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人P21^WAF1/CIP1启动子荧光素酶真核表达载体的构建
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作者 李兵 申社林 +2 位作者 李朝争 郭靠山 李建广 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第2期179-181,共3页
目的:构建含人P21WAF1/CIP1基因启动子的表达载体pGL3-P21p。方法:以全血总RNA为模板,经RT-PCR扩增P21WAF1/CIP1基因启动子,并将其克隆到T-easy载体,测序分析,然后经酶切再克隆到pGL3-basic,构成重组真核表达载体pGL3-P21p。将pGL3-P21... 目的:构建含人P21WAF1/CIP1基因启动子的表达载体pGL3-P21p。方法:以全血总RNA为模板,经RT-PCR扩增P21WAF1/CIP1基因启动子,并将其克隆到T-easy载体,测序分析,然后经酶切再克隆到pGL3-basic,构成重组真核表达载体pGL3-P21p。将pGL3-P21p转染到乳腺癌细胞株MCF7中,并检测细胞中荧光素酶的活性。结果:经测序、酶切等检测证实重组真核表达载体pGL3-P21p构建成功,荧光素酶活性检测显示P21WAF1/CIP1基因启动子对荧光酶基因表达起到了正调控作用。结论:P21WAF1/CIP1启动子荧光素酶真核表达载体的成功构建为进一步研究P21WAF1/CIP1基因启动子的表达调控奠定了基础。 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1 启动子 pGL3-basic载体 荧光素酶
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DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化 被引量:12
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作者 宋宜 孟祥兵 +4 位作者 梅柱中 刘斌 董燕 孙国敬 孙志贤 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期277-281,共5页
毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期... 毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1 展开更多
关键词 DNA损伤 生物学反应 ATM p21^WAF1/cip1 直接磷酸化 电离辐射 蛋白磷酸化
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腺病毒介导p21^(WAF1/CIP1)基因转移及诱导胃癌细胞凋亡 被引量:7
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作者 郑世营 葛锦锋 +2 位作者 沈振亚 赵军 秦涌 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2002年第1期9-12,共4页
目的 :探讨 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 ,进一步了解p2 1基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法 :通过腺病毒介导外源性p2 1基因转移到有 p5 3基因突变的人胃癌细胞系SGC 790 1,对 p2 1基因的... 目的 :探讨 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )过表达对人胃癌细胞恶性表型和细胞凋亡的影响 ,进一步了解p2 1基因对肿瘤细胞的治疗作用。方法 :通过腺病毒介导外源性p2 1基因转移到有 p5 3基因突变的人胃癌细胞系SGC 790 1,对 p2 1基因的表达、细胞生长的抑制与机制和对肿瘤模型的治疗效果进行分析。结果 :外源性 p2 1基因在靶细胞高水平表达显著抑制了胃癌细胞的生长和集落形成 ,流式细胞仪检测显示G1期阻滞并发生了凋亡。瘤内注射Ad p2 1对裸鼠体内移植瘤有一定抑瘤作用。 结论 :p2 1基因可能参与肿瘤细胞凋亡的诱导 ,使 p2 1基因在肿瘤的基因治疗 ,特别是在与其他凋亡诱导因子联合作用的方案中有更好的应用前景。 展开更多
关键词 胃肿瘤 p21基因 基因转移 细胞凋亡 基因治疗 腺病毒 p21^WAF1/cip1
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骨巨细胞瘤p21^(WAF1/CIP1)、PCNA的表达及其与病理分级和复发的关系 被引量:3
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作者 董健文 廖威明 +3 位作者 韩士英 李扬 李佛保 丘钜世 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期937-938,共2页
关键词 骨巨细胞瘤 p21^WAF1/cip1 pCNA 病理分级 复发
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曲古菌素A调节NB4细胞组蛋白乙酰化和p21^(WAF1/CIP1)表达 被引量:3
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作者 李新刚 陈燕 +1 位作者 吴青 刘红利 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期41-43,47,共4页
 目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmo...  目的 研究去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A (trichostatin A, TSA) 对人急性早幼粒细胞白血病细胞NB4组蛋白H3乙酰化水平的调节作用及对细胞周期素依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1 表达的影响。方法 应用 300、150、75、37 5、18 75 nmol/L浓度的TSA分别作用NB4细胞 4、8、12、24、48 h, 提取细胞的总 mRNA和总蛋白, 采用RT PCR技术检测 p21WAF1/CIP1mRNA表达情况, 并用免疫印迹技术 (Western blot) 观察组蛋白 H3 的乙酰化水平变化及 p21WAF1/CIP1蛋白的表达水平。结果 TSA对组蛋白H3乙酰化作用随时间改变而变化; 在低浓度时就可引起组蛋白H3的乙酰化。TSA对 p21WAF1/CIP1 mRNA和 p21WAF1/CIP1 蛋白表达的影响呈时间和剂量依赖性。结论 TSA能够明显上调NB4细胞组蛋白H3的乙酰化水平, 促进细胞周期依赖性激酶抑制剂 p21WAF1/CIP1的表达。 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1 NB4细胞 表达水平 酶抑制剂 TSA 组蛋白乙酰化 细胞周期素依赖性激酶 去乙酰化 RNA RT-pCR技术
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P21^(waf1/cip1)和P53在子宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义 被引量:3
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作者 姚煜 锁爱莉 +1 位作者 何静 李明众 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期461-463,共3页
目的 探讨P2 1waf1/cip1和P5 3基因与子宫颈癌发生发展的关系以及它们之间的相互关系。方法 采用免疫组化方法研究 15例慢性子宫颈炎和 47例子宫颈癌P2 1waf1/cip1和P5 3的表达情况。结果 P5 3蛋白在慢性子宫颈炎中阳性表达率为 0 ,... 目的 探讨P2 1waf1/cip1和P5 3基因与子宫颈癌发生发展的关系以及它们之间的相互关系。方法 采用免疫组化方法研究 15例慢性子宫颈炎和 47例子宫颈癌P2 1waf1/cip1和P5 3的表达情况。结果 P5 3蛋白在慢性子宫颈炎中阳性表达率为 0 ,子宫颈癌中阳性表达率为 38 3%,其P5 3蛋白异常表达与肿瘤发生、肿瘤细胞分化程度、临床分期有关。P2 1waf1/cip1在慢性子宫颈炎中阳性表达率为 86 7%,子宫颈癌中阳性表达率为 5 7 5 %,其阳性表达率降低与肿瘤发生、肿瘤细胞分化程度相关。结论 在子宫颈癌中P2 1waf1/cip1可通过P5 3依赖及非P5 3依赖两种途径表达。 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1 p53 子宫颈鳞状细胞癌 免疫组化 基因表达
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细胞周期素D1和P21^(WAF1/CIP1)蛋白在肺癌组织中的表达 被引量:3
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作者 王小闯 李秀霞 +1 位作者 孙润芹 赵世平 《西安医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期220-222,共3页
目的 研究细胞周期素 (Cyclin)D1和P2 1 WAF1/CIP1在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床分期、组织类型、分化程度及转移和预后的关系。方法 用免疫组化法检测癌旁肺组织及肺癌组织中CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达。结果 ①Cycli... 目的 研究细胞周期素 (Cyclin)D1和P2 1 WAF1/CIP1在肺癌组织中的表达及其与肺癌临床分期、组织类型、分化程度及转移和预后的关系。方法 用免疫组化法检测癌旁肺组织及肺癌组织中CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达。结果 ①CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1在癌旁肺组织中不表达或很少表达 ,而在癌组织中有较高的表达率 ,其阳性表达率分别为 60 .4% (2 9/ 4 8)和 2 7.0 8% (1 3 / 4 8)。②CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白表达与肿瘤的病理类型和临床TNM分期无关 ;与肺癌组织分化程度有关 ,其中CyclinD1阳性率越高 ,肺癌的分化程度越低 (P <0 .0 5 ) ,P2 1 WAF1/CIP1蛋白阳性率越高 ,肺癌的分化程度越高 (P <0 .0 5 )。③P2 1蛋白阳性表达者转移率低于阴性表达者 (P <0 .0 5 ) ,并且其存活期长 (P <0 .0 5 )。④CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达呈显著负相关 (P <0 .0 5 )。结论 ①CyclinD1和P2 1 WAF1/CIP1蛋白的表达与肿瘤的组织分化有关 ;②P2 展开更多
关键词 肺癌 p21^WAF1/cip1基因 免疫组织化学 肿瘤转移 预后 基因表达 临床分期
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Survivin、P21^(WAF1/CIP1)及Cyclin D1蛋白表达及与早期宫颈癌复发的关系 被引量:13
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作者 李全红 姚嘉斐 胡淑敏 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2003年第6期495-499,共5页
目的 :探讨凋亡抑制蛋白Survivin、细胞周期蛋白CyclinD1及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P2 1WAF1/CIP1在宫颈癌中的表达及与早期宫颈癌复发的关系。方法 :应用免疫组化S P法 ,检测Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在 5 5例宫颈... 目的 :探讨凋亡抑制蛋白Survivin、细胞周期蛋白CyclinD1及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白P2 1WAF1/CIP1在宫颈癌中的表达及与早期宫颈癌复发的关系。方法 :应用免疫组化S P法 ,检测Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在 5 5例宫颈癌 (鳞癌 4 5例 ,腺癌 10例 )及 10例正常宫颈组织中的表达。结果 :①Survivin、CyclinD1及P2 1WAF1/CIP1蛋白在正常宫颈组织的阳性表达率分别为 0、10 0 %、2 0 0 % ;在宫颈鳞癌中阳性表达率分别为 6 8 9%、5 1 1%、5 7 8% ;在宫颈腺癌中阳性表达率分别为 6 0 0 %、90 0 %、80 0 % ;与正常宫颈组织比较 ,三者在宫颈癌中的阳性表达率明显增高 (P <0 0 5 )。②Survivin或CyclinD1蛋白的表达与鳞癌临床分期及病理分级成正相关 (P <0 0 5 ) ,而P2 1WAF1/CIP1蛋白的表达与其无关 (P >0 0 5 )。③P2 1WAF1/CIP1与Survivin或CyclinD1的共表达仅与病理分级有关 (P <0 0 5 )。而三种蛋白的共表达时与临床分期及病理分级均有关 (P <0 0 5 )。④Survivin、cyclinD1蛋白单独表达与早期宫颈癌的复发有关 (P <0 0 5 ) ,二者的共表达与早期宫颈癌的盆腔淋巴结转移有关(P <0 0 5 )。结论 :Survivin及cyclinD1蛋白在宫颈癌中的表达与临床晚期、分化不良及复? 展开更多
关键词 SURVIVIN CYCLIND1 p21^WAF1/cip1 宫颈癌 复发 免疫组化
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乳腺癌MCF-7细胞p21^(WAF1/CIP1)启动子区雌激素受体α的高功能结合位点 被引量:2
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作者 邹丹 冯秀艳 周伟强 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期677-680,685,共5页
目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培... 目的研究雌激素受体(ER)α募集于p21^(WAF1/CIP1)启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节p21^(WAF1/CIP1)启动子功能中的分子机制。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol/L的SAHA 0.88μL(SAHA组)、0.625 nmol/L的leptin 10μL(leptin组)处理24 h,对照组在完全型RPMI-1640培养基中培养细胞。应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与ERα抗体孵育,收集纯化结合ERα抗体的DNA片段,应用实时PCR法检测p21^(WAF1/CIP1)启动子区从转录起始点到其上游(+2^-4 000 bp)f1~f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCt法分析。结果对照组中,与ERα抗体结合的f1、f2、f8片段DNA相对表达量较f9片段高出2倍以上(P<0.01)。与对照组比较,SAHA及leptin组f1~f10片段与ERα抗体结合能力均降低,其中SAHA组f8片段DNA相对表达量达最低值(P<0.01),且明显低于leptin组(P<0.01)。SAHA组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其升高(P<0.05或0.01)。leptin组中以f8片段为对照,其他片段与ERα抗体结合能力均较其降低,除f1外均有统计学差异(P<0.01)。结论乳腺癌细胞增殖过程中细胞增殖信号招募ERα至p21^(WAF1/CIP1)启动子区,且p21^(WAF1/CIP1)启动子区-2 800 bp^-3 200 bp区域存在与ERα高度结合的靶功能区。 展开更多
关键词 乳腺癌 MCF-7 细胞 p21^WAF1/cip1 雌激素受体 α 辛二酰苯胺异羟肟酸 瘦素
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胃癌组织cyclinE和p21^(WAF1/CIP1)蛋白表达的意义 被引量:5
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作者 李远晃 徐志林 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 2001年第5期419-421,共3页
目的 :探讨cyclinE和p2 1WAF1/CIP1蛋白在胃癌发生发展中的作用及其表达的意义。方法 :采用免疫组化S P法检测正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、萎缩性胃炎伴不典型增生各 2 0例和 78例胃腺癌组织中cyclinE和 p2 1WAF1/CIP1蛋白表... 目的 :探讨cyclinE和p2 1WAF1/CIP1蛋白在胃癌发生发展中的作用及其表达的意义。方法 :采用免疫组化S P法检测正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生、萎缩性胃炎伴不典型增生各 2 0例和 78例胃腺癌组织中cyclinE和 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达。结果 :cyclinE蛋白阳性表达在胃癌组高于正常胃黏膜、萎缩性胃炎伴肠上皮化生组 ,而 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达则相反 ,差异均有显著性 (P <0 0 5 ) ;cyclinE、p2 1WAF1/CIP1蛋白表达与胃癌细胞分化程度相关 (P <0 0 5 ) ;有肝转移的胃癌组cyclinE阳性表达率高于无肝转移组 (P <0 0 5 ) ;有淋巴结转移组 p2 1WAF1/CIP1蛋白表达率低于无淋巴结转移组 (P <0 0 5 )。结论 :cyclinE蛋白高表达与 p2 1WAF1/CIP1蛋白失表达可能参与胃癌的发生发展过程 ,检测cyclinE和p2 展开更多
关键词 胃肿瘤 CYCLINE p21^WAF1/cip1 免疫组织化学
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重组核心蛋白聚糖转染对HepG2细胞p21^(WAF1/CIP1)表达的影响 被引量:1
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作者 王雅丽 张玉成 +1 位作者 杜珍武 张桂珍 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期104-107,196,共5页
目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂... 目的:将已构建完成的分泌型核心蛋白聚糖真核表达载体转染到HepG2细胞中并检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1的表达,探讨核心蛋白聚糖抗肿瘤作用的机制。方法:HepG2细胞分为转染pcDNA3.1-DCN载体的转染组和转染pcDNA3.1空载体的对照组,脂质体介导核心蛋白聚糖真核表达载体及质粒pcDNA3.1载体分别转染到HepG2细胞中,经G418筛选建立稳定转染的细胞株,采用RT-PCR法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1mRNA表达;Western blotting法检测核心蛋白聚糖和p21WAF1/CIP1蛋白质的表达;免疫组化法检测核心蛋白聚糖蛋白质的表达。结果:RT-PCR检测转染组细胞核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1mRNA表达的灰度比值均高于对照组(P<0.05),Western blotting检测核心蛋白聚糖及p21WAF1/CIP1蛋白质表达的灰度比值也高于对照组(P<0.05),免疫组化检测转染组细胞核心蛋白聚糖蛋白质表达的阳性细胞计数高于对照组(P<0.05)。结论:成功建立了稳定转染核心蛋白聚糖的HepG2细胞株,并证实核心蛋白聚糖能够提高p21WAF1/CIP1mRNA和蛋白质的表达。 展开更多
关键词 核心蛋白聚糖 p21^WAF1/cip1 HEpG2 转染
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PSA启动子介导的TAT-p21^(WAF1/CIP1)融合蛋白在前列腺癌细胞中的特异表达及活性初探 被引量:1
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作者 蔡捷 苑辉卿 +5 位作者 孔峰 任凯 王小玲 吉恺 胡晓燕 张建业 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期498-503,共6页
目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前... 目的:设计并构建含有前列腺组织特异性抗原(PSA)启动子的TAT-p21WAF1/CIP1融合蛋白真核表达载体(pPSA-TAT-p21),使由TAT蛋白转导结构域(TAT)介导的抑癌基因蛋白p21WAF1/CIP1(p21)能够在前列腺癌细胞中实现特异性的跨膜转运,增强p21对前列腺癌的抑制作用。方法:利用PCR技术构建含有PSA启动子、TAT蛋白转导序列和p21读码框架的真核表达载体pPSA-TAT-p21,并进行酶切、测序鉴定。脂质体法在前列腺癌LNCaP细胞和大肠癌HT-29细胞中转染上述表达载体及对照质粒后进行反转录PCR(RT-PCR),检测p21的mRNA以及蛋白在不同细胞中的表达情况。MTT法检测转染pPSA-TAT-p21后LNCaP细胞的增殖情况。结果:成功构建pPSA-TAT-p21真核表达载体。RT-PCR和Western blotting结果显示PSA-TAT-p21在前列腺癌细胞中有明显表达,在大肠癌细胞中基本不表达,呈现特异性的表达,而由CMV启动子介导的p21(pCMV-21)对照组在两个细胞株中均有表达。细胞增殖实验结果显示,含有TAT蛋白转导结构域的PSA-TAT-p21的融合蛋白对前列腺癌细胞增殖的抑制作用明显高于不含TAT的PSA-p21蛋白。结论:pPSA-TAT-p21能够在前列腺癌细胞中特异性地高效表达,为前列腺癌基因的靶向治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 前列腺特异抗原 TAT—p21^WAF1/cip1融合蛋白 前列腺肿瘤 LNCAp细胞 HT-29细胞
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骨肉瘤p21^(WAF1/CIP1)基因DNA序列分析及其mRNA、p21蛋白表达
13
作者 张春林 廖威明 +2 位作者 李佛保 曾炳芳 曾益新 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期445-450,共6页
【目的】通过检测骨肉瘤组织中p21WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化,探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价。【方法】采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达。采用PCR-SSC... 【目的】通过检测骨肉瘤组织中p21WAF1/CIP1基因的表达及其DNA序列变化,探讨它们与骨肉瘤生物学特性之间的关系及其对预后的评价。【方法】采用原位杂交及免疫组化法检测45例人骨肉瘤p21WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达。采用PCR-SSCP方法检测骨肉瘤p21WAF1/CIP1基因DNA变化。采用双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序。【结果】①p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为18%(8/45);②p21WAF1/CIP1基因mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42%(19/45);③DNA序列分析结果显示,骨肉瘤中p21WAF1/CIP1基因第三外显子(exon3)的cDNA全长序列的609位碱基处发生C→T改变,发生率为47%(17/36)。exon2a的cDNA全长序列的187位、303位碱基处发生G→T改变,发生率为6%(2/36)。exon2b的cDNA全长序列的522位碱基处发生G→A改变,发生率为2.7%(1/36)。【结论】①随着骨肿瘤恶性度的升高,p21WAF1/CIP1基因mRNA及p21蛋白的表达下降。②p21WAF1/CIP1基因mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。③本实验对中国人群骨肉瘤p21WAF1/CIP1基因DNA多态性位点进行了新的定位,这些位点可能会对今后对该基因的研究提供有意义的参考。 展开更多
关键词 骨肉瘤 p21^WAF1/cip1基因 表达 p21蛋白 改变 RNA 发生率 碱基 全长序列 DNA
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稳定高效表达p21^(WAF1/CIP1)的HCT/8-WAF1细胞株的建立
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作者 卜丽莎 侯睿智 +1 位作者 杜珍武 王维忠 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期283-285,共3页
目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 HCT/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 HCT/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应... 目的 :建立高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ CIP1大肠癌细胞株 HCT/8- WAF1。方法 :应用阳离子脂质体分别将带有目的基因 WAF1的 pc DNA3及空白 pc DNA3质粒转染大肠癌细胞株 HCT/8,经G41 8进行阳性筛选 ,将筛选的阳性细胞连续传代培养 ,应用免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1的表达。结果 :经 G41 8筛选后 ,空白对照细胞全部死亡 ,转染目的基因及空质粒组的细胞存活 ,可连续传代培养 30代以上 ,并选择 HCT/8作对照 ;免疫荧光技术监测 p2 1 WAF1/ CIP1表达结果显示转染目的基因的 HCT/8细胞 p2 1 WAF1/ CIP1表达阳性细胞率 ( 89.96% )显著高于转染空质粒组 ( 8.0 2 % )和空白对照组 ( 3.39% ) ( F=1 6 60 8.99,P<0 .0 0 1 ) ;各代间差异无显著性 ( F=2 .1 71 ,P>0 .0 5 )。结论 :HCT/8- WAF1是一株高效、稳定表达 p2 1 WAF1/ 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1 HCT/8 质粒 脂质体 基因表达 肿瘤细胞 培养的 转染
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p21^(WAF1/CIP1)基因的生物学功能及其与肿瘤发生的关系 被引量:3
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作者 席亚光 任英慧 +1 位作者 苏秀兰 柯杨 《北京大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期444-447,共4页
p21 WAF1/CIP1 gene is known for a most important cell cycle regulator as well as its roles in apoptosis and differentiation. This review focuses on p21 WAF1/CIP1 gene functions and its association with carcinogenesis.... p21 WAF1/CIP1 gene is known for a most important cell cycle regulator as well as its roles in apoptosis and differentiation. This review focuses on p21 WAF1/CIP1 gene functions and its association with carcinogenesis. Better understanding of the structure and function of p21 WAF1/CIP1 gene may help to comprehend molecular mechanisms of cancers and to facilitate diagnosis and treatment of malignancy. 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1基因 生物学功能 肿瘤发生 细胞周期 细胞凋亡
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p21^(WAF1/CIP1)蛋白在小鼠卵泡与黄体中的表达 被引量:3
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作者 陈五妍 王正虹 +2 位作者 陈树林 韩苗苗 周涛 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2009年第12期29-33,共5页
【目的】研究p21WAF1/CIP1蛋白在成年小鼠卵泡发育与黄体形成及退化过程中表达的变化规律。【方法】取20只成年雌性小鼠的卵巢,制作石蜡切片,经免疫组织化学SP法染色后,观察p21WAF1/CIP1蛋白在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡... 【目的】研究p21WAF1/CIP1蛋白在成年小鼠卵泡发育与黄体形成及退化过程中表达的变化规律。【方法】取20只成年雌性小鼠的卵巢,制作石蜡切片,经免疫组织化学SP法染色后,观察p21WAF1/CIP1蛋白在原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡、三级卵泡、成熟卵泡、闭锁卵泡、早期黄体、中期黄体以及晚期黄体中的定位及表达。【结果】卵泡发育和黄体形成及退化过程中均有p21WAF1/CIP1蛋白的表达;p21WAF1/CIP1蛋白在此过程中呈先升高后降低的趋势,峰值出现在三级卵泡时期。【结论】p21WAF1/CIP1蛋白在卵母细胞中发挥一定作用,可能参与优势卵泡的选择,并对卵泡发育及黄体形成和退化有影响。 展开更多
关键词 p21^WAF1/cip1蛋白 卵泡发育 黄体形成与退化
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益气养阴化浊通络方通过调控miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导 的线粒体自噬减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤 被引量:1
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作者 郭克磊 李颖利 +6 位作者 宣晨光 侯紫君 叶松山 李林运 陈丽平 韩立 卞华 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期27-34,共8页
目的探讨益气养阴化浊通络方(YYHT)对高糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的保护作用及潜在机制。方法大鼠分别灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理盐水1周制备低、中、高浓度含药血清和空白血清。体外培养MPC5,分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+... 目的探讨益气养阴化浊通络方(YYHT)对高糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的保护作用及潜在机制。方法大鼠分别灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理盐水1周制备低、中、高浓度含药血清和空白血清。体外培养MPC5,分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、模型组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+NC+高浓度含药血清)、miR-21a-5p抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pinhibitor+空白血清)。qRT-PCR检测miR-21a-5p表达及FoxO1、PINK1、Parkin的mRNA表达,Western blotting检测足细胞标志蛋白(Nephrin、Podocin)及FoxO1、PINK1、Parkin蛋白表达,MDC染色检测自噬荧光。将MPC5分为阴性对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-NC+空白血清)、miR-21a-5p-mimic组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pmimic+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+高浓度含药血清),荧光素酶报告基因实验检测miR-21a-5p/FoxO1转录调控,RIP检测miR-21a-5p与靶基因FoxO1结合。结果与对照组相比,模型组miR-21a-5p表达升高(P<0.05),FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达降低(P<0.05),FoxO1、PINK1、Parkin、Nephrin、Podocin蛋白表达及自噬荧光降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量YYHT含药血清及miR-21a-5p-inhibitor促进Nephrin及Podocin蛋白表达(P<0.05),抑制miR-21a-5p表达(P<0.05),增强FoxO1、PINK1、Parkin的mRNA和蛋白表达及自噬荧光(P<0.05)。与miR-21a-5p-NC组相比,miR-21a-5p-mimic组抑制FoxO1转录(P<0.05),促进miR-21a-5p与FoxO1的结合(P<0.05);与miR-21a-5p组相比,YYHT含药血清组促进FoxO1转录(P<0.05),抑制miR-21a-5p与FoxO1的结合(P<0.05)。结论益气养阴化浊通络方可能通过调节miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导的线粒体自噬,减轻高糖诱导的小鼠肾足细胞损伤。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 益气养阴化浊通络方 线粒体自噬 足细胞损伤 miR-21a-5p/FoxO1/pINK1
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组蛋白去乙酰化酶抑制剂调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平影响乳腺癌MCF-7细胞周期 被引量:12
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作者 周慧 周伟强 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期1421-1425,共5页
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histone deacetylase inhibitor,HDACI)调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平,调节乳腺癌MCF-7细胞周期的分子机制。方法采用实时定量PCR、Western blot和DNA-Ch IP方法测定SAHA对乳腺癌MCF-7细胞周期调控系统的影响;应用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,Ch IP)技术探究SAHA调控p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平的情况。结果 SAHA明显影响乳腺癌细胞周期相关调控因子的表达;在针对p21^(WAF1/CIP1)基因功能的筛查中发现,SAHA可明显诱导p21^(WAF1/CIP1)mRNA和蛋白的表达,并且可调节p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化水平。结论 SAHA通过影响p21^(WAF1/CIP1)启动子乙酰化程度调节乳腺癌MCF-7细胞周期的进程。 展开更多
关键词 乳腺癌 雌激素受体阳性细胞 MCF-7 SAHA p21(WAF1/cip1) 乙酰化
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子宫内膜样腺癌中Id-1、Smad4和p21^(WAF1/CIP1)蛋白及mRNA的表达 被引量:4
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作者 陈晶晶 陈柯 +1 位作者 王晓秋 胡闻 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第1期39-43,共5页
目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)、DPC4/Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学和原位分子杂交方法,检测30例正常子宫内膜组织、30... 目的探讨分化抑制因子-1(Id-1)、DPC4/Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜样腺癌(EA)组织中的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学和原位分子杂交方法,检测30例正常子宫内膜组织、30例单纯性增生过长、30例复杂性增生伴不典型增生、72例EA组织中Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及其mRNA的表达。结果Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及三者mRNA在EA中的表达率分别为86.1%(62/72)、44.4%(32/72)、63.9%(46/72)、73.6%(53/72)、41.7%(30/72)和61.1%(44/72),Id-1和p21WAF1/CIP1阳性率明显高于正常和各型增生内膜;而Smad4则相反;Id-1蛋白及mRNA过表达与组织学分级、临床分期、浸润程度和淋巴结转移有关(P值均<0.05);Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA阳性表达与组织学分级、临床分期和浸润程度有关(P值均<0.05);Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白与相对应的mRNA呈正相关;Id-1与Smad4表达呈负相关。结论Id-1、Smad4和p21WAF1/CIP1蛋白及mRNA表达异常与EA的发生发展有关,有可能成为判断子宫内膜组织癌变和转移的重要指标。 展开更多
关键词 子宫内膜样腺癌 ID-1 SMAD4 p21WAF1/cip1
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叶酸通过调节p53/p21(waf1/cip1)信号途径促进小鼠神经干细胞增殖和分化 被引量:4
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作者 王虹 王芳 +1 位作者 范利军 包金风 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期247-252,共6页
目的:研究叶酸对体外培养小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响及作用机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测叶酸对NSCs增殖的影响;撤除生长因子后,用含10%胎牛血清的培养基诱导... 目的:研究叶酸对体外培养小鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖和分化的影响及作用机制。方法:采用无血清悬浮培养方法分离培养新生小鼠脑NSCs,通过MTT法检测叶酸对NSCs增殖的影响;撤除生长因子后,用含10%胎牛血清的培养基诱导分化培养6 d后,采用Tuj1(神经元标记物)和GFAP(胶质细胞标记物)免疫荧光双标记法检测叶酸对NSCs分化的影响;并应用流式细胞术、RT-PCR法检测给予叶酸对NSCs细胞周期、p53和p21(waf1/cip1)mRNA水平的影响。结果:与对照组相比,MTT法测定结果显示,叶酸组NSCs增殖能力明显增强;分化后免疫荧光双标法测定显示,叶酸组Tuj1阳性细胞的比率明显增加,且差异具有显著性(P<0.01);流式细胞仪测定结果显示,叶酸组NSCs在G0/G1期细胞数量明显减少(P<0.01),而G2/M期细胞数量明显增多(P<0.01);RT-PCR结果显示,叶酸组NSCs中p53和p21 mRNA表达量明显降低。结论:叶酸能促进NSCs增殖及向神经元分化;叶酸对NSCs增殖和分化的影响与调节NSCs细胞周期及p53/p21(waf1/cip1)信号转导途径相关。 展开更多
关键词 叶酸 神经干细胞 增殖 分化 p53/p21(waf1/cip1)信号途径 小鼠
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