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表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的理化特性及遗传稳定性研究 被引量:3
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作者 李诗 他蕾 +3 位作者 许霄 秦涛 陈素娟 彭大新 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期806-811,共6页
为检测各理化因子对表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的影响,并探究其在体内体外的遗传稳定性,本研究将rFPV-ILTVgB经热、酸、碱、氯仿、乙醚和胰酶分别处理后,接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)中,测定病毒的... 为检测各理化因子对表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gB基因的重组鸡痘病毒rFPV-ILTVgB的影响,并探究其在体内体外的遗传稳定性,本研究将rFPV-ILTVgB经热、酸、碱、氯仿、乙醚和胰酶分别处理后,接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)中,测定病毒的半数感染量(TCID50),结果显示:rFPV-ILTVgB经55℃水浴30 min或60℃水浴15 min可被完全灭活;经pH3~pH9的酸碱作用或经24 h的乙醚作用,病毒滴度变化不明显;经胰蛋白酶或氯仿处理后,病毒滴度下降明显;将rFPV-ILTVgB在CEF中连续培养30代,取第0、5、10、15、20、25、30代rFPV-ILTVgB分别扩增g B基因并测序,通过间接免疫荧光试验鉴定gB蛋白的表达,结果显示:rFPV-ILTVgB能在CEF细胞中稳定传代,gB基因序列在传代过程中未发生任何突变,gB蛋白稳定表达;同时将rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内连续传代,结果显示,rFPV-ILTVgB在SPF鸡体内的传代过程中,gB基因的阳性检出率逐渐降低,对鸡体的致病性逐渐降低,不存在毒力返强的可能,符合生物制品的相关要求。本研究选取表达ILTV优势流行株gB基因的rFPV-ILTVgB,首次从分子生物学和遗传学等角度研究该疫苗候选株,为后续该疫苗的生产、运输提供参考。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 重组鸡痘病毒 GB基因 理化特性 遗传稳定性
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表达鸡传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒对SPF鸡的免疫保护作用 被引量:17
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作者 田占成 孙永科 +5 位作者 王云峰 智海东 刘胜旺 孙惠玲 王玫 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期580-586,共7页
将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4+、TCRγδ+T淋巴细胞比例显著高于对照组... 将表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因的重组鸡痘病毒(rFPV-IBVS1)以5×106PFU剂量翅皮下注射接种4周龄的SPF鸡。血清抗体检测表明,该重组鸡痘病毒能刺激鸡体产生特异性抗体,外周血液中CD4+、TCRγδ+T淋巴细胞比例显著高于对照组,而CD8+T淋巴细胞比例低于对照组。免疫后4周用1×103.0EID50的传染性支气管炎病毒LX4株进行攻毒,结果表明,重组鸡痘病毒免疫组与IB弱毒疫苗免疫保护率分别为12/16和13/16;攻毒后喉拭子IBV分离结果表明,IB弱毒疫苗和重组鸡痘病毒免疫组的IBV气管排毒时间比对照组缩短了2 d,病毒的分离率显著低于对照组;肾脏、气管、肺脏、腺胃、脾和肝脏的病理损伤也较对照组轻,而且病变持续时间缩短。 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎 重组鸡痘病毒 免疫保护性
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鸡痘母源抗体对重组鸡痘疫苗免疫效果的影响 被引量:7
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作者 王云峰 智海东 +7 位作者 王玫 孙永科 张晶 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期546-549,共4页
为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降... 为了检测抗鸡痘病毒母源抗体对喉气管炎重组鸡痘疫苗的影响,孵化一批来自禽痘病毒高免母鸡的雏鸡,采用ELISA方法检测鸡痘疫苗免疫鸡后代的血清抗体。检测结果表明,雏鸡自孵出2d开始,血清鸡痘病毒抗体水平就开始缓慢下降,到15日龄时下降至临界值,已有部分鸡开始出现抗体阴性反应;到21日龄时,全部被检血清抗体水平均转为阴性。分别于不同日龄对试验雏鸡免疫接种重组鸡痘疫苗,结果只有当鸡体内的鸡痘病毒母源抗体全部为阴性(21日龄)后免疫时才能产生可靠的保护作用,保护率达到80%以上。这说明鸡痘病毒母源抗体对重组鸡痘疫苗的效果有一定的影响,因此重组疫苗合理的首免时间应选择在3周龄以后。 展开更多
关键词 鸡痘母源抗体 重组鸡痘疫苗 免疫效力 ELISA 传染性喉气管炎
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传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB在重组鸡痘病毒中的表达 被引量:16
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作者 张绍杰 童光志 +5 位作者 王柳 仇华吉 倪建强 孟松树 于力 王玫 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第3期205-208,共4页
本试验首先用PCR方法扩增出ILTVgB基因 ,将其克隆到质粒pUC1 1 9中 ,并进行了序列分析。将克隆的gB基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中 ,然后 ,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,筛选蓝色的重组病毒 ,并... 本试验首先用PCR方法扩增出ILTVgB基因 ,将其克隆到质粒pUC1 1 9中 ,并进行了序列分析。将克隆的gB基因再亚克隆到禽痘病毒转移载体质粒中 ,然后 ,通过质脂体方法转染由禽痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中 ,筛选蓝色的重组病毒 ,并对其进行了 6轮蚀斑纯化。该重组病毒通过PCR方法鉴定证明其基因组中含有完整的鸡传染性喉气管炎gB基因 。 展开更多
关键词 糖蛋白gB 重组鸡痘病毒 ILTV 基因表达
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H5亚型高致病性禽流感疫苗的免疫效力 被引量:21
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作者 贾立军 刘秀梵 +3 位作者 卢建红 张艳梅 彭大新 张如宽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期542-545,共4页
利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。结果发现,利用103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗... 利用表达H5亚型禽流感病毒血凝素基因(HA)的重组鸡痘病毒(rFPV-HA)和全病毒灭活疫苗免疫商品鸡,比较两种疫苗的保护效力。结果发现,利用103PFU和106PFU的rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡和含母源抗体商品鸡,HI抗体应答水平均低于灭活疫苗免疫组。利用H5亚型禽流感病毒经肌肉注射攻毒后,rFPV-HA免疫的无母源抗体商品鸡获得了完全保护(100%),高于灭活疫苗保护率(94.7%);但rFPV-HA免疫含母源抗体商品鸡诱导的保护率(11.4%~15.8%)低于灭活疫苗免疫组的保护水平(68.4%)。结果表明,rFPV-HA诱导HI抗体的能力低于灭活疫苗;但rFPV-HA免疫无母源抗体商品鸡的保护率完全达到灭活疫苗保护水平,显示出了良好的应用前景;灭活疫苗和rFPV-HA均受到母源抗体的干扰,不适于在母源抗体处于高峰期时使用。 展开更多
关键词 H5亚型高致病性禽流感疫苗 免疫效力 血凝素基因 重组鸡痘病毒 全病毒灭活疫苗
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鸡新城疫病毒HN基因在重组鸡痘病毒中的表达及其保护性的研究 被引量:14
6
作者 曹殿军 刘惠莉 +3 位作者 王莉林 闵平 张莹 卢景良 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期61-64,共4页
利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合We... 利用重组表达质粒HN-PEFL-29与鸡痘病毒FP9共转染鸡胚成纤维细胞,经蚀斑筛选,结合Southern杂交,获得含有外源HN基因的纯化重组病毒。将筛选到的重组病毒经4次传代,细胞可见明显病变。免疫荧光检测结合Western印迹表明该重组子表达产物主要位于细胞膜上,以糖基化(74kD)和非糖基化(68kD)2种形式存在,表达产物具有类似于天然NDVHN蛋白的红细胞吸附活性及神经氨酸酶活性,且这2种活性均可被NDVHN特异性单抗所抑制。对该表达产物的免疫活性研究表明:用重组病毒免疫4周龄SPF鸡的ELISA抗体水平和血凝抑制效价均高于FPV接种组,但低于LaSota弱毒活疫苗接种组。以NDV强毒株F48E9攻毒发现:接种重组病毒106pfu/只时,保护力可达80%,而104pfu/只时,保护率仅为60%,这表明该重组病毒对雏鸡具有一定的保护作用,且该保护作用与接种剂量有一定的相关性。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 重组禽痘病毒
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表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验 被引量:8
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作者 智海东 王云峰 +3 位作者 孙永科 杨玉艾 王玫 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期13-15,共3页
用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡... 用表达传染性喉气管炎病毒gB基因和新城疫病毒F基因的重组鸡痘病毒(rFPV-gB-F)制备的疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180 d分别采血,分离血清,检测抗FPV和gB的抗体。结果表明重组疫苗免疫后14 d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21 d血清抗FPV的抗体出现峰值;此后便开始回落,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。抗gB的抗体在免疫后的第二周达到阳性,之后的六个月都为阳性。在免疫后的每个月将免疫鸡取20只再分成两组,分别用新城疫强毒与传染性喉气管炎强毒的攻击。在免疫后的第一个月对新城疫的保护率为8/10,第2个月对新城疫的保护为7/10,第3个月为2/10,因此对新城疫的免疫保护期为2个月。在免疫后的5个月内可以使免疫鸡对传染性喉气管炎强毒攻击的保护率达到8/10以上,免疫后的6个月对ILT为8/13,因此rF-PV-gB-F对传染性喉气管炎的免疫保护期为5个月。 展开更多
关键词 新城疫 传染性喉气管炎 重组鸡痘病毒 免疫持续期
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表达传染性喉气管炎病毒gB基因重组鸡痘病毒疫苗免疫持续期试验 被引量:7
8
作者 王云峰 智海东 +6 位作者 王玫 彭金美 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期131-135,共5页
将200003批疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180和225d分别采血,分离血清,采用ELISA方法检测血清抗FPV抗体,结果表明重组疫苗免疫后14d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值,... 将200003批疫苗免疫4周龄SPF鸡,免疫后的7、14、21、30、60、90、120、150、180和225d分别采血,分离血清,采用ELISA方法检测血清抗FPV抗体,结果表明重组疫苗免疫后14d,免疫鸡血清抗体已经全部阳转,免疫后的21d血清抗FPV的抗体出现峰值,此后便开始下降,到免疫后的6个月抗体水平已经接近阴性对照的水平。用ILTVWG株和FPV102株强毒进行的攻毒保护试验与血清检测的结果基本一致,在免疫后的5个月内可以使免疫鸡获得100%(10/10)保护,免疫后的6个月对ILT和FP的免疫保护分别为1/7和2/10,此时需要对鸡群实施二次免疫。其他5批疫苗(200001、200002、200101、200102和200103)免疫SPF鸡后5个月用ILTVWG株和FPV102株攻击也获得了完全保护。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 鸡痘 重组鸡痘病毒 免疫持续期
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表达禽流感HA和NP双基因重组禽痘病毒的免疫保护性 被引量:8
9
作者 乔传玲 姜永萍 +4 位作者 田国斌 邓国华 王秀荣 陈化兰 于康震 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期178-181,共4页
将分别来自禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA基因和A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV HA NP)。将rFPV HA NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡... 将分别来自禽流感病毒A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)毒株的HA基因和A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)NP基因重组到禽痘病毒基因组中,获得了能同时高效表达这两种蛋白的重组禽痘病毒(rFPV HA NP)。将rFPV HA NP经翅膀刺种途径接种8周龄SPF鸡,并设亲本禽痘病毒免疫和非免疫对照组。免疫后4周分别用10LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV)A/Goose/Guangdong/1/96(H5N1)和A/FPV/Rostock/34(H7N1)毒株进行攻击。结果重组禽痘病毒rFPV HA NP免疫鸡群后能够诱导产生高水平的特异性抗体,可完全抵抗H5N1毒株的致死性攻击,并可有效阻止H7N1病毒攻击后病毒在泄殖腔的排出。而禽痘病毒免疫组和非免疫对照组在攻毒后全部发病并死亡。结果表明NP在与HA共同表达时,在诱导交叉保护性方面有一定的免疫增强功能。 展开更多
关键词 基因表达 禽流感 HA NP 双基因重组 禽痘病毒 免疫保护性
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抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗同居感染试验 被引量:7
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作者 王云峰 智海东 +6 位作者 王玫 孙永科 仇华吉 周艳君 田志军 张绍杰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期51-54,共4页
疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后... 疫苗的接触传播是疫苗免疫接种需要考虑的重要因素,为了检测重组鸡痘病毒载体疫苗水平传播的能力,对隔离条件下饲养的SPF鸡用重组鸡痘病毒基因工程疫苗接种,同时设立非免疫对照鸡,饲养期间特意延长清粪时间以增加感染的机会,1个月之后攻击传染性喉气管炎WG株强毒和鸡痘102株强毒,疫苗免疫鸡全部获得保护,而非免疫鸡则全部发病。在试验动物饲养场的自然条件下,将免疫鸡和试验对照两组鸡饲养在同一个鸡舍内,让疫苗毒的传播更接近自然条件。在每个月的攻毒试验中,对照鸡都没有获得对鸡痘和传染性喉气管炎强毒的保护。在疫苗免疫期间进行连续5个月的跟踪检测,同居未免疫鸡没有检测到抗传染性喉气管炎病毒gB抗体。这些实验结果表明抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗不能通过接触传播。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 鸡痘病毒 抗鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗 同居感染试验 免疫接种
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H7亚型禽流感病毒血凝素基因重组鸡痘病毒活载体疫苗免疫原性评估 被引量:7
11
作者 马文军 陈化兰 +3 位作者 于康震 张建林 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期7-9,共3页
本研究以细胞感染_转染技术构建了一株表达H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV_HA。以5×105PFU的rFPV_HA经翅下刺种免疫8周龄SPF鸡,免疫后第3周用100CID50的HA基因同源AIVA/ArfiStar/Eng_Q/983/79(H7N1)... 本研究以细胞感染_转染技术构建了一株表达H7亚型禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组鸡痘病毒rFPV_HA。以5×105PFU的rFPV_HA经翅下刺种免疫8周龄SPF鸡,免疫后第3周用100CID50的HA基因同源AIVA/ArfiStar/Eng_Q/983/79(H7N1)进行人工感染,1周后采集泄殖腔棉拭子进行病毒分离。免疫后第三周及攻毒后第1、2周对所有动物进行静脉采血,检测血凝抑制(HI)抗体和免疫沉淀(AGP)抗体。结果,攻毒前部分rFPV_HA免疫鸡可检测到HI抗体,但检测不到AGP抗体,野生型病毒(F017)接种组和空白对照组HI抗体和AGP抗体均为阴性。攻毒后rFPV_HA免疫组的HI抗体上升速度明显高于野生型病毒接种组和空白对照组。rFPV_HA免疫组有6/8的鸡为流感病毒分离阴性,野生型病毒接种组和空白对照组的试验鸡病毒分离全部为阳性。结果表明rFPV_HA可诱导鸡产生有效的免疫保护反应,阻止或降低消化道病毒排泄。rFPV_HA的成功构建为研制开发H7亚型禽流感活载体疫苗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H7亚型 血凝素基因 重组鸡痘病毒 疫苗 免疫原性评估 免疫保护反应
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡II型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达 被引量:10
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作者 孙永科 田占成 +5 位作者 王云峰 童光志 智海东 刘胜旺 王玫 杨增岐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期800-806,共7页
将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化... 将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡II型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγS1。rFPV-ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV-ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有16只发病(16/16),并有2只出现死亡(2/16),表明rFPV-ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 鸡Ⅱ型干扰素 重组鸡痘病毒
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表达H5亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶双基因重组禽痘病毒的构建 被引量:7
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作者 乔传玲 乔传玲 +8 位作者 于康震 于康震 贾永清 刘明 刘明 孟庆文 孟庆文 田国彬 唐秀英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第S1期178-,共1页
血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF... 血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)是禽流感病毒(AIV)的两种表面糖蛋白,主要诱导机体产生体液免疫应答。本研究采用SDS-蛋白酶K法提取禽流感病毒分离株A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的SPF鸡胚尿囊毒RNA,RT-PCR扩增完整的NA cDNA基因,将其克隆到载体pSY538中的禽痘病毒早晚期启动子 LP2EP2的下游,然后再将含有启动子的 NA基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+LacZ)中,构建了HA、NA双重组禽痘病毒转移载体pSY(HA+NA+LacZ),将它与禽痘病毒疫苗株S-FPV-017共转染鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在的条件下,经蓝斑筛选、六选蚀斑纯化、PCR鉴定等,结果表明已获得一株能同时稳定表达HA和NA蛋白的重组禽痘病毒,为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 神经氨酸酶基因 重组禽痘病毒
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新城疫病毒融合蛋白单克隆抗体的研制 被引量:5
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作者 胡北侠 吴艳涛 +1 位作者 刘秀梵 张如宽 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期498-501,共4页
以纯化的新城疫病毒(NDV)F48E9免疫BALB/C小鼠,最后1次免疫后3d取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。以纯化的NDV和表达NDV融合蛋白(F)的重组鸡痘病毒(rFPV)分别建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光(IIF)方法,并用于单抗筛... 以纯化的新城疫病毒(NDV)F48E9免疫BALB/C小鼠,最后1次免疫后3d取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合。以纯化的NDV和表达NDV融合蛋白(F)的重组鸡痘病毒(rFPV)分别建立了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光(IIF)方法,并用于单抗筛选的第一、二检测系统。经反复筛选并3次亚克隆后共获得7株针对F蛋白的单克隆抗体,它们的生物学特性和在不同反应系统中的敏感性各有不同。用这7株单抗对国内外不同时期分离的NDV毒株进行排谱发现,单抗几乎可以与所有毒株反应,表明所得的单抗都是针对NDVF蛋白的抗原保守区。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白 单克隆抗体 研制技术 鸡痘病毒 间接酶联 免疫吸附试验 单抗筛选
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单表达和共表达NDVF和HN基因重组鸡痘病毒活疫苗的免疫效力比较试验 被引量:6
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作者 甘军纪 田志鹏 +3 位作者 陶鸽 陈素娟 彭大新 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期790-794,共5页
为评价母源抗体对抗新城疫病毒(NDV)重组鸡痘病毒(rFPV)活疫苗免疫效力的影响,本研究用单表达、共表达NDV基因VII型病毒ZJ1株F、HN基因的rFPV活疫苗rFPV-12LSF、rFPV-12LSHN、rFPV-12LSFHN和油乳剂灭活疫苗分别免疫14日龄商品蛋鸡,rFPV... 为评价母源抗体对抗新城疫病毒(NDV)重组鸡痘病毒(rFPV)活疫苗免疫效力的影响,本研究用单表达、共表达NDV基因VII型病毒ZJ1株F、HN基因的rFPV活疫苗rFPV-12LSF、rFPV-12LSHN、rFPV-12LSFHN和油乳剂灭活疫苗分别免疫14日龄商品蛋鸡,rFPV疫苗的免疫剂量均为2×104pfu,免疫后21d分别用106ELD50NDV不同强毒株攻毒。其中F48E8株攻毒的免疫保护率分别为30.3%、73.2%、41.1%;而ZJ1株攻毒的免疫保护率分别为89.3%和35.8%、67.9%、78.6%、100%。用表达鸡IL-2基因的rFPV-12LSIL-2与rFPV-12LSHN联合免疫没有提高rFPV-12LSHN疫苗的免疫保护力。试验结果表明,单表达NDV HN基因的rFPV-12LSHN可作为NDV活疫苗候选株,为NDV重组鸡痘病毒活疫苗的进一步应用性开发奠定了基础。 展开更多
关键词 重组鸡痘病毒 F基因 HN基因 疫苗 新城疫
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共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒免疫抗体消长规律及免疫效力研究 被引量:4
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作者 陈素娟 丁彦红 +3 位作者 钱程 柴茂 彭大新 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期596-601,共6页
为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的免疫抗体消长规律及免疫效力,将重组病毒通过颈部皮下注射和翅部皮下注射2种不同的免疫途径来免疫鸡群,结果发现,2种免疫途径中,重组鸡痘病毒对鸡体质量增加... 为评价共表达鸡IL-6和H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒(rFPV-AIH5AIL6)的免疫抗体消长规律及免疫效力,将重组病毒通过颈部皮下注射和翅部皮下注射2种不同的免疫途径来免疫鸡群,结果发现,2种免疫途径中,重组鸡痘病毒对鸡体质量增加均无影响,而野生型鸡痘病毒均可抑制鸡体质量增加。翅部皮下注射疫苗组能够产生较高的血凝抑制(HI)抗体水平,免疫21d后抗体水平达到高峰,28d后开始下降,49d时仍保持在一定的水平。免疫SPF鸡21d后攻毒,表明该重组病毒能使经滴鼻攻毒的SPF鸡抵抗H5亚型AIV的致死性攻击,保护率为95%,与油苗组相同,与单表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸡痘病毒组(40%)差异显著;攻毒后3、5、7d采集喉头、泄殖腔棉拭子检测排毒情况,结果发现第3天排毒率最高,其中rFPV-AIH5AIL6免疫组排毒率为最低,显示IL-6在rFPV-AIH5IL6免疫过程中起到了免疫佐剂的作用,这为研制新型的禽流感重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 HA基因 鸡IL-6 重组鸡痘病毒 佐剂
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表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒的遗传稳定性 被引量:6
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作者 张体银 孙蕾 +1 位作者 刘武杰 刘秀梵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期405-407,共3页
本实验为了评价表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV282E4-SF,rFPVLp-SF)的遗传稳定性,将其在鸡胚成纤维细胞连续培养20代。通过蓝斑来鉴定重组鸡痘病毒纯度,结果所有蚀斑100%变蓝。通过对第0、10和20代F基因扩增并进行序列测定,所有... 本实验为了评价表达新城疫病毒F基因重组鸡痘病毒(rFPV282E4-SF,rFPVLp-SF)的遗传稳定性,将其在鸡胚成纤维细胞连续培养20代。通过蓝斑来鉴定重组鸡痘病毒纯度,结果所有蚀斑100%变蓝。通过对第0、10和20代F基因扩增并进行序列测定,所有碱基和氨基酸序列均和原始转移载体序列完全一致,没有发生任何改变。随后又通过间接免疫荧光证实rFPV282E4-FS和rFPVLP-FS各个代次F基因的特异表达。所有结果均显示了上述重组鸡痘病毒具有良好的遗传稳定性,满足兽医生物制品的遗传稳定性要求。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F基因 重组鸡痘病毒 遗传稳定性
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禽流感病毒血凝素与核蛋白在重组禽痘病毒中的共表达 被引量:5
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作者 乔传玲 张建林 +5 位作者 贾永清 邓国华 姜永萍 王秀荣 孟庆文 于康震 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期81-83,共3页
为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的... 为克服禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)仅诱导机体产生亚型特异性免疫应答的不足,本研究拟将病毒核蛋白(NP)基因与HA基因在重组禽痘病毒中实现共表达。首先构建转移载体,从测序质粒pUCNP中切下目的基因克隆到载体pSY538早晚期启动子LP2EP2的下游,再将含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2的NP基因片段亚克隆到已有的AIVHA基因重组禽痘病毒转移载体中,即得到同时含有HA和NP两种基因的重组转移载体pSY(HA+NP)。将转移载体脂质体转染已感染禽痘病毒亲本株S-FPV-017的鸡胚成纤维细胞。根据报告基因β-半乳糖苷酶(LacZ)基因的表达,蓝白斑法筛选重组病毒,经数轮蚀斑纯化,PCR鉴定及West-ern-blot分析,结果表明所获得的重组病毒能高效表达AIVHA及NP两种蛋白。此研究为进一步研制更为有效的禽流感基因工程活病毒载体疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 核蛋白基因 重组禽痘病毒 基因共表达 基因工程活病毒载体疫苗
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表达传染性支气管炎病毒S1基因重组鸡痘病毒的构建 被引量:4
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作者 田占成 孙永科 +4 位作者 王云峰 智海东 刘胜旺 王玫 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期466-470,共5页
将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋... 将鸡传染性支气管炎病毒S1基因插入到鸡痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681。将pSY681-IBVS1转染已感染亲本鸡痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与鸡痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IBVS1蛋白的重组鸡痘病毒rFPV-IBVS1。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选且进一步纯化14代。S1基因的PCR检测表明,获得的含传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒能够稳定遗传,间接免疫荧光和Westernblot等试验证实该重组病毒在CEF内真实地表达了分子量约为90Ku的具有免疫学活性的IBVS1糖蛋白。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 重组鸡痘病毒 S1基因
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传染性喉气管炎新城疫鸡痘重组病毒免疫效力的研究 被引量:4
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作者 智海东 王云峰 +3 位作者 张晶 王玫 王凤雪 童光志 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期807-811,共5页
在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1 mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30 d后分组分别用ILTVWG株和NDVF4... 在表达鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)糖蛋白gB基因和新城疫病毒(NDV)F基因的重组鸡痘病毒(rF-PV-gB-F)安全性检验合格后,以5.0×101~5.0×104PFU不同含量按0.1 mL/鸡的剂量免疫100只30日龄SPF鸡,30 d后分组分别用ILTVWG株和NDVF48E9株强毒进行攻击.免疫鸡抗鸡痘病毒抗体都转为阳性,痘反应和接种剂量有关,重组疫苗的最小反应剂量为50PFU.重组疫苗可以诱发对新城疫和传染性喉气管炎的保护,0.1mL/鸡的接种量在500~5 000PFU浓度范围内的免疫效果最好,对于ILTV攻击的发病保护率在70%以上,对NDV强毒攻击的抗死亡保护率可以达到80%,这为进一步考察疫苗的免疫效力试验以及进行田间试验奠定了基础. 展开更多
关键词 传染性喉气管炎 新城疫 重组鸡痘病毒 最佳免疫剂量 安全性
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