机挑选的阳性克隆测序和分析结果表明,正、反向文库在基因表达谱上存在一定的差异,萌动芽文库在亚细胞器形成、转运载体等方面的基因与休眠芽文库有较大差异,而休眠芽文库在抗氧化、翻译调控以及胁迫响应等方面的基因与萌动芽文库有较大差异。这两个文库的建立为进一步了解茶树芽休眠与解除的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树(Camellia sinensis) 芽休眠 表达序列标签 抑制消减杂交
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猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cDNA文库的构建 被引量:2
8
作者 黄翠琴 陈宁 +3 位作者 张新高 林瑞庆 宋慧群 朱兴全 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期832-836,共5页
为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectT... 为筛选与线虫感染性相关的基因,本研究以猪蛔虫为对象,构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库,为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总RNA,纯化mRNA后,采用Clontech公司PCR-selectTM试剂盒进行反转录合成cDNA并进行抑制消减杂交(SSH),构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库,并采用Southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线BLAST分析。试验结果表明,感染期幼虫差异表达的消减cDNA文库具有较强的特异性;在得到的41个表达序列标签(ESTs)中,有40个ESTs与已报道的基因有较高的相似性,主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因,有1个cDNA片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cDNA文库的成功构建,为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 猪蛔虫 感染期幼虫 抑制消减杂交 差异表达基因 消减cDNA文库 斑点杂交
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干旱胁迫下黄花苜蓿与蒺藜苜蓿两个抑制性差减杂交文库的构建及分析 被引量:8
9
作者 王天佐 赵敏桂 张文浩 《草业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期175-181,共7页
水分胁迫是植物面临的最主要的非生物胁迫之一,研究植物的抗旱机理以提高植物的抗旱能力具有重大的意义。抑制性差减杂交是一种筛选特异表达基因的良好手段,使用该方法成功构建了豆科植物黄花苜蓿和蒺藜苜蓿2个差减文库并进行测序。通... 水分胁迫是植物面临的最主要的非生物胁迫之一,研究植物的抗旱机理以提高植物的抗旱能力具有重大的意义。抑制性差减杂交是一种筛选特异表达基因的良好手段,使用该方法成功构建了豆科植物黄花苜蓿和蒺藜苜蓿2个差减文库并进行测序。通过GO分类和KEGG分析等手段对文库中序列进行分类,并分析表达序列的差异,发现黄花苜蓿文库中对抵抗水分胁迫起积极作用的基因表达序列明显多于蒺藜苜蓿。此外,还对筛选到的2个基因在2种苜蓿中的干旱响应表达模式进行了分析,结果表明,在黄花苜蓿中这2个基因的表达更加有利于响应和抵抗干旱。这些结果在分子层面上一定程度的解释了黄花苜蓿较蒺藜苜蓿更加抗旱的原因。 展开更多
关键词 黄花苜蓿 蒺藜苜蓿 干旱 抑制性差减杂交(ssh)
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细粒棘球蚴原头蚴包囊和原头蚴成虫抑制差减杂交文库中差异表达基因的筛选及分析 被引量:3
10
作者 赵莉 石保新 +6 位作者 李军 张壮志 马正海 张旭 薛晶 金映红 张文宝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1215-1223,共9页
细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线... 细粒棘球绦虫原头蚴(PSC)具有双向发育的特点,本文旨在利用SSH和生物信息学方法筛选原头蚴包囊(CW)和成虫(AW)特异性的基因。将PSC-CW和PSC-AW双相发育差减cDNA文库的差减PCR产物克隆入pGEM-T载体并测序,利用CAP3sequence assembly在线软件、Blast2GO软件与GenBank数据库对测序结果进行分析,筛选原头蚴成囊和成虫特异性的基因,并探讨这些基因的功能。结果显示:对PSC-CW和PSC-AW文库进行扩增,分别得到280和200个阳性克隆,菌落PCR鉴定结果表明,这些克隆均插入200~1 000bp片段。测序结果显示从PSC-CW和PSC-AW SSH文库中分别得到16和10个特异性基因。其中PSC-CW SSH文库中得到4个出现频率较高的基因,其余12个基因仅出现1次,其中5个为未知基因,已知基因分别编码细胞色素C氧化酶Ⅰ、热休克蛋白70和铁蛋白等功能蛋白质。PSC-AW SSH文库中得到10个基因,其中2个出现频率较高基因,8个基因仅出现1次,4个为未知基因,6个已知基因分别编码基质蛋白1、延伸因子1α和脂肪酸结合蛋白等功能蛋白质。本研究筛选获得原头蚴成囊和成虫发育时差异表达的基因,对这些基因的功能进行分析表明,PSC-CW SSH文库中多是与营养和能量转运功能的相关基因,而PSC-AW SSH文库中多为发育与分化相关的基因,这些基因的差异表达可能与原头蚴处于不同的生长环境和发育方向有关,同时也为棘球蚴病免疫诊断、药物筛选和疫苗研制提供候选基因。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 抑制差减杂交 特异性基因
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凡纳滨对虾烯醇酶基因Enolase的克隆及表达分析 被引量:3
11
作者 李文兰 高永华 +2 位作者 盛小伟 陈晓汉 熊建华 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期168-171,174,共5页
以生长性状分离的凡纳滨对虾家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,斑点杂交筛选获得Enolase基因,克隆获得全长编码区序列。序列分析表明,序列包含1 305 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质含434个氨基酸,预测的分子量为47.... 以生长性状分离的凡纳滨对虾家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,斑点杂交筛选获得Enolase基因,克隆获得全长编码区序列。序列分析表明,序列包含1 305 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质含434个氨基酸,预测的分子量为47.4 ku,等电点为5.67。通过荧光定量PCR法研究了Enolase基因在凡纳滨对虾的不同组织和不同生长期的肌肉组织中的表达情况,结果显示,Enolase基因在凡纳滨对虾的心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄、鳃和血等组织或器官中都有表达;在肌肉组织中表达量最高,在肝胰腺中表达量最低;在日龄为125 d的对虾肌肉组织中表达量最高,在日龄为80 d的对虾肌肉组织中表达量最低。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 烯醇酶 抑制性差减杂交 荧光定量PCR
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低温胁迫下高羊茅抑制消减文库的构建与分析 被引量:4
12
作者 黄锦文 骆娟 +2 位作者 陈冬梅 郑红艳 林文雄 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1162-1167,共6页
采用抑制消减杂交(SSH)技术构建了高羊茅"猎狗5号"低温下的正向差减cDNA文库,并从基因表达水平研究了低温诱导对高羊茅抗寒性的影响。通过Reverse northern杂交法筛选,挑选出36个低温处理下差异表达基因,并对这些基因进行测... 采用抑制消减杂交(SSH)技术构建了高羊茅"猎狗5号"低温下的正向差减cDNA文库,并从基因表达水平研究了低温诱导对高羊茅抗寒性的影响。通过Reverse northern杂交法筛选,挑选出36个低温处理下差异表达基因,并对这些基因进行测序。将测序结果在基因组数据库(NCBI)中进行检索比对,最后获得34个差异表达的基因,其中33个基因功能已知,主要与植物信号转导、光合作用、糖代谢、物质运输以及抗逆性相关。 展开更多
关键词 高羊茅 低温处理 抑制消减杂交 基因表达 抗寒性
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应用抑制性差减杂交技术构建副猪嗜血杆菌基因组差减文库 被引量:3
13
作者 李淼 李春玲 +1 位作者 宋帅 杨冬霞 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期128-130,共3页
为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW124和H465菌株细菌基因组的表达差... 为构建副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)有毒力菌株SW124(血清4型)和无毒力菌株H465(血清11型)间的差异表达基因文库,采用抑制性差减杂交技术(Suppression subtractive hybridization,SSH)分析SW124和H465菌株细菌基因组的表达差异,并进行两轮差减杂交和两次PCR扩增,将第2次PCR产物与pMD19-T载体相连,转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞并进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库。结果共获得327个阳性克隆,筛选100个克隆制备质粒进行PCR检测,均扩增出100~2 000 bp大小的片段。差异DNA差减文库的构建为进一步筛选、克隆HPS特异的未知新基因、建立分子鉴别新体系奠定了基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 抑制性差减杂交 差异基因文库
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孔石莼在干出胁迫下上调表达基因消减cDNA文库的构建及分析 被引量:3
14
作者 李世国 杨帆 +3 位作者 吴倩倩 乔坤 佟少明 侯和胜 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2011年第2期172-180,共9页
利用抑制消减杂交技术构建了潮间带绿藻孔石莼(Ulva pertusa)在干出胁迫状态下上调表达基因的消减cDNA文库。获得的阳性克隆经测序得到150条上调表达的EST片段,其中21条为冗余序列(RS),137条非冗余序列(NRS)。片段中最长833 bp,最... 利用抑制消减杂交技术构建了潮间带绿藻孔石莼(Ulva pertusa)在干出胁迫状态下上调表达基因的消减cDNA文库。获得的阳性克隆经测序得到150条上调表达的EST片段,其中21条为冗余序列(RS),137条非冗余序列(NRS)。片段中最长833 bp,最短106 bp,平均长度364 bp。参与比对的EST片段按照其注释功能可分类为:细胞生长与发育、蛋白合成与分解、代谢过程、胁迫应答、光合作用与光诱导、转录调节、信号转导等相关基因。未知功能和无对比结果序列共60条,占非冗余序列的43.80%。比对相似度主要分布在20%~60%之间,主要与已经完成基因组测序的藻类或高等植物的氨基酸序列具有较高的相似性。孔石莼对密码子第三位碱基的使用偏好无显著差别(P〉0.05),GC使用总频率为50.66%,而对终止密码子则明显偏好TGA。实时荧光定量结果表明,部分分离的基因在干出胁迫状态下表达量上调。这些不同功能基因的表达构成了复杂的调控网络,能够为揭示孔石莼抵御潮间带不良环境的分子机制提供多方面的切入点。 展开更多
关键词 孔石莼 潮间带 干出状态 抑制消减杂交 CDNA文库
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抑制性消减杂交技术及其在动物基因研究中的应用 被引量:1
15
作者 陶金忠 张勇 +2 位作者 杨永新 张进隆 赵兴绪 《动物医学进展》 CSCD 2007年第5期57-60,共4页
抑制性消减杂交(SSH)是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、灵敏度高等特点。在两种状态下基因的表达变化、差异基因的克隆和鉴定对基因表达调控有着重要意义。... 抑制性消减杂交(SSH)是结合抑制性PCR和消减杂交技术发展起来的一种高效分离差异表达基因的方法,具有特异性高、假阳性率低、操作简便、灵敏度高等特点。在两种状态下基因的表达变化、差异基因的克隆和鉴定对基因表达调控有着重要意义。SSH在动物抗病、抗应激及药物的靶基因等方面的研究中取得了重要的进展。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 聚合酶链反应 基因 动物
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凡纳滨对虾内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ的克隆及表达分析 被引量:1
16
作者 熊建华 盛小伟 +3 位作者 高永华 李文兰 杨彦豪 陈晓汉 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期446-451,共6页
以生长性状为指标分离凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,进行斑点杂交筛选获得内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ基因,克隆获得cDNA全长编码序列及部分非编码序列。序列包含270 bp的开... 以生长性状为指标分离凡纳滨对虾Litopenaeus vannamei家系的肌肉组织,构建凡纳滨对虾生长性状差减cDNA文库,进行斑点杂交筛选获得内质网膜转运通道蛋白基因Sec61γ基因,克隆获得cDNA全长编码序列及部分非编码序列。序列包含270 bp的开放阅读框,推测编码的蛋白质为89个氨基酸,预测的相对分子质量为10 300,理论等电点为10.58。通过荧光定量PCR的方法研究了Sec61γ基因在对虾不同组织和不同生长期肌肉组织中的表达情况,结果表明:Sec61γ基因在对虾的血液以及心脏、肝胰腺、肌肉、胃、肠、眼柄等器官或组织中都有表达,其中在肌肉组织中表达量最高,在肠中表达量最低;在对虾不同生长期肌肉中的表达量各不相同,在10日龄的对虾肌肉组织中表达量最高,为45日龄的对虾肌肉组织中表达量的27.6倍。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾 Sec61γ基因 抑制性差减杂交 荧光定量PCR
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转“全鱼”GH基因鲤鱼胸腺发育差异表达基因的筛选与鉴定 被引量:1
17
作者 孙晓凤 黄容 +3 位作者 胡炜 肖梦颖 汪亚平 郭琼林 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1184-1191,共8页
采用显微注射方法,获得了转“全鱼”生长激素(GH)基因鲤鱼(转基因鱼),应用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了4月龄F3转基因鱼胸腺发育差减cDNA文库,筛选并鉴定了与胸腺发育相关的81个与已知基因同源的表达序列标签(EST)。这些EST... 采用显微注射方法,获得了转“全鱼”生长激素(GH)基因鲤鱼(转基因鱼),应用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了4月龄F3转基因鱼胸腺发育差减cDNA文库,筛选并鉴定了与胸腺发育相关的81个与已知基因同源的表达序列标签(EST)。这些EST至少代表69个基因。根据基因的作用将其分为5类:18个与免疫和细胞防御有关;23个参与细胞生长、发育和分化等代谢过程;3个参与细胞信号传导和周期调控;8个在转录和表达调节中发挥作用;17个为核糖体蛋白基因,表明转基因鱼胸腺细胞处于活跃的蛋白合成状态。应用RT-PCR和虚拟Northern杂交技术进一步证实其中的若干基因在转基因鱼胸腺组织中的表达量增加。实验结果为阐明转植GH基因促进鲤鱼胸腺发育的相关分子机制提供了依据。 展开更多
关键词 “全鱼”生长激素基因 转基因鲤鱼 胸腺发育 抑制性差减杂交(ssh) 表达序列标签(EST)
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雌性东方蜜蜂基因表达差减文库的构建及初步分析
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作者 樊莹 邹丰才 +1 位作者 董霞 匡海鸥 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期710-721,共12页
蜜蜂的蜂王和工蜂是两种不同的表型,这是基于基因的差异表达,而不是遗传物质的多态性。本研究以雌性东方蜜蜂为材料,利用抑制消减杂交技术构建东方蜜蜂蜂王和工蜂的基因差异表达的文库。挑选插入片段大于200 bp的330个阳性克隆进行测序... 蜜蜂的蜂王和工蜂是两种不同的表型,这是基于基因的差异表达,而不是遗传物质的多态性。本研究以雌性东方蜜蜂为材料,利用抑制消减杂交技术构建东方蜜蜂蜂王和工蜂的基因差异表达的文库。挑选插入片段大于200 bp的330个阳性克隆进行测序,蜂王消减文库176个,工蜂消减文库154个。测序后蜂王消减文库获得161条ESTs序列,工蜂消减文库获得142条ESTs序列。获得的序列采用DNAstar seq Man软件进行载体、接头和低质量序列去除后进行ESTs分析,蜂王消减文库获得110个contings,工蜂消减文库获得81个contings,蜂王和工蜂文库均有部分重叠的ESTs序列。在NCBI上进行在线BLASTx和t BLASTn同源比较,发现在蜂王的ESTs中有62个已知ESTs,3个未知ESTs,工蜂的ESTs中有49个已知ESTs,8个未知ESTs。通过基因本体论进行功能分析,大部分差异表达的基因为酶类和结合蛋白,主要参与基因的转录、翻译和新陈代谢过程。雌性东方蜜蜂差减文库的构建,为进一步研究蜜蜂级型分化的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 东方蜜蜂 抑制消减杂交 差异表达基因 消减文库 ESTS
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“班菲”脐橙果皮油斑病相关基因的分析
19
作者 魏召新 程春振 +4 位作者 程昌凤 吴纯清 朱世平 漆巨容 洪林 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第17期219-224,共6页
柑橘油斑病作为一种普遍发生的柑橘病害,严重影响着果实的外观和商品价值。以晚熟脐橙“班菲”为材料,利用抑制差减杂交技术分别构建油斑病诱导的正反向cDNA文库。文库插入片段多在100~700bp之间,从正反向文库中各随机挑取了150个菌... 柑橘油斑病作为一种普遍发生的柑橘病害,严重影响着果实的外观和商品价值。以晚熟脐橙“班菲”为材料,利用抑制差减杂交技术分别构建油斑病诱导的正反向cDNA文库。文库插入片段多在100~700bp之间,从正反向文库中各随机挑取了150个菌液PCR检测为阳性的克隆进行测序,成功获得了有效ESTs序列292条。通过BLASTx序列比对,有165条ESTs找到了55个基因的同源序列,且E值小于1.0×10-3。GO功能归类结果表明:这些差异表达的ESTs主要涉及氧化还原、抗逆防御、生物和非生物胁迫等多种相关的生物学过程,推测油斑病的形成与氧化胁迫有关。 展开更多
关键词 柑橘油斑病 抑制性差减文库 差异表达基因 氧化胁迫 实时定量PCR
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用差减抑制杂交方法鉴定太谷核不育小麦花药败育过程中的特异表达基因 被引量:5
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作者 常青山 周荣华 +1 位作者 余增亮 贾继增 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第3期30-33,共4页
以太谷核不育小麦败育花药为对照群体 ,可育花药为目标群体 ,进行抑制差减杂交。用经过败育花药差减的可育花药cDNA群体构建了一个差减抑制杂交文库。结果显示 ,插入片段的大小主要集中在 30 0~ 5 0 0bp之间。随机选取 8个克隆进行Nort... 以太谷核不育小麦败育花药为对照群体 ,可育花药为目标群体 ,进行抑制差减杂交。用经过败育花药差减的可育花药cDNA群体构建了一个差减抑制杂交文库。结果显示 ,插入片段的大小主要集中在 30 0~ 5 0 0bp之间。随机选取 8个克隆进行Northern杂交分析 ,结果其中 7个克隆在可育花药和不育花药之间的表达存在差异。对其中 16个插入cDNA片段测序后与GenBank同源性比较表明 ,共获得未重复序列 13条 ,占81% ,其中与已知功能基因同源的 3条 ,与EST库中的序列同源的 7条 ,新的cDNA片段 3条。 展开更多
关键词 差减抑制杂交方法 鉴定 太谷核不育小麦 花药 败育过程 特异表达基因 ssh技术 Northern杂交
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