高纤维强力棉花种质系苏远7235 BAC文库的构建 被引量：10

1

作者 王省芬 马骏 +2 位作者 马峙英 张桂寅 郑拥民 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2006年第4期200-203,共4页

苏远7235是我国利用异常棉等多个野生种创造的高纤维强力棉花种质系,是开展棉花纤维品质研究的重要材料。本研究以pIndigoBAC-5(HindIII-cloning ready)为载体,构建了苏远7235的细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文... 苏远7235是我国利用异常棉等多个野生种创造的高纤维强力棉花种质系,是开展棉花纤维品质研究的重要材料。本研究以pIndigoBAC-5(HindIII-cloning ready)为载体,构建了苏远7235的细菌人工染色体(Bacterial Artificial Chromosome,BAC)文库,该文库包含30336个BAC克隆。分析结果表明,重组克隆苏远7235 DNA插入片段为50-140 kb,平均120 kb,空载率2.1%,89.6%的克隆插入片段大于100 kb。 展开更多

关键词 棉花 纤维品质 细菌人工染色体文库

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稻属不同染色体组着丝粒BAC克隆的分离和鉴定 被引量：6

2

作者 裔传灯 龚志云 +3 位作者 梁国华 王飞华 汤述翥 顾铭洪 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期851-858,共8页

着丝粒在真核生物有丝分裂和减数分裂染色体正常的分离和传递中起着重要的作用。通过构建5个稻属二倍体野生种的基因组BAC文库,采用菌落杂交和FISH技术,筛选和鉴定了各染色体组着丝粒克隆,并且分析了这些克隆在不同基因组间的共杂交情况... 着丝粒在真核生物有丝分裂和减数分裂染色体正常的分离和传递中起着重要的作用。通过构建5个稻属二倍体野生种的基因组BAC文库,采用菌落杂交和FISH技术,筛选和鉴定了各染色体组着丝粒克隆,并且分析了这些克隆在不同基因组间的共杂交情况,结果表明:(1)C染色体组的野生种O.officinalis和F染色体组的野生种O.brachyantha具有各自着丝粒特异的卫星DNA序列,并且O.brachyantha着丝粒还具有特异的逆转座子序列;(2)A、B和E染色体组的野生稻O.glaberrima、O.punctata和O.australiensis着丝粒区域都含有与栽培稻着丝粒重复序列CentO和CRR同源的序列;(3)C染色体组野生稻O.officinalis的2条体细胞染色体着丝粒具有CentO的同源序列,同时也发现其所有着丝粒区域都包含栽培稻CRR的同源序列。这些结果对克隆稻属不同染色体组的着丝粒序列、研究不同染色体组间着丝粒的进化关系和稻属不同着丝粒DNA序列与功能之间的关系均具有重要意义。 展开更多

关键词 野生稻 着丝粒 细菌人工染色体 荧光原位杂交

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红莲型水稻不育系和保持系线粒体基因组BAC文库的构建 被引量：5

3

作者 易平 汪莉 +1 位作者 万翠香 朱英国 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期756-759,共4页

以红莲型 (HL )细胞质雄性不育系和保持系为材料 ,构建了水稻线粒体基因组的 BAC文库。每个文库保存约2 30 0个菌落 ,外源插入片段介于 9～ 2 5 kb之间。以线粒体基因为探针对文库进行菌落原位杂交验证 ,均筛选到了阳性克隆。构建的两... 以红莲型 (HL )细胞质雄性不育系和保持系为材料 ,构建了水稻线粒体基因组的 BAC文库。每个文库保存约2 30 0个菌落 ,外源插入片段介于 9～ 2 5 kb之间。以线粒体基因为探针对文库进行菌落原位杂交验证 ,均筛选到了阳性克隆。构建的两个文库为进一步研究水稻线粒体基因组的结构特点 。 展开更多

关键词 水稻 保持系 细胞质雄性不育 线粒体基因组 bac文库 红莲型不育系

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棉花细菌人工染色体的荧光原位杂交(BAC-FISH)技术 被引量：5

4

作者 王凯 张燕洁 +2 位作者 关兵 郭旺珍 张天真 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1216-1222,共7页

细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组... 细菌人工染色体荧光原位杂交(BAC-FISH)技术是植物染色体识别、物理作图等分子细胞遗传学研究的重要工具,但对于某些物种尤其是多倍体植物,由于大量重复序列的存在等问题,使得该技术应用受到很大的限制.通过选择棉花分子遗传图中高重组区的微卫星位点(simple sequence repeats,SSR)标记的策略,筛选到不含或含有少量重复序列的细菌人工染色体(BAC)克隆,同时,在通用FISH技术程序基础上,通过改进发根、变性、洗脱条件等步骤,构建出适合于棉花的BAC-FISH技术,简化了操作流程的同时,获得稳定的杂交结果及较高的检出率;并通过将一随机获得的BAC进行染色体的物理定位,进一步引入双探针、双色及重复杂交技术,显示了该技术的成熟与良好的应用前景和价值. 展开更多

关键词 棉花 细菌人工染色体 荧光原位杂交

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稻瘟病菌细菌人工染色体(BAC)基因组文库的构建 被引量：3

5

作者 周晓罡 朱立煌 +3 位作者 翟文学 李进斌 罗朝喜 李成云 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期331-334,共4页

稻瘟病菌是一种重要的植物病原菌 ,同时又是研究植物和病原物之间相互关系的一个重要试验系统。实验通过采用 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株经提取纯化得到该稻瘟病菌的细胞核基因组总DNA ,用限制性内切酶部分酶解后 ,与经末端去磷酸化处理过... 稻瘟病菌是一种重要的植物病原菌 ,同时又是研究植物和病原物之间相互关系的一个重要试验系统。实验通过采用 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株经提取纯化得到该稻瘟病菌的细胞核基因组总DNA ,用限制性内切酶部分酶解后 ,与经末端去磷酸化处理过的pCUGIBAC1质粒载体按一定摩尔比例相互连接 ,通过转化E .coliDH10B感受态细胞进而通过蓝白斑筛选挑取白色克隆从而构建了 95 - 2 3- 4a稻瘟病菌株的细菌人工染色体 (BAC)基因组文库。通过进行酶切检测及Southern杂交分析后确定所构建的BAC文库平均插入片段 2 9.1kb ,该文库覆盖 7.4倍基因组 。 展开更多

关键词 稻瘟病菌 细菌 人工染色体 bac 基因组文库

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高产优质抗病棉花品种中棉所12号细菌人工染色体(BAC)文库构建 被引量：3

6

作者 郑拥民 王省芬 +2 位作者 张桂寅 李喜焕 马峙英 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期17-20,共4页

中棉所12号是我国自育的高产、优质、抗枯萎病、耐黄萎病棉花品种,其重要创新是使抗性和产量、品质得到结合改良和提高。本研究以plndigoBAC-5为载体,对中棉所12号进行了细菌人工染色体(BAC)文库构建。初步建立的文库含有38800个克隆,覆... 中棉所12号是我国自育的高产、优质、抗枯萎病、耐黄萎病棉花品种,其重要创新是使抗性和产量、品质得到结合改良和提高。本研究以plndigoBAC-5为载体,对中棉所12号进行了细菌人工染色体(BAC)文库构建。初步建立的文库含有38800个克隆,覆盖2倍基因组。对文库中132个重组克隆的分析表明:插入片段为50～150kb,平均大小为120kb;大于100kb的克隆占87 7%,大于110kb的克隆占56%;空载率小于1%。该文库的构建为深入开展棉花基因组有关研究奠定了基础。 展开更多

关键词 棉花 中棉所12号 细菌人工染色体 文库构建

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陆地棉雄性不育恢复系18R的BAC文库构建 被引量：2

7

作者 周焘 郭红媛 +3 位作者 张锐 梁成真 石雅丽 郭三堆 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期252-254,共3页

18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插... 18R雄性不育恢复系农艺性状优良,恢复性状稳定,对不育系能够100%恢复,是研究棉花三系互作的重要材料。本研究以pCC1BAC(BamHI)为载体,构建了18R的细菌人工染色体(BAC)文库。建立的文库包含139,200个BAC克隆。分析结果表明,BAC文库DNA插入片段为50～200 kb,91%的克隆插入片段为80～150 kb,平均102 kb,空载率<2%,覆盖6.3倍基因组。 展开更多

关键词 棉花 18R 雄性不育恢复系 细菌人工染色体文库

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东乡野生稻双元细菌人工染色体(BIBAC)文库的构建 被引量：4

8

作者 成志伟 曹筑荣 +1 位作者 陈良碧 曹孟良 《生物技术通报》 CAS CSCD 2006年第C00期272-275,282,共5页

双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成... 双元细菌人工染色体(binarybacterialartificialchromosome,BIBAC)是能直接将大片段DNA转入植物的载体,是植物基因图位克隆和构建植物基因嵌入突变体库的重要工具。该研究以东乡野生稻为材料,构建其BIBAC文库。该文库由14592个克隆组成,平均插入片段大小为65kb,覆盖率为2倍基因组。稳定性检测结果表明,东乡野生稻基因组DNA能够在BIBAC载体中稳定存在。 展开更多

关键词 东乡野生稻 双元细菌人工染色体文库 基因组 DNA

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中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区349I12 BAC克隆插入片段基因组成与结构分析 被引量：1

9

作者 白大章 李桂芳 +5 位作者 董慧芹 邱巍 杨小亮 陈芳 马润林 高剑峰 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期6-11,共6页

利用已测序的中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段阳性克隆插入片段制备探针,筛选中国美利奴绵羊(新疆军垦型)混合组织cDNA文库,以期获得该MHC片段的基因组成与结构信息。用中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区域内的349I12 BAC克隆... 利用已测序的中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段阳性克隆插入片段制备探针,筛选中国美利奴绵羊(新疆军垦型)混合组织cDNA文库,以期获得该MHC片段的基因组成与结构信息。用中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区域内的349I12 BAC克隆,BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,以噬菌斑原位杂交筛选正常中国美利奴绵羊cDNA文库,并将分离所得的cDNA阳性克隆测序后进行基因结构分析。以349I12 BAC克隆制备探针经过两轮的噬菌斑原位杂交筛选,获得19个cDNA阳性克隆,经测序、比对等进一步分析确定获得17条不同序列,其中7条序列与免疫相关。绵羊20号染色体上的MHC区段包含表达序列,且多为断裂基因,对其基因结构的分析将有助于相应基因功能及调控方面的研究。 展开更多

关键词 细菌人工染色体(bac) CDNA表达文库 放射性探针 噬菌斑原位杂交

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一种用高拷贝质粒载体制备BAC载体基本功能基因的新方法 被引量：1

10

作者 崔红玉 王亚萍 +5 位作者 徐明举 薛永志 石星明 兰德松 王云峰 童光志 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第23期9890-9892,9950,共4页

[目的]简便有效地解决BAC载体序列因单一拷贝数带来的制备以及下游亚克隆操作的困难。[方法]选择适当的单一酶切位点,将单拷贝BAC载体质粒序列全部插入高拷贝质粒pUC119载体的适当位点。[结果]BAC载体基本功能基因序列在新质粒pUC119-BA... [目的]简便有效地解决BAC载体序列因单一拷贝数带来的制备以及下游亚克隆操作的困难。[方法]选择适当的单一酶切位点,将单拷贝BAC载体质粒序列全部插入高拷贝质粒pUC119载体的适当位点。[结果]BAC载体基本功能基因序列在新质粒pUC119-BAC中失去了单一拷贝数控制功能,以高拷贝形式进行复制,利用单一酶切,可将BAC载体基本功能基因序列完整切下来,自连后重新恢复严格的单拷贝控制功能。[结论]利用高拷贝pUC119-BAC质粒,实现了BAC载体的基本功能基因序列高拷贝的复制和扩增,可以方便地用于分子克隆化重组病毒转移载体的构建或BAC文库的构建。 展开更多

关键词 细菌人工染色体(bac) 高拷贝质粒 bac载体 单拷贝质粒

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绒山羊细菌人工染色体BAC文库构建条件的优化 被引量：1

11

作者 刘志红 李宁 +6 位作者 任立明 胡晓湘 郭英 崔文涛 尹俊 张文广 李金泉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期55-58,共4页

近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的... 近年来,细菌人工染色体BAC文库成为应用最广泛的基因组文库之一,它以其容量大、遗传特性稳定、嵌合体少、插入片段易回收、操作简便等不可比拟的优点而被广泛应用于基因组较大的真核生物基因组研究之中。作者就细菌人工染色体BAC文库的构建条件进行了研究,用HindⅢ部分酶切绒山羊基因组,脉冲场凝胶电泳分离大片段DNA,以电洗脱法回收DNA后,与BAC载体连接,将连接产物点透析后,电转化DH10B感受态细胞,最后对转化的片段小提质粒进行NotⅠ酶切,脉冲电泳鉴定其大小。结果表明,本试验采用的方法既可获得较大的插入片段又可获得较高的转化效率,是较好的用于构建大基因组文库的方法。 展开更多

关键词 细菌人工染色体 文库 构建条件

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中国美利奴绵羊MHC 222G18 BAC克隆的基因筛选与结构分析

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作者 邱巍 董慧芹 +3 位作者 白大章 陈芳 马润林 高剑峰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期127-131,共5页

绵羊主要组织相容性复合体(MHC)是与控制绵羊抗病性和易感性紧密连锁的基因簇。为了深入了解该类基因的组成与结构,利用中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段克隆222G18,经BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,通过噬菌斑原位杂... 绵羊主要组织相容性复合体(MHC)是与控制绵羊抗病性和易感性紧密连锁的基因簇。为了深入了解该类基因的组成与结构,利用中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段克隆222G18,经BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,通过噬菌斑原位杂交技术筛选中国美利奴绵羊cDNA文库,经过两轮杂交筛选,获得12个cDNA阳性克隆,经测序、比对等生物信息学分析确定获得7条与免疫相关的序列,其中3条具有完整的编码序列。利用SIM4软件将7条序列定位到BAC克隆上,结果显示绵羊MHC区段的表达序列多为断裂基因且跨度很大,可能是形成其基因多样性的重要原因之一。 展开更多

关键词 主要组织相容性复合体 细菌人工染色体 CDNA文库 免疫 筛选

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细菌人工染色体(BAC)文库在畜禽遗传资源保存中的应用

13

作者 何丽 刘丑生 韩旭 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第10期188-192,共5页

作者介绍了国际畜禽遗传资源保存的研究现状与趋势,分析了细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的发展和应用状况,阐述了BAC文库应用于畜禽遗传资源保存的特有优势,提出了建立BAC文库将成为畜禽遗传资源保存的一种... 作者介绍了国际畜禽遗传资源保存的研究现状与趋势,分析了细菌人工染色体(bacterial artificial chromosome,BAC)文库的发展和应用状况,阐述了BAC文库应用于畜禽遗传资源保存的特有优势,提出了建立BAC文库将成为畜禽遗传资源保存的一种重要补充形式,有利于提升畜禽遗传资源保存的安全性和长久性,也为今后进一步研究畜禽品种的特定性状提供了无可替代的材料,对实现全方位保存畜禽遗传资源具有重要的实用价值和推动作用。 展开更多

关键词 细菌人工染色体(bac)文库 畜禽遗传资源保存 应用

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一种改进的用高拷贝质粒制备BAC载体的新方法 被引量：2

14

作者 邓代永 杨继良 +3 位作者 宣劲松 张明哲 翁曼丽 王斌 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第7期29-33,共5页

介绍了一种改进的使用高拷贝质粒制备BAC载体的简便有效的方法 ,我们同时使用从高拷贝质粒 pCUGIBAC1制备的和用传统方法从单拷贝质粒 pIndigoBAC 5制备的两种载体 ,比较了这两种载体与玉米大片段DNA连接所构建的BAC文库。结果表明在使... 介绍了一种改进的使用高拷贝质粒制备BAC载体的简便有效的方法 ,我们同时使用从高拷贝质粒 pCUGIBAC1制备的和用传统方法从单拷贝质粒 pIndigoBAC 5制备的两种载体 ,比较了这两种载体与玉米大片段DNA连接所构建的BAC文库。结果表明在使用这两种BAC载体构建的BAC文库中 ,所获得的转化体数目 ,及在BAC克隆中插入的DNA片段的大小和BAC克隆的稳定性等方面都相同 ,从而证明本文所介绍的从高拷贝质粒 pCUGIBAC1来制备BAC载体是一种更方便的方法 。 展开更多

关键词 高拷贝质粒 细菌人工染色体 载体 制备方法 DNA 转化体 克隆稳定性 bac文库

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阿维链霉菌BAC文库的构建及分析 被引量：5

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作者 刘家栋 王革娇 罗美中 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期45-50,共6页

为进一步阐明阿维菌素的生物合成路径和调控途径,提高阿维菌素的产量,采用BamHⅠ限制性内切酶酶解阿维链霉菌基因组DNA的方法,构建了阿维链霉菌的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含2 304个克隆,平均插入片段为101kb,空载率约9%,覆... 为进一步阐明阿维菌素的生物合成路径和调控途径,提高阿维菌素的产量,采用BamHⅠ限制性内切酶酶解阿维链霉菌基因组DNA的方法,构建了阿维链霉菌的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含2 304个克隆,平均插入片段为101kb,空载率约9%,覆盖了该菌基因组的25.9倍。该文库的成功构建可以为其他微生物尤其是基因组具有磷硫酰化修饰的微生物的文库构建提供参考。 展开更多

关键词 阿维链霉菌 阿维菌素 大片段DNA 细菌人工染色体(bac) DNA的磷硫酰化修饰

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细菌人工染色体(BAC)文库及其在小麦中的应用 被引量：1

16

作者 刘越 孔秀英 +2 位作者 吴佳洁 肖建会 刘旭 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期159-163,共5页

细菌人工染色体(BAC)具有容量大、遗传稳定、易于操作等优点,在基因组研究和基因功能分析等方面得到了广泛应用。对BAC文库克隆载体的类型、小麦BAC文库的构建及其应用进行了综述,并对其前景进行了展望。细菌人工染色体载体是由大肠杆菌... 细菌人工染色体(BAC)具有容量大、遗传稳定、易于操作等优点,在基因组研究和基因功能分析等方面得到了广泛应用。对BAC文库克隆载体的类型、小麦BAC文库的构建及其应用进行了综述,并对其前景进行了展望。细菌人工染色体载体是由大肠杆菌的F-因子发展而来,第一代BAC克隆载体pBAC108l能容纳300kb的片段,但它只具有转化选择标记,没有重组选择标记。第二代载体是将LacZ基因插入到多克隆位点中形成具有重组选择标记类型的载体如pBeloBAC11,在该载体的基础上经过改造和改进又发展了一些特殊用途的载体,如富集基因类型和遗传转化类型的载体。近年来利用这些载体构建了小麦二倍体、四倍体、六倍体基因组BAC文库以及小麦特定染色体BAC文库,并以单克隆或混合池的形式保存。这些小麦BAC文库对于小麦基因克隆、基因组及基因区物理图谱的构建以及比较基因组学等方面的研究具有重要的意义。 展开更多

关键词 小麦 细菌人工染色体文库 基因组学 选择标记

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白氏文昌鱼单个体基因组BAC文库的构建 被引量：1

17

作者 张巨永 黄盛丰 +2 位作者 王蔚 徐安龙 王义权 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期67-72,共6页

隶属于头索动物亚门的文昌鱼是现存生物中最近似于脊椎动物亚门直接祖先的一个类群,具有重要的进化地位,是研究脊椎动物原始祖先的重要材料和模式动物。随着文昌鱼实验室连续繁殖的成功,全基因组测序成为中国文昌鱼模式化急需完成的工... 隶属于头索动物亚门的文昌鱼是现存生物中最近似于脊椎动物亚门直接祖先的一个类群,具有重要的进化地位,是研究脊椎动物原始祖先的重要材料和模式动物。随着文昌鱼实验室连续繁殖的成功,全基因组测序成为中国文昌鱼模式化急需完成的工作之一。文章从单条雄性白氏文昌鱼精巢组织中提取高质量的基因组DNA,经EcoRⅠ限制性内切酶和EcoRⅠ甲基化酶酶切,脉冲场电泳选择合适酶切DNA片段,连接线性磷酸化的载体pCC1BAC,转化大肠杆菌EPI300 E.coli,构建了含有44706个克隆的全基因组BAC(Bacterial artificial chromosome)文库,该文库平均插入片段80kb,具有9倍的基因组覆盖率,基本能够满足功能基因等研究需要,为中国文昌鱼全基因组测序打下基础。 展开更多

关键词 头索动物 白氏文昌鱼 基因组文库 bac文库

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雷蒙德氏棉3条染色体特异BAC的筛选与定位 被引量：1

18

作者 覃琴 刘方 +4 位作者 甘仪梅 王春英 王玉红 蔡小彦 王坤波 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第4期323-328,共6页

通过筛选海岛棉BAC文库并结合BAC-FISH技术成功获得雷蒙德氏棉D501、D502和D510染色体的特异BAC克隆,可作为这3条染色体的细胞学标记。这3个克隆在雷蒙德氏棉和海岛棉中进行比较作图,结果表明,它们在海岛棉中均表现出了染色体特异性,说... 通过筛选海岛棉BAC文库并结合BAC-FISH技术成功获得雷蒙德氏棉D501、D502和D510染色体的特异BAC克隆,可作为这3条染色体的细胞学标记。这3个克隆在雷蒙德氏棉和海岛棉中进行比较作图,结果表明,它们在海岛棉中均表现出了染色体特异性,说明这3个BAC也可用于海岛棉Db01、Db02和Db10染色体的识别。其中BAC克隆280G06在两棉种10号染色体上的位置为非线性关系,可能在棉属的进化过程中发生了染色体结构的变异。 展开更多

关键词 雷蒙德氏棉 单染色体 细菌人工染色体 荧光原位杂交

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以绵羊MHC区段BAC克隆酶切片段为探针杂交筛选绵羊混合组织cDNA文库

19

作者 杨小亮 白大章 +6 位作者 邱巍 董慧芹 李大全 陈芳 马润林 Hugh T Blair 高剑峰 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期887-894,共8页

在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下,用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针,以噬菌斑原位杂交筛选... 在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下,用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针,以噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库(库库杂交),对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定,并与相应的已知序列信息和基因注释的BAC克隆比对以及在NCBI Blastn数据库中序列相似性检索,旨在验证基因注释结果的准确性和对基因(序列)功能的初步分析。实验中,经过两轮杂交共筛选出27个cDNA阳性克隆(序列),并发现这些序列均可定位到相应的BAC克隆上,且25条序列处在注释基因的外显子部分;在NCBI数据库中经Blastn序列相似性检索发现,23条序列与牛基因的序列相似性最高,且与免疫功能密切相关。 展开更多

关键词 绵羊MHC 细菌人工染色体(bac) CDNA文库 噬菌斑原位杂交

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高抗黑胫病烤烟BAC文库的构建及分析

20

作者 董庆园 马德清 +11 位作者 杨学 刘勇 黄昌军 袁诚 方敦煌 于海芹 童治军 沈俊儒 许银莲 罗美中 李永平 曾建敏 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期869-877,共9页

烟草是重要的模式植物。本研究利用pIndigoBAC536-S载体及Hind Ⅲ限制性内切酶酶解烟草基因组DNA的方法,构建了烟草新品系14-60的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含414,720个克隆,保存在1080块384板中。随机挑选的120个烟草BAC克... 烟草是重要的模式植物。本研究利用pIndigoBAC536-S载体及Hind Ⅲ限制性内切酶酶解烟草基因组DNA的方法,构建了烟草新品系14-60的细菌人工染色体(BAC)文库。该文库共包含414,720个克隆,保存在1080块384板中。随机挑选的120个烟草BAC克隆检测结果表明,外源插入片段大小为97.0~145.5 kb,平均约为123 kb,空载率极低(0),覆盖烟草基因组11倍。用烟草hem A基因、eIF4E-1基因、NtFT基因的特异引物进一步验证,该文库质量高、可用性强,为烟草黑胫病抗性基因的克隆以及其他重要农艺性状和品质性状等功能基因克隆研究提供了基础资源。 展开更多

关键词 烟草 基因组DNA 细菌人工染色体(bac) 基因筛选

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