期刊文献+
共找到26篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
Inverse PCR法快速测定转基因马铃薯中T-DNA的拷贝数 被引量:1
1
作者 南相日 《中国马铃薯》 2006年第2期78-80,共3页
利用Inverse PCR技术分析原生质体途径导入PLRV-CP基因的马铃薯转基因后代T-DNA拷贝数,结果与Southern Blot相同。经RT-PCR分析,低拷贝数的转基因后代显阳性反应,多拷贝数的显阴性反应,说明T-DNA多拷贝数影响外源基因的表达。Inverse PC... 利用Inverse PCR技术分析原生质体途径导入PLRV-CP基因的马铃薯转基因后代T-DNA拷贝数,结果与Southern Blot相同。经RT-PCR分析,低拷贝数的转基因后代显阳性反应,多拷贝数的显阴性反应,说明T-DNA多拷贝数影响外源基因的表达。Inverse PCR技术能为早期快速准确预测转基因植株中外源基因的T-DNA拷贝数,排除多拷贝重复串联序列诱导的外源基因沉默植株,为获得稳定表达的转基因株系提供有效方法。 展开更多
关键词 inverse pcr 拷贝数 基因沉默
在线阅读 下载PDF
应用于染色体步移的PCR扩增技术的研究进展 被引量:33
2
作者 刘博 苏乔 +2 位作者 汤敏谦 袁晓东 安利佳 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期587-595,共9页
各种建立在PCR基础上染色体步移的方法能够根据已知的基因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T-DNA或转座子的插入位点、染色体测序工作中的空隙填补,从而获得完整... 各种建立在PCR基础上染色体步移的方法能够根据已知的基因序列得到侧翼的基因序列。染色体步移技术主要应用于克隆启动子、步查获得新物种中基因的非保守区域、鉴定T-DNA或转座子的插入位点、染色体测序工作中的空隙填补,从而获得完整的基因组序列等方面。其方法主要有3种:反向PCR的方法,连接法介导的PCR的方法以及特异引物PCR的方法。文章就各种方法进行举例说明并加以分析比较。 展开更多
关键词 染色体步移 反向pcr 连接法pcr 特异引物pcr
在线阅读 下载PDF
改进的反向PCR技术克隆转移基因的旁侧序列 被引量:19
3
作者 李竹红 刘德培 梁植权 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第6期600-602,共3页
对传统的反向PCR 技术作了一些改进: 用巢式PCR 扩增含量极少的靶序列; PCR 反应体系中加入5 % 的甲酰胺以减少非特异性扩增. 结果表明, 改进的反向PCR 体系是克隆人基因组已知片段旁侧序列的高度灵敏、高度特异的方法.
关键词 反向pcr 旁侧序列 转移基因
在线阅读 下载PDF
反向PCR克隆转基因水稻的外源基因旁侧序列 被引量:29
4
作者 韩志勇 王新其 沈革志 《上海农业学报》 CSCD 2001年第2期27-32,共6页
以反向PCR(IPCR)为基础建立了适合于处理大量材料的克隆转基因水稻中外源基因旁侧序列的技术体系。该方法中用小量法提取转基因水稻总DNA ;总DNA用 10倍过量的限制性内切酶在 50 μL反应体积中进行过夜酶切 ;酶切片段在 2 0 μL体积中... 以反向PCR(IPCR)为基础建立了适合于处理大量材料的克隆转基因水稻中外源基因旁侧序列的技术体系。该方法中用小量法提取转基因水稻总DNA ;总DNA用 10倍过量的限制性内切酶在 50 μL反应体积中进行过夜酶切 ;酶切片段在 2 0 μL体积中进行自连接 ,之后进行套式PCR(nested PCR)扩增旁侧序列。在套式PCR中结合了热启动PCR和降落PCR技术以增强PCR反应的特异性。用这种方法 ,本实验室在一周内克隆了 35个转基因水稻株系中外源基因的旁侧序列 ,长度在 30 0~ 750bp之间 ,PCR产物的特异性用Southern杂交进行了证明。实验结果表明这个方法具有快速、稳定和高效的优点。 展开更多
关键词 反向pcr 旁侧序列 外源基因 转基因水稻
在线阅读 下载PDF
反向嵌套PCR法高效扩增辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA5′末端序列 被引量:8
5
作者 李秋莉 高晓蓉 +3 位作者 范琦 袁晓东 刘大伟 安利佳 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2001年第11期17-19,共3页
采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法... 采用反向嵌套PCR法 ,根据已获得的辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA的部分序列 ,设计一条 5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物 ,成功地克隆了辽宁碱蓬甜菜碱醛脱氢酶cDNA 5′末端。与锚定PCR法相比 ,反向嵌套PCR法具有特异性强、扩增效率高等优点 ,是一种非常有效的扩增cDNA 5′末端序列的方法。 展开更多
关键词 反向嵌套pcr 辽宁碱蓬 甜菜碱醛脱氢酶 5′cDNA 末端序列 基因工程 RACE 反转录 克隆 扩增效率
在线阅读 下载PDF
运用新型的反向PCR策略高效构建基因的点突变体 被引量:3
6
作者 程龙 韩白玉 +9 位作者 侯莎 韩永健 徐小洁 蒋凯 李法曾 杨智洪 窦京涛 吕朝晖 张浩 叶棋浓 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第4期378-382,共5页
基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序... 基因的点突变体在其结构和功能研究中发挥非常关键的作用,如何高效、经济地构建基因点突变体是许多分子生物学研究遇到的棘手问题.以PIAS3点突变体的构建为对象,设计了新型的以反向PCR为基础的点突变构建流程,获得的点突变体质粒经测序后均与预期相符,并在293T细胞内得到了正确表达.以上结果表明,该实验设计方案能够高效、方便地用于基因点突变体的构建,为进一步研究它们的分子功能打下了基础. 展开更多
关键词 反向pcr PIAS3 点突变
在线阅读 下载PDF
2种PCR方法扩增盐藻肌动蛋白基因3’旁侧序列比较 被引量:6
7
作者 姜国忠 谢华 +2 位作者 郭玉忠 范天黎 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2004年第1期41-44,共4页
目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白... 目的 :比较扩增盐藻肌动蛋白基因 3’旁侧序列的 2种PCR方法。方法 :用pvuⅡ、EcoRⅤ和StuⅠ 3种限制性内切酶消化盐藻基因组DNA后 ,供 2种PCR用 ,一种是连接介导法PCR(LMPCR) ,与用人工合成的适配子相连并用适配子引物和盐藻肌动蛋白基因特异引物扩增未知序列 ;另一种是反向PCR(IPCR) ,酶切后的DNA自身环化做模板 ,用 2对基因特异引物反向扩增。结果 :2轮PCR后 ,LMPCR中得到大量的非特异扩增产物 ,测序结果发现许多产物是由适配子引物AP2单独扩增引起。而反向PCR在得到pvuⅡ和StuⅠ消化的自连文库中扩增得到 2 .5kb特异产物 ,经测序发现 ,片段两侧为基因特异引物 ,部分序列与已知序列相一致。Southern也进一步证实了IPCR扩增片段来源于盐藻基因组DNA。结论 :IPCR技术在克隆基因旁侧序列时优于LMPCR方法。 展开更多
关键词 反向pcr 连接介导法pcr 盐藻 肌动蛋白 旁侧序列cDNA 简并引物
在线阅读 下载PDF
长距离PCR技术检测重型血友病甲Ⅷ因子基因倒位的进一步研究及推广应用 被引量:2
8
作者 梁燕 刘敬忠 +5 位作者 肖白 季林祥 张跃进 赵翠兰 王勇 林雯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第9期42-45,共4页
将已研究成功的长距离PCR(LDPCR) 技术[3]在热循环条件、模板DNA用量及dNTP用量等方面进行了进一步优化和探索。应用优化后的LDPCR技术检测了来自天津、江苏、北京、湖北、四川等省市108个重型血友病... 将已研究成功的长距离PCR(LDPCR) 技术[3]在热循环条件、模板DNA用量及dNTP用量等方面进行了进一步优化和探索。应用优化后的LDPCR技术检测了来自天津、江苏、北京、湖北、四川等省市108个重型血友病甲家系共157 份DNA(患者105人, 家属52人), 发现47例患者(或家系) 有凝血因子Ⅷ(FⅧ) 基因倒位, 占重型患者的44% ; 查出基因倒位携带者30 余名。用LDPCR检测FⅧ基因倒位的技术可以准确、简便、快速地直接进行重型血友病甲的基因诊断、携带者检测及产前诊断。 展开更多
关键词 LD-pcr 血友病甲 Ⅷ因子 基因倒位
在线阅读 下载PDF
优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究 被引量:9
9
作者 杨坤 吴学龙 +1 位作者 朗春秀 陈锦清 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第10期5002-5005,共4页
[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增... [目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比。[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%。根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点。[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列。 展开更多
关键词 反向pcr 侧翼序列 改良CTAB法 转基因油菜
在线阅读 下载PDF
长距离PCR检测重型血友病A病人凝血因子Ⅷ基因倒位 被引量:1
10
作者 丁培芳 孙汶生 +4 位作者 王勤友 刘德春 张雪芹 滕彬 申法奎 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期390-392,共3页
为了筛查山东省重型血友病A(hemophiliaA ,HA)凝血因子Ⅷ基因倒位的患者并检出携带者 ,采用长距离DNA扩增 (LD PCR)方法 ,以 0 .6 %琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测临床上确诊的 5 5例重型HA患者及其家系成员中是否存在凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因... 为了筛查山东省重型血友病A(hemophiliaA ,HA)凝血因子Ⅷ基因倒位的患者并检出携带者 ,采用长距离DNA扩增 (LD PCR)方法 ,以 0 .6 %琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测临床上确诊的 5 5例重型HA患者及其家系成员中是否存在凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因倒位。电泳出现 11kb带 ,示凝血因子Ⅷ基因倒位 ;12kb带 ,示非倒位 ;这两条带同时出现者为凝血因子Ⅷ基因倒位携带者。结果表明 :5 5例无亲缘关系的重型HA患者中 ,发现 2 2例患者 (或家系成员 )有凝血因子Ⅷ基因倒位 ,占重型HA患者的 4 0 % ;15个家系中查出基因倒位携带者 5名。结论 :运用LD PCR技术可以准确、简便、快速地检测重型血友病A患者是否存在凝血因子Ⅷ基因倒位。 展开更多
关键词 pcr 长距离pcr 血友病A 凝血因子Ⅷ 基因倒位
在线阅读 下载PDF
反向PCR法扩增花粉特异表达基因PSG076启动子 被引量:1
11
作者 陈泠 苏佩佩 +5 位作者 佟汉文 刘易科 朱展望 杨广笑 高春保 何光源 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期309-314,共6页
PSG076基因是从奥地利小麦品种‘Ferdinand’中分离的花粉特异性表达基因,功能未知。为获得可用于小麦基因工程的花粉特异性启动子,采用优化的反向PCR法分离PSG076启动子,获得了起始密码子上游约1.4 kb的启动子序列。生物信息学分析显示... PSG076基因是从奥地利小麦品种‘Ferdinand’中分离的花粉特异性表达基因,功能未知。为获得可用于小麦基因工程的花粉特异性启动子,采用优化的反向PCR法分离PSG076启动子,获得了起始密码子上游约1.4 kb的启动子序列。生物信息学分析显示,该启动子除含有与花粉特异性表达相关的调控元件AGAAA和GTGA外,还含有花粉特异性表达相关的数量元件AGGTCA和AAATGA,推测其为活性较强的花粉特异性启动子。实验中对反向PCR方法的优化可提高扩增侧翼未知序列的效率,特别适用于启动子序列的扩增。 展开更多
关键词 小麦 花粉特异性启动子 反向pcr 序列分析
在线阅读 下载PDF
采用反向PCR技术优化适合毕赤酵母表达的截短型HPV58型L1基因 被引量:1
12
作者 马团 宇丽 +1 位作者 李发涛 周羽竝 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期631-635,共5页
目的:探讨利用反向聚合酶链反应(反向PCR)技术根据毕赤酵母偏爱密码子优化截短型人乳头瘤病毒58型(HPV58)L1基因的研究。方法:设计PCR引物扩增截短型HPV58L1目的基因,将其克隆入毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC;测序并对目的基因进行序列... 目的:探讨利用反向聚合酶链反应(反向PCR)技术根据毕赤酵母偏爱密码子优化截短型人乳头瘤病毒58型(HPV58)L1基因的研究。方法:设计PCR引物扩增截短型HPV58L1目的基因,将其克隆入毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC;测序并对目的基因进行序列分析;根据毕赤酵母偏爱密码子利用反向PCR技术设计引物对目的基因进行扩增。结果:扩增了截短型HPV58L1基因并将其克隆入毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC中;根据毕赤酵母偏爱密码子优化了截短型HPV58L1基因。结论:成功构建经密码子优化截短型HPV58L1基因的毕赤酵母分泌表达载体pPICZαC-HPV58L1。 展开更多
关键词 毕赤酵母 HPV58L1基因 反向聚合酶链反应(反向pcr) 载体
在线阅读 下载PDF
单只不育果蝇未知基因的反向PCR(英文)
13
作者 江云芳 袁婺洲 +1 位作者 李敏 吴秀山 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 1999年第2期71-77,共7页
根据p转位子诱变和poxn基因双杂合子法检测化学感受器数目的变化,筛选到一系列突变个体,其中一个雄蝇腿部表现出不能形成化学感受器的突变表型.遗憾的是该只雄蝇是不育的.为了克隆该基因,研究出一种微量DNA反向PCR法.... 根据p转位子诱变和poxn基因双杂合子法检测化学感受器数目的变化,筛选到一系列突变个体,其中一个雄蝇腿部表现出不能形成化学感受器的突变表型.遗憾的是该只雄蝇是不育的.为了克隆该基因,研究出一种微量DNA反向PCR法.该法可用0.5只果蝇扩增出P转位子插入点相邻的基因组片断,方法简便可靠. 展开更多
关键词 反向pcr 果蝇 未知基因 原位杂交 pcr
在线阅读 下载PDF
猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1(SRPK1)克隆表达及功能初步分析 被引量:3
14
作者 俄广鑫 刘娣 +6 位作者 张冬杰 杨秀琴 崔羽 祝继原 杨少成 王嘉博 谢宇彤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1379-1386,共8页
本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白... 本研究旨在阐明猪SRPK1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象,利用RT-PCR技术克隆SRPK1基因CDS区域,同时利用反向PCR(inverse PCR,I-PCR)技术得到猪部分SRPK1的5′UTR序列;利用生物信息学方法分析SRPK1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点;利用荧光定量PCR(real-time PCR)检测SRPK1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况;构建猪骨骼肌损伤模型,研究在骨骼肌发育过程中SRPK1基因的表达特性。结果,将克隆片段拼接得到长2499bp的大白猪SRPK1基因序列,包含了1968bp完整CDS区域,分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质;包括2个P_Kc结构域,猪SRPK1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得5′UTR含有多个转录结合位点:HSF1、HSF2、Ik-1、IK-2、SRY、SP1MyoD、USF、E47、p300、CP2、RREB-1、E2F和AP-1。利用荧光定量PCR研究发现,表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性,主要都是在胃、大肠和小肠中表达。SR-PK1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′UTR处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点,主要在消化系统组织表达,在骨骼肌修复中表达上调,推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。 展开更多
关键词 精氨酸/丝氨酸蛋白激酶1 实时荧光定量pcr 反向pcr 骨骼肌损伤模型 生物信息学分析
在线阅读 下载PDF
小麦转录因子TaDREB6基因启动子的克隆及活性分析 被引量:3
15
作者 李凤艳 徐兆师 +4 位作者 李雅轩 晏月明 李连城 陈明 马有志 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期793-798,共6页
启动子的分析有助于解析植物抵御不良环境的机制。植物DREB转录因子参与对干旱、低温和高盐等胁迫的响应,在抗逆中起着重要作用。本研究利用反向PCR方法从小麦中克隆获得DREB转录因子TaDREB6基因启动子,长度为1 705 bp。PLACE和PlantCAR... 启动子的分析有助于解析植物抵御不良环境的机制。植物DREB转录因子参与对干旱、低温和高盐等胁迫的响应,在抗逆中起着重要作用。本研究利用反向PCR方法从小麦中克隆获得DREB转录因子TaDREB6基因启动子,长度为1 705 bp。PLACE和PlantCARE分析发现,TaDREB6基因启动子包含多种胁迫相关元件。构建由TaDREB6基因启动子驱动的GUS植物表达载体,转化小麦成熟胚愈伤组织,组织化学染色结果表明,TaDREB6基因启动子是诱导型启动子,受干旱、低温、盐、脱落酸和水杨酸等胁迫诱导。Real-time PCR显示,TaDREB6基因受多种胁迫诱导表达,与TaDREB6启动子活性分析结果一致,这些结果为进一步分析DREB转录因子的功能提供了依据。 展开更多
关键词 小麦 DREB启动子 反向pcr 瞬时表达
在线阅读 下载PDF
银耳芽孢内源gpd启动子的克隆与功能鉴定 被引量:8
16
作者 聂燕华 林俊芳 +2 位作者 王杰 尤琳烽 郭丽琼 《食用菌学报》 北大核心 2012年第2期1-7,共7页
利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。... 利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremellafuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验。结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885bp)、gpd-Tre2(708bp)、gpd-Tre3(466bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTre1-mfc、pgTre2-mfc和pgTre3-mfc。拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3%,比工程菌株yLes3提高25.7%,木聚糖酶活为34.8U/mL,比Tr01酶活提高26.3%,略低于yLes3。3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885bp的大片段gpd启动子表达活性更高。 展开更多
关键词 银耳 芽孢 gpd启动子 反向长距离pcr 多功能纤维素酶
在线阅读 下载PDF
小麦TaPSG719基因启动子的分离及序列分析 被引量:1
17
作者 陈泠 丁丽萍 +4 位作者 严颖君 金莲 杨广笑 涂知明 何光源 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期361-364,共4页
TaPSG719基因是从小麦中分离的花粉特异性表达基因,其功能未知。克隆和分析该基因的启动子有助于研究该基因的功能,解析小麦花器官的发育调控机制。本研究根据已报道的TaPSG719基因cDNA序列为基础设计引物,经过两次反向PCR获得了该基因... TaPSG719基因是从小麦中分离的花粉特异性表达基因,其功能未知。克隆和分析该基因的启动子有助于研究该基因的功能,解析小麦花器官的发育调控机制。本研究根据已报道的TaPSG719基因cDNA序列为基础设计引物,经过两次反向PCR获得了该基因起始密码子上游1776bp的调控序列。应用PLACE和PlantCARE数据库系统对该序列进行分析研究,发现其具有启动子的基本元件TATA-box和CAAT-box、两种花粉特异性调控元件AGAAA和GTGA及光反应和激素响应元件。 展开更多
关键词 小麦 花粉特异性基因 反向pcr 启动子 序列分析
在线阅读 下载PDF
外源性人TIMP-1基因在转基因小鼠染色体上的整合及定位 被引量:2
18
作者 朱晗玉 陈香美 +2 位作者 马润林 张冬芬 任建功 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期37-42,共6页
为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(human tissue inhibitor of metalloproteinase-1,hTIMP-1)基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位,应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数,结果表明,外... 为探讨外源基因人基质金属蛋白酶组织抑制物-1(human tissue inhibitor of metalloproteinase-1,hTIMP-1)基因在转基因小鼠家系染色体上的整合和精确定位,应用Southern印迹检测外源基因在染色体上整合的位点及拷贝数,结果表明,外源基因是以单拷贝、单位点形式整合;应用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术检测F4~F20代转基因小鼠中外源基因的整合.结果证明,该家系转基因小鼠自F4代起是纯合子,外源基因整合在17号染色体E区;反向PCR法(Inverse PCR,IPCR)克隆出约3.8kb外源基因整合位点处的侧翼序列.分析表明,外源基因整合在17号染色体E1.3区,ALK(anaplastic lymphoma kinase,ALK)基因第23个内含子区域、结果提示,获得的转基因小鼠为纯系,外源基因hTIMP-1已稳定整合在转基因小鼠染色体上,并能遗传给后代. 展开更多
关键词 转基因动物模型 基质金属蛋白酶组织抑制物-1 荧光原位杂交 反向pcr
在线阅读 下载PDF
骆驼β-防御素caBD-1全长cDNA的扩增 被引量:1
19
作者 杨银凤 唐博 +1 位作者 曹贵方 王永胜 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期264-268,共5页
获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设... 获得全长cDNA序列是研究基因结构、基因表达和基因功能的前提。我们根据已获得的骆驼β_防御素caBD_1cDNA的已知序列设计一条上游引物,反转录引物中的部分序列即3′末端序列。另外,采用反向嵌套PCRRACE法,根据caBD_1cDNA的已知序列,设计一条5′末端磷酸化的特异性反转录引物和两对特异性反向嵌套PCR引物,首先进行反转录(RT),然后将mRNA反转录成的cDNA进行环化,最后进行反向嵌套巢式PCR,成功的克隆了骆驼β_防御素caBD_1cD NA的5′末端序列。本研究扩增出的caBD_1cDNA序列全322bp,其中包含一个由192bp组成的开放读码框(ORF),该ORF编码64个氨基酸残基的前原caBD_1肽。 展开更多
关键词 反向嵌套pcr 5’RACE 3’RACE Β-防御素 骆驼
在线阅读 下载PDF
三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因5′侧翼序列的克隆与分析 被引量:1
20
作者 何晓兰 刘桂华 +4 位作者 倪万潮 侯喜林 吴纪中 钦佩 朱卫民 《江苏农业学报》 CSCD 2004年第2期65-69,共5页
 根据三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)5′端序列设计特异引物,采用反向PCR技术从三角叶滨藜总DNA中扩增并克隆了该基因的5′侧翼区约855bp的片段。距起始密码子ATG77bp处的T碱基为可能的转录起始位点。在-25~-30bp、-260~-265bp...  根据三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)5′端序列设计特异引物,采用反向PCR技术从三角叶滨藜总DNA中扩增并克隆了该基因的5′侧翼区约855bp的片段。距起始密码子ATG77bp处的T碱基为可能的转录起始位点。在-25~-30bp、-260~-265bp、-337~-342bp以及-715~-720bp含有推测的TATA box(TATAAA),在-389~-393bp和-720~-724bp含有推测的CAAT box(CCAAT),以及在-112~-116bp和-397~-401bp含有推测的ABA作用元件CACGT。仅其-178~-1bp区与中亚滨藜BADH基因启动子区高度同源,同源性为90%。该BADH基因5′侧翼区与其它植物BADH基因的启动子区无同源性。 展开更多
关键词 三角叶滨藜 甜菜碱醛脱氢酶基因 基因克隆 序列分析 5′侧翼序列 反向pcr 渗透保护剂
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部