人CGT52TGTMBL突变体在CHO细胞中的表达及其产物分析 被引量：4

1

作者 刘凤玲 左大明 +1 位作者 白志军 陈政良 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期399-402,共4页

目的: 初步探索MBL基因CGT52TGT点突变引起调理吞噬缺损的机制。方法: 采用PCR技术, 从质粒pMBLm52中获取含CGT52TGT点突变的MBL基因, 将其插入真核表达载体pcDNA4 /HisMaxC中构建重组表达载体。经测序验证后, 电转染入CHO细胞。以800mg... 目的: 初步探索MBL基因CGT52TGT点突变引起调理吞噬缺损的机制。方法: 采用PCR技术, 从质粒pMBLm52中获取含CGT52TGT点突变的MBL基因, 将其插入真核表达载体pcDNA4 /HisMaxC中构建重组表达载体。经测序验证后, 电转染入CHO细胞。以800mg/LZeocin筛选转染后的CHO细胞30d; 随后的30d中, 维持Zeocin的浓度在200mg/L, 以获取稳定转染的细胞。以RT PCR分析其mRNA的表达情况。表达产物经Ni NTAagarose纯化后, 以非还原SDS PAGE和Westernblot对表达产物进行初步鉴定。结果:以PCR扩增的MBLm52基因片段长约750bp, 将其插入表达载体构建重组真核表达载体pcDNA4 /HisMaxC MBLm52, 测序验证序列正确后将其电转染入CHO细胞。从细胞培养上清中获得的纯化的表达产物, 主要为相对分子质量(Mr)约60 000的分子, 寡聚化程度明显低于重组人野生型MBL和从人血浆中分离的MBL。结论: MBL基因CGT52TGT点突变可能并不影响其表达产物向胞外分泌的过程, 但突变后产生的Cys可能形成新的二硫键, 影响MBL结构单位和/或寡聚分子的形成, 推测该突变MBL蛋白不能发挥正常的功能。 展开更多

关键词 甘露聚糖结合凝集素 CGT52TGT突变体 表达 52Cys突变mbl蛋白

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雷公藤多苷抑制糖尿病大鼠肾组织MBL及MASP2的表达并减轻肾损伤 被引量：12

2

作者 赵瑞萍 陈卫东 +4 位作者 常保超 范瑞晨 刘磊 潘艳 郭亚玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1498-1503,共6页

目的研究雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织甘露糖结合凝集素(MBL)及甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽酶2(MASP2)表达的影响,探讨雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护机制。方法 45只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=35)和正常对照组(n=10)。实验... 目的研究雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾组织甘露糖结合凝集素(MBL)及甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽酶2(MASP2)表达的影响,探讨雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏损伤的保护机制。方法 45只雄性SD大鼠随机分为实验组(n=35)和正常对照组(n=10)。实验组喂以高糖高脂饲料6周后,腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病肾病大鼠模型。实验组有33只大鼠造模成功,将33只大鼠随机分为糖尿病肾病模型组(n=16)和雷公藤多苷治疗组(n=17),治疗组以雷公藤多苷[10 mg/(kg·d)]灌胃8周。第14周末,比较模型组和治疗组24 h尿蛋白定量及血清生化指标;过碘酸希夫反应(PAS)观察肾组织形态学改变;荧光定量PCR检测肾组织MBL1、MASP2、核因子κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)mRNA水平,Western blot法检测肾组织MBL-A、MASP2、NF-κB、MCP-1的蛋白水平,免疫组织化学染色检测MBL-A、MASP2蛋白在肾组织的表达和分布。结果与治疗组相比,模型组大鼠24 h尿蛋白定量、血清肌酐、尿素氮增高,肾组织MBL、MASP2、NF-κB及MCP-1表达明显增加;相关性分析显示,MBL与MASP2、NF-κB、MCP-1表达及24 h尿蛋白定量呈显著正相关。结论雷公藤多苷能抑制糖尿病模型大鼠肾组织MBL及MASP2的表达,减轻糖尿病大鼠肾损伤。 展开更多

关键词 雷公藤多苷 糖尿病肾病 甘露糖结合凝集素(mbl) 甘露聚糖结合凝集素丝氨酸肽酶2(MASP2) 核因子κB(NF-κB)

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类风湿关节炎患者血清MBL、MASP-2、HsCRP与C_3水平的相关性 被引量：9

3

作者 陈思 马宝良 +2 位作者 曹明强 于红娟 马兴铭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1340-1344,1356,共6页

目的研究类风湿关节炎(RA)患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)/MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)、Hs CRP和C3水平的相关性。方法收集50例RA患者(活动期和非活动期各25例)和40例健康对照者空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验分... 目的研究类风湿关节炎(RA)患者血清中甘露糖结合凝集素(MBL)/MBL相关的丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)、Hs CRP和C3水平的相关性。方法收集50例RA患者(活动期和非活动期各25例)和40例健康对照者空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验和免疫比浊试验分别检测血清MBL、MASP-2、Hs CRP和C3的水平。结果 RA组活动期和非活动期患者血清中MBL水平均显著低于健康对照组(10.05±2.14 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L;14.79±3.93 ng/m L vs 26.97±11.78 ng/m L,P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中MASP-2水平均显著低于健康对照组(75.90±9.21 ng/m L vs 251.78±34.50 ng/m L;107.8±14.90 ng/m L vs251.78±34.50 ng/m L)(P<0.05);RA组活动期和非活动期患者血清中Hs CRP水平显著高于健康对照组(40.53±34.81 mg/L vs1.42±1.70 mg/L;2.97±2.51 mg/L vs 1.42±1.70 mg/L,P<0.05),C3水平3组无差异;双变量Pearson相关性分析,RA患者组MBL与MASP-2含量均呈显著正相关(r=0.550,P=0.001)、与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.323,P=0.022);与C3含量无相关(r=0.022,P=0.882)。RA组MASP-2与Hs CRP含量呈低度负性相关(r=-0.453,P=0.001);与C3含量无相关(r=0.049,P=0.738)。经ROC曲线分析,Hs CRP曲线下面积最大(0.844,P=0.001),MASP-2和MBL曲线下面积较小(0.025,P=0.001;0.266,P=0.001),Hs CRP(84%)对RA诊断的敏感性高于MBL(10%)、MASP-2(40%)。结论 MBL与MASP-2水平与Hs CRP呈负相关关系,RA患者关节的炎症损伤程度越重,则血清MBL与MASP-2水平越低,提示MBL与MASP-2参与RA病理损伤过程,但二者的敏感性均较低,不能做为RA诊断及疾病活动程度评价的独立指标。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 甘露糖结合凝集素 mbl相关的丝氨酸蛋白酶-2 补体系统 超敏C反应蛋白 补体C3

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人血浆中MBL-MASP复合物的纯化与分离 被引量：6

4

作者 陈月 张丽芸 陈政良 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第12期1373-1377,共5页

目的从人血浆中分离纯化甘露聚糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)。方法用非活化Sepharose4B两步亲和层析纯化MBL-MASP复合物,再以SephacrylS-300柱凝胶过滤将MBL和MASP分离。在纯化MBL-MASP复合物的整个过程中,除凝胶过滤... 目的从人血浆中分离纯化甘露聚糖结合凝集素(MBL)和MBL相关丝氨酸蛋白酶(MASP)。方法用非活化Sepharose4B两步亲和层析纯化MBL-MASP复合物,再以SephacrylS-300柱凝胶过滤将MBL和MASP分离。在纯化MBL-MASP复合物的整个过程中,除凝胶过滤缓冲液外,均加入丝氨酸蛋白酶抑制剂苯甲磺酰氟(PMSF)和金属蛋白酶抑制剂1,10-邻二氮杂菲(1,10-phenanthroline),并控制温度在4 ℃。结果获得高度纯化的MBL和酶原形式的MASP。SDS-PAGE和Westernblotting表明所纯化的MBL相对分子质量为28000和32000肽链构成的功能性多聚体;配体结合测定和酵母菌凝集试验证实所纯化的MBL具有生物学活性。结论建立了一种比较简便的同时分离纯化MBL和MASP酶原的方法。 展开更多

关键词 甘露聚糖结合凝集素 甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶 亲和层析 凝胶过滤

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七彩神仙鱼C型凝集素家族成员CD302和MBL的克隆及在病原刺激下的免疫应答

5

作者 马腾飞 温彬 +3 位作者 刘鑫 缪琳 高建忠 陈再忠 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期35-43,共9页

七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特的亲代抚育行为,前期研究发现2种C型凝集素在育幼亲本皮肤中高表达,但表达模式不同,预示着潜在的功能分化。为探究两者潜在免疫功能的差异性,克隆获得了七彩神仙鱼C型凝集素基因SaCD302和S... 七彩神仙鱼(Symphysodon aequifasciatus)具独特的亲代抚育行为,前期研究发现2种C型凝集素在育幼亲本皮肤中高表达,但表达模式不同,预示着潜在的功能分化。为探究两者潜在免疫功能的差异性,克隆获得了七彩神仙鱼C型凝集素基因SaCD302和SaMBL,并分析了病原刺激下的免疫应答模式。结果显示,SaCD302和SaMBL的开放阅读框(ORF)长度分别为741和795 bp,分别编码246和264个氨基酸。SaCD302的氨基酸序列包含一个信号肽(aa 1—29),一个CTL结构域(aa 32—169)和一个跨膜结构域(aa 184—206)。SaMBL的氨基酸序列包含两个低复杂度区域(aa 32—92和aa 104—121)和一个典型的CTL结构域(aa 137—263)。SaCD302和SaMBL的氨基酸序列与尼加拉瓜湖始丽鱼(Archocentrus centrarchus)对应氨基酸序列的同源性最高。SaCD302在各组织中均有表达,头肾中表达量最高,其次为肝脏和鳃;SaMBL在皮肤中高表达,在肠道、肝脏、脾脏和性腺中低表达。嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)感染后,SaCD302在脾脏、头肾、肠道和皮肤中的表达量均显著上调,SaMBL仅在头肾、肠道和皮肤中表达上调,且时序性不同,表明二者可能在七彩神仙鱼免疫防御中发挥不同作用。 展开更多

关键词 七彩神仙鱼 C型凝集素基因 CD302 mbl QRT-PCR

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人甘露糖结合凝集素在小鼠肝脏细胞内表达 被引量：7

6

作者 金振晓 刘维永 +1 位作者 胡军 胡巧侠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期828-831,共4页

目的 :在小鼠肝脏组织中表达人甘露糖结合凝集素 (mannose bindinglectin ,MBL)。方法 :采用PCR方法从pGEMT MBL质粒中扩增人MBLcDNA序列 ,克隆入pUC19载体中 ,限制性酶切鉴定及测序正确后 ,将MBLcDNA克隆入真核表达载体pcDNA3质粒中 ,... 目的 :在小鼠肝脏组织中表达人甘露糖结合凝集素 (mannose bindinglectin ,MBL)。方法 :采用PCR方法从pGEMT MBL质粒中扩增人MBLcDNA序列 ,克隆入pUC19载体中 ,限制性酶切鉴定及测序正确后 ,将MBLcDNA克隆入真核表达载体pcDNA3质粒中 ,构建成pcDNA3 MBL质粒 ,经尾静脉大容量快速注射pcDNA3 MBL质粒 2 0 μg,8h后处死小鼠 ,WesternBlot方法检测小鼠肝脏组织和血清中人MBL ,免疫组织化学方法检测小鼠肝脏组织中人MBL的表达情况。结果 :成功扩增出人MBLcDNA序列并构建克隆载体pUC19 MBL ,测序结果正确 ,成功构建pcDNA3 MBL真核表达载体。小鼠尾静脉注射pcDNA3 MBL质粒后 8h ,免疫组化检测证实肝细胞中有人MBL表达 ,Westernblot方法检测发现血清和肝脏组织中出现人MBL蛋白。结论 :真核表达载体pcDNA3 MBL裸质粒DNA静脉注射可以在小鼠肝脏中大量表达人MBL ,并分泌入血 ,为临床纠正先天性低MBL患者的易感染状态提供了新的思路。 展开更多

关键词 肝脏细胞 甘露糖结合凝集素 基因表达 mbl PCR方法

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甘露糖结合凝集素基因的研究进展 被引量：6

7

作者 刘梅 赵忠利 +1 位作者 仲跻峰 王长法 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第6期45-49,共5页

疾病是影响畜牧业生产的主要因素,虽然传统的疾病控制方法对疾病的预防和治疗起到了重要作用,但随着分子生物学和基因工程技术的发展,分析在抗性和易感群体中候选基因的标记等位基因频率差异,结合遗传育种技术,提高家畜的抗病性与健康... 疾病是影响畜牧业生产的主要因素,虽然传统的疾病控制方法对疾病的预防和治疗起到了重要作用,但随着分子生物学和基因工程技术的发展,分析在抗性和易感群体中候选基因的标记等位基因频率差异,结合遗传育种技术,提高家畜的抗病性与健康水平已成为当今提高家畜生产水平的重要途径。甘露糖结合凝集素(mannan-binding lectins,MBL)是构成人和动物血清补体凝集素途径的主要成分,在先天免疫过程中起重要作用。笔者简述了MBL的分布、结构、功能,介绍了MBL基因与抗病力的关系,对其作为家畜抗病育种遗传标记的应用前景进行了展望。期望MBL作为遗传标记,通过标记辅助选择进行抗病育种可以培育出抗病力强的家畜品种。 展开更多

关键词 甘露糖结合凝集素 生物学功能 多态性 抗病育种

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宁夏汉族人群甘露糖结合凝集素基因多态性与乙型肝炎的相关性 被引量：1

8

作者 马力通 李珺 +1 位作者 李雅丽 王玉炯 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期383-385,390,共4页

目的探讨宁夏汉族人群中甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与乙型肝炎的相关性。方法应用PCR-RFLP方法检测111例宁夏汉族健康人、82例乙肝患者的MBL基因的多态性分布,并与其他汉族人群MBL基因多态性的分布进行比较。结果在宁夏汉族人群中... 目的探讨宁夏汉族人群中甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性与乙型肝炎的相关性。方法应用PCR-RFLP方法检测111例宁夏汉族健康人、82例乙肝患者的MBL基因的多态性分布,并与其他汉族人群MBL基因多态性的分布进行比较。结果在宁夏汉族人群中,只检测出两种等位基因:野生型A和变异型B,未检出变异型C、D等位基因,发现健康人与乙型肝炎患者MBL基因多态性分布无显著性差异。结论MBL基因多态性与乙型肝炎不相关,但宁夏汉族MBL基因多态性与广东汉族相比有显著性差异。 展开更多

关键词 乙型肝炎 甘露糖结合凝集素 基因多态性

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烟草甘露糖结合凝集素基因的克隆及序列分析 被引量：1

9

作者 林世锋 任学良 王仁刚 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2012年第3期20-24,共5页

为了对植物抗病虫基因工程研究提供依据,以辣椒凝集素基因为探针,通过电子克隆方法从烟草栽培品种K326中克隆甘露糖结合凝集素基因,并对其进行了序列分析。结果表明:从烟草栽培品种K326中克隆出NtMBL1、NtMBL2和NtMBL33种甘露糖结合凝... 为了对植物抗病虫基因工程研究提供依据,以辣椒凝集素基因为探针,通过电子克隆方法从烟草栽培品种K326中克隆甘露糖结合凝集素基因,并对其进行了序列分析。结果表明:从烟草栽培品种K326中克隆出NtMBL1、NtMBL2和NtMBL33种甘露糖结合凝集素基因;3种凝集素cDNA序列均包含完整的开放读码框,编码298个氨基酸,具备B-凝集素结构域,与辣椒凝集素蛋白的一致性较高。经SWISS-MODEL同源模建分析,NtMBL1、NtMBL2和NtMBL3的蛋白模型由8～9个β片层组成的β桶结构,具有与单子叶植物甘露糖结合凝集素相似的空间结构。 展开更多

关键词 烟草 甘露糖结合凝集素(mbl) 克隆 序列分析

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甘露糖结合凝集素与炎性肠病相关性的研究进展 被引量：3

10

作者 吴瑛 汪芳裕 《医学研究生学报》 CAS 2009年第2期217-220,共4页

甘露糖结合凝集素(MBL)属于凝集素家族,是机体先天性免疫的重要成分,有激活补体系统、调理吞噬等作用,并与许多免疫相关性疾病有关。炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,目前普遍认为其发病机制与自身免疫损害密切相关。近年研究表明,... 甘露糖结合凝集素(MBL)属于凝集素家族,是机体先天性免疫的重要成分,有激活补体系统、调理吞噬等作用,并与许多免疫相关性疾病有关。炎性肠病包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,目前普遍认为其发病机制与自身免疫损害密切相关。近年研究表明,MBL基因的多态性导致了其血清水平的个体差异,且与炎性肠病的发病率、临床症状、病程等具有相关性。文中综述了MBL及其与炎性肠病间相关性的研究进展。 展开更多

关键词 甘露糖结合凝集素 炎性肠病 甘露糖相关丝氨酸蛋白酶 基因多态性

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甘露(聚)糖结合凝集素外显子Ⅰ 54位密码子突变的检测方法

11

作者 张红梅 班谦 +4 位作者 赵宗胜 曹旭东 丁进 王丽娅 程江 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第5期535-537,共3页

对人源甘露糖结合凝集素基因54位密码子点突变的情况进行测定,建立了相关实验室检测方法。采用PCR扩增目的片段,再对产物采用PCR-RFLP测定点突变。检测的哈萨克40例血样54位密码子的点突变情况:野生型为20例,占50%;突变杂合型为20,占50%... 对人源甘露糖结合凝集素基因54位密码子点突变的情况进行测定,建立了相关实验室检测方法。采用PCR扩增目的片段,再对产物采用PCR-RFLP测定点突变。检测的哈萨克40例血样54位密码子的点突变情况:野生型为20例,占50%;突变杂合型为20,占50%;突变纯合子为0例,占0%。PCR-RFLP适合实验室检测MBL外显子I54密码子突变情况,可以作为分析依据。 展开更多

关键词 甘露糖结合凝集素 突变 PCR-RFLP

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苹果甘露糖结合凝集素基因的克隆及表达分析 被引量：1

12

作者 李明想 柏素花 +2 位作者 张玉刚 祝军 戴洪义 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期36-41,共6页

以苹果幼叶为试验材料,通过同源克隆和RT-PCR方法分离出B_LECTIN基因家族中的一个基因,命名为MdMBL。分析结果表明,克隆得到的MdMBL长度为1 181 bp,包括20 bp的5'非编码区、81 bp的3'非编码区和一个长度为1 080 bp编码359个氨... 以苹果幼叶为试验材料,通过同源克隆和RT-PCR方法分离出B_LECTIN基因家族中的一个基因,命名为MdMBL。分析结果表明,克隆得到的MdMBL长度为1 181 bp,包括20 bp的5'非编码区、81 bp的3'非编码区和一个长度为1 080 bp编码359个氨基酸的开放阅读框,推测该蛋白质分子量为39.76 kDa,其等电点为8.72。在构建的MBL系统进化树中,MdMBL与葡萄的MBL的关系最近,其次为橹豆的MBL,与苹果的MBL2同源基因进化关系最远。相对荧光定量RT-PCR分析表明,MdMBL具有组织特异性,在茎中表达量最高,在花中表达量最低;低温胁迫促使MdMBL表达量升高,MdMBL在机械损伤处理下表达量先升高后降低;外源SA能够诱导MdMBL表达上调。 展开更多

关键词 苹果 甘露糖结合凝集素 基因克隆 表达分析

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