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c-myc调节人端粒酶逆转录酶(htert)启动子活性的体外研究 被引量:10
1
作者 林勇 谢渭芬 +4 位作者 陈伟忠 张新 张兴荣 张忠兵 沈建伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期34-36,共3页
目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有... 目的 :研究c myc对人端粒酶逆转录酶 (htert)启动子的调节作用。方法 :采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肝癌细胞HepG2 、猴肾COS 7细胞和NIH3T3细胞 ,孵育 48h后 ,分别检测其报告基因萤虫素酶活性。结果 :与对照相比 ,载有htert 80 0bp启动子的质粒TERTLuc(80 0 )在肿瘤细胞HepG2 中活性显著增强。外源性转录因子c myc可显著上调htert启动子的表达 ,其激活作用与剂量呈正相关。人工突变c myc结合位点明显降低htert启动子的活性。结论 :c myc可直接激活htert启动子的表达 ,是调节端粒酶活性的重要转录因子。 展开更多
关键词 C-MYC 人端粒酶逆转录酶 htert 启动子 基因调控 脂质体 肝癌细胞
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三氧化二砷对HL-60细胞凋亡及其端粒酶hTERT-mRNA表达影响的实验研究 被引量:43
2
作者 章尧 赵燕 陈昌杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期206-208,共3页
目的 探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法 不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60... 目的 探讨不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3)对急性早幼粒细胞白血病细胞株HL 60细胞端粒酶亚单位hTERT mRNA表达及其诱导凋亡的作用。方法 不同浓度的As2 O3与HL 60细胞株共培养 48h ,流式细胞术鉴定HL 60细胞凋亡 ;RT PCR法检测HL 60细胞端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达。结果 在 0 1、1 0和 5 0 μmol·L-13种浓度的As2 O3作用下 ,HL 60细胞凋亡率分别为 2 2 8%± 0 40 %、2 5 5 %± 0 2 2 %和 47 5 7%± 2 79% ;端粒酶亚单位hTERT mRNA表达的相对值分别为 73 97%、63 70 %和 2 9 0 4%。细胞凋亡率在 5 0 μmol·L-1与 0 1和 1 0μmol·L-1浓度组间差异有显著性 (P <0 0 1) ;端粒酶亚单位表达的差异也有显著性 (P <0 0 5 )。As2 O3诱导HL 60细胞凋亡效应与其抑制端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达相关。结论 As2 O3对HL 60细胞具有凋亡诱导效应 ,且对其端粒酶亚单位hTERTmRNA的表达具有抑制作用 ,两者均呈现浓度依赖效应。As2 O3可能通过抑制HL 展开更多
关键词 肿瘤细胞 细胞凋亡 端粒酶催化亚单位 细胞凋亡 HL-60细胞 三氧化二砷
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反义hTERT对胃癌细胞SGC7901 VEGF及其受体表达的影响 被引量:6
3
作者 司艺玲 韩为东 +3 位作者 赵亚力 宋海静 李琦 郝好杰 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1061-1063,共3页
目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测... 目的研究反义hTERT对胃癌细胞SGC7901VEGF及其受体表达的影响,探讨其对肿瘤发展和转移的影响。方法以端粒酶逆转录酶组分hTERTcDNA为模板构建反义hTERT逆转录病毒表达载体,包装重组逆转录病毒后感染胃癌SGC7901细胞,用半定量RTPCR检测基因转染前后VEGFC及其受体Flt4mRNA表达水平的变化,免疫组化法检测VEGFC、Flt4蛋白表达。结果反义hTERT稳定转染后SGC7901细胞VEGFC及其受体VEGFR3(Flt4)mRNA和蛋白表达均受到明显抑制。结论反义hTERT可有效抑制胃癌细胞VEGFC及其受体Flt4的表达,阻断肿瘤血管和淋巴途径转移。 展开更多
关键词 DNA 反义 人端粒酶逆转录酶 胃肿瘤 血管内皮生长因子类
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曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡 被引量:5
4
作者 周咏明 薛克营 +2 位作者 陈艳红 刘隽 黄士昂 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期171-174,共4页
目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-... 目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。 展开更多
关键词 曲古菌素A 细胞凋亡 端粒酶 端粒酶逆转录酶
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靶向hTERT基因表达载体的构建和其对人乳腺癌细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响 被引量:6
5
作者 刘祥厦 姚陈 +2 位作者 张辉 王三明 王深明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期2187-2190,共4页
目的构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒,转染乳腺癌MCF-7和M... 目的构建靶向端粒酶hTERT基因mRNA的shRNA质粒表达载体,转染人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,探讨其对细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法设计合成端粒酶hTERT基因特异性shRNA干扰序列,重组pSuper-retro-puro质粒,转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(转染组),设立正常培养乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(阴性对照组)和pSuper-retro-puro质粒转染的乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系(空白对照组),利用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法(TRAP-ELISA)检测细胞端粒酶活性,MTT实验及琼脂糖细胞集落形成实验检测细胞增殖能力等。结果成功构建pSuper-retro-puro-TERTRNAi#1、#2质粒并转染乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞系,转染后细胞端粒酶活性较转染前明显下调,差异有统计学意义(P<0.005);MTT法检测细胞增殖能力显示,MCF-7及MDA-MB231转染组细胞增殖活性较阴性对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂集落形成实验表明MCF-7和MDA-MB231转染组细胞克隆形成能力较阴性对照组显著下降,差异有统计学意义(P<0.001)。结论通过RNAi技术特异性干扰hTERT基因mRNA表达可显著下调细胞端粒酶活性,并可导致细胞增殖能力的减弱,以端粒酶为靶点的基因治疗可能是乳腺癌治疗的一种有效方法。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒酶 htert RNA干扰 基因治疗
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hTERT基因转染激活人毛乳头细胞端粒酶的实验研究 被引量:3
6
作者 刘官智 伍津津 +2 位作者 朱堂友 鲁元刚 杨桂红 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期69-71,共3页
目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳... 目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶。方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养。应用反转录(RT)-PCR法检测hTERTmRNA的表达,端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测细胞端粒酶活性。结果:未转染DPC和空载体转染细胞(DPC-EGFP)无hTERTmRNA表达,端粒酶活性为阴性;而外源性hTERT基因转染细胞(DPC-hTERT)稳定表达hTERTmRNA,同时端粒酶活性转为阳性。结论:外源性hTERT基因转染能够激活体外培养人DPC的端粒酶,为建立永生化细胞系奠定基础。 展开更多
关键词 毛乳头细胞 基因 htert 端粒酶 人端粒酶反转录酶
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维甲酸诱导HL-60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT,c-myc和bcl-2表达的研究 被引量:6
7
作者 吴立德 陈元仲 +1 位作者 李乃农 吴勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期395-399,共5页
为了探讨全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL 60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达的变化规律及其意义 ,复制HL 60细胞的诱导分化模型 ,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR ELISA方法测定端粒酶活性 ,采用RT PC... 为了探讨全反式维甲酸 (ATRA)诱导HL 60细胞分化过程中端粒酶活性与hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达的变化规律及其意义 ,复制HL 60细胞的诱导分化模型 ,在分化前和分化过程中通过端粒重复序列扩增PCR ELISA方法测定端粒酶活性 ,采用RT PCR方法检测hTERT ,c myc和bcl 2mRNA表达水平。结果显示 ,在ATRA诱导HL 60细胞分化过程中 ,端粒酶活性水平逐渐下降 ,hTERTmRNA表达下调的同时c myc和bcl 2mRNA表达亦下调 ,且hTERTmRNA下调早于端粒酶活性水平下降。结论 :全反式维甲酸诱导的HL 60细胞分化过程与端粒酶活性降低和hTERT ,c myc及bcl 展开更多
关键词 HL—60细胞 维甲酸 端粒酶 人端粒酶逆转录酶 c—myc bcl—2 细胞分化 htert 酶活性 表达水平 白血病 药物治疗
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hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景 被引量:4
8
作者 张敏 陈小云 +3 位作者 王磊 王栋 蒋桃珍 王静文 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第2期58-62,共5页
人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作... 人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作一综述。 展开更多
关键词 永生化 端粒 端粒酶 人端粒酶逆转录酶基因(htert)
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hTERT核心启动子调控的hNIS重组腺病毒的构建与鉴定 被引量:3
9
作者 张俊 王爱东 +4 位作者 申咏梅 石怡珍 崔学军 刘增礼 欧阳松应 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期549-553,共5页
目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶... 目的:构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠碘转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并初步鉴定。方法:将hTERT核心启动子从hTERT/pcDNA3.1(+)质粒中切出,亚克隆至含全长hNIS cDNA序列的质粒载体FL*-hNIS/pcDNA3,应用限制性内切酶将hTERT-hNIS片段切出后连入穿梭质粒载体pAdTrack,应用AdEasy系统构建出重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS。同时,构建CMV启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV-hNIS作为阳性对照。应用RT-PCR方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性。结果:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS并经PCR验证正确。RT-PCR证实hNIScDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来。结论:成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS;hTERT核心启动子在转染的肺癌A549细胞中具有转录活性。为下一步的碘治疗实验提供了实验依据。 展开更多
关键词 钠碘转运体(hNIS) 端粒酶逆转录酶(htert) 重组腺病毒 核心启动子
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RNA干扰hTERT基因治疗喉鳞状细胞癌的实验研究 被引量:7
10
作者 刘丹 陶泽璋 +1 位作者 陈始明 肖伯奎 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2005年第20期1182-1186,共5页
目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达hTERTmRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤... 目的:探讨RNA干扰hTERT(人端粒酶逆转录酶)基因对人喉鳞状细胞癌的治疗作用。方法:根据hTERTcDNA序列构建表达hTERTmRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1、pshRNA2。将shRNA质粒分别转染人喉癌Hep-2细胞株及荷瘤裸鼠瘤体内。以激光共聚焦显微镜观察质粒在Hep-2细胞及瘤体内的表达;以MTT法观察质粒对Hep-2细胞增殖的抑制作用;以蛋白印迹法(Westernblot法)检测Hep-2细胞中hTERT蛋白的表达;以免疫组化SP法检测裸鼠瘤体内hTERT蛋白的表达。结果:pshRNA1、pshRNA2转染Hep-2细胞及pshRNA1转染瘤体后,共聚焦显微镜下见大量的癌细胞表达绿色荧光,hTERT蛋白表达明显下降。细胞受pshRNA1、pshRNA2转染后,其生长活性受到明显抑制。体内抑瘤实验表明,与空质粒载体组(pshRNA4)和生理盐水组相比,pshRNA1组移植瘤生长明显受到抑制。结论:表达shRNA的、hTERT基因特异的真核表达质粒能有效转染体内、外喉鳞癌细胞,并可有效抑制人喉鳞癌细胞的生长,为今后应用RNA干扰基因治疗喉癌提供重要的实验参考。 展开更多
关键词 htert RNAI 头颈部肿瘤 鳞状细胞 基因治疗
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正、反义hTERT基因真核表达载体的构建与鉴定 被引量:6
11
作者 孙来保 李成荣 +1 位作者 文剑明 张萌 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第9期899-902,共4页
目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,... 目的构建正、反义hTERT基因真核表达载体,为进一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗作准备。方法根据已发表在Genebank的hTERT cDNA序列,设计并合成了1对两端带特定限制性酶切位点引物,提取子宫颈癌HeLa细胞株总RNA,进行RT-PCR,并将扩增产物TA首先克隆至pGEMR-T载体,然后双酶切pGEM-T载体回收目的片段再克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(±)中,并对重组体进行酶切鉴定和测序分析。结果PCR扩增片段与预期结果相符,双酶切证实构建的正、反义hTERT基因真核表达载体克隆成功,插入片段测序结果与Genebank的hTERT cDNA的部分序列完全一致。结论成功地构建了正、反义hTERT基因真核表达载体,为下一步研究端粒酶的活性调节与恶性肿瘤基因治疗打下了实验基础。 展开更多
关键词 恶性肿瘤 htert基因 真核表达载体 构建 鉴定 基因治疗
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PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中的表达及意义 被引量:8
12
作者 吴国英 朱玲 +1 位作者 冯振卿 彭韬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第3期256-258,共3页
目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11... 目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11例中p53蛋白、PCNA和hTERTmRNA的表达。结果:PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中均有表达的异常。结论:hTERT、PCNA和p53与口腔黏膜癌前病变癌变的发生发展有关,它们的异常表达有助于口腔黏膜癌前病变和鳞癌的早期诊断,为研究癌前病变癌变的发生提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 癌前病变 鳞癌 端粒酶逆转录酶 增殖细胞核抗原 P53
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胃癌细胞株hTERT基因启动子区甲基化分析 被引量:3
13
作者 程永波 房殿春 +1 位作者 杨海捷 罗元辉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期187-189,共3页
目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692~-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲... 目的检测人端粒酶反转录酶(hTERT)基因启动子区甲基化状态。方法采用TRAP法检测细胞端粒酶活性,免疫荧光法观察hTERT表达;选择hTERT启动子中-692~-403bp共290bp为靶序列,采取亚硫酸氢钠修饰和测序法(BSP)检测2种胃癌细胞株中靶序列甲基化状态并作分析。结果端粒酶和hTERT在SGC-7901和BGC-823胃癌细胞株中都有表达;PCR扩增产物测序测出-634~-403bp共232bp,经比对与亚硫酸氢钠转化前源序列对应良好,此序列段26个CpG胞嘧啶中,BGC-823细胞株有25个发生甲基化,SGC-7901细胞株全部发生甲基化,经检索此序列段含2个MZF-2结合域即2个锌指基序,但仅可结合MZF-2一个转录调节因子。结论高甲基化改变了DNA的空间结构可能是hTERT启动子高甲基化上调hTERT表达的原因之一,从而阻断了MZF-2与锌指基序的结合。 展开更多
关键词 人端粒酶反转录酶 甲基化 MZF-2
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hTERT基因转染显著延长人骨髓间充质干细胞增殖能力的实验研究 被引量:2
14
作者 石东文 代飞 +5 位作者 池君 陈希炜 贺伟峰 胡晓红 罗高兴 吴军 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第16期1562-1565,共4页
目的构建含有端粒酶逆转录酶(human telom erase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒,感染人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),观察外源性hTERT基因在hMSCs中的表达及其对hMSCs端粒酶活性和细胞增殖能... 目的构建含有端粒酶逆转录酶(human telom erase reverse transcriptase,hTERT)基因的逆转录病毒,感染人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),观察外源性hTERT基因在hMSCs中的表达及其对hMSCs端粒酶活性和细胞增殖能力的影响。方法构建pLXSN-hTERT质粒,BamHⅠ酶切和测序鉴定,转染PT67包装细胞,G418抗性筛选获得产病毒阳性细胞克隆。用产病毒细胞珠和hMSCs共培养的方法转染hMSCs,G418抗性筛选。以未转染hM-SCs作为对照,用TRAPEZE方法检测hTERT基因转染hMSCs的端粒酶活性,用流式细胞仪检测细胞周期,并观察转染hMSCs的生长情况。结果成功构建了hTERT基因重组pLXSN-hTERT质粒,建立了产病毒pLXSN-hTER-PT67细胞株。获得了hTERT-hMSCs细胞群,与未转染的hMSCs相比,hTERT-hMSCs细胞群端粒酶活性明显增强,hTERT蛋白阳性表达细胞百分率提高,细胞的生命周期显著延长,细胞传代至46代,形态无明显改变,生长良好。结论逆转录病毒载体介导的hTERT基因转染可增强hMSCs的端粒酶活性,提高hMSCs的增殖能力。 展开更多
关键词 htert 逆转录病毒 端粒酶 人骨髓间充质干细胞
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hTERT和PCNA在良恶性胸腹水细胞中的表达及临床意义 被引量:3
15
作者 吴丽颖 刘邦荣 +3 位作者 陆军 凌明德 陈洁 李朋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期154-156,共3页
目的探讨端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)在良恶性胸、腹水中的表达及临床意义。方法应用免疫细胞化学S-P法分析46例恶性胸、腹水患者、21例良性胸... 目的探讨端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)和增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)在良恶性胸、腹水中的表达及临床意义。方法应用免疫细胞化学S-P法分析46例恶性胸、腹水患者、21例良性胸、腹水患者的胸、腹水脱落细胞hTERT和PCNA的表达状况。结果hTERT和PCNA在46例恶性胸、腹水中的阳性表达率分别为84.8%和63.0%,良恶性胸、腹水中反应性间皮细胞均未见hTERT和PCNA表达。hTERT和PCNA表达呈明显正相关(r=0.30,P<0.05)。hTERT和PCNA联合检测较二者单独检测敏感性提高至89·1%。结论hTERT的表达对于良恶性胸、腹水的鉴别诊断具有一定的辅助意义,hTERT联合PCNA检测较单独检测及细胞学检测敏感性进一步提高。 展开更多
关键词 端粒酶逆转录酶 增殖细胞核抗原 胸腹水
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hTERT mRNA与p16蛋白在非小细胞肺癌中的表达 被引量:2
16
作者 冼磊 周华富 +3 位作者 张兴华 薛邦德 郭建极 冯旭 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第9期1005-1008,共4页
背景与目的端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16参与多种肿瘤的发生发展。本研究旨在探讨端粒酶逆转录酶和p16在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和免疫组化SP法检测117例非小细胞肺癌组织及癌旁组织,21例肺良性... 背景与目的端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16参与多种肿瘤的发生发展。本研究旨在探讨端粒酶逆转录酶和p16在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和免疫组化SP法检测117例非小细胞肺癌组织及癌旁组织,21例肺良性疾病组织中端粒酶逆转录酶和p16的表达情况。结果hTERT mRNA在非小细胞肺癌组织的表达量为2.937±0.836,明显高于正常肺组织2.042±0.378(t=-5.242,P<0.01);肺良性疾病中p16蛋白表达率为85.7%,高于癌组织中的47.9%,差异有统计学意义(P=0.004)。hTERT mRNA表达与非小细胞肺癌病理类型具有统计学意义(P<0.05),p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、淋巴结转移及细胞分化程度具有统计学意义(P<0.05)。hTERT mRNA与p16蛋白表达存在相关性(P<0.05)。结论hTERT mRNA表达对非小细胞肺癌诊断具有潜在临床价值,端粒酶逆转录酶和p16蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 实时荧光定量RT-PCR法 端粒酶逆转录酶 P16蛋白
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含hTERT片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞功能的影响 被引量:2
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作者 胡贵方 孙莉莎 +3 位作者 金宏 欧程山 蒋毅萍 庞建新 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期394-397,共4页
目的观察含人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞(DCs)功能的影响。方法 ELISA试剂盒检测DCs培养液中IL-12水平;混合白细胞(MLR)反应检测含hTERT片段的重组逆转录病毒感染的 DCs(hTERT-DCs)和未感染的DCs(N-DCs... 目的观察含人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的重组逆转录病毒感染对树突状细胞(DCs)功能的影响。方法 ELISA试剂盒检测DCs培养液中IL-12水平;混合白细胞(MLR)反应检测含hTERT片段的重组逆转录病毒感染的 DCs(hTERT-DCs)和未感染的DCs(N-DCs)刺激同种异体淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测DCs表面分子CD80、 CD83、CD86和HLA-DR的变化;CytoTox 96非放射性细胞毒性检测试剂盒检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。结果 hTERT-DCs和N-DCs在分泌IL-12的水平、刺激同种异体淋巴细胞增殖的能力方面无明显差异;hTERT-DCs的 CD83表达水平低于N-DCs,同时,hTERT-DCs激发的CTL对端粒酶阳性的靶细胞杀伤率明显高于端粒酶阴性的靶细胞(P<0.05)。结论 hTERT-DCs尽管有可能阻止DCs自身的成熟,但在活化淋巴细胞、刺激淋巴细胞分化增殖的能力方面并没发生明显改变,并且还能激发hTERT特异性CTL。 展开更多
关键词 htert 逆转录病毒 树突状细胞 免疫治疗
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人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因腺病毒载体的构建及包装 被引量:3
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作者 任充华 张婷婷 +3 位作者 杨涵江 王昕 陈知龙 张智英 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2012年第7期39-43,50,共6页
【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经... 【目的】构建能够表达人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的腺病毒。【方法】通过对PCI-neo-hTERT质粒的改造,依次构建出JMB293-hTERT、pAdTrack-hTERT载体,将pAdTrack-hTERT经PmeⅠ线性化后与pAdEasy-1载体共转化到BJ5183细菌中进行重组,经卡那霉素抗性筛选获得重组腺病毒载体pAdEasy-hTERT。将pAdEasy-hTERT PacⅠ酶切线性化并回收后,转染HEK293人胚肾细胞,培养7d后,收集细胞并反复冻融,收集细胞裂解液;反复扩增3次后,测定重组hTERT腺病毒的滴度。【结果】①利用酶切连接的方法得到了穿梭载体pAdTrack-hTERT;②通过同源重组将外源目的基因hTERT整合到腺病毒骨架载体中,得到重组质粒pAdEasy-hTERT;③成功获得了滴度为6.73×1010 GFU/mL的高滴度腺病毒颗粒。【结论】含有hTERT基因的重组腺病毒颗粒包装成功,为后续哺乳动物原代细胞永生化研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶(htert)基因 重组腺病毒 细胞永生化
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靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)RNAi载体的构建及活性评价 被引量:6
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作者 夏云 林汝仙 +2 位作者 郑素军 张敏丽 王升启 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1079-1084,共6页
RNA干涉是由与特定基因同源互补的双链RNA ,在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解 ,从而导致转录后基因沉默的过程 .为研究内源性的siRNA对靶基因的抑制效果 ,用pPUR/U6载体构建用于细胞内转录靶向hTERT基因的短发夹状siRNA表达... RNA干涉是由与特定基因同源互补的双链RNA ,在体内以序列特异的方式引发靶基因的mRNA降解 ,从而导致转录后基因沉默的过程 .为研究内源性的siRNA对靶基因的抑制效果 ,用pPUR/U6载体构建用于细胞内转录靶向hTERT基因的短发夹状siRNA表达质粒 ,并评价其对hTERT基因的抑制效果 .将hTERTcDNA 35 6 5~ 35 83一段 19bp的DNA序列及其反向重复序列 ,用 9bp的连接序列连接后再接上 5个T碱基 ,将此段DNA序列克隆至pPUR/U6载体U6启动子的下游 ,形成能在体内合成hTERT特异性短发夹状RNA的重组质粒载体pPUR/U6 /hTERT .将pPUR/U6 /hTERT与对照质粒pPUR/U6分别转染HepG2细胞 .采用嘌呤霉素筛选和富集转染具有抗性的细胞 .收集存活的细胞接种 12孔板、提取RNA和蛋白质 .以细胞计数法测定细胞的生长速度 ,RT PCR和蛋白质印迹分析hTERT基因的表达 ,端粒重复放大测定法检测端粒酶活性 ,蛋白质印迹检测p5 3蛋白水平 .与转染对照质粒pPUR/U6的细胞相比 ,转染pPUR/U6 /hTERT的细胞其hTERT基因表达水平显著下降 ,端粒酶活性降低 ,细胞生长速度变慢 ,p5 3蛋白表达明显升高 .以上结果表明 ,以DNA质粒为载体产生的内源性短发夹状siRNA能高效抑制hTERT基因的表达 。 展开更多
关键词 RNA干扰 端粒酶逆转录酶 p53
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地高辛标记的寡核苷酸探针两步原位杂交检测胸液细胞hTERT mRNA 被引量:4
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作者 束军 孙耕耘 +1 位作者 刘爱平 刘兢 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2004年第7期771-774,共4页
目的 建立原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的实验方法,初步评价该法识别胸液中肿瘤细胞的效果。方法 取23例胸腔积液病例标本,以地高辛标记的寡核苷酸探针对胸液细胞hTERT mRNA行两步原位杂交,再通过抗原-抗体-酶... 目的 建立原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的实验方法,初步评价该法识别胸液中肿瘤细胞的效果。方法 取23例胸腔积液病例标本,以地高辛标记的寡核苷酸探针对胸液细胞hTERT mRNA行两步原位杂交,再通过抗原-抗体-酶-显色途径,测出hTERT mRNA信号。实验研究设严格的阴性、阳性对照,且与临床诊疗各自独立进行。结果 本法对9例恶性胸腔积液病例检测的结果均为阳性,即无论细胞形态是否异常,镜下均可见到有细胞质深染及部分细胞核少许点状着色的细胞。此9例中,7例经胸液细胞形态学检查亦示阳性者,可同时观察到形态明显异常的肿瘤细胞,其余2例经反复胸液细胞形态学检查阴性,但胸膜活检确诊为恶性胸腔积液者,虽未见到形态明显异常细胞,但镜下可发现胞质深染、部分细胞核少许着色的细胞。14例良性胸腔积液病例的检测结果均为阴性。结论 原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA可望作为一种临床细胞病理学的新方法,用以鉴别胸腔积液的良、恶性,同时判定肿瘤细胞的类型。 展开更多
关键词 原位杂交 人端粒酶逆转录酶 胸腔积液/诊断 细胞病理学
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