转Cry1A(b)基因抗虫水稻的获得及鉴定 被引量：3

1

作者 祁永斌 叶胜海 +3 位作者 陆艳婷 雷树凡 陶跃之 张小明 《浙江农业学报》 CSCD 2007年第4期264-267,共4页

利用农杆菌混合液介导的共转化法,研究不同浓度的农杆菌混合液浸染5种水稻品种的愈伤组织,进而获得共转化再生植株。对转基因植株进行叶片潮霉素抗性检测和螟虫田间抗性鉴定的结果表明,农杆菌混合液浓度OD600为0.6左右时,其浸染能力较... 利用农杆菌混合液介导的共转化法,研究不同浓度的农杆菌混合液浸染5种水稻品种的愈伤组织,进而获得共转化再生植株。对转基因植株进行叶片潮霉素抗性检测和螟虫田间抗性鉴定的结果表明,农杆菌混合液浓度OD600为0.6左右时,其浸染能力较强;5个品种中以浙粳27的再生效率最高。转基因植株叶片经潮霉素抗性检测,潮霉素阳性率为78.13%,经PCR检测转基因植株Cry1A(b)基因阳性率为15.11%。自然抗性鉴定结果表明:Cry1A(b)基因阳性的转基因植株对稻纵卷叶螟具有很好的抗性。基因分离的鉴定结果表明:HPT基因与Cry1A(b)基因在共转化转基因植株的后代中发生了分离。 展开更多

关键词 水稻 农杆菌 潮霉素 Cry1A(b)基因

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抗潮霉素B的水稻原生质体的再生 被引量：5

2

作者 杨歧生 颜秋生 +1 位作者 金小平 张雪琴 《浙江大学学报（自然科学版）》 CSCD 1996年第5期582-588,共7页

本实验室构建的具有潮霉素Ｂ（ＨＰＴ）抗性基因、卡那霉素抗性基因（ＫａｎＲ）和虫萤光素酶基因（ＬＣＣ）的质粒ｐＴＨＬ２７ＤＮＡ，用聚乙二醇（ＰＥＧ）法导入到水稻广亲和品种０２４２８的原生质体细胞内．研究原生质体抗性筛选... 本实验室构建的具有潮霉素Ｂ（ＨＰＴ）抗性基因、卡那霉素抗性基因（ＫａｎＲ）和虫萤光素酶基因（ＬＣＣ）的质粒ｐＴＨＬ２７ＤＮＡ，用聚乙二醇（ＰＥＧ）法导入到水稻广亲和品种０２４２８的原生质体细胞内．研究原生质体抗性筛选和原生质体再生的条件．结果，在含有２５μｇ／ｍｌ潮霉素Ｂ和１００ｎμｇ／ｍｌ卡那霉素的培养基ＫＰＲ和Ｎ６内连续处理４星期，可以很好地除去非转化的敏感的原生质体再生细胞，然后在无抗菌素选择压力的培养基中，转化细胞可再生成小植株． 展开更多

关键词 水稻 原生质体 再生 抗潮霉素b基因

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潮霉素B预混剂的临床驱虫试验研究 被引量：1

3

作者 费陈忠 苏世广 +5 位作者 李贵玉 许月英 吴昊 范超 肖文龙 薛飞群 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第1期30-34,共5页

为了解潮霉素B预混剂临床驱除绦虫线虫的有效性和给药时间的合理性,依据兽药临床试验规范,试验选择了蠕虫自然感染皖西麻黄鸡824只,按要求随机分为3组,分别为潮霉素B预混剂治疗组284只,芬苯哒唑粉对照药物组284只,不治疗的感染对照组256... 为了解潮霉素B预混剂临床驱除绦虫线虫的有效性和给药时间的合理性,依据兽药临床试验规范,试验选择了蠕虫自然感染皖西麻黄鸡824只,按要求随机分为3组,分别为潮霉素B预混剂治疗组284只,芬苯哒唑粉对照药物组284只,不治疗的感染对照组256只,试验周期根据临床治疗效果确定。结果显示,潮霉素B预混剂,推荐剂量10 mg/kg混饲,连续饲喂21 d,对鸡蛔虫和绦虫的粗计驱虫率分别为63%和26%,表现明显的驱除蛔虫作用(P<0.05),连续饲喂42 d,对鸡蛔虫和绦虫的粗计驱虫率分别为100%和-13%,驱蛔虫效果极显著(P<0.01);对照药物芬苯哒唑粉,50 mg/kg混饲,连续饲喂6 d,对鸡蛔虫和绦虫的粗计驱虫率分别为100%和44%,同样具有极显著的驱除蛔虫作用(P<0.01),本试验中2种药物的驱蛔虫效果相当,对绦虫的驱除作用不明显(P>0.05)。潮霉素B预混剂10 mg/kg混饲,连续饲喂42 d,可以驱净鸡蛔虫的感染,但对鸡绦虫感染无明显的驱除作用。 展开更多

关键词 鸡蛔虫 潮霉素b 临床试验

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潮霉素B抗性基因在木醋杆菌中的整合表达 被引量：1

4

作者 闵勇 吴顺清 +6 位作者 朱海云 方北松 万中义 王开梅 吴昊 陈华 杨自文 《湖北农业科学》 北大核心 2010年第12期3064-3066,共3页

以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传... 以质粒pSET152为出发载体,构建潮霉素B抗性基因的表达载体pSET152-HYG,通过大肠杆菌-木醋杆菌的属间接合转移将pSET152-HYG导入木醋杆菌,在位点特异性重组酶作用下潮霉素抗性基因B整合到木醋杆菌的染色体上。与出发菌株相比,重组菌株传代稳定,潮霉素抗性有了较大的提高,从100μg/mL提高到了400μg/mL以上,而产纤维素能力只略有下降。 展开更多

关键词 潮霉素b抗性基因 接合转移 整合表达 木醋杆菌

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潮霉素B在遗传转化中应用的研究进展 被引量：12

5

作者 王坚 李永玲 刘炜 《宁夏农林科技》 2017年第12期36-43,共8页

本文简介了潮霉素B及其他常见抗生素的作用机制,总结了近年来在遗传转化研究中用到的潮霉素B的筛选浓度及其体系,以期为后续相关研究中筛选体系的确定提供指导。

关键词 潮霉素b 遗传转化 筛选

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具潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备

6

作者 张梅英 李华 +8 位作者 董婉维 杨葳 秦英 汪瑛 周生来 于洋 王惟 王太一 王禄增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第S1期57-58,共2页

[目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物... [目的]建立具有潮霉素B(hygromycinB)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层。[方法]通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和southernblot鉴定。[结果]经300ug/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆。抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southernblot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞。[结论]本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础。 展开更多

关键词 NIHNIH3T3细胞 潮霉素b磷酸转移酶基因 转染 潮霉素b抗性 ES细胞

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潮霉素B对拟南芥种子萌发及幼苗生长的影响

7

作者 程琳琳 王璇 +4 位作者 彭文涛 周立军 王纪坤 谢贵水 安锋 《种子》 北大核心 2023年第4期118-126,共9页

为探究拟南芥种子进行1/2 MS培养基筛选的最适潮霉素浓度,将野生型拟南芥种子灭菌后,点播在含0,20,30,40,50 mg/L潮霉素的1/2 MS培养基上进行培养(分别记为M_(0)、M_(1)、M_(2)、M_(3)、M_(4)),观察潮霉素对种子萌发、幼苗生长形态变化... 为探究拟南芥种子进行1/2 MS培养基筛选的最适潮霉素浓度,将野生型拟南芥种子灭菌后,点播在含0,20,30,40,50 mg/L潮霉素的1/2 MS培养基上进行培养(分别记为M_(0)、M_(1)、M_(2)、M_(3)、M_(4)),观察潮霉素对种子萌发、幼苗生长形态变化的影响,统计种子萌发率、第3天萌发势、第13天幼苗失绿死亡率,测定第7天幼苗鲜重、干重、相对含水率、主根长度,结合逆向思维的变异系数-熵权组合赋权的TOPSIS方法得出不同浓度潮霉素处理效果的综合排序。结果表明,潮霉素对拟南芥种子萌发和幼苗生长均有明显的抑制作用;变异系数-熵权组合赋权的TOPSIS方法得出不同处理对拟南芥种子萌发和幼苗生长抑制效果的排序为:M_(4)>M_(3)>M_(2)>M_(1)>M_(0),M_(2)的接近度为0.531 5,约为0.5,最接近抑制效果的50%;综合实验结果可知,拟南芥种子进行1/2 MS培养基筛选的适宜潮霉素浓度为30 mg/L,种子点播的第7~10天为幼苗移栽的适宜时期。 展开更多

关键词 潮霉素b 拟南芥 种子萌发 幼苗生长 TOPSIS方法

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表达荧光素酶报告基因稳定细胞系的建立及对CBLB502活性的检测

8

作者 汤立宣 王治东 +2 位作者 许望翔 葛常辉 杨晓明 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第4期310-313,共4页

目的建立表达NF-κB-RE-luc2P荧光素酶报告基因的稳定细胞系以检测CBLB502的活性。方法利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有NF-κB报告基因的质粒NF-κB-RE-luc2P转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),并通过潮霉素B进行克隆筛选,最后挑取... 目的建立表达NF-κB-RE-luc2P荧光素酶报告基因的稳定细胞系以检测CBLB502的活性。方法利用脂质体转染试剂Lipofectin2000将含有NF-κB报告基因的质粒NF-κB-RE-luc2P转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),并通过潮霉素B进行克隆筛选,最后挑取单克隆进行放大并应用荧光素酶检测方法进行鉴定。结果经200μg/ml的潮霉素B筛选,得到所需要的单克隆株,鉴定并保存。应用该潮霉素抗性单克隆细胞系对基于NF-κB信号通路的新型抗辐射蛋白药物CBLB502活性的检测显示出良好的量效关系。结论本实验通过Lipofectin2000转染法并在潮霉B筛选成功培育出稳定表达NF-κB报告基因活性的HEK293细胞系。 展开更多

关键词 荧光素酶类 NF-Κb 潮霉素b

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以潮霉素抗性为选择标记的毛壳霉原生质体转化 被引量：19

9

作者 陈振明 郭泽建 +1 位作者 林福呈 李德葆 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期19-22,共4页

利用 PEG方法 ,将含有潮霉素抗性标记的质粒 p CB10 0 3转化毛壳霉原生质体 ,并在高于毛壳霉敏感的潮霉素浓度下筛选转化子。转化率达 1～ 2个转化子 / μg质粒 DNA。以潮霉素抗性的毛壳霉转化子的基因组 DNA为模板进行 PCR扩增及其产物... 利用 PEG方法 ,将含有潮霉素抗性标记的质粒 p CB10 0 3转化毛壳霉原生质体 ,并在高于毛壳霉敏感的潮霉素浓度下筛选转化子。转化率达 1～ 2个转化子 / μg质粒 DNA。以潮霉素抗性的毛壳霉转化子的基因组 DNA为模板进行 PCR扩增及其产物的 Southern杂交。结果表明 ,潮霉素抗性基因已整合入毛壳霉染色体。稳定性试验表明 。 展开更多

关键词 毛壳霉 潮霉素抗体 原生质体转化 选择标记

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基因枪法遗传转化双孢蘑菇菌褶 被引量：6

10

作者 曹育博 刘天翔 +4 位作者 周巍巍 高玉千 戚元成 申进文 邱立友 《食用菌学报》 北大核心 2011年第3期9-11,共3页

以双孢蘑菇(Agaricus bisporus)2793为试材,采用基因枪法对其菌褶进行遗传转化,相对转化率为2.69%,转化子经PCR检测表明,外源潮霉素B抗性基因已经被转入到菌丝体中。

关键词 双孢蘑菇 基因枪 遗传转化 潮霉素b抗性

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不同抗生素对雪莲愈伤组织生长的影响 被引量：4

11

作者 唐亚萍 原慧 覃建兵 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期611-615,614-615,共5页

以雪莲叶片为外植体,探讨了卡那霉素(kanamycin,Kan)、潮霉素(hygromycin B,Hyg)、羧苄青霉素(car-benidillin,Car)3种抗生素对雪莲愈伤组织诱导、生长及分化的影响,以确定农杆菌介导的遗传转化研究中筛选剂和抑菌剂的最适浓度。结果表... 以雪莲叶片为外植体,探讨了卡那霉素(kanamycin,Kan)、潮霉素(hygromycin B,Hyg)、羧苄青霉素(car-benidillin,Car)3种抗生素对雪莲愈伤组织诱导、生长及分化的影响,以确定农杆菌介导的遗传转化研究中筛选剂和抑菌剂的最适浓度。结果表明:40mg/L的卡那霉素已抑制雪莲愈伤组织生长,当卡那霉素为50mg/L时,愈伤组织的生长基本停止;8.0mg/L潮霉素能够有效抑制雪莲愈伤组织的生长,当潮霉素为20mg/L时则生长的愈伤组织块较小、褐化、甚至死亡。同时,低浓度(0.5～2.0mg/L)的潮霉素可以提高雪莲愈伤组织的分化率;作为农杆菌抑菌剂,不同浓度羧苄青霉素对雪莲愈伤组织生长的影响差异极显著,当羧苄青霉素的浓度超过400mg/L时对雪莲愈伤组织的出愈及生长均有明显的抑制作用。 展开更多

关键词 雪莲 愈伤组织 卡那霉素 潮霉素 羧苄青霉素

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抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定 被引量：2

12

作者 杨丽琛 张素香 +2 位作者 皮国华 朱祯 杨晓光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期335-337,共3页

目的 :制备抗潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)的单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法 :用基因重组潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)抗原免疫BALB C小鼠 ,采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决... 目的 :制备抗潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)的单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法 :用基因重组潮霉素B磷酸转移酶 (HPT)抗原免疫BALB C小鼠 ,采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对 ,建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果 :筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定均为IgG1,ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明 4株单抗是针对不同的抗原决定簇 ,与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法 ,均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为 30ng ml,且与别的无关抗原无交叉反应性。结论 :4株杂交瘤细胞株特异性好 ,亲和力强 ,组成双抗夹心ELISA法可用于快速。 展开更多

关键词 HPT 单克隆抗体 鉴定

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以cosmid质粒为载体的稻瘟病菌转化体系的建立及病菌基因文库的构建 被引量：7

13

作者 鲁国东 黄大年 +2 位作者 陶全洲 杨炜 谢联辉 《中国水稻科学》 CSCD 北大核心 1995年第3期156-160,共5页

用潮霉素Ｂ（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ）抗性基因和λ噬菌体的ｃｏｓ位点组建了一种ｃｏｓｍｉｄ质粒ｐＳＶｈｙｇＢ，以此质粒建立了稻瘟病菌的转化体系，并且构建了病菌的基因组文库。结果表明，ｐＳＶｈｙｇＢ质粒可用于稳定地转化稻... 用潮霉素Ｂ（ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ）抗性基因和λ噬菌体的ｃｏｓ位点组建了一种ｃｏｓｍｉｄ质粒ｐＳＶｈｙｇＢ，以此质粒建立了稻瘟病菌的转化体系，并且构建了病菌的基因组文库。结果表明，ｐＳＶｈｙｇＢ质粒可用于稳定地转化稻瘟病菌，转化频率约为１５个转化子／μｇＤＮＡ，电击法转化并不能有效地提高稻瘟病菌的转化频率。构建的稻瘟病基因文库中包含将近１００００个重组子克隆，随机挑取１２个重组子的鉴定表明，都包含有外源插入片段，说明所建文库已达要求。 展开更多

关键词 基因组文库 稻瘟病菌 转化 水稻

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香菇对潮霉素的抗性实验 被引量：7

14

作者 胡乐琴 潘迎捷 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期14-16,共3页

选用4株不同品系的香菇菌种,比较了香菇在固体、液体2种不同培养条件下,对潮霉素抗性的差异;研究了香菇以原生质体、原生质体再生菌丝、冷藏菌种等3种不同生理状态为实验材料,对潮霉素的抗性特点。试验表明,香菇对潮霉素极为敏感,在固... 选用4株不同品系的香菇菌种,比较了香菇在固体、液体2种不同培养条件下,对潮霉素抗性的差异;研究了香菇以原生质体、原生质体再生菌丝、冷藏菌种等3种不同生理状态为实验材料,对潮霉素的抗性特点。试验表明,香菇对潮霉素极为敏感,在固定的条件下,抗性稳定;而当条件改变时,抗性有一定变化。 展开更多

关键词 香菇 潮霉素 原生质体 致死浓度 抗性实验

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羽衣甘蓝下胚轴农杆菌介导遗传转化体系的优化 被引量：5

15

作者 高航 高玉亮 李葵花 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期111-115,共5页

以红鸥羽衣甘蓝下胚轴为试材,首先优化了不定芽分化体系,其次探讨了农杆菌介导遗传转化过程中农杆菌侵染浓度、侵染时间对不定芽分化率的影响及不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力,最后对抗性植株进行了潮霉素B筛选基因的PCR检测。... 以红鸥羽衣甘蓝下胚轴为试材,首先优化了不定芽分化体系,其次探讨了农杆菌介导遗传转化过程中农杆菌侵染浓度、侵染时间对不定芽分化率的影响及不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力,最后对抗性植株进行了潮霉素B筛选基因的PCR检测。结果表明,在MS+6-BA 5.0 mg/L+Ag NO3 9.0 mg/L培养基中不定芽分化率最高,为84.17%;农杆菌侵染浓度OD600值为0.5、侵染5 min时利于遗传转化,分化率为69.17%;不定芽分化和生根过程中潮霉素B筛选压力分别为4.0 mg/L和30.0 mg/L;潮霉素B筛选基因的PCR鉴定结果,在预期的602 bp处出现了条带,初步证明潮霉素B筛选基因已整合到羽衣甘蓝基因组中。 展开更多

关键词 羽衣甘蓝 农杆菌侵染效率 潮霉素筛选压力浓度

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限制性内切酶介导的粉红粘帚霉67-1转化体系构建 被引量：2

16

作者 许梦秋 姜杰 +2 位作者 孙漫红 谢响明 李世东 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期263-269,共7页

本文将含有潮霉素抗性基因(hph)的质粒pAN7-1通过限制性内切酶介导法转入植病生防真菌粉红粘帚霉Clonostachys rosea 67-1中,并由此建立该生防真菌的遗传转化体系。研究结果表明,PEG介质含量、限制性内切酶种类和浓度、质粒形态和反应... 本文将含有潮霉素抗性基因(hph)的质粒pAN7-1通过限制性内切酶介导法转入植病生防真菌粉红粘帚霉Clonostachys rosea 67-1中,并由此建立该生防真菌的遗传转化体系。研究结果表明,PEG介质含量、限制性内切酶种类和浓度、质粒形态和反应时间对转化效率具有显著的影响。当质粒经线性化后加入40%PEG3350和20 U HindⅢ,室温下转化10 min时,转化效率可达到30～40 CFU.μg 1质粒DNA。PDA平板上连续培养3代,再转接到潮霉素抗性平板中,获得遗传稳定的转化子。PCR检测、Southern杂交和Real-time PCR检测等证明hph基因已整合到基因组中,且多为单拷贝插入。对随机挑取的50个转化子生长性状的测定结果表明,20%的转化子在PDA培养基中生长较快,12%的转化子产孢水平较高;另有16%～20%的转化子生长缓慢、产孢量减少;还有4%的转化子生长微弱,且无明显产孢现象。上述方法可以成功用于在粉红粘帚霉中引入外源基因,为今后生防粘帚霉高效工程菌株的构建提供了依据。 展开更多

关键词 粉红粘帚霉 原生质体转化 限制性内切酶介导整合 潮霉素抗性

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含绿色荧光蛋白标记的木霉表达载体的构建 被引量：2

17

作者 吕天晓 李世贵 +2 位作者 顾金刚 姜瑞波 牛永春 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期125-129,共5页

ACCC 30150是由本实验室筛选的一株对黄瓜枯萎病、青椒疫病等多种土传病害具有较好防治效果的长柄木霉生防菌,为研究其在蔬菜根际的定殖情况,本试验将含绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素B抗性的融合基因交换整合到真核表达骨架载体pNOM102上... ACCC 30150是由本实验室筛选的一株对黄瓜枯萎病、青椒疫病等多种土传病害具有较好防治效果的长柄木霉生防菌,为研究其在蔬菜根际的定殖情况,本试验将含绿色荧光蛋白(GFP)和潮霉素B抗性的融合基因交换整合到真核表达骨架载体pNOM102上。通过酶切鉴定和测序鉴定证明目的片段与载体片段连接正确,木霉表达载体pNOM102-HygEGFP构建成功,为下一步进行生防木霉根际定殖研究奠定基础。 展开更多

关键词 载体构建 绿色荧光蛋白 潮霉素b抗性 表达载体 木霉

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甘蔗遗传转化中不同阶段潮霉素抗性筛选 被引量：10

18

作者 姚丽 吴才文 曾千春 《中国糖料》 2010年第2期17-19,共3页

以新台糖22的胚性愈伤组织为材料,在诱导培养基、分化培养基及生根培养基中,分别添加不同浓度的潮霉素(Hyg)为选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化时的最佳筛选浓度。结果表明:潮霉素对不同阶段培养基的敏感性存在一定差异,在甘蔗遗传转化时... 以新台糖22的胚性愈伤组织为材料,在诱导培养基、分化培养基及生根培养基中,分别添加不同浓度的潮霉素(Hyg)为选择性试剂,以确定甘蔗遗传转化时的最佳筛选浓度。结果表明:潮霉素对不同阶段培养基的敏感性存在一定差异,在甘蔗遗传转化时3种培养基的抗性筛选浓度分别以50、30、30mg/L为佳;在分化培养基内的毒性作用比在诱导培养基内更快、效果更好,故遗传转化时可直接将Hyg用于分化培养基进行抗性芽筛选试验。 展开更多

关键词 甘蔗组织培养 潮霉素 抗性试验 遗传转化

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丝状真菌转化载体的改进 被引量：3

19

作者 李继刚 陈永利 +1 位作者 杨忠祥 郑建坡 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2013年第5期110-113,共4页

为了改进农杆菌介导丝状真菌遗传转化用的Ti双元载体,将质粒pUCATPH上真菌trpC基因启动子驱动的潮霉素B抗性基因(hygB)表达盒转移到Ti质粒pPZP111上,构建成用于丝状真菌遗传转化的Ti载体pATZ。将植物表达载体pDL916上的草丁膦抗性bar基... 为了改进农杆菌介导丝状真菌遗传转化用的Ti双元载体,将质粒pUCATPH上真菌trpC基因启动子驱动的潮霉素B抗性基因(hygB)表达盒转移到Ti质粒pPZP111上,构建成用于丝状真菌遗传转化的Ti载体pATZ。将植物表达载体pDL916上的草丁膦抗性bar基因重组到载体pKS-trpC上,构建成含真菌启动子、终止子调控的bar基因表达盒的中间载体pTrpCBar;之后将该表达盒转移到pPZP111载体上,得到以bar基因为筛选标记的真菌转化Ti质粒pTBZ。上述质粒载体经酶切鉴定和DNA测序证实构建正确,为丝状真菌的农杆菌介导遗传转化提供了新的工具。 展开更多

关键词 农杆菌介导转化 丝状真菌 转化载体 草丁膦抗性基因bar 潮霉素b抗性基因hygb 真菌启动子

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食用菌属间原生质体融合研究初报 被引量：7

20

作者 范雷法 潘慧娟 《中国食用菌》 2005年第5期21-22,27,共3页

本实验首先确定潮霉素浓度对香菇和平菇菌丝和原生质体再生的影响。其次进行了温度和时间对平菇原生质体灭活效果的研究。然后利用香菇和平菇再生原生质体对潮霉素抗潮霉素的差异,结合平菇原生质体灭活为融合子筛选依据,在融合剂诱导下... 本实验首先确定潮霉素浓度对香菇和平菇菌丝和原生质体再生的影响。其次进行了温度和时间对平菇原生质体灭活效果的研究。然后利用香菇和平菇再生原生质体对潮霉素抗潮霉素的差异,结合平菇原生质体灭活为融合子筛选依据,在融合剂诱导下获得4株融合子。 展开更多

关键词 香菇 平菇 原生质体融合 融合子 潮霉素

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