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采用蛋白组学技术分析质粒介导siRNA的“Off-target”效应 被引量:1
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作者 周昌华 章崇杰 +2 位作者 彭晓东 魏大鹏 王光迪 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期170-180,共11页
siRNA的"脱靶效应"(off-target effects)是RNA干扰应用研究领域的热点问题.采用蛋白组学技术对质粒介导的siRNA稳定沉默原癌基因c-myc可能存在的"off-target"效应进行初步研究,为siRNA靶向特异性的系统评价奠定理... siRNA的"脱靶效应"(off-target effects)是RNA干扰应用研究领域的热点问题.采用蛋白组学技术对质粒介导的siRNA稳定沉默原癌基因c-myc可能存在的"off-target"效应进行初步研究,为siRNA靶向特异性的系统评价奠定理论与实验基础.构建靶向c-myc的siRNA真核表达质粒p-Mat01-1及其错配质粒p-Mis09-1,空质粒pEGFP-C1为对照,并稳定转染MCF-7人乳腺癌细胞.通过RT-PCR和Western印迹分析结果显示p-Mat01-1稳定转染克隆中c-myc/c-MYC的表达降低.采用2-DE及LC-ESI-MS/MS等方法,研究了p-Mat01-1与pEGFP-C1稳定转染克隆的蛋白组表达差异.结果显示,p-Mat01-1稳定转染克隆中有47个c-myc非调控蛋白点表达升高或降低,约占423个随机检测蛋白点的11.1%.这些蛋白涉及细胞骨架、代谢、增殖、信号传导、分子伴侣、氧化还原等多条途径.实验结果表明,质粒介导靶向c-myc的siRNA在MCF-7细胞中存在明显的"off-target"效应,提示在设计siRNA实验及应用研究时应系统考察其靶向特异性. 展开更多
关键词 C-MYC RNA干扰 小干扰RNA 脱靶效应 蛋白组学
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视频小卫星目标跟踪视野分区防脱靶控制
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作者 范才智 钟子凯 +1 位作者 王猛猛 杨跃能 《国防科技大学学报》 北大核心 2025年第3期98-108,共11页
针对视频小卫星与观测目标存在较大初始相对姿态偏差和角速度,目标容易偏离相机视场造成脱靶的问题,设计了一种视频小卫星目标跟踪视野分区防脱靶控制方法,该方法将星载相机矩形成像视野按照内切圆划分为内外两部分,内切圆内部和外部分... 针对视频小卫星与观测目标存在较大初始相对姿态偏差和角速度,目标容易偏离相机视场造成脱靶的问题,设计了一种视频小卫星目标跟踪视野分区防脱靶控制方法,该方法将星载相机矩形成像视野按照内切圆划分为内外两部分,内切圆内部和外部分别基于势函数和拟欧拉旋转法设计跟踪控制器,并利用Barbalat引理证明两个区域控制律的渐近稳定性,同时在理论上证明了目标进入视野内切圆区域后,在基于势函数的控制器作用下可以确保不脱靶。通过控制器对比仿真,结果表明拟欧拉旋转法相比于比例-微分(proportional-derivative,PD)控制具有更强的抑制目标偏离视场能力,结合拟欧拉旋转法和势函数法的视野分区控制与全视场的拟欧拉旋转法相比,能够有效实现对较快速机动目标的防脱靶控制,从而实现连续跟踪观测。 展开更多
关键词 视频小卫星 势函数 拟欧拉旋转 视觉跟踪 防脱靶
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CRISPR/Cas genome editing for cotton precision breeding:mechanisms,advances,and prospects
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作者 SHERI Vijay MOHAN Harikrishnan +3 位作者 JOGAM Phanikanth ALOK Anshu ROHELA Gulab Khan ZHANG Baohong 《Journal of Cotton Research》 2025年第1期115-128,共14页
Cotton(Gossypium hirsutum L.)is one of the most important global crops that supports the textile industry and pro-vides a living for millions of farmers.The constantly increasing demand needs a significant rise in cot... Cotton(Gossypium hirsutum L.)is one of the most important global crops that supports the textile industry and pro-vides a living for millions of farmers.The constantly increasing demand needs a significant rise in cotton production.Genome editing technology,specifically with clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated protein(Cas)tools,has opened new possibilities for trait development in cotton.It allows pre-cise and efficient manipulation within the cotton genome when compared with other genetic engineering tools.Current developments in CRISPR/Cas technology,including prime editing,base editing,and multiplexing editing,have expanded the scope of traits in cotton breeding that can be targeted.CRISPR/Cas genome editing has been employed to generate effectively CRISPRized cotton plants with enhanced agronomic traits,including fiber yield and quality,oil improvement,stress resistance,and enhanced nutrition.Here we summarized the various target genes within the cotton genome which have been successfully altered with CRISPR/Cas tools.However,some challenges remain,cotton is tetraploid genome having redundant gene sets and homologs making challenges for genome edit-ing.To ensure specificity and avoiding off-target effects,we need to optimize various parameters such as target site,guide RNA design,and choosing right Cas variants.We outline the future prospects of CRISPR/Cas in cotton breeding,suggesting areas for further research and innovation.A combination of speed breeding and CRISPR/Cas might be useful for fastening trait development in cotton.The potentials to create customized cotton cultivars with enhanced traits to meet the higher demands for the agriculture and textile industry. 展开更多
关键词 CRISPR/Cas Biotic stress Fiber quality Genomic complexity off-target effects Textile industry
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AGM-158系列巡航导弹目标保障工作
4
作者 贺波 刘晓东 +1 位作者 赵晓林 吴诗辉 《火力与指挥控制》 北大核心 2025年第4期128-134,共7页
目标保障是确保AGM-158系列巡航导弹预期作战效果的关键。在分析AGM-158系列巡航导弹发展及作战运用的基础上,系统研究AGM-158系列巡航导弹针对固定高价值目标和时间敏感目标实施打击的目标保障工作内容及程序,归纳总结其主要特点,为我... 目标保障是确保AGM-158系列巡航导弹预期作战效果的关键。在分析AGM-158系列巡航导弹发展及作战运用的基础上,系统研究AGM-158系列巡航导弹针对固定高价值目标和时间敏感目标实施打击的目标保障工作内容及程序,归纳总结其主要特点,为我军目标保障工作提供有益借鉴。 展开更多
关键词 防区外精确打击 巡航导弹 目标保障 目标系统分析 高价值目标
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水稻愈伤特异性启动子P_(OsCSPpro)在花生愈伤中的功能鉴定及碱基编辑效率分析
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作者 薛璐璐 李晓娜 +7 位作者 罗丹丹 刘涵 渠鹏宇 黄冰艳 韩锁义 董文召 石磊 张新友 《中国油料作物学报》 北大核心 2025年第5期1091-1099,共9页
CRISPR/Cas9基因编辑系统的脱靶问题是研究者们一直以来的重点关注问题,采用愈伤特异性启动子驱动Cas9蛋白能够降低编辑株系成苗后的脱靶风险。为有效降低脱靶效应,本研究克隆了一个源自水稻的愈伤特异性启动子P_(OsCSPpro),研究了其在... CRISPR/Cas9基因编辑系统的脱靶问题是研究者们一直以来的重点关注问题,采用愈伤特异性启动子驱动Cas9蛋白能够降低编辑株系成苗后的脱靶风险。为有效降低脱靶效应,本研究克隆了一个源自水稻的愈伤特异性启动子P_(OsCSPpro),研究了其在花生愈伤中的表达活性及碱基编辑效率。GUS组织化学染色结果表明,该启动子在花生愈伤中具有活性。选择AhALS2基因第190位氨基酸P190为靶点,以该启动子驱动胞嘧啶脱氨酶和nCas9蛋白,构建碱基编辑载体并转化花生,对该启动子的编辑效率进行检验。结果表明,P_(OsCSPpro)驱动的胞嘧啶碱基编辑器在花生中具有编辑活性,编辑效率为3.6%。 展开更多
关键词 花生 愈伤特异性启动子 P_(OsCSPpro) 脱靶效应 GUS报告基因 碱基编辑
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靶向实体瘤CAR-T细胞设计:安全性与通用性提升策略
6
作者 邱毓灵 廖天艺 +1 位作者 刘宝瑞 李茹恬 《中国肿瘤生物治疗杂志》 北大核心 2025年第6期559-569,共11页
嵌合抗原受体基因修饰T细胞(CAR-T细胞)疗法是一种肿瘤免疫治疗方法:来自人体的T细胞在体外经遗传学修饰、表达特异性嵌合抗原受体(CAR),然后将其回输入患者体内,用于靶向识别和消除肿瘤细胞。尽管CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤治疗中取... 嵌合抗原受体基因修饰T细胞(CAR-T细胞)疗法是一种肿瘤免疫治疗方法:来自人体的T细胞在体外经遗传学修饰、表达特异性嵌合抗原受体(CAR),然后将其回输入患者体内,用于靶向识别和消除肿瘤细胞。尽管CAR-T细胞疗法在血液系统肿瘤治疗中取得了较为显著的成功,其在实体瘤治疗中仍面临障碍。细胞因子释放综合征(CRS)等免疫相关不良反应(irAE)制约了CAR-T细胞的安全应用,肿瘤相关抗原(TAA)的异质性限制了单一CAR-T细胞的广谱适用性,也制约了其通用型开发。鉴于此,要使CAR-T细胞疗法在实体瘤临床治疗中得到应用,还需开展进一步的改良与提升研究。本文围绕实体瘤中CAR-T细胞疗法,从“CAR基因修饰策略”、“通用免疫受体的再靶向策略”及“抗原通用性‘赋靶’策略”三个方面对CAR-T细胞领域中为提高安全性和通用性所进行的探索进行述评,系统剖析各策略的研究路径、优势及局限性,并展望未来发展方向。通过综述CAR-T细胞安全性和普适性设计策略的进展,本文旨在为实体瘤的CAR-T细胞疗法研发提供创新思路。 展开更多
关键词 实体瘤免疫治疗 嵌合抗原T细胞疗法 脱靶效应 开关CAR-T细胞
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基于风场的坦克装甲对抗脱靶量分析与校射研究
7
作者 王晋琦 赵永娟 +2 位作者 李鹏飞 郭伟峰 王力金 《火炮发射与控制学报》 北大核心 2025年第2期24-30,共7页
从坦克装甲机动性增强现状出发,基于风场统计特性和外弹道理论,建立了部分近地风风场模型和考虑载体运动对炮口初速影响的非标准情况弹道模型。在此基础上,采用递推最小二乘法拟合了载体速度在1~10 m/s、风速在1~10 m/s的情况下风向与... 从坦克装甲机动性增强现状出发,基于风场统计特性和外弹道理论,建立了部分近地风风场模型和考虑载体运动对炮口初速影响的非标准情况弹道模型。在此基础上,采用递推最小二乘法拟合了载体速度在1~10 m/s、风速在1~10 m/s的情况下风向与脱靶量的函数关系,由强相关误差统计特性提出通过函数拟合对射击诸元进行直接射击校正的方法。以某坦克为例进行仿真实验,实验结果表明本文所提方法在不同的载体速度和不同的风力等级下,坦克的射击精度均有显著提高,验证了对动目标的行进间对抗的校射效果,为强相关误差的修正提供了一种校正方法。 展开更多
关键词 行进间射击 风场建模 弹道仿真 脱靶量 校射
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交互式多模型概率数据关联抗速度拖引干扰算法
8
作者 闫咏琪 王琪 易凡 《系统工程与电子技术》 北大核心 2025年第5期1507-1515,共9页
脉冲多普勒雷达导引头面对释放速度拖引干扰的强机动性目标时,存在跟踪、制导精度下降的问题。为此,结合空空/地空导弹应用场景,提出一种基于交互式多模型概率数据关联的抗速度拖引干扰算法。该算法结合概率数据关联和多模型交互的优势... 脉冲多普勒雷达导引头面对释放速度拖引干扰的强机动性目标时,存在跟踪、制导精度下降的问题。为此,结合空空/地空导弹应用场景,提出一种基于交互式多模型概率数据关联的抗速度拖引干扰算法。该算法结合概率数据关联和多模型交互的优势,采用概率数据关联滤波器处理角度和速度通道的量测信息,同时引入多模型交互框架动态适应目标在不同机动状态下的运动模式。仿真实验表明,提出的抗干扰算法可增强对复杂机动行为的捕捉能力和目标状态估计的鲁棒性,有效降低速度拖引干扰带来的影响,提升导弹制导精度。 展开更多
关键词 强机动目标跟踪 速度拖引干扰 交互式多模型 概率数据关联
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CRISPR/Cas9系统中sgRNA设计与脱靶效应评估 被引量:23
9
作者 谢胜松 张懿 +4 位作者 张利生 李广磊 赵长志 倪攀 赵书红 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1125-1136,共12页
基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术,已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点,而使用高效且特异的sg RNA(Small gu... 基于CRISPR/Cas9系统介导的第三代基因组编辑技术,已成功应用于动物、植物和微生物等诸多物种的基因组改造。如何提高CRISPR/Cas9技术的基因组编辑效率和最大限度降低脱靶风险一直是本领域的研究热点,而使用高效且特异的sg RNA(Small guide RNA)是基因组改造成功的关键性因素之一。目前,已有多款针对CRISPR/Cas9技术的sg RNA设计和/或脱靶效应评估软件,但不同的软件各有优缺点。本文重点对16款sg RNA设计和脱靶效应评估在线和单机版软件的特点进行了阐述,通过制定38项评估指标对不同软件进行了比较分析,最后对11种用于检测基因组编辑效率和脱靶的实验方法,以及如何筛选高效且特异的sg RNA进行了归纳总结。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9系统 基因组编辑 sgRNA 脱靶效应
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基于灰靶决策模型的煤与瓦斯突出可能性评价 被引量:38
10
作者 梁冰 秦冰 孙维吉 《煤炭学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1974-1978,共5页
基于灰色系统理论,建立多指标加权灰靶突出可能性决策模型,对矿井煤与瓦斯突出的可能性进行量化评价。根据10组煤与瓦斯突出危险区域测点数据与预测煤层突出危险性单项指标临界值的靶心距的大小,对矿井突出可能性大小进行评价,并进行了... 基于灰色系统理论,建立多指标加权灰靶突出可能性决策模型,对矿井煤与瓦斯突出的可能性进行量化评价。根据10组煤与瓦斯突出危险区域测点数据与预测煤层突出危险性单项指标临界值的靶心距的大小,对矿井突出可能性大小进行评价,并进行了突出可能性等级划分。应用该模型对花宝沟煤矿煤与瓦斯突出的可能性进行评价,评价结果是靶心距距离较大,可能性小,不易发生突出,评价结果与实际情况一致。说明应用多指标加权灰靶突出可能性决策模型对矿井进行煤与瓦斯突出危险性评价是可行的。 展开更多
关键词 煤与瓦斯突出 危险性 评价 靶心距
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CRISPR/Cas9基因组编辑技术在农业动物中的应用 被引量:16
11
作者 幸宇云 杨强 任军 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期217-226,共10页
CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR associated proteins)是在细菌和古细菌中发现的一种用来抵御病毒或质粒入侵的获得性免疫系统。目前已发现的CRISPR/Cas系统包括Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型,其中Ⅱ型... CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)/Cas(CRISPR associated proteins)是在细菌和古细菌中发现的一种用来抵御病毒或质粒入侵的获得性免疫系统。目前已发现的CRISPR/Cas系统包括Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型,其中Ⅱ型系统的组成较简单,由其改造成的CRISPR/Cas9技术已成为一种高效的基因组编辑工具。自2013年CRISPR/Cas9技术成功用于哺乳动物基因组定点编辑以来,应用该技术进行基因组编辑的报道呈现出爆发式的增长。农业动物不仅是重要的经济动物,也是人类疾病和生物医药研究的重要模式动物。本文综述了CRISPR/Cas9技术在农业动物中的研究和应用进展,简述了该技术的脱靶效应及减少脱靶的主要方法,并展望了该技术的应用前景。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因组编辑 农业动物 脱靶
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植物基因组编辑及衍生技术最新研究进展 被引量:71
12
作者 单奇伟 高彩霞 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期953-973,共21页
基因组编辑技术已经在多个模式植物、动物以及其他生物中得到成功应用。基因组编辑是利用序列特异核酸酶(Sequence-specific nucleases,SSNs)在基因组特定位点产生DNA双链断裂(Double-strand breaks,DSBs),从而激活细胞自身修复机制—... 基因组编辑技术已经在多个模式植物、动物以及其他生物中得到成功应用。基因组编辑是利用序列特异核酸酶(Sequence-specific nucleases,SSNs)在基因组特定位点产生DNA双链断裂(Double-strand breaks,DSBs),从而激活细胞自身修复机制——非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)或同源重组(Homologous recombination,HR),实现基因敲除、染色体重组以及基因定点插入或替换等。锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN)、TALEN(Transcription activator-like effector nuclease)和CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated 9)系统是最主要的3类SSNs。ZFN和TALEN是利用蛋白与DNA结合方式靶向特定的基因组位点,而最新的CIRISPR/Cas9系统则是利用更简单的核苷酸互补配对方式结合在基因组靶位点,其构建简单、效率更高效,因而促进了基因组编辑在植物中的广泛应用。利用基因组编辑技术除了实现植物基因定点突变外,还可以将SSNs的DNA结合域与其他功能蛋白融合,实现基因的靶向激活、抑制和表观调控等衍生技术。本文从基因组编辑技术的原理与优势、SSNs组成及构建方法、基因组编辑及衍生技术在植物中应用、优化SSNs突变效率和减少脱靶突变方法等方面进行了系统介绍,并对未来需要迫切解决的一些问题进行了分析和展望。 展开更多
关键词 基因组编辑 CRISPR/Cas9 同源重组 脱靶突变
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CRISPR/Cas9的应用及脱靶效应研究进展 被引量:47
13
作者 郑武 谷峰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1003-1010,共8页
CRISPR/Cas9基因编辑技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命,该技术可以对基因组特定位点进行靶向编辑,包括缺失、插入、修复等。CRISPR/Cas9比锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术更易于操作,而且更高效。... CRISPR/Cas9基因编辑技术在生命科学领域掀起了一场全新的技术革命,该技术可以对基因组特定位点进行靶向编辑,包括缺失、插入、修复等。CRISPR/Cas9比锌指核酸酶(ZFNs)和转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)技术更易于操作,而且更高效。CRISPR/Cas9系统中的向导RNA(Single guide RNA,sg RNA)是一段与目标DNA片段匹配的RNA序列,指导Cas9蛋白对基因组进行识别。研究发现,设计的sg RNA会与非靶点DNA序列错配,引入非预期的基因突变,即脱靶效应(Off-target effects)。脱靶效应严重制约了CRISPR/Cas9基因编辑技术的广泛应用。为了避免脱靶效应,研究者对影响脱靶效应的因素进行了系统研究并提出了许多降低脱靶效应的方法。文章总结了CRISPR/Cas9系统的应用及脱靶效应研究进展,以期为相关领域的工作提供参考。 展开更多
关键词 基因组编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 RNA
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基于CRISPR/Cas9系统的OsbHLH116基因编辑及其脱靶效应分析 被引量:4
14
作者 杜彦修 季新 +5 位作者 陈会杰 彭廷 张静 李俊周 孙红正 赵全志 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期577-586,共10页
以水稻OsbHLH116基因为编辑对象,根据基因编码区序列(CDS)在第一外显子区域设计长度为19bp的sgRNA,化学合成sgRNA的寡核苷酸序列,然后与CRISPR/Cas9系统表达载体pBUN411连接,再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系,最后利用酶切和测序相... 以水稻OsbHLH116基因为编辑对象,根据基因编码区序列(CDS)在第一外显子区域设计长度为19bp的sgRNA,化学合成sgRNA的寡核苷酸序列,然后与CRISPR/Cas9系统表达载体pBUN411连接,再用农杆菌介导法获得水稻转基因株系,最后利用酶切和测序相结合的方法对OsbHLH116突变体进行了筛选鉴定和脱靶效应分析。结果表明,所构建的pBUN411-gRNA载体成功实现了对基因OsbHLH116的定向编辑。酶切分析表明在选取的10株T0代转基因苗中得到了6个OsbHLH116突变单株。对6个突变单株进行了TA克隆测序分析,发现了纯合突变、双等位突变和杂合突变3种类型。酶切分析表明2个潜在脱靶位点均未发生脱靶效应。 展开更多
关键词 水稻 基因编辑 CRISPR/Cas9 脱靶效应 OsbHLH116
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煤与瓦斯突出预测敏感指标 被引量:7
15
作者 齐庆杰 武宇 +4 位作者 董子文 刘晓南 周新华 吴宪 杨桢 《辽宁工程技术大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2015年第3期329-334,共6页
为系统反映评价指标自身属性并和煤与瓦斯突出实际相结合,提高预测和判别的准确性与严谨性,分别建立基于"三率"(突出预测率、突出预测准确率、不突出预测准确率)的"效益、成本型"属性和"区间型"属性的煤... 为系统反映评价指标自身属性并和煤与瓦斯突出实际相结合,提高预测和判别的准确性与严谨性,分别建立基于"三率"(突出预测率、突出预测准确率、不突出预测准确率)的"效益、成本型"属性和"区间型"属性的煤与瓦斯突出预测敏感指标筛选模型,根据现场预测所得数据建立预测与决策的样本矩阵,依据不同属性进行算子转换构造决策矩阵,采用成分提取确定决策矩阵中各评价指标的权重,作出各预测指标的排序.研究结果表明:张集煤矿煤与瓦斯突出预测的敏感指标是钻屑瓦斯解析指标、钻孔瓦斯涌出初速度.研究结论能将开采煤层实际突出率引入评价系统中,又能使各指标之间的区分更加明显. 展开更多
关键词 区间型 “三率” 煤与瓦斯突出 靶心距 多指标加权灰靶决策
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基于多因素加权灰靶决策模型的滑坡灾害危险性评价 被引量:25
16
作者 高彩云 崔希民 《中南大学学报(自然科学版)》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第2期524-530,共7页
以重庆市万州区典型滑坡为例,根据其特有的地质环境条件,选取滑坡发育高差、坡度、降水、人类活动等11项因素作为滑坡危险性评价指标,通过灰色关联分析得出影响因素权重的大小,以灰靶决策理论为基础,构建多因素加权灰靶滑坡危险性评价模... 以重庆市万州区典型滑坡为例,根据其特有的地质环境条件,选取滑坡发育高差、坡度、降水、人类活动等11项因素作为滑坡危险性评价指标,通过灰色关联分析得出影响因素权重的大小,以灰靶决策理论为基础,构建多因素加权灰靶滑坡危险性评价模型,根据所得靶心距的大小,对滑坡的危险性进行量化评价,将滑坡危险性划分为高度、较高、中度、低度和较低5级,对研究区域内6个重点滑坡体进行危险性评价,获得每个滑坡体的危险性等级,并与自适应模糊评价法、神经网络评价法和PSO-BP评价结果进行比较。研究结果表明:多因素加权灰靶决策模型科学合理,符合实际情况,为滑坡危险性评价提供一种新思路。 展开更多
关键词 滑坡 危险性评价 灰靶决策 靶心距 权重
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干扰RNA的非靶免疫副作用及其siRNA序列设计与化学修饰 被引量:3
17
作者 韩秋菊 张彩 +1 位作者 张建 田志刚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第4期343-347,共5页
siRNA介导的RNA干扰技术已经成为基因功能研究和开展疾病治疗的有用工具.近年发现,siRNA在哺乳动物体内可激活天然免疫系统,诱导干扰素等炎症因子的分泌,并且可非特异性抑制某些非靶基因的表达,有可能极大限制RNA干扰技术的应用.进行高... siRNA介导的RNA干扰技术已经成为基因功能研究和开展疾病治疗的有用工具.近年发现,siRNA在哺乳动物体内可激活天然免疫系统,诱导干扰素等炎症因子的分泌,并且可非特异性抑制某些非靶基因的表达,有可能极大限制RNA干扰技术的应用.进行高效特异性siRNA的设计和修饰,以保持或者增强siRNA的特异性靶基因沉默作用,又消除siRNA对机体的非靶免疫副作用,成为使siRNA安全有效应用于临床治疗的关键. 展开更多
关键词 RNA干扰 SIRNA TLR 非靶效应
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RNA干扰非特异性研究进展 被引量:4
18
作者 韩继波 陈晨 +1 位作者 陈始明 陶泽璋 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期27-30,共4页
RNA干扰(RNA i)靶向基因治疗是目前研究的热点,其依赖序列特异性的基因表达调节为生物学发展带来重大突破。然而在应用RNA i时所产生的一系列非特异性反应阻碍了RNA i进一步的临床应用,这其中主要包括脱靶基因抑制和内在免疫副反应等。... RNA干扰(RNA i)靶向基因治疗是目前研究的热点,其依赖序列特异性的基因表达调节为生物学发展带来重大突破。然而在应用RNA i时所产生的一系列非特异性反应阻碍了RNA i进一步的临床应用,这其中主要包括脱靶基因抑制和内在免疫副反应等。主要从非特异性反应的产生机制、脱靶效应的预测和RNA i非特异性的控制3个方面对近几年研究成果进行综述,探讨临床应用前景。 展开更多
关键词 RNA干扰 非特异性反应 脱靶效应 免疫副反应
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基于CRISPR/Cas9系统定点编辑小鼠MAD2L1基因及其脱靶效应分析 被引量:4
19
作者 陈丽香 彭秀华 +5 位作者 谭丹 韩铖潇 赵锐 王超 李顺 周晓辉 《中国实验动物学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期587-593,共7页
目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到N... 目的建立利用CRISPR/Cas9系统对小鼠MAD2L1基因第二外显子基因编辑的方法体系,并分析CRISPR/Cas9对MAD2L1基因编辑的脱靶效应。方法通过CHOPCHOP网站设计位于小鼠MAD2L1基因第二外显子的靶点序列,并构建Cas9-MAD2L1载体,将该载体转染到NIH/3T3细胞中,通过嘌呤霉素筛选并结合荧光显微镜观察GFP后,提取细胞转染后的基因组DNA,利用PCR方法,结合T7E1分析和桑格尔测序,鉴定对小鼠MAD2L1基因编辑情况,并对转染后的NIH/3T3细胞进行CRISPR/Cas9脱靶效应分析。结果将Cas9-MAD2L1载体转染到NIH/3T3细胞并进行嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察到大量表达GFP的细胞,PCR结合T7E1结果显示,以转染后的细胞DNA为模板扩增出的228 bp MAD2L1 PCR产物,可被酶切成166 bp和62 bp片段,测序结果显示,成功对MAD2L1基因第二外显子靶点处进行基因编辑,脱靶效应分析未检测到CRISPR/Cas9有对脱靶位点进行基因编辑。结论成功建立对小鼠MAD2L1基因第二外显子进行基因编辑的方法体系,设计的对MAD2L1基因编辑靶点未检测到脱靶效应的发生。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 小鼠 MAD2L1 脱靶效应
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基于优化sgRNA系统提高海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑功效的研究 被引量:4
20
作者 李继洋 胡燕 +2 位作者 姚瑞 代培红 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1522-1534,共13页
CRISPR/Cas9基因组编辑体系已经在多种作物中被建立,其最大的优势在于能简单高效定向创制突变体。然而,CRISPR/Cas9基因组编辑体系在实际操作过程中经常会出现没有编辑的情况,或者靶向编辑目的基因的同时也会引发不同程度的脱靶效应,这... CRISPR/Cas9基因组编辑体系已经在多种作物中被建立,其最大的优势在于能简单高效定向创制突变体。然而,CRISPR/Cas9基因组编辑体系在实际操作过程中经常会出现没有编辑的情况,或者靶向编辑目的基因的同时也会引发不同程度的脱靶效应,这对CRISPR/Cas9基因组编辑技术的运用带来不利影响。本研究基于前期在海岛棉体细胞中建立的CRISPR/Cas9基因组编辑体系,通过对构建Cas9不同密码子优化方式、不同PAM位点个数和不同靶位点数量的编辑载体,来分析比较编辑效率和脱靶效应的差异。结果表明,2种Cas9密码子不同优化方式的编辑载体产生的编辑效率和脱靶效应无显著差异;优化后的双PAM位点的编辑效率显著高于单PAM位点,且脱靶效率显著较低;大部分双靶序列编辑效率均高于单靶序列且脱靶效率较低。上述研究结果为今后优化CRISPR/Cas9介导的海岛棉基因组编辑体系奠定了重要的理论依据。 展开更多
关键词 棉花 CRISPR/Cas9 编辑效率 脱靶效率 sgRNA类型
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