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核定位信号筛选系统的构建 被引量：7
1
作者 王冀姝 陈萍 +5 位作者 孙强 牛立国 周鹏 张浩 韩骅 苏成芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第3期301-305,共5页
建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构... 建立了一酵母克隆系统用于克隆含核定位信号 (NLS)的蛋白质的基因 .用表达转录因子GAL4 DNA结合域 - p53(GAL4- DBD- p53)融合蛋白的质粒转化酵母 HF7c,使 GAL4- DBD- p53可结合于报告基因的启动子但因无转录激活域而不能激活转录 .构建一酵母穿梭载体 ,可表达无NLS的 GAL4转录激活域 -大 T抗原 (GAL4- AD- LT)融合蛋白 .融合蛋白基因的下游插入一多克隆位点 .将 c DNA文库插入多克隆位点后 ,如果 c DNA片段可编码 NLS,则 GAL4- AD- LT分子可进入细胞核 ,并通过 LT与 p53的相互作用而使 GAL4- AD结合于启动子和激活报告基因的转录 .构建了这一克隆系统的各质粒 ,并用绿色荧光蛋白 (GFP)验证了其对核内蛋白和胞浆蛋白的甄别能力 .这一系统将有助于从 c DNA文库中筛选编码带有 展开更多
关键词 核定位信号 基因克隆 酵母表达系统 融合蛋白
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核因子κB的跨核膜转运及其调控机制 被引量：6
2
作者 沈利群 徐祥 +1 位作者 吕凤林 梁华平 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期368-371,共4页
核因子kappaB (NF κB)是一组重要的转录调节因子 ,当细胞处于静息状态时 ,它与抑制蛋白IκB结合以非活性的形式存在于胞浆中 .当细胞受到多种外界信号刺激 ,NF κB、IκB分别在核定位信号 (NLS)的介导下经核孔复合物 (NPC)转运入核 .... 核因子kappaB (NF κB)是一组重要的转录调节因子 ,当细胞处于静息状态时 ,它与抑制蛋白IκB结合以非活性的形式存在于胞浆中 .当细胞受到多种外界信号刺激 ,NF κB、IκB分别在核定位信号 (NLS)的介导下经核孔复合物 (NPC)转运入核 .在核内 ,NF κB与IκB再次结合成复合物 ,在核转出信号 (NES)介导下 ,经CRM 1依赖的途迳出核 .该过程是能量依赖的主动转运过程 。 展开更多
关键词 核因子КB 跨核膜转运 调控机制
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BRD7的亚细胞定位及其假定核输出信号序列的分离与鉴定 被引量：3
3
作者 周鸣 徐晓杰 +5 位作者 彭聪 何佳瑾 彭淑平 李小玲 卢建红 李桂源 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期373-378,共6页
BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细... BRD7被鉴定为一个鼻咽癌密切相关新基因和潜在的核转录调节因子.通过绿色荧光蛋白(GFP)介导的亚细胞定位方法,系统研究BRD7在非洲绿猴肾COS7细胞、人宫颈癌HeLa细胞以及人鼻咽癌HNE1细胞中的亚细胞定位,发现BRD7主要定位在细胞核,呈细点状或条梭状分布,3株细胞中没有明显的细胞类型差异.通过对BRD7编码蛋白氨基酸序列进行比对分析,发现了1个具有亮氨酸富集特征的假定核输出信号序列pNES,该区域具有类似核输出信号特征序列“Lx(2,3)[LIVFM]x(2,3)Lx[LI]”(X代表任意氨基酸)的结构;通过功能分析,发现它不具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其亚细胞定位或胞浆胞核分布比例不受细霉素B(leptomycinB)干预的影响,说明这个pNES不具核输出信号结构域的功能,不是BRD7的核输出信号. 展开更多
关键词 BRD7 转录因子 亚细胞定位 核输出信号
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BRD7核输出信号序列的定位与功能鉴定 被引量：1
4
作者 周鸣 郭驰 +7 位作者 李夏雨 何佳瑾 徐晓杰 王贺冉 唐珂 曹利 李小玲 李桂源 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期634-639,共6页
目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,... 目的:定位和鉴定BRD7核输出信号序列所在区域,探讨其在介导异源蛋白核输出功能中的作用。方法:以绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)做为研究模型,通过步移法对BRD7进行区段分析,探讨BRD7的不同区段对GFP核输出功能的影响,初步确定BRD7核输出信号序列所在的区域;进一步通过氨基酸序列的比对分析,确定该序列中氨基酸的含量特征及核输出信号潜在的位置。结果:BRD7的B7C1(219-450)具有介导异源蛋白GFP胞浆定位的功能,且其核输出功能在核输出信号阻滞剂Leptomycin B(LMB)的诱导下受到阻滞。该区段疏水氨基酸残基含量比较丰富,但没有发现具有典型亮氨酸聚集特征的核输出信号。结论:初步确定了BRD7核输出信号序列所在的区域为aa219-450。 展开更多
关键词 BRD7 核输出信号 亚细胞定位
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核转出蛋白对前列腺癌雄激素受体稳定性的调节 被引量：1
5
作者 巩艳青 张崔建 +3 位作者 何世明 李学松 周利群 郭应禄 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期569-574,共6页
目的:探讨位于雄激素受体(androgen receptor,AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor,NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法:绿色荧光蛋白(green fluoresc... 目的:探讨位于雄激素受体(androgen receptor,AR)配体结合域中具有出核转运信号肽的核转出蛋白(nuclear export signal of androgen receptor,NESAR)对前列腺癌雄激素受体蛋白表达和稳定性调节的机制。方法:绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)融合蛋白表达载体p EGFP-AR(1-918aa),p EGFP-NESAR(743-817aa),p EGFP-NAR(1-665aa)和p EGFP-NAR-NESAR,及NESAR的赖氨酸突变体(赖氨酸K突变为精氨酸R)p EGFPNESAR K776R,p EGFP-NESAR K807R和p EGFP-NESAR K776R/K807R,瞬时转染前列腺癌细胞PC3后,采用荧光显微镜、蛋白质免疫印迹和免疫沉淀,检测NESAR对雄激素受体稳定性的调节。结果:在荧光显微镜下,含NESAR的融合蛋白呈胞浆定位,荧光信号强度比不含NESAR的融合蛋白明显减弱,且含NESAR的融合蛋白表达水平显著低于不含NESAR的融合蛋白表达水平。在蛋白合成抑制剂放线菌酮处理下,GFP-NESAR和GFP-NAR-NESAR的半衰期小于6 h,而对照GFP和GFP-NAR的表达相对更稳定,半衰期大于24 h。融合蛋白GFP-NESAR在蛋白酶体抑制剂MG132的处理下,其蛋白表达显著增加,并呈现剂量依赖性,而MG132对GFP蛋白稳定性没有显著影响;在蛋白合成被抑制的情况下,MG132同样显著抑制了GFP-NESAR融合蛋白的降解,且蛋白表达呈剂量依赖性的增加。GFP免疫沉淀的结果显示,GFP-NESAR融合蛋白的泛素化水平明显高于GFP对照。赖氨酸位点K776和K807突变的NESAR的泛素化水平显著降低,且蛋白稳定性提高,赖氨酸位点K776和K807是介导NESAR发生泛素化的关键氨基酸残基。结论:核转出蛋白NESAR具有降解不稳定性,作为多聚泛素化修饰的识别信号,介导了其融合蛋白在前列腺癌细胞中通过泛素-蛋白酶体途径的降解。本研究为AR蛋白水平和/或活性的调控开辟一种新的研究思路,有助于对AR降解分子机制的了解和在前列腺癌产生去势抗性的过程中对AR靶向的密切调控。 展开更多
关键词 雄激素受体 核转出蛋白 泛素蛋白酶体途径 降解
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BS69的亚细胞定位及其核输出信号序列的分析鉴定 被引量：1
6
作者 张超 于波 +3 位作者 邵勇 杨虹 张伟 万峻 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2145-2149,共5页
目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把B... 目的:分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列,寻找新的核输出信号序列,并在Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法:分析数据库中不同BS69亚型DNA序列,与传统和输出信号序列比对,寻找可能的新的核输出信号序列。采用DNA重组技术把BS69不同亚型片段的cDNA插入到真核表达载体pcDNA3.1上,转染Cos7细胞,用免疫荧光染色方法确定其亚细胞定位,用Western blotting方法验证不同亚型BS69在细胞中的功能。结果:在BS69亚型2上面发现1段富含亮氨酸的基因序列,与核输出信号序列极为相似。免疫荧光染色方法显示BS69亚型2定位于细胞浆中,而BS69亚型1和2个亚型共同序列编码的蛋白质则定位于细胞核中。BS69亚型2参与了EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein-Barrvirus latent membrane protein1,LMP1)介导的信号转导途径。结论:BS69不同亚型具有不同的亚细胞定位,因此具有不同的生物学功能,其中核蛋白是转录调控因子,细胞浆蛋白则可能参与鼻咽癌发生发展的调控。 展开更多
关键词 腺病毒EIA相关蛋白BS69 核输出信号序列 亚细胞定位 转录因子
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不同亚细胞定位的alpha-突触核蛋白对SK-N-SH细胞的毒性影响 被引量：2
7
作者 赵云 韩玉坤 +2 位作者 郑焱 杨慧 张建亮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期164-170,共7页
在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或... 在帕金森病中,alpha-突触核蛋白(α-synuclein)累积与聚集所产生的细胞毒性是发病的重要原因。本文目的是探求不同亚细胞定位的α-突触核蛋白对于细胞的毒性影响。分别在α-突触核蛋白前插入核输出序列(nuclear export sequence,NES)或核定位序列(nuclear localization sequence,NLS),使其特定地表达在细胞质或细胞核中。构建成功的质粒分别在神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中表达,通过免疫荧光与Western印迹法检测蛋白质的表达情况。结果显示,NES-α-synuclein特异性地在细胞质中表达,NLS-α-synuclein特异性地在细胞核中表达。乳酸脱氢酶法检测结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的乳酸脱氢酶的释放量减少26. 54%,NLS-α-synuclein组的乳酸脱氢酶释放量增加12. 85%。CCK8法检测细胞活性结果表明,相较于WT-α-synuclein组,NES-α-synuclein组的细胞活力提高35. 51%,NLS-α-synuclein组的细胞活力减少7. 93%。上述结果提示,胞质内表达α-synuclein对于细胞的毒性更小,而细胞核内表达的α-synuclein对细胞有更强的毒性作用。这些发现为研究帕金森病的分子机制提供了新的研究思路。 展开更多
关键词 alpha-突触核蛋白 核定位序列 核输出序列 细胞毒性
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Caspase-3细胞定位信号的检测与分析 被引量：1
8
作者 卢智勇 卢智刚 曾昭淳 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期543-548,共6页
Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一... Caspase-3是调节细胞凋亡的关键蛋白质.凋亡过程中,胞质定位的caspase-3被酶解激活,进入细胞核中执行功能.这一定位变化的分子机制至今仍不清楚.分析caspase-3分子中所含的细胞定位信号,可以为深入了解其移位机制提供重要的线索.构建一系列含caspase-3不同区段的截短突变体,与GFP融合表达,观察它们在细胞中的定位,以鉴定caspase-3分子中所含的核输出信号（nuclear export signal,NES）和核定位信号NLS（nuclear localization signal,NLS）.结果发现,caspase-3分子中不存在明显的NLS,但存在一个明显的NES,该NES定位在caspase-3小亚基的C端,包括220-245位氨基酸残基. 展开更多
关键词 胱天蛋白酶3 核输出信号 核定位信号
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昆虫中的核输出现象
9
作者 吴一弘 陈国庆 +1 位作者 王文凯 冯国忠 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期1095-1106,共12页
核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白... 核质转运是真核细胞生命活动重要的组成部分,细胞核内蛋白的平衡及转录出的RNA出核成熟过程都依赖于核输出,核输出与真核生物的生命活动密切相关;病原物在侵染昆虫时也会利用宿主的核输出机制干扰宿主的免疫反应或劫持宿主的核输出蛋白以利于病毒的组装及复制。本文主要介绍真核细胞中核输出的基本机制、蚊子和果蝇等模式昆虫中核输出通路;简述核输出机制在昆虫胚胎发育及免疫等生理活动及信号通路中的影响,以及与昆虫相关的病毒蛋白对昆虫等宿主核输出机制的利用和破坏情况。 展开更多
关键词 昆虫 核孔复合体 核质转运 核输出信号 核输出受体
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