miR-101-3p靶向调控Anxa2抑制胃癌细胞EMT和巨噬细胞M2极化

1

作者 张笑添 王傲君 +1 位作者 毛琳琪 徐玉 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期1552-1558,1565,共8页

目的:探讨miR-101-3p抑制胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)和巨噬细胞M2极化的分子机制。方法:生物信息学软件分析miR-101-3p在胃癌中的表达及其与生存期的相关性;Transwell和Western blot实验分别检测miR-101-3p和Anxa2对胃癌细胞迁移、侵... 目的:探讨miR-101-3p抑制胃癌细胞上皮-间质转化(EMT)和巨噬细胞M2极化的分子机制。方法:生物信息学软件分析miR-101-3p在胃癌中的表达及其与生存期的相关性;Transwell和Western blot实验分别检测miR-101-3p和Anxa2对胃癌细胞迁移、侵袭以及EMT的影响;人单核细胞(THP-1)与转染后的胃癌细胞共培养后,免疫荧光和Western blot检测miR-101-3p和Anxa2对M2型巨噬细胞标志物CD206和精氨酸酶-1(Arg-1)表达的影响;Western blot和免疫组化分析Anxa2在胃癌组织和胃癌细胞中的表达;生物信息学软件、双荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-101-3p与Anxa2的靶向关系。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中的miR-101-3p水平明显降低,并且与生存期呈正相关。与正常胃黏膜细胞比较,胃癌细胞中的miR-101-3p水平明显降低(P<0.01)。过表达胃癌细胞中的miR-101-3p,胃癌细胞的迁移和侵袭能力明显降低,N-cadherin和Vimentin的表达明显减少,而E-cadherin的表达明显增加;共培养体系中,过表达胃癌细胞中的miR-101-3p可以明显抑制巨噬细胞M2极化(P<0.01)。与癌旁组织比较,胃癌组织中的Anxa2表达明显升高;与正常胃黏膜细胞比较,胃癌细胞中的Anxa2水平明显升高(P<0.01)。Anxa2是miR-101-3p的靶基因。过表达胃癌细胞中的Anxa2,胃癌细胞的迁移和侵袭能力明显增强;共培养体系中,过表达胃癌细胞中的Anxa2可以明显促进巨噬细胞M2极化(P<0.01)。过表达Anxa2可以逆转miR-101-3p对胃癌细胞EMT和巨噬细胞M2极化的抑制作用(P<0.01)。结论:miR-101-3p靶向调控Anxa2抑制胃癌细胞EMT和巨噬细胞M2极化,进而抑制胃癌细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 胃癌 mir-101-3p Anxa2 巨噬细胞 M2极化 EMT

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miR-101通过抑制DNA甲基转移酶3a抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移 被引量：14

2

作者 刘健 庞亚梅 +5 位作者 王黄震 李艳波 孙欣 徐菲 任宏 刘大鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期299-303,共5页

目的研究miR-101对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-101和DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在乳腺癌组织和相对应的正常乳腺组织,正常乳腺细胞以及多种乳腺... 目的研究miR-101对乳腺癌细胞增殖和迁移能力的影响,并分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。方法采用实时荧光定量PCR检测miR-101和DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)在乳腺癌组织和相对应的正常乳腺组织,正常乳腺细胞以及多种乳腺癌细胞系中的表达水平,应用慢病毒介导感染的方法分别将miR-101序列及shRNA-DNMT3a转至MDAMB-231人乳腺癌细胞,通过Western blot法检测DNMT3a以及上皮钙黏素(E-cadherin)的表达,分析miR-101影响乳腺癌细胞生物学行为的可能机制。通过MTT法检测乳腺癌细胞的增殖能力,划痕实验检测乳腺癌细胞的迁移能力。结果miR-101在MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-361、HCC70乳腺癌细胞系及乳腺癌组织中表达低于正常乳腺组织及MCF-10A乳腺细胞系,而DNMT3a表达则升高。Western blot实验结果显示过表达miR-101的MDA-MB-231细胞中,DNMT3a的表达明显下降,而E-cadherin的表达升高;应用shRNA-DNMT3a抑制DNMT3a表达后,E-cadherin的表达也明显升高,证实miR-101可能通过抑制DNMT3a而发挥作用。体外实验显示过表达miR-101可明显抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖和迁移能力。结论miR-101抑制乳腺癌细胞增殖和迁移能力可能是通过抑制DNMT3a进而恢复E-cadherin表达来实现。 展开更多

关键词 乳腺癌 mir-101 DNMT3a 上皮钙黏素 增殖 迁移

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稳定过表达mir-101结直肠癌细胞株的建立及其靶基因的鉴定 被引量：5

3

作者 刘燕 陆滟霞 +2 位作者 周敏 张超 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期928-933,共6页

目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的... 目的构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株并鉴定mir-101的靶基因。方法运用荧光定量PCR技术检测结直肠癌细胞株中mir-101的表达水平。利用GV209-mir101慢病毒感染SW620细胞,建立稳定过表达mir-101的细胞株。扩增包含mir-101结合位点的RAC1 3'UTR基因片段并将其亚克隆至psiCHECK-2载体,对此重组载体进行定点突变构建psiCHECK-2-Rac1-Mut;并用双萤光素酶报告实验检测RAC1 3'UTR相对荧光素酶活性。结果稳定过表达mir-101的细胞株中,mir-101的表达明显高于对照组。双萤光素酶报告实验证实mir-101 inhibitors可以上调3'UTR相对荧光素酶活性。稳定过表达mir-101,RAC1表达下调;而干扰mir-101之后RAC1表达上调。结论成功构建稳定过表达mir-101的SW620细胞亚株。RAC1是mir-101的靶基因。 展开更多

关键词 结直肠癌 mir-101 慢病毒 双荧光素酶报告实验 RAC1

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miR-101靶向甲基化转移酶3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭 被引量：5

4

作者 胡可可 邓赫男 +2 位作者 谭琛 彭丽秀 肖斌梅 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期791-795,共5页

背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭... 背景与目的:mi R-101在胃癌、结肠癌、乳腺癌以及前列腺癌中表达下调,有类似抑癌基因样作用,然而,其在卵巢癌中的作用尚未明确。该研究旨在探讨mi R-101是否通过靶向调控甲基化转移酶3A(DNMT3A)抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭,从而进一步揭示mi R-101的抑瘤机制。方法:采用实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测22例卵巢癌组织及癌旁正常卵巢组织中mi R-101的表达改变;将mi R-101 mimics转染于卵巢癌SKOV3细胞,以DNMT3A si RNA为阳性对照,采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测外源过表达mi R-101对DNMT3A蛋白表达水平的影响;采用噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)和Transwell侵袭实验检测外源高表达mi R-101对人卵巢癌细胞生长与侵袭能力的影响。结果:q RT-PCR检测结果显示,mi R-101在22例卵巢癌组织中的表达水平较癌旁正常组织明显下调;Western blot检测结果显示,外源过表达mi R-101或沉默DNMT3A能下调SKOV3细胞DNMT3A蛋白的表达水平;MTT检测结果显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 48、72和96 h后D值与对照组比较明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05);Transwell侵袭实验显示,转染mi R-101 mimics或沉默DNMT3A 36 h后穿过基底膜的细胞数分别为(105±7)个和(107±13)个,与对照组(213±11)个比较能明显减缓SKOV3细胞的穿膜能力,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:mi R-101通过靶向调控DNMT3A抑制人卵巢癌细胞生长与侵袭。 展开更多

关键词 mir-101 卵巢癌 甲基化转移酶3A 生长和侵袭

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miR-101-3p靶向TGFβR1/Smad抑制视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移 被引量：9

5

作者 王爽 段素芳 +2 位作者 牛秉轩 闫琼 李晓鹏 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第10期924-928,共5页

目的探索miR-101-3p对视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法RT-PCR检测miR-101-3p及转化生长因子β受体1(transforming growth factor beta receptor 1,TGFβR1)表达水平;生物信息学预测miR-101-3p与TGFβR1的靶向关系... 目的探索miR-101-3p对视网膜母细胞瘤细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法RT-PCR检测miR-101-3p及转化生长因子β受体1(transforming growth factor beta receptor 1,TGFβR1)表达水平;生物信息学预测miR-101-3p与TGFβR1的靶向关系并通过荧光素酶报告实验进行验证。将Y79细胞分为Control组、miR-101-3p mimic组(转染miR-101-3p mimic)、pcDNA-TGFβR1组(转染pc-TGFβR1)及miR-101-3p mimic+pc-TGFβR1组(共转染miR-101-3p mimic和pc-TGFβR1),MTT检测细胞增殖速率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移,Western blot检测TGFβR1、Ki67、Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-9、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9、血管内皮生长因子、p-Smad2及p-Smad3的表达水平。结果在视网膜母细胞瘤组织中,miR-101-3p的表达为0.35±0.05,明显低于正常视网膜组织(P<0.01);视网膜母细胞瘤细胞株Y79中miR-101-3p的表达为0.24±0.04,明显低于视网膜上皮细胞株ARPE-19(P<0.01);与Control组相比,miR-101-3p mimic组miR-101-3p mRNA水平显著升高、TGFβR1 mRNA水平显著降低(均为P<0.01);miR-101-3p与TGFβR1之间存在连续结合片段。与Control组相比,miR-101-3p mimic组TGFβR1的表达水平显著降低,增殖速率及细胞中Ki67表达均显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax及cleaved Caspase-9表达显著升高、Bcl-2表达显著降低,侵袭细胞数目和划痕闭合率显著降低,MMP-2、MMP-9、血管内皮生长因子、TGFβR1、p-Smad2和p-Smad3的表达水平显著降低(均为P<0.01)。结论miR-101-3p通过靶向下调TGFβR1抑制视网膜母细胞瘤细胞的侵袭和迁移。 展开更多

关键词 mir-101-3p TGFβR1 视网膜母细胞瘤 细胞侵袭 细胞迁移

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miR-101对结直肠癌细胞增殖、凋亡及KIF14蛋白表达的影响 被引量：4

6

作者 刘继攀 孙伟 +2 位作者 赵学荣 李炳茂 王成君 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2018年第6期776-779,共4页

目的:研究miR-101对结直肠癌细胞增殖、凋亡及驱动蛋白家族蛋白14(KIF14)表达的影响。方法:利用靶基因预测库预测miR-101与KIF14的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验鉴定。采用实时荧光定量PCR和Western blot法测定结直肠癌组织和细胞... 目的:研究miR-101对结直肠癌细胞增殖、凋亡及驱动蛋白家族蛋白14(KIF14)表达的影响。方法:利用靶基因预测库预测miR-101与KIF14的靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验鉴定。采用实时荧光定量PCR和Western blot法测定结直肠癌组织和细胞中miR-101和KIF14蛋白的表达。在结直肠癌HT29细胞中转染miR-101模拟物,MTT法测定细胞增殖情况,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blot法测定KIF14蛋白的表达。结果:双荧光素酶报告实验结果显示,miR-101与KIF14存在靶向关系。结直肠癌组织和细胞中miR-101表达下调,KIF14表达上调(P <0. 05)。miR-101模拟物可以明显抑制HT29细胞的增殖能力并促进其凋亡,同时下调KIF14蛋白表达水平(P <0. 05)。结论:miR-101可靶向作用于KIF14而影响结直肠癌细胞的增殖和凋亡。 展开更多

关键词 mir-101 结直肠癌 KIF14 凋亡

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猪miR-101表达特性分析 被引量：2

7

作者 杨秀芹 万洪宇 +3 位作者 王金奎 韩丽鑫 杜欣 禚建树 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期74-80,共7页

miRNA是一类长20～25 nt内源性、单链、非编码小分子RNA，通过调控靶基因转录后表达参与机体各项生命活动。人类miR-101是重要疾病相关miRNA，参与维持机体健康、抵御疾病。目前有关猪miR-101研究尚不多见，为确定其在猪抗病毒免疫反应... miRNA是一类长20～25 nt内源性、单链、非编码小分子RNA，通过调控靶基因转录后表达参与机体各项生命活动。人类miR-101是重要疾病相关miRNA，参与维持机体健康、抵御疾病。目前有关猪miR-101研究尚不多见，为确定其在猪抗病毒免疫反应中作用，研究利用stem-loop RT-PCR方法构建猪miR-101组织表达谱和poly（I：C）诱导表达谱。结果表明，猪miR-101在肝脏组织中表达量最高，高浓度poly（I：C）能有效抑制猪miR-101转录表达。为深入阐明miR-101在猪抗病毒免疫反应中作用奠定基础，为培育高抗病性猪品种（系）提供参考。 展开更多

关键词 猪 mir-101 poly(I:C) STEM LOOP RT-PCR 表达

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miR-101对结直肠癌细胞SW620生物学特性的影响 被引量：2

8

作者 刘燕 陆滟霞 +2 位作者 周敏 郑林 李学农 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期990-996,共7页

目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞... 目的探讨miR-101对结直肠癌细胞SW620增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法利用CCK8法、平板克隆形成实验、细胞周期、细胞凋亡方法分别检测SW620、GV209-SW620、mir101-SW620 3组细胞的生物学特性。结果 CCK8比色法结果显示SW620各组细胞生长时间水平差异具有显著性(F=4152,P<0.001),细胞增殖能力组间有显著性差异(F=10220,P<0.001)。平板克隆实验的结果为SW620空白对照组、GV209-SW620对照组和mir101-SW620组的克隆形成率分别为:44.33%、48.17%、35.17%。SW620 3组细胞间的克隆形成能力差异具有统计学意义(F=73.015,P<0.001)。细胞周期分析发现SW620各组细胞间其G1、S、G2/M期存在着统计学差异(F=45.974,P=0.019;F=122.139,P=0.000;F=115.171,P=0.000)。除了SW620和GV209-SW620的G2期分布无统计学差异外(P=0.441),其余各组G1、G2/M期均有统计学差异(P<0.01);与SW620和GV209-SW620相比,mir101-SW620组出现了明显的G1和G2/M期周期阻滞。细胞凋亡实验发现SW620细胞各组细胞凋亡率差异有统计学意义(F=6115,P<0.001),各组进行两两比较,均有统计学差异(P<0.01)。与SW620空白细胞组、GV209-SW620对照组相比,mi R-101过表达组细胞凋亡率增加(P<0.05)。结论 mi R-101能够抑制结直肠癌细胞SW620的增殖,细胞G1和G2/M期周期阻滞及促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 结直肠癌 mir-101 SW620 增殖 凋亡 细胞周期 生物学特性

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胃癌患者血清miR-101与miR-25的动态变化及其诊断价值 被引量：9

9

作者 宋雅琴 温旺荣 《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期259-266,共8页

目的:探讨miR-101与miR-25在胃癌术前术后血清中的表达及其与病理因素间的关系,探讨其是否能作为胃癌早期诊断的新型生物标志物.方法:应用实时荧光定量(PCR)检测58例胃癌(其中31例配对胃癌术前术后),30例胃癌癌前病变,30例正常对照血清m... 目的:探讨miR-101与miR-25在胃癌术前术后血清中的表达及其与病理因素间的关系,探讨其是否能作为胃癌早期诊断的新型生物标志物.方法:应用实时荧光定量(PCR)检测58例胃癌(其中31例配对胃癌术前术后),30例胃癌癌前病变,30例正常对照血清miR-101与miR-25的相对表达量,比较miR-101与miR-25在胃癌术前术后表达差异,及其与病理参数的关系,绘制研究对象工作特征曲线(ROC),评估血清miR-101与miR-25对胃癌的临床诊断价值.结果:胃癌血清miR-101表达水平显著性低于正常对照组(P<0.01)及胃癌癌前病变组(P<0.01),而胃癌血清miR-25(P<0.01)表达水平显著升高.胃癌术后血清miR-101表达水平明显高于术前(P=0.007),而血清miR-25在胃癌术后显著性降低(P=0.011).ROC曲线分析显示血清miR-101与miR-25对胃癌诊断价值较高[miR-101:ROC曲线下面积(Area Under roc Curve,AUC)=0.857,敏感度=0.710,特异度=0.881;miR-25:AUC=0.821,敏感度=0.702,特异度=0.800],而血清miR-101与miR-25联合诊断胃癌的AUC为0.905,其敏感性和特异性分别为75.9%和86.7%.进一步分析发现胃癌血清miR-101低表达与幽门螺旋杆菌(helicobacter pylori,Hp)感染有关,miR-101表达水平在感染HP的胃癌血清中显著低于未感染HP的胃癌血清(P=0.012);胃癌血清miR-101低表达与胃癌淋巴结转移(P=0.033)和临床分期(P=0.015)显著相关;胃癌血清miR-25在高临床分期(P=0.018)和淋巴结转移(P<0.001)表达水平升高.结论:血清miR-101与miR-25可能作为胃癌术前术后动态监测和胃癌诊断的新型潜在标志物. 展开更多

关键词 胃癌 mir-101 mir-25 血清标志物

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胃癌组织EB病毒感染与miR-101 EZH2 COX-2表达关系的研究 被引量：3

10

作者 袁浩 刘伟 +4 位作者 姜楠 王玉平 陈兆峰 刘敏 周永宁 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期420-424,共5页

目的:探讨甘肃省武威地区胃癌患者EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染状况及miR-101、EZH2、COX-2在EBV相关胃癌发生发展中的作用。方法:应用组织芯片、原位杂交和免疫组织化学技术检测120例胃癌组织及相应癌旁组织中EBV小RNA(EBER)、m... 目的:探讨甘肃省武威地区胃癌患者EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染状况及miR-101、EZH2、COX-2在EBV相关胃癌发生发展中的作用。方法:应用组织芯片、原位杂交和免疫组织化学技术检测120例胃癌组织及相应癌旁组织中EBV小RNA(EBER)、miR-101、EZH2、COX-2的表达情况。结果:120例胃癌组织EBV阳性率为10.0%,EBV相关胃癌有较少的淋巴结转移,好发于贲门、胃体(P<0.05)。miR-101、EZH2、COX-2在120例胃癌组织和相应癌旁组织的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。12例EBV阳性胃癌组织miR-101、EZH2、COX-2和108例EBV阴性胃癌组织3个分子的表达率差异有统计学意义(P<0.05)。胃癌组织EBV感染和miR-101表达呈正相关,EBV相关胃癌组织miR-101表达和淋巴结转移、COX-2、EZH2表达均呈负相关(P<0.05)。结论:EB病毒感染与武威地区胃癌的发生有一定关系;EBV相关胃癌和EBV阴性胃癌在淋巴结转移和发生部位的差异有统计学意义;miR-101、EZH2、COX-2与EB病毒相关胃癌的发展有一定关系。 展开更多

关键词 EB病毒 胃癌 原位杂交 mir-101

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C2C12成肌细胞诱导肌性分化过程中miR-101a的表达 被引量：1

11

作者 李粉 王丽 +1 位作者 郑艳艳 陈华群 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期116-119,共4页

以C2C12成肌细胞为模型,在分化培养基中诱导C2C12建立体外肌性细胞分化模型。以poly(A)3'-端加尾和实时定量PCR方法研究miR-101a在C2C12细胞分化过程中的表达情况。结果发现,在细胞转入分化培养基进行肌性分化的1-5 d中,miR-101a的... 以C2C12成肌细胞为模型,在分化培养基中诱导C2C12建立体外肌性细胞分化模型。以poly(A)3'-端加尾和实时定量PCR方法研究miR-101a在C2C12细胞分化过程中的表达情况。结果发现,在细胞转入分化培养基进行肌性分化的1-5 d中,miR-101a的表达量逐渐增加,提示miR-101a可能在肌肉发生中发挥调控作用。 展开更多

关键词 C2C12C成肌细胞 实时定量PCR mir-101a 肌分化

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CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p影响结直肠癌SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

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作者 刘建军 王攀 +3 位作者 袁华燕 吴镇江 印隆宽 白翔宇 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2023年第8期801-807,共7页

目的探究CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p对结直肠癌(CRC)SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测人CRC组织、邻近正常组织、CRC细胞株SW480、正常结肠上皮细胞FHC中CircPIP5K1A、miR-101-3p水平;将si-NC、si-CircPIP5... 目的探究CircPIP5K1A靶向调节miR-101-3p对结直肠癌(CRC)SW480细胞生长、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法qRT-PCR检测人CRC组织、邻近正常组织、CRC细胞株SW480、正常结肠上皮细胞FHC中CircPIP5K1A、miR-101-3p水平;将si-NC、si-CircPIP5K1A、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor分别转染至SW480细胞并命名为si-NC组、si-CircPIP5K1A组、si-CircPIP5K1A+inhibitor NC组、si-CircPIP5K1A+miR-101-3p inhibitor组,未做任何处理的SW480细胞记为NC组。双荧光素酶报告基因实验验证CircPIP5K1A与miR-101-3p的关系;qRT-PCR检测SW480细胞中CircPIP5K1A、miR-101-3p表达;CCK-8法检测SW480细胞增殖情况;流式细胞术检测SW480细胞凋亡率;Transwell检测SW480细胞侵袭、迁移数量;Western blot检测SW480细胞E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白水平;小鼠异种移植检测肿瘤生长。结果与邻近正常组织[(1.00±0.03)、(1.00±0.02)]或FHC细胞(1.00±0.00)相比,CRC组织和SW480细胞CircPIP5K1A水平[(1.85±0.21)、(1.54±0.16)]显著上调(P<0.05),miR-101-3p表达[(0.31±0.02)、(0.36±0.04)]显著下调(P<0.05)。与NC组、si-NC组相比,si-CircPIP5K1A组SW480细胞A 450值、迁移、侵袭细胞数量、CircPIP5K1A表达、N-cadherin、Vimentin蛋白水平显著下降(P<0.05),SW480细胞凋亡率、miR-101-3p表达、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);而抑制miR-101-3p表达减弱了沉默CircPIP5K1A抑制SW480细胞增殖、迁移和侵袭的效果;CircPIP5K1A负向调控miR-101-3p。与NC组、慢病毒空载(LV-NC)组相比,PIP5K1A慢病毒载体(LV-PIP5K1A)组肿瘤体积、肿瘤质量显著下降(P<0.05);与LV-PIP5K1A组、LV-PIP5K1A+拮抗剂对照(antiagomir)组相比较,LV-PIP5K1A+miR-101-3p拮抗剂(miR-101-3p antiagomir)组肿瘤体积、肿瘤质量显著升高(P<0.05)。结论沉默CircPIP5K1A可能通过上调miR-101-3p表达来对CRC细胞SW480增殖、迁移和侵袭产生影响。 展开更多

关键词 CircPIP5K1A mir-101-3p 结直肠癌 增殖 凋亡 迁移 侵袭

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miR-101a靶向EZH2促进山羊骨骼肌卫星细胞的分化 被引量：6

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作者 李俊涛 赵薇 +4 位作者 李丹丹 冯静 巴贵 宋天增 张红平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期828-836,共9页

本实验室前期研究发现,miR-101a对山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)分化有促进作用,但其具体作用机制并不清楚。本研究利用Pic Tar、Target Scan和miRanda软件在线预测miR-101a的靶基因,并通过双荧光素酶报... 本实验室前期研究发现,miR-101a对山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,SMSCs)分化有促进作用,但其具体作用机制并不清楚。本研究利用Pic Tar、Target Scan和miRanda软件在线预测miR-101a的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因进行实验验证;检测了山羊SMSCs分化不同时期miR-101a和靶基因的表达关系,同时分析了超表达和抑制miR-101a对靶基因表达水平的影响。结果证实,zeste增强子同源物2(enhancer of zeste homologue 2,EZH2)基因m RNA的3￠UTR具有miR-101a结合位点,是miR-101a的一个靶基因。在SMSCs分化过程中,随着miR-101a表达水平的升高,EZH2的表达在m RNA和蛋白水平均下调。抑制miR-101a后,EZH2的表达极显著升高(P<0.01),但是在超表达miR-101a条件下,EZH2表达变化在m RNA和蛋白水平均不显著(P>0.05)。以上研究结果表明,miR-101a能通过抑制EZH2的表达来促进山羊SMSCs分化,为进一步阐明miR-101a对SMSCs的调控机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 mir-101a 山羊 骨骼肌卫星细胞 zeste增强子同源物2

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miR-101通过靶向FGF2抑制非小细胞肺癌的迁移和侵袭 被引量：6

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作者 郭雪茹 张其程 +1 位作者 曹丽敏 徐克 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期984-991,共8页

目的:探究microRNA-101(miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC... 目的:探究microRNA-101(miR-101)通过靶向成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)抑制非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞迁移和侵袭的分子机制。方法:采用qPCR法检测人正常肺上皮细胞BEAS-2B和NSCLC细胞系A549、H661和SK-MES-1,以及转染后A549细胞miR-101和FGF2的表达水平。分别将miR-NC、miR-101 mimics、miR-IN-NC、miR-101 inhibitor或pcDNA-3.1空质粒、pcDNA-FGF2转染至A549细胞,运用划痕愈合实验和Transwell小室实验,检测A549细胞中过表达miR-101和FGF2对NSCLC细胞迁移和侵袭能力的影响,采用Western blotting(WB)法检测各组A549细胞中FGF2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果:miR-101在NSCLC细胞系中的表达水平明显低于正常肺上皮细胞(均P<0.05),而以A549细胞中表达水平为最低。过表达miR-101可明显抑制A549细胞的迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.01),且使细胞中E-cadherin的表达增多(P<0.05)而Vimentin(P<0.05)、N-cadherin(P<0.01)和p-ERK1/2(P<0.05)的表达水平降低。抑制miR-101表达后,可以显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.05),引起细胞中E-cadherin表达明显降低而Vimentin、N-cadherin和p-ERK1/2表达水平增高(均P<0.05)。采用WB法和双荧光素酶报告基因实验验证了FGF2是miR-101的直接靶基因,且过表达FGF2后显著增强A549细胞的迁移和侵袭能力(均P<0.01),以及减少细胞中E-cadherin的表达(P<0.01)而增加Vimentin(P<0.01)、N-cadherin(P<0.05)和p-ERK1/2(P<0.05)表达水平。与单独过表达FGF2组相比,共同过表达miR-101和FGF2组A549细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P<0.01),其E-cadherin的表达增多(P<0.01)而Vimentin(P<0.01)、N-cadherin(P<0.05)和p-ERK1/2表达水平下降(P<0.01)。结论:miR-101通过调控靶基因FGF2抑制NSCLC A549细胞的上皮间质转化(EMT)过程及ERK信号通路,进而抑制NSCLC细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 mir-101 非小细胞肺癌 A549细胞 迁移 侵袭 成纤维细胞生长因子2 上皮间质转化 ERK信号通路

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子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其通过Rac1调控子宫颈癌细胞丝状伪足的形成 被引量：5

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作者 木叶斯尔·买买提 聂磊 +4 位作者 徐梦伟 吕单单 王伟旭 吴姝言 林晨 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期783-788,共6页

目的探讨子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其临床意义,探究miR-101通过调控靶基因Rac1在子宫颈癌细胞丝状伪足形成中的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测18例子宫颈癌患者和20例健康体检者血清中miR-101的表达量。采用qRT-PCR法检测正... 目的探讨子宫颈癌患者血清中miR-101的表达及其临床意义,探究miR-101通过调控靶基因Rac1在子宫颈癌细胞丝状伪足形成中的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测18例子宫颈癌患者和20例健康体检者血清中miR-101的表达量。采用qRT-PCR法检测正常对照组、NC mimic组、miR-101 mimic组子宫颈癌SiHa细胞内miR-101的表达水平,并验证其转染效率。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-101与Rac1的靶向关系,并通过Western blot、qRT-PCR和免疫荧光实验检测Rac1 mRNA和蛋白表达水平。miR-101 mimic与Rac1 mimic共转染至SiHa细胞后电镜下观察丝状伪足的形成,罗丹明标记的鬼笔环肽染色观察F-actin的表达。结果miR-101在子宫颈癌血清(0.54±0.06)和细胞(0.93±0.03)中低表达(P<0.01),并与子宫颈癌分化程度有关(Z=2.974,P=0.003)。miR-101靶向负调控Rac1的表达(P<0.05),即上调miR-101表达后Rac1 mRNA和蛋白表达水平均降低(0.40±0.01、0.22±0.03)(P<0.05)。上调miR-101表达后SiHa细胞丝状伪足数减少(39±3)(P<0.01),且F-actin蛋白表达明显降低,过表达Rac1可部分逆转miR-101对丝状伪足形成(57±3)(P<0.01)及F-actin蛋白的抑制作用。结论子宫颈癌患者血清中miR-101低表达与其分化程度呈负相关,miR-101靶向调控Rac1抑制子宫颈癌细胞丝状伪足的形成。 展开更多

关键词 子宫颈肿瘤 mir-101 RAC1 丝状伪足

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猪C1QTNF3基因可变剪接体的鉴定及介导miR-101调控成脂分化的研究 被引量：1

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作者 杨阳 张雪莲 +8 位作者 张万锋 李文霞 李文新 蔡春波 路畅 高鹏飞 郭晓红 李步高 曹果清 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期3042-3052,共11页

旨在研究猪C1QTNF3基因可变剪接体的特性及miR-101通过C1QTNF3基因促进猪脂肪SV细胞成脂分化的机制。本研究采集3头30日龄健康马身猪仔公猪心、肝、脾、肺、肾、胃、股二头肌、腰大肌、皮下脂肪和背部脂肪组织样品,首先利用RT-PCR技术... 旨在研究猪C1QTNF3基因可变剪接体的特性及miR-101通过C1QTNF3基因促进猪脂肪SV细胞成脂分化的机制。本研究采集3头30日龄健康马身猪仔公猪心、肝、脾、肺、肾、胃、股二头肌、腰大肌、皮下脂肪和背部脂肪组织样品,首先利用RT-PCR技术和生物信息学方法对C1QTNF3基因的不同转录本进行扩增和生物学特性分析,采用qRT-PCR技术检测C1QTNF3基因不同转录本在猪组织中的表达变化。随后,利用生物信息学预测发现,C1QTNF3上游的调控因子是miR-101,采用双荧光素酶报告试验验证miR-101对C1QTNF3的调控作用。最后,利用油红O染色和qRT-PCR技术检测过表达miR-101对猪脂肪SV细胞成脂分化的影响。基因克隆得到猪C1QTNF3存在两个转录本C1QTNF3和C1QTNF3-1,其中C1QTNF3-1为新鉴定的转录本;测序分析显示,与C1QTNF3相比,C1QTNF3-1的第1外显子区域缺失了219个碱基,少编码73个氨基酸。进化树分析显示,猪C1QTNF3和C1QTNF3-1蛋白序列与人和马来亚穿山甲等物种的亲缘关系较近。C1QTNF3和C1QTNF3-1在猪各组织中均有表达,且在各组织中C1QTNF3-1的表达量均极显著高于C1QTNF3(P<0.01)。过表达miR-101极显著下调C1QTNF33′UTR区域的荧光素酶活性(P<0.01)和C1QTNF3 mRNA的表达(P<0.01),同时增加了脂肪细胞成脂分化关键基因PPARγ、C/EBPβ、SREBP-1c和FABP4的mRNA表达量(P<0.01)。本试验成功克隆了猪C1QTNF3基因的两个可变剪接体,其中C1QTNF3-1在猪不同组织中均高表达,推测该转录本为基因发挥功能的主要亚型。并深入研究了C1QTNF3基因的上游调控因子,揭示了miR-101靶向C1QTNF3促进成脂分化的机制,丰富了C1QTNF3的生物学作用和调控网络。 展开更多

关键词 猪 C1QTNF3基因 成脂分化 mir-101 可变剪接

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牦牛miR-101的靶基因预测及生物信息学分析 被引量：1

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作者 凌笑笑 吴晓云 +5 位作者 梁春年 唐朋 王宏博 包鹏甲 郭宪 阎萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期2580-2586,共7页

本研究利用相关生物信息学软件和数据库对牦牛miR-101进行了靶基因预测与生物信息学分析。通过高通量测序获取牦牛miR-101的序列,并分析其序列保守性;选取TargetScan、miRanda、PicTar预测结果的交集并结合miRTarbase中已证实的靶基因集... 本研究利用相关生物信息学软件和数据库对牦牛miR-101进行了靶基因预测与生物信息学分析。通过高通量测序获取牦牛miR-101的序列,并分析其序列保守性;选取TargetScan、miRanda、PicTar预测结果的交集并结合miRTarbase中已证实的靶基因集合,取二者并集,采用BINGO和DAVID数据库获得靶基因集合的本体注释,进行GO功能富集及Pathway信号通路富集分析。结果显示,miR-101序列在各物种间高度保守,miR-101调控的靶基因GO功能富集主要包括多细胞生物体发育、发育过程、系统发育、解剖结构发育、器官发育等基本生物学过程和蛋白连接、转录因子活性等分子功能;靶基因存在于细胞各个组分中,包括细胞质、细胞核、细胞器中;信号转导通路显著富集于MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)、黏着斑(focal adhesion)、ErbB信号通路(ErbB signaling pathway)、Wnt信号通路(Wnt signaling pathway)、TGF-beta信号通路(TGF-beta signaling pathway)和mTOR信号通路(mTOR signaling pathway)中(P<0.05)。通过对牦牛miR-101靶基因的生物信息学分析,为进一步研究miR-101在牦牛肌肉发育中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 牦牛 mir-101 靶基因 生物信息学

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Bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响 被引量：2

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作者 虎巧燕 翟相钦 +3 位作者 李一丹 韩家乐 雷初朝 党瑞华 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期1040-1051,共12页

旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及mi... 旨在探究bta-miR-101对牛睾丸支持细胞增殖、凋亡及分泌的影响。本研究采集3日龄(n=3)与13月龄(n=3)健康公牛的睾丸组织,构建安格斯牛组织表达谱,验证bta-miR-101在两个时期的差异表达。利用在线工具(TargetScan、miRTarBase、miRDB及miRWalk)预测miR-101的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将miR-101的模拟物与抑制物分别转染至牛睾丸支持细胞中,利用RT-qPCR、Western Blotting以及CCK-8等技术检测细胞增殖、凋亡及分泌相关基因表达量以及细胞增殖系数。通过4种在线软件预测到26个bta-miR-101的共同靶基因,GO和KEGG富集分析发现这些基因主要富集在核质、蛋白质结合、JAK-STAT的受体信号通路上,这些信号通路与细胞分化、细胞周期、细胞凋亡等生物过程有着不同程度的关联。RT-qPCR结果显示,bta-miR-101在牛初生期睾丸组织中的表达量显著高于性成熟时期(P<0.05),与实验室前期测序结果一致。转染miR-101的模拟物与抑制物后,发现相较于对照组,miR-101 mimics可以促进增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,并显著升高支持细胞的增殖系数,同时抑制凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05);miR-101 inhibitor可以抑制增殖相关基因在mRNA和蛋白水平的表达量,同时促进凋亡基因在mRNA和蛋白水平的表达量(P<0.05)。在细胞分泌方面,miR-101对分泌标志基因GDNF、BMP4的转录有影响,但对雄激素结合蛋白的分泌影响不显著。综上所述,miR-101促进牛睾丸未成熟支持细胞的增殖并抑制其凋亡,对雄激素结合蛋白的分泌无显著影响。 展开更多

关键词 牛睾丸支持细胞 mir-101 增殖 凋亡

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COX-2、PKC-α和miR-101在胃癌中的表达及相关性 被引量：22

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作者 孙海兵 魏永长 +4 位作者 涂宏蕾 杜宁 赵阳 胡丽娟 任宏 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期559-562,共4页

目的探讨miR-101、蛋白激酶C-α(PKC-α)和环氧合酶2(COX-2)在胃癌中的表达及相关性。方法(1)荧光定量RT-PCR法检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中miR-101的表达水平;(2)Western blotting检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘... 目的探讨miR-101、蛋白激酶C-α(PKC-α)和环氧合酶2(COX-2)在胃癌中的表达及相关性。方法(1)荧光定量RT-PCR法检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中miR-101的表达水平;(2)Western blotting检测57例胃癌组织标本对应的正常胃粘膜标本中PKC-α蛋白和COX-2蛋白的表达水平。结果(1)胃癌组织中miR-101表达明显低于正常胃粘膜(P<0.05);胃癌组织中COX-2及PKC-α蛋白表达高于正常胃粘膜(P<0.05);(2)胃癌中COX-2蛋白的表达与其分化程度、浸润深度、淋巴结转移、肿瘤病理分期有关(P<0.05);胃癌中PKC-α蛋白的表达与肿瘤分期和淋巴转移有关(P<0.05);(3)胃癌组织中COX-2蛋白相对表达水平与胃癌组织中PKC-α蛋白表达呈正相关,与胃癌组织中miR-101表达呈负相关,两者相关具有统计学意义(r=0.531,P<0.05;r=-0.627,P<0.05)。结论 miR-101、PKC-α和COX-2可能参与了胃癌的发生发展;miR-101和PKC-α可能是抑制COX-2在胃癌中表达的新靶点。 展开更多

关键词 胃癌 蛋白激酶C-Α 环氧合酶2 微RNA-101

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miR-101表达上调对视网膜母细胞瘤细胞的增殖及侵袭能力的抑制作用 被引量：9

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作者 李勇 徐卫星 +1 位作者 徐军 李佳 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2018年第6期527-532,共6页

目的探究miR-101对视网膜母细胞瘤增殖及侵袭能力的影响。方法收集31例视网膜母细胞瘤组织及7例正常视网膜组织。培养人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181及视网膜母细胞瘤系HXO-Rb44。Lipofectamine 2000转染HXORb44细胞并分组:阴性对... 目的探究miR-101对视网膜母细胞瘤增殖及侵袭能力的影响。方法收集31例视网膜母细胞瘤组织及7例正常视网膜组织。培养人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181及视网膜母细胞瘤系HXO-Rb44。Lipofectamine 2000转染HXORb44细胞并分组:阴性对照(normal control,NC)1组[转染microRNA(miR)-101阴性对照物]、miR-101表达组(转染miRNA-101类似物);NC 2组[转染组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶(EZH2)阴性对照序列]、siRNA-EZH2组(转染EZH2siRNA)、siRNAEZH2+mimics组(转染EZH2siRNA和miRNA-101类似物)和EZH2+mimics组(转染EZH2表达载体和miRNA-101类似物)。正常HOX-Rb44细胞作为空白组。采用qRT-PCR检测miR-101、EZH2 mRNA表达,Western blot检测EZH2蛋白表达。MTT及Transwell实验分别测定细胞增殖及侵袭能力。荧光素酶报告基因实验确定miR-101和EZH2的靶向关系。裸鼠体内移植实验测定细胞体内增殖能力。结果与正常视网膜组织和ACBRI-181细胞相比,视网膜母细胞瘤组织及HXO-Rb44细胞中miR-101的相对表达量均明显下调(均为P<0.05)。EZH2 mRNA及蛋白在miR-101表达组中的相对表达量均显著低于空白组和NC1组(均为P<0.05)。72~96 h,miR-101表达组的吸光度(A)值均显著低于空白组及NC1组(均为P<0.01)。miR-101表达组侵袭细胞数量(51±6)均显著低于空白组(97±11)及NC1组(92±8)(均为P<0.01)。EZH2是miR-101的靶基因。48~96 h,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的A值均显著低于空白组和NC2组(均为P<0.01);72~96 h,siRNA-EZH2+mimics组的A值明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05);24~96 h,EZH2+mimics组的A值与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。siRNA-EZH2组侵袭细胞数量(48±4)和siRNA-EZH2+mimics组(38±3)均显著低于空白组(95±10)和NC2组(90±6)(均为P<0.01),siRNA-EZH2+mimics组侵袭细胞数量明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05),EZH2+mimics组侵袭细胞数量与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。裸鼠体内移植5~7周,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积均显著低于空白组和NC2组(均为P<0.01),siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05),EZH2+mimics组的肿瘤体积与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 miR-101上调后可抑制HXO-Rb44细胞的增殖及侵袭能力,这可能是通过抑制EZH2表达实现的。 展开更多

关键词 视网膜母细胞瘤 mir-101 EZH2 增殖 侵袭

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