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切割桑花叶萎缩类病毒的12串联体核酶基因克隆与转录载体构建 被引量：1
1
作者 孔卫青 杨金宏 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期638-642,共5页
通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并... 通过人工合成和PCR扩增,克隆特异性切割桑花叶萎缩类病毒RNA的12串联体核酶基因,用于控制病毒基因的表达。将桑花叶萎缩类病毒正链RNA上10 nt的靶序列连接在锤头型核酶催化区3'端,构成具有自切割功能的核酶基因。克隆该核酶基因并将其连接于载体pMD18T-SP6。在SP6 RNA聚合酶的作用下对线性化的重组质粒进行体外转录,体外自切割反应显示转录的多体自切割核酶可以通过内部的顺式切割释放出核酶分子。同时,将该12串联体核酶基因导入双元质粒pBI121中,获得重组植物转录载体pBI121-12MRz,为进一步培育抗桑花叶型萎缩病的转基因桑树奠定了基础。 展开更多
关键词 桑花叶型萎缩病 类病毒 12串联体核酶基因 转录载体 切割活性
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人类Cornulin蛋白S100结构域钙依赖的多聚化能有效减少细胞的损伤(英文) 被引量：3
2
作者 李国明 陈强 +1 位作者 戴克胜 郑晓峰 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第3期239-247,共9页
在哺乳动物中发现一类新的能够抵制环境压力和保持组织完整性的应激蛋白.含有S100钙结合结构域的Cornulin(CRNN)是这类蛋白质之一,它在人类食管鳞状上皮细胞中高表达,而在食管鳞状上皮细胞癌中却低表达,它能抑制脱氧胆酸诱导的细胞损伤.... 在哺乳动物中发现一类新的能够抵制环境压力和保持组织完整性的应激蛋白.含有S100钙结合结构域的Cornulin(CRNN)是这类蛋白质之一,它在人类食管鳞状上皮细胞中高表达,而在食管鳞状上皮细胞癌中却低表达,它能抑制脱氧胆酸诱导的细胞损伤.S100结构域在CRNN的功能上具有重要作用.为了进一步探讨CRNN S100结构域的生物学特性,克隆、表达、纯化了该结构域,证明其折叠正确,适合用于生物物理和生物化学特性的研究.更为重要的是,通过核磁共振、凝胶过滤层析、超速离心、质谱和蛋白质交联分析,发现S100结构域具有钙依赖的多聚性质,而多聚体的形成更有利于保护细胞免受脱氧胆酸和乙醇的损伤.上述结果表明,S100结构域是CRNN发挥功能的关键结构域,它可以通过多聚化更好地保护细胞.该工作将进一步揭示S100结构域的生物学功能. 展开更多
关键词 Cornulin(CRNN) S100结构域 钙 多聚性质 脱氧胆酸 细胞存活
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无脊椎动物β-胸腺素的功能研究进展 被引量：3
3
作者 康志琼 郝丽娟 +2 位作者 马上上 吕鹏 陈克平 《生物学杂志》 CAS CSCD 2015年第2期76-79,共4页
β-胸腺素(β-thymosin)是肌动蛋白单体(G-actin)的锚定因子,它可以阻止后者多聚化形成微丝。当前关于β-胸腺素的研究主要集中在脊椎动物中,发现其在淋巴系统的发育、维持免疫系统的平衡、中枢神经系统的发育等生命过程中起着重要作用... β-胸腺素(β-thymosin)是肌动蛋白单体(G-actin)的锚定因子,它可以阻止后者多聚化形成微丝。当前关于β-胸腺素的研究主要集中在脊椎动物中,发现其在淋巴系统的发育、维持免疫系统的平衡、中枢神经系统的发育等生命过程中起着重要作用。人体中胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)参与了机体抗菌过程,并且能促进伤口愈合,组织、器官的修复重塑。在无脊椎动物中,也发现了β-胸腺素的存在,研究发现这类蛋白与Tβ4具有一定的相似性,但是在结构及功能上却比Tβ4更为复杂,详细讨论了β-胸腺素在无脊椎动物中的研究进展。 展开更多
关键词 无脊椎动物 β-胸腺素 肌动蛋白 结构 功能
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橡胶树HbPIP1;1基因的克隆及蛋白的亚细胞定位与多聚化分析 被引量：7
4
作者 乔雪莹 郑玉皎 +2 位作者 阳江华 曾长英 邹智 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2022年第12期2405-2412,共8页
水通道蛋白(aquaporin)是一类广泛存在生物体中高效转运水分子的膜内在蛋白,其在生物膜上以同源或异源四聚体的形式起作用。根据序列相似性及亚细胞定位,植物水通道蛋白可分为PIP(plasmamembraneintrinsicprotein)、TIP(tonoplast intri... 水通道蛋白(aquaporin)是一类广泛存在生物体中高效转运水分子的膜内在蛋白,其在生物膜上以同源或异源四聚体的形式起作用。根据序列相似性及亚细胞定位,植物水通道蛋白可分为PIP(plasmamembraneintrinsicprotein)、TIP(tonoplast intrinsic protein)、NIP(NOD26-like intrinsic protein)、SIP(small basic intrinsic protein)和XIP(X intrinsic protein)等5大类,其中,PIP定位在细胞膜,是介导细胞间水分跨膜运输的主要通道。橡胶树最早起源于南美亚马逊河流域,是目前天然橡胶的主要商业来源。与其他植物相比,橡胶树除蒸腾耗水外,周期性的割胶活动也会造成水分的大量流失,因此,水分平衡对于橡胶树尤为重要。为揭示橡胶树水分平衡的分子机制,采用RT-PCR技术对1个PIP类水通道蛋白基因HbPIP1;1进行克隆,并在此基础上对其编码蛋白的亚细胞定位和多聚化特征进行分析。结果显示:该基因的编码区长864 bp,预测编码287 aa,其理论分子量为30.80 kDa、等电点8.59、不稳定系数49.27、脂肪族指数22.34、总平均疏水指数为0.639,属于不稳定的疏水型碱性蛋白;蛋白含有水通道蛋白家族特有的MIP(major intrinsicprotein)结构域及6个典型的跨膜螺旋,每个螺旋的残基数介于20~23之间。研究构建了基因的亚细胞定位分析载体,并采用农杆菌介导法对烟草叶片进行了瞬时转化。荧光共聚焦显微镜观察显示,HbPIP1;1蛋白定位在细胞膜,与用生物信息学手段预测的结果一致。在烟草叶片中的双分子荧光互补实验显示,HbPIP1;1蛋白自身不能互作,这进一步得到了点对点的酵母双杂交实验的证实。以上结果表明HbPIP1;1蛋白可能通过异源互作的方式参与橡胶树水分的平衡。 展开更多
关键词 橡胶树 亚细胞定位 多聚化 双分子荧光互补 酵母双杂交
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VWF基因c.7332G>A无义突变家系分析及致病机制研究
5
作者 王端阳 王蕾 +6 位作者 付栋彦 卢晓梅 赵丽东 郑嘉伟 于雅琳 王刚 杨林花 《中国实验血液学杂志》 2025年第6期1701-1707,共7页
目的:对VWF基因c.7332G>A无义突变进行遗传学分析,并探讨其分子致病机制。方法:使用VWF:Ag、VWF:RCo、FⅧ:C、多聚体分析对先证者进行表型诊断。采用NGS全外显子组测序对先证者进行基因型鉴定,并通过Sanger测序验证测序结果,同时对... 目的:对VWF基因c.7332G>A无义突变进行遗传学分析,并探讨其分子致病机制。方法:使用VWF:Ag、VWF:RCo、FⅧ:C、多聚体分析对先证者进行表型诊断。采用NGS全外显子组测序对先证者进行基因型鉴定,并通过Sanger测序验证测序结果,同时对家系成员进行基因型鉴定。构建VWF基因c.7332G>A无义突变质粒,转染后进行体外细胞水平功能验证,通过qRT-PCR检测mRNA水平,Western blot检测蛋白表达水平,并通过多聚物分析验证多聚化功能。结果:先证者的VWF:Ag和VWF:RCo均≤3%,多聚体分析表现为多聚体缺失,诊断为3型VWD。基因测序检测到VWF基因c.7332G>A纯合无义突变。通过构建质粒进行体外细胞水平功能验证,结果显示突变型质粒的VWF基因mRNA水平下降,细胞上清中VWF蛋白表达量下降,突变体蛋白发生截短,导致VWF蛋白多聚化功能受损。结论:VWF基因43号外显子c.7332G>A纯合突变是导致先证者3型VWD的致病原因,该突变导致VWF基因mRNA水平下降,VWF蛋白表达量下降及VWF多聚化功能受损。 展开更多
关键词 VWF 下一代测序 无义突变 多聚体分析 致病机制
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