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针对趋化因子受体CCR5的SPA-WGA药物筛选方法
被引量：
1
1
作者
陈仁海
吕燕慧
+2 位作者
胡琼莹
裴钢
陈力
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第10期1266-1271,共6页
目的建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。方法通过降低SPA-WGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法...
目的建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。方法通过降低SPA-WGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。结果最后优化得到实验条件为:100μl反应体系,0.1 mg SPA-WGA小球,10μgCHO-CCR5细胞膜,10μmol.L-1GDP和0.3 nmo.lL-1[35S]GTPγS,室温孵育1.5 h并且在1 200 m in之内完成所有样品测量。该法与传统抽滤法比较,测量得到RANTES的EC50分别为:1.40 nmol.L-1和2.90 nmol.L-1,测量得到SCH-C的IC50分别为:2.95 nmo.lL-1和2.73 nmo.lL-1,测量结果相似,均呈现出较好的剂量效应关系。利用该法筛选54个化合物,筛到3个IC50在1~10 nmol.L-1的化合物。这3个化合物是否具有H IV-1进入抑制剂的潜在开发价值,还有待体外抗H IV-1实验的进一步验证和筛选。结论此方法操作简便,灵敏性和重现性好,且可高通量和自动化,该法适用于能与Gi家族蛋白偶联的GPCR的高通量药物筛选。
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关键词
趋化因子受体CCR5
亲和闪烁法
[35^S]GTPγS结合
实验方法
高通量筛选
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职称材料
临近闪烁分析技术在生命科学研究中的新进展
被引量：
2
2
作者
张洪杰
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期197-208,共12页
起源于放射免疫分析的临近闪烁分析法(scintillation proximity assay,SPA)是一种均相、灵敏、快速和简便的基于闪烁载体的分析平台.放射性标记分子和亲和标签分子的多样化和商业化,以及液闪计数器和液相操作等技术的发展,使得SPA操作...
起源于放射免疫分析的临近闪烁分析法(scintillation proximity assay,SPA)是一种均相、灵敏、快速和简便的基于闪烁载体的分析平台.放射性标记分子和亲和标签分子的多样化和商业化,以及液闪计数器和液相操作等技术的发展,使得SPA操作具有无需分离、被测目标分子易于固定和检测的优势.SPA已成为高通量检测的重要方法,广范应用于筛选药物靶点及先导化合物筛选、药物作用机理研究,以及病毒、肿瘤标志物等抗原的高通量检测.本文在简要介绍SPA技术的原理及系统分析SPA操作中环境、条件对测试结果影响的基础上,比较全面地介绍了SPA技术在生物学研究中的应用,尤其是在膜蛋白和细胞水平上的应用进展,介绍了应用实例,归纳了国内研究人员开展相关技术应用与技术创新的制约因素,给出了未来的发展趋势.基于SPA的生物学应用技术创新必然提升我们对细胞体系生物学的全面理解.
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关键词
临近闪烁分析法
非临近效应
猝灭效应
膜蛋白
细胞水平分析
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职称材料
题名
针对趋化因子受体CCR5的SPA-WGA药物筛选方法
被引量：
1
1
作者
陈仁海
吕燕慧
胡琼莹
裴钢
陈力
机构
中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第10期1266-1271,共6页
基金
国家"十五"重大科技专项资助项目(No2004AA2Z3443)
上海市科学技术委员会科技攻关计划资助项目(No03DZ19216)
文摘
目的建立针对趋化因子受体CCR5的药物筛选SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。方法通过降低SPA-WGA小球用量和对其他各种因素进行优化,如细胞膜用量、GDP浓度、体系孵育时间和样品连续测量时间,建立了SPA-WGA法[35S]GTPγS结合实验方法。结果最后优化得到实验条件为:100μl反应体系,0.1 mg SPA-WGA小球,10μgCHO-CCR5细胞膜,10μmol.L-1GDP和0.3 nmo.lL-1[35S]GTPγS,室温孵育1.5 h并且在1 200 m in之内完成所有样品测量。该法与传统抽滤法比较,测量得到RANTES的EC50分别为:1.40 nmol.L-1和2.90 nmol.L-1,测量得到SCH-C的IC50分别为:2.95 nmo.lL-1和2.73 nmo.lL-1,测量结果相似,均呈现出较好的剂量效应关系。利用该法筛选54个化合物,筛到3个IC50在1~10 nmol.L-1的化合物。这3个化合物是否具有H IV-1进入抑制剂的潜在开发价值,还有待体外抗H IV-1实验的进一步验证和筛选。结论此方法操作简便,灵敏性和重现性好,且可高通量和自动化,该法适用于能与Gi家族蛋白偶联的GPCR的高通量药物筛选。
关键词
趋化因子受体CCR5
亲和闪烁法
[35^S]GTPγS结合
实验方法
高通量筛选
Keywords
chemokine receptor CCRS
scintillation proximity assay （ spa ）
[ 35^ S ] GTPγS binding
assay
high throughput screening
分类号
R341.2 [医药卫生—基础医学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
临近闪烁分析技术在生命科学研究中的新进展
被引量：
2
2
作者
张洪杰
机构
中国科学院生物物理研究所
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016年第3期197-208,共12页
文摘
起源于放射免疫分析的临近闪烁分析法(scintillation proximity assay,SPA)是一种均相、灵敏、快速和简便的基于闪烁载体的分析平台.放射性标记分子和亲和标签分子的多样化和商业化,以及液闪计数器和液相操作等技术的发展,使得SPA操作具有无需分离、被测目标分子易于固定和检测的优势.SPA已成为高通量检测的重要方法,广范应用于筛选药物靶点及先导化合物筛选、药物作用机理研究,以及病毒、肿瘤标志物等抗原的高通量检测.本文在简要介绍SPA技术的原理及系统分析SPA操作中环境、条件对测试结果影响的基础上,比较全面地介绍了SPA技术在生物学研究中的应用,尤其是在膜蛋白和细胞水平上的应用进展,介绍了应用实例,归纳了国内研究人员开展相关技术应用与技术创新的制约因素,给出了未来的发展趋势.基于SPA的生物学应用技术创新必然提升我们对细胞体系生物学的全面理解.
关键词
临近闪烁分析法
非临近效应
猝灭效应
膜蛋白
细胞水平分析
Keywords
scintillation
proximity
assay
（
spa
）, none
proximity
effect, quenching effect, membrane protein, cellbased
assay
分类号
Q6-33 [生物学—生物物理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
针对趋化因子受体CCR5的SPA-WGA药物筛选方法
陈仁海
吕燕慧
胡琼莹
裴钢
陈力
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
1
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职称材料
2
临近闪烁分析技术在生命科学研究中的新进展
张洪杰
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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