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EXPRESSION OF A TELOMERASE-ASSOCIATED GENE IN NORMAL, ATROPHIC ,AND TUMOROUS TESTES 被引量:2
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作者 Fang Mei Bo Zhang Zhi-wei Tang Lin Hou 《Chinese Medical Sciences Journal》 CAS CSCD 2005年第3期217-220,共4页
Objective To evaluate the expression of telomerase transcriptional elements-interacting factor (TEIF) in human testis under different status and its relation with human telomerase reverse transcriptase (hTERT) exp... Objective To evaluate the expression of telomerase transcriptional elements-interacting factor (TEIF) in human testis under different status and its relation with human telomerase reverse transcriptase (hTERT) expression. Methods Specific antisera against TEIF were generated by immunization of rabbits with purified recombinated partial TEIF. Samples were assigned to three groups according to their pathological types, including 16 normal testes, 8 atrophic testes, and 6 testicular seminomas. They were subjected to immunohistochemical staining of TEIF and hTERT. Results from both TEIF and hTERT were analyzed semi-quantitatively and compared. The expressions of TEIF and hTERT were detected in all samples of normal, atrophic testes, and seminomas. No differences of TEIF expressions among these three groups were observed (P 〉 0.05). On the contrary, the expressions of hTERT were significantly lower in atrophic testes compared with those of normal testes and seminomas (both P 〈 0.05). Nevertheless, co-expressions of TEIF with hTERT were revealed to be in normal and malignant cases (P 〈 0.05) but not in atrophic testes, which generally presented TEIF expression. The cellular distributions of both proteins were similar and mainly in spermatocytes and some Sertoli cells, while were all negative in the interstitial cells and other stromal cells. Conclusion The uniform expressions of TEIF in all these specimens suggest that it may be a marker of testis and its related diseases. The strong expression of hTERT in normal testes and testicular seminomas comparing with the low expression in atrophic testes may suggest a role for telomerase in maintaining proliferation of germ cells. 展开更多
关键词 telomerase transcriptional elements-interacting factor human telomerase reverse transcriptase IMMUNOHISTOCHEMISTRY TESTIS
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hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景 被引量:4
2
作者 张敏 陈小云 +3 位作者 王磊 王栋 蒋桃珍 王静文 《中国兽药杂志》 北大核心 2015年第2期58-62,共5页
人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作... 人端粒酶逆转录酶基因(hTERT)诱导的永生化细胞兼具原代细胞的生物学特性和传代细胞系连续传代的能力,是一种理想的细胞来源,在基础研究、临床应用和生物工程领域具有无可比拟的优势。本文主要就hTERT永生化细胞的研究进展及应用前景作一综述。 展开更多
关键词 永生化 端粒 端粒酶 人端粒酶逆转录酶基因(htert)
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PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中的表达及意义 被引量:8
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作者 吴国英 朱玲 +1 位作者 冯振卿 彭韬 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第3期256-258,共3页
目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11... 目的:探讨PCNA、p53蛋白和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌组织中的表达及临床意义。方法:采用原位杂交和免疫组化技术检测口腔黏膜单纯增生(HP)9例,轻度异常增生(LD)11例,中度异常增生(MD)10例,重度异常增生(原位癌CIS)9例,鳞癌(SCC)11例中p53蛋白、PCNA和hTERTmRNA的表达。结果:PCNA、p53和hTERT在口腔黏膜癌前病变和鳞癌中均有表达的异常。结论:hTERT、PCNA和p53与口腔黏膜癌前病变癌变的发生发展有关,它们的异常表达有助于口腔黏膜癌前病变和鳞癌的早期诊断,为研究癌前病变癌变的发生提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 癌前病变 鳞癌 端粒酶逆转录酶 增殖细胞核抗原 P53
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CK20 mRNA和hTERT mRNA在大肠癌围手术期血行微转移中的转录特征 被引量:2
4
作者 王谦 孙启龙 +3 位作者 王传新 张建业 王洪春 杨晓静 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期409-412,共4页
目的探讨细胞角蛋白20(CK20)mRNA和人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA作为大肠癌围手术期血行微转移标志物的价值。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例大肠癌患者术前、术中及术后外周血CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,并对不同分化... 目的探讨细胞角蛋白20(CK20)mRNA和人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA作为大肠癌围手术期血行微转移标志物的价值。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测40例大肠癌患者术前、术中及术后外周血CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,并对不同分化程度、不同Dukes分期的大肠癌患者CK20mRNA和hTERTmRNA的表达进行比较。结果40例大肠癌患者外周血CK20mRNA和hTERTmRNA的表达率,术前分别为47.5%(19/40)和45.0%(18/40),术中为70.0%(28/40)和70.0%(28/40),术后为10.0%(4/40)和32.5%(13/40)。除术后hTERTmRNA阳性率与术前无显著差异(P>0.05)外,术中外周血CK20mRNA、hTERTmRNA阳性率和表达强度(与内参照β-actin比值)均显著高于术前(P<0.01,P<0.05),术后明显低于术前和术中(P<0.01)。hTERTmRNA在低分化肿瘤的表达明显高于高、中分化组(P<0.05),而CK20mRNA在低分化肿瘤的表达强度低于高、中分化组(P<0.01)。大肠癌围手术期DukesB期和C+D期之间CK20mRNA和hTERTmRNA均无显著性差异(P>0.05)。结论大肠癌患者围手术期血行微转移的发生几率较高,病理分化程度低者更易发生,但与Dukes分期无明显相关,CK20mRNA和hTERTmRNA联合检测对大肠癌血液微转移具有较高的敏感性和特异性,是判断围手术期血行微转移的良好标志物。 展开更多
关键词 细胞角蛋白20mRNA 人端粒酶催化亚单位mRNA 逆转录聚舍酶链反应 大肠癌 围手术期 血行微转移
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人端粒酶催化亚单位(hTERT)反义分子探针的制备与理化性质初步研究 被引量:1
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作者 王荣福 刘萌 +1 位作者 张春丽 闫平 《核化学与放射化学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期35-40,共6页
制备放射性核素99Tcm标记的针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA的反义分子探针,探讨其在体外的稳定性和相关理化性质。针对hTERT mRNA(GEN-BANK号为AF015950)的第2331~2348位核苷酸(含18个碱基)... 制备放射性核素99Tcm标记的针对人端粒酶催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA的反义分子探针,探讨其在体外的稳定性和相关理化性质。针对hTERT mRNA(GEN-BANK号为AF015950)的第2331~2348位核苷酸(含18个碱基),即5′-TCAAGAGCCACGTCTCTA-3′(hTERT SON),设计反义寡核苷酸序列(hTERT ASON)为5′-TAGAGACGTGGCTCTTGA-3′;对hTERTASON进行适当修饰。通过双功能螯合剂S-Acetyl NHS-MAG3进行放射性核素99Tcm标记。针对影响标记的主要因素(SnCl2用量、反应体积、反应时间等)进行条件摸索,建立最优化标记方案。纸层析法测定反义分子探针(99Tcm-hTERT ASON)的标记率和放射化学纯度,计算比活度。检测99Tcm-hTERT ASON的放射稳定性与序列稳定性,以及血清蛋白结合率。所有结果通过统计学软件SPSS12.0进行分析。室温下反应15~30 min后,99Tcm-hTERT ASON的标记率为76%±5%(n=5);在相同条件下,无双功能螯合剂作用,ASON的标记率仅为5.0%±1.6%(n=5);二者比较有显著差异(P<0.05)。99Tcm-hTERT ASON放射化学纯度达到96%以上,比活度为1 850 GBq/g。在不同条件下,99Tcm-hTERT ASON的放射化学纯度在24 h内均达到93%以上。PAGE凝胶电泳显示99Tcm-hTERT ASON在与人新鲜血清37℃孵育6 h内未发生任何降解。与人新鲜血清37℃孵育1、3和6 h后,99Tcm-hTERT ASON的血清蛋白结合率分别为15.0%±1.6%、18.0%±1.9%和20.0%±2.4%。99Tcm-hTERT ASON具有较高标记率、放射化学纯度和比活度;其放射稳定性和序列稳定性均良好,与血清蛋白结合率较低,适合作为反义显像剂用于进一步研究。 展开更多
关键词 人端粒酶催化亚单位(htert) S-Acetyl NHS-MAG3 99Tcm 分子探针 反义显像
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含hTERT启动子、PE38KDEL片段质粒构建及其对人胰腺癌细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 李宝玉 孙晋津 陈剑秋 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第34期4-6,共3页
目的构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并观察其对人胰腺癌MiaPaCa2细胞凋亡的影响。方法采用PCR法构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并用双酶切法鉴定;将MiaPaCa2细胞分为5组,A组为空白对照组,仅加入含10%... 目的构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并观察其对人胰腺癌MiaPaCa2细胞凋亡的影响。方法采用PCR法构建含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,并用双酶切法鉴定;将MiaPaCa2细胞分为5组,A组为空白对照组,仅加入含10%FBS的DMEM;B、C、D、E组分别转染pIRES2-EGFP、phTERT-IRES2-EGFP、pPE38KDEL-IRES2-EGFP、phTERTp-PE38KEDL-IRES2-EGFP,采用TUNEL法检测MiaPaCa2细胞的凋亡指数。结果重组质粒的PCR产物及酶切后片段的测序结果与GeneBank报道序列一致。A组转染24、48 h时MiaPaCa2细胞凋亡率分别为17.12%±1.66%、24.86%±2.80%,B组分别为18.14%±1.61%、26.47%±2.71%,C组为19.08%±3.84%、27.42%±7.26%,D组为29.46%±2.86%、38.12%±3.19%,E组为72.16%±4.79%、86.40%±7.71%。B^E组与A组比较,P均<0.05;E组与D组比较,P<0.05。结论成功构建了含hTERT启动子和PE38KDEL片段的重组表达质粒,该质粒可促进人胰腺癌MiaPaCa2细胞的凋亡。 展开更多
关键词 胰腺癌 人端粒酶反转录酶 启动子 铜绿假单胞菌外毒素 绿色荧光蛋白 基因疗法
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siRNA抑制hTERT对脑胶质瘤T98G细胞增殖及周期的影响
7
作者 王拓 王举波 +2 位作者 李超 董丹凤 王茂德 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期555-559,共5页
目的研究人端粒酶逆转录酶被抑制后胶质瘤细胞系体外增殖及周期的变化,以期寻找控制胶质瘤细胞恶性行为的有效途径。方法人工合成小干扰RNA(siRNA)序列,并将其通过lip2000转入体外培养的T98G胶质瘤细胞系中,荧光显微镜观察转染效率,免... 目的研究人端粒酶逆转录酶被抑制后胶质瘤细胞系体外增殖及周期的变化,以期寻找控制胶质瘤细胞恶性行为的有效途径。方法人工合成小干扰RNA(siRNA)序列,并将其通过lip2000转入体外培养的T98G胶质瘤细胞系中,荧光显微镜观察转染效率,免疫印记检测蛋白表达情况,MTT法检测细胞体外增殖表现,绘制生长曲线图,流式细胞仪检测细胞周期的变化。结果成功转染siRNA,并有效抑制人端粒酶逆转录酶的活性,免疫印记验证干扰效果可靠,体外可抑制胶质瘤细胞的增殖,与对照组比较其抑制效率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论体外条件下,可以通过siRNA有效抑制人端粒酶逆转录酶,从而有效抑制胶质瘤细胞的体外增殖,使胶质瘤细胞周期发生变化。这可能为胶质瘤的治疗带来新的启示。 展开更多
关键词 胶质瘤 小干扰RNA 转染 人端粒酶逆转录酶 细胞增殖 细胞周期
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hTERT与血清CA125联合检测对子宫内膜癌诊断和评估预后的价值 被引量:1
8
作者 梁静 陈铭 《中国医学工程》 2012年第5期12-13,16,共3页
目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)与血清CA125联合检测对子宫内膜癌诊断和预后评估的价值。方法采用免疫组化SP法分别检测试验组的46例子宫内膜癌术后标本和选作对照的同期内膜标本,包括20例不典型增生(EIN)、40例单纯及复杂增生和20例正... 目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)与血清CA125联合检测对子宫内膜癌诊断和预后评估的价值。方法采用免疫组化SP法分别检测试验组的46例子宫内膜癌术后标本和选作对照的同期内膜标本,包括20例不典型增生(EIN)、40例单纯及复杂增生和20例正常子宫内膜hTERT的表达,并采用放射免疫法检测患者术前血清CA125水平。结果 (1)hTERT在内膜癌组中的表达高于正常子宫内膜组、单纯及复杂增生组和EIN组(P<0.05),hTERT对诊断子宫内膜癌的敏感度为76.1%,特异度为80.2%,准确度为71.4%;上述四组中血清CA125在内膜癌组中的阳性表达明显高于对照各组(P<0.05),血清CA125诊断子宫内膜癌的敏感度为56.5%,特异度为77.6%,准确度为74.6%;(2)病灶组织hTERT和血清CA125水平的阳性表达与子宫内膜癌患者的手术病理分期(FIGO分期,2009)及组织学分级有关联(P<0.05);(3)病灶组织hTERT和血清CA125联合检测诊断子宫内膜癌的敏感度为80.6%,特异度为88.6%,准确度为81.4%,较hTERT和CA125单项检测敏感度、特异度和准确度均增高(P<0.05)。结论病灶组织hTERT联合血清CA125对子宫内膜癌具有较好的诊断价值,同时对评估预后有重要作用。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 子宫内膜增生 CA125抗原 端粒酶逆转录酶 预后
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hTERT转染永生化新生大鼠耳蜗基底膜细胞的研究
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作者 许映龙 刘晖 +1 位作者 王军利 许珉 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期685-688,共4页
目的通过基因转染法获得新生大鼠耳蜗基底膜细胞永生化细胞系。方法通过脂质体法将pCI-neo-hTERT质粒转染原代培养的新生大鼠耳蜗基底膜细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞系,并行转染细胞RT-PCR、端粒酶活性、细胞周期、细胞凋亡等检测... 目的通过基因转染法获得新生大鼠耳蜗基底膜细胞永生化细胞系。方法通过脂质体法将pCI-neo-hTERT质粒转染原代培养的新生大鼠耳蜗基底膜细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞系,并行转染细胞RT-PCR、端粒酶活性、细胞周期、细胞凋亡等检测。结果转染72h后RT-PCR检测到人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因阳性表达,转染细胞通过G418筛选传代后,可检测到端粒酶活性,流式细胞术检测提示转染细胞增殖活力增强不明显,但细胞凋亡明显减少。结论通过脂质体转染hTERT基因,可使新生大鼠耳蜗基底膜细胞凋亡减少,传代能力增强,给耳蜗细胞实验提供足够的细胞来源。 展开更多
关键词 耳蜗基底膜 细胞 人端粒酶逆转录酶 大鼠
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hTERT基因转染人表皮干细胞的可行性研究
10
作者 王联群 刘德伍 +2 位作者 蓝蔚 林尊文 黄培信 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第22期15-17,共3页
目的观察外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染体外培养的人表皮干细胞的可行性。方法采用脂质体转染法,将质粒pIRES2-EGFP-hTERT转入体外培养的人表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与培养。应用RT-PCR法和Western blot法... 目的观察外源性人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因转染体外培养的人表皮干细胞的可行性。方法采用脂质体转染法,将质粒pIRES2-EGFP-hTERT转入体外培养的人表皮干细胞,并用G418筛选法进行抗性克隆的筛选与培养。应用RT-PCR法和Western blot法检测hTERT mRNA及其蛋白的表达。结果转染组hTERT mRNA及其蛋白的表达强于非转染组。结论外源性hTERT基因转染体外培养的人表皮干细胞具有可行性。 展开更多
关键词 表皮干细胞 端粒酶逆转录酶 体外
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腺病毒介导的HSV-tk/GCV系统在hTERT启动子调控下治疗人膀胱癌的实验研究
11
作者 王亚轩 蔡文清 +3 位作者 黎玮 杨书文 李景东 齐进春 《山东医药》 CAS 北大核心 2011年第20期26-28,I0001,共4页
目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因/丙氧鸟苷(GCV)系统在体外及荷瘤裸鼠体内对人膀胱癌的治疗作用。方法利用hTERT启动子及小鼠巨细胞病毒(CMV)启动子调控的携带HSV-tk基因的重... 目的观察人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的腺病毒介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因/丙氧鸟苷(GCV)系统在体外及荷瘤裸鼠体内对人膀胱癌的治疗作用。方法利用hTERT启动子及小鼠巨细胞病毒(CMV)启动子调控的携带HSV-tk基因的重组腺病毒(Ad-hTERT-HSV/tk与Ad-CMV-HSV/tk)分别感染人膀胱癌细胞253 J和人正常肺成纤维细胞MRC-5,加入GCV,MTT法观察受染细胞的存活率。建立人膀胱癌裸鼠移植瘤模型,随机分为4组,A组(Ad-hTERT-HSV/tk+GCV组)、B组(Ad-hTERT-HSV/tk+PBS组)、C组(PBS+GCV组)和D组(PBS对照组),观察各组肿瘤生长状况、重要脏器病理变化及裸鼠存活情况。结果体外实验表明,应用GCV处理后,Ad-CMV-HSV/tk对253 J和MRC-5细胞均有杀伤作用,而Ad-hTERT-HSV/tk只对膀胱癌细胞253 J具有杀伤作用。动物实验显示,A组移植瘤的体积和瘤重低于其他3组(P<0.01)。A组裸鼠平均存活期长于其他3组(P<0.01)。结论 hTERT启动子调控的重组腺病毒介导HSV-tk/GCV系统是一种安全、有效且靶向性高的基因疗法。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 基因治疗 人端粒酶逆转录酶启动子 单纯疱疹病毒胸苷激酶基因
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非小细胞肺癌hTERT与p16基因甲基化的表达
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作者 冼磊 周华富 +1 位作者 张兴华 薛邦德 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第52期12-13,19,共3页
目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病中的作用。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和甲基化特异性PCR法检测45例NSCLC组织、21例肺正常组织hTERT和p16基因甲基化的表达。结果NSCLC、正常肺组织hTERTmRN... 目的探讨端粒酶逆转录酶(hTERT)和p16基因甲基化在非小细胞肺癌(NSCLC)发病中的作用。方法应用实时荧光定量RT-PCR法和甲基化特异性PCR法检测45例NSCLC组织、21例肺正常组织hTERT和p16基因甲基化的表达。结果NSCLC、正常肺组织hTERTmRNA的表达分别为2.854±0.728、2.042±0.378,组间比较差异有统计学意义(P<0.01);NSCLC组织、肺正常组织p16基因甲基化阳性率分别为57.8%、14.3%(P<0.01)。hTERTmRNA与NSCLC病理类型相关,p16基因甲基化与NSCLC细胞分化程度及淋巴结转移相关(P均<0.05)。结论hTERT与p16基因甲基化存在相关性,hTERT和p16基因甲基化的表达与NSCLC的发生、发展有关。 展开更多
关键词 非小细胞肺 端粒酶逆转录酶 基因 p16 甲基化
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口腔颌面部肉瘤中hTERTmRNA和hTERT蛋白的表达
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作者 王海斌 刘慧 +4 位作者 李新明 刘进 李峰 王瑞永 赵军方 《河南医学研究》 CAS 2006年第4期316-319,共4页
目的:探讨hTERTmRNA及hTERT蛋白在口腔颌面部肉瘤组织中表达的生物学意义。方法:应用原位杂交和免疫组化技术检测37例口腔颌面部肉瘤和14例良性间叶组织肿瘤中hTERTmRNA和hTERT蛋白的表达,探讨口腔肉瘤组织中hTERT表达的生物学意义。结... 目的:探讨hTERTmRNA及hTERT蛋白在口腔颌面部肉瘤组织中表达的生物学意义。方法:应用原位杂交和免疫组化技术检测37例口腔颌面部肉瘤和14例良性间叶组织肿瘤中hTERTmRNA和hTERT蛋白的表达,探讨口腔肉瘤组织中hTERT表达的生物学意义。结果:肉瘤中hTERTmRNA的阳性表达率明显高于良性肿瘤(62.2%/14.3%,P<0.05)。在低度、中度和高度恶性肉瘤组织中,hTERTmRNA阳性表达率分别为41.67%、50.00%和86.67%,统计分析显示低度恶性与高度恶性组间差异有统计学意义(P<0.05)。复发肉瘤中hTERTmRNA的阳性表达率明显高于原发肉瘤(P<0.05)。在发生淋巴结转移或远处转移的肉瘤中hTERTmRNA表达有升高趋势(P>0.05);口腔肉瘤中hTERT蛋白的阳性表达率明显高于良性肿瘤(P<0.05),并随肉瘤分化程度的降低而呈升高趋势,其中低度恶性肉瘤与高度恶性肉瘤比较差异显著(P<0.05)。hTERT蛋白表达与肉瘤复发密切相关(P<0.05),发生淋巴结转移或远处转移的肉瘤中hTERT蛋白表达明显升高(P>0.05)。结论:hTERT基因在口腔颌面部肉瘤发生与发展过程中可能起重要作用。 展开更多
关键词 肉瘤 端粒酶逆转录酶 原位杂交 免疫组化
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HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定
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作者 黄桂填 肖焕擎 +3 位作者 曾山崎 徐波 蔡文松 李书华 《广州医学院学报》 2011年第2期102-105,111,共5页
目的:构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法:根据GenBank中的HTERT启动子(HTERTp)序列设计引物,以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板,PCR扩增HTERTp,并将HTERT... 目的:构建靶向结肠癌细胞的人端粒酶逆转录酶HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方法:根据GenBank中的HTERT启动子(HTERTp)序列设计引物,以人胚肾293细胞提取基因组DNA为模板,PCR扩增HTERTp,并将HTERTp序列克隆入pDC312质粒中,构建成HTERTp调控的腺病毒质粒pSG—HTERTp;NK4 cDNA酶切并回收克隆至pSG—HTERTp载体中,构建成pSG—HTERTp/pA—NK4穿梭质粒,脂质体法在293细胞中包装重组腺病毒;噬斑分析法筛选单克隆重组腺病毒;RT-PCR检测NK4基因的转录;Western Blot检测NK4蛋白的表达。结果:成功构建出成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,滴度为4.5×10^9空斑形成单位(pfu)/mL,且PCR扩增及western bolt电泳均呈阳性表达。结论:成功构建出HTERT启动子调控的NK4基因重组腺病毒,为进一步研究NK4基因的作用机制打下实验基础。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶启动 NK4基因 腺病毒
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肝细胞癌患者血浆hTERT DNA的检测及其临床意义 被引量:2
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作者 杨英俊 黄平 +4 位作者 李程华 董子鹤 李凤增 涂植光 陈辉 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期260-262,共3页
目的检测肝细胞癌(HCC)患者血浆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)DNA水平并分析其临床意义。方法收集60例HCC患者术前血浆标本,21例HBV感染者及29例健康体检者血浆标本,提取血浆DNA,实时荧光定量PCR检... 目的检测肝细胞癌(HCC)患者血浆人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)DNA水平并分析其临床意义。方法收集60例HCC患者术前血浆标本,21例HBV感染者及29例健康体检者血浆标本,提取血浆DNA,实时荧光定量PCR检测各组血浆hTERT DNA水平,分析3组间差异及与HCC患者临床特征之间的关系。结果 HCC患者血浆hTERT DNA水平明显高于HBV感染者和健康体检者,差异有统计学意义(P<0.01)。HCC患者血浆hTERT DNA水平与肿瘤大小呈正相关(r=0.382,P<0.01);与TNM分期和门静脉癌栓密切相关(P<0.05),与淋巴结转移、HBV感染及血清AFP水平不相关(P>0.05)。TNMⅠ~Ⅱ期及血清AFP≤20 ng/mL的HCC患者血浆hTERT DNA水平高于HBV感染者及体检健康者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血浆hTERT DNA检测对于HCC的早期筛查及病情监测有一定参考价值,值得进一步研究。 展开更多
关键词 肝细胞癌 血浆 人端粒酶逆转录酶DNA 循环DNA
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人脑胶质瘤中CXCR4、hTERT的表达及意义
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作者 刘毅 王雷 +1 位作者 付向阳 王东林 《山东医药》 CAS 北大核心 2008年第12期15-16,共2页
目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)和端粒酶逆转录酶(hTERT)在胶质瘤恶性转变中表达的变化及意义。方法用免疫组织化学、原位杂交技术检测60例胶质瘤手术切除患者标本中CXCR4、hTERT的表达,6例正常脑组织作对照。结果60例胶质瘤中有35例表达... 目的探讨趋化因子受体4(CXCR4)和端粒酶逆转录酶(hTERT)在胶质瘤恶性转变中表达的变化及意义。方法用免疫组织化学、原位杂交技术检测60例胶质瘤手术切除患者标本中CXCR4、hTERT的表达,6例正常脑组织作对照。结果60例胶质瘤中有35例表达CXCR4(58.3%),36(60.0%)例表达hTERT,随着胶质瘤级别的升高,CXCR4、hTERT表达增强(P<0.05)。正常脑组织均不表达CXCR4、hTERT。CXCR4与hTERT表达呈正相关(r=0.6358,P<0.05)。结论CXCR4、hTERT的表达与胶质瘤的分级有关,联合检测CXCR4、hTERT有助于胶质瘤恶性程度的判断。 展开更多
关键词 胶质瘤 趋化因子受体4 端粒酶逆转录酶
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MACC1和hTERT蛋白在胆管癌中的表达及其意义
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作者 廖小春 曹友德 +2 位作者 邓中华 乐杨桦 周玉杰 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2016年第9期698-702,共5页
目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)和人端粒酶逆转录酶(h TERT)蛋白在胆管癌中的表达及其意义。方法收集60例胆管癌、30例胆道良性病变患者术前血清和术后病理组织标本及30例体检健康者血清标本,分别采用免疫组化染色技术和ELISA法检... 目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)和人端粒酶逆转录酶(h TERT)蛋白在胆管癌中的表达及其意义。方法收集60例胆管癌、30例胆道良性病变患者术前血清和术后病理组织标本及30例体检健康者血清标本,分别采用免疫组化染色技术和ELISA法检测组织及血清中MACC1和h TERT蛋白的表达水平,并结合临床病理资料进行统计分析。结果 MACC1和h TERT蛋白在胆管癌患者组织和血清中的表达显著高于胆道良性病变组(P<0.01)。在胆管癌中,临床分期晚、伴有淋巴转移的癌组织中MACC1、h TERT蛋白表达较高(P<0.05)。胆管癌中MACC1蛋白与h TERT蛋白表达的一致性分析均具有良好的相关性(r=0.699,P<0.01)。血清中MACC1和h TERT单独和联合检测的ROC曲线下面积(AUCROC)分别为0.896、0.909、0.916,两者联合检测的敏感性最高(91.7%),MACC1单独检测的特异性最高(90.0%)。结论 MACC1和h TERT可以较好地鉴别胆道恶性肿瘤与良性病变。 展开更多
关键词 结肠癌转移相关基因1 人端粒酶逆转录酶 胆管癌
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miR-138在胃黏膜癌变过程中的表达及意义 被引量:4
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作者 李学成 王宗华 +5 位作者 梁光萍 刘志鹏 王军 邹利全 熊晓峰 陈陵 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期520-522,共3页
目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白和hTERT调控相关miR-138在正常胃黏膜(NM)、肠上皮化生(IM)、异型增生(DYS)、早期胃癌(EGC)和进展期胃癌(AGC)中的表达及其意义。方法选取经病理证实的胃黏膜病变组织96例,用免疫组化SP染色法检测hT... 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)蛋白和hTERT调控相关miR-138在正常胃黏膜(NM)、肠上皮化生(IM)、异型增生(DYS)、早期胃癌(EGC)和进展期胃癌(AGC)中的表达及其意义。方法选取经病理证实的胃黏膜病变组织96例,用免疫组化SP染色法检测hTERT表达水平,real-time PCR检测miR-138表达丰度。结果在NM、IM、DYS、EGC和AGC 5组标本中,hTERT阳性表达率逐渐升高,分别为0.0%、26.1%、33.3%、75.0%和77.4%;miR-138表达水平呈逐步下降趋势,分别为2.93±1.24、2.12±0.98、1.90±0.58、1.27±0.89和1.68±1.02;低表达miR-138组织的百分率在低、未分化组中显著高于高、中分化组(83.3%vs 36.5%,P<0.01),而与性别、年龄、有无淋巴结转移及TNM分期等无关。结论 miR-138表达丰度的下降,是胃黏膜癌变过程中的早期事件;miR-138有望成为新的胃癌早期诊断指标及治疗靶标。 展开更多
关键词 微小RNA miR-138 人端粒酶逆转录酶 胃癌
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应用端粒酶逆转录酶基因使猪血管内皮细胞永生化的初步研究 被引量:4
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作者 苏正元 张彦明 +1 位作者 洪海霞 刘建玲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期407-411,共5页
为寻求使猪主动脉血管内皮细胞增殖寿命延长的方法,本试验将含有人类端粒酶催化亚基端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过脂质体介导法导入猪主动脉血管内皮细胞(Porcine ... 为寻求使猪主动脉血管内皮细胞增殖寿命延长的方法,本试验将含有人类端粒酶催化亚基端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因的真核表达质粒pCI-neo-hTERT通过脂质体介导法导入猪主动脉血管内皮细胞(Porcine arterial endothelial cell,PAEC)。对转染后的血管内皮细胞进行Ⅷ因子和CD34鉴定,利用PCR-ELISA方法检测hTERT导入后细胞端粒酶活性的表达情况,探讨了转染后细胞的生长特性。结果显示,转染后的细胞Ⅷ因子和CD34均呈阳性,证明转染后细胞仍表达血管内皮细胞的特异性蛋白;导入hTERT后,细胞有较高的端粒酶活性,增殖寿命较对照细胞延长了20代。表明hTERT导入细胞能重建细胞端粒酶活性,从而延长细胞在体外培养的寿命。 展开更多
关键词 猪血管内皮细胞 人端粒酶逆转录酶 脂质体 转染
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人参皂甙单体Rh_2对人脑胶质瘤细胞U251增殖和凋亡的影响及其机制探讨 被引量:3
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作者 张继全 邱建武 +1 位作者 关宁 张晓健 《山东医药》 CAS 北大核心 2010年第22期16-18,共3页
目的观察人参皂甙单体Rh2(GS-Rh2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法用GS-Rh2处理人脑胶质瘤U251细胞,采用MTT法检测U251细胞增殖抑制率,流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双染法观察U251细胞凋亡情况,TRAP-ELISA... 目的观察人参皂甙单体Rh2(GS-Rh2)对人脑胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法用GS-Rh2处理人脑胶质瘤U251细胞,采用MTT法检测U251细胞增殖抑制率,流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双染法观察U251细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测U251细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测U251细胞人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达。结果 5、10、20、40、80μg/ml GS-Rh2组U251细胞增殖抑制率分别为20.42%、32.19%、45.09%、57.37%、73.82%。根据细胞增殖抑制曲线计算出IC30、IC50、IC70值分别为9.7、25.2、68.4μg/ml。FITC和PI荧光双参数点图显示实验组细胞分布区域与对照组相比出现明显改变,随着药物浓度的增加,早期凋亡、晚期凋亡或坏死的区域细胞数量逐渐增多。9.7、25.2、68.4μg/ml GS-Rh2处理12、24、48、72 h后U251细胞端粒酶活性随GS-Rh2浓度增加和作用时间的延长而降低。浓度为25.2μg/ml GS-Rh2作用24、48、72 h的U251细胞hTERTmRNA与β-actin灰度值比为0.964 9±0.004 2、0.401 8±0.001 4、0.297 8±0.001 8,对照组为0.976 4±0.005 1。作用48、72 h U251细胞hTERT mRNA与β-actin灰度值比与对照组相比P均<0.05;作用48、72 h者相比P<0.05。结论 GS-Rh2能够诱导人脑胶质瘤U25l细胞凋亡,抑制U25l细胞增殖。其机制与其抑制hTERT基因表达,降低端粒酶活性有关。 展开更多
关键词 人参皂甙单体Rh2 胶质瘤 细胞增殖 细胞凋亡 端粒酶 人端粒酶逆转录酶
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