猪瘟病毒E2基因部分表位区重组猪伪狂犬病病毒的构建及生物学特性研究

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作者 王林青 张刘辉 +3 位作者 陈曦艋 马世杰 宋月 陈红英 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1815-1824,共10页

【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表... 【目的】猪瘟病毒(Classical swine fever virus, CSFV)和猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)是当前影响生猪产业发展的两种重要病原,目前无高效的药物治疗方法,主要依靠疫苗接种进行预防。本试验旨在构建含有CSFV E2基因部分表位区的重组PRV毒株,并探究其生物学特性,为开发同时预防CSFV和PRV的二联疫苗提供参考。【方法】首先使用基因工程技术将包含CSFV E2蛋白B/C/D/A 4个表位区的一段基因插入pG-EGFP重组质粒的BamHⅠ位点,构建重组质粒pG-E2AD-EGFP;然后将质粒转染已接种PRV三基因缺失毒株rPRV NY-gE^(-)/gI^(-)/TK^(-)的ST细胞,在ST细胞内发生同源重组,利用蚀斑纯化法拯救出带绿色荧光蛋白的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。使用CRISPR/Cas9敲除载体敲除EGFP基因,经蚀斑纯化得到无荧光的重组病毒rPRV-E2AD。利用PCR扩增和Western blotting检测重组病毒rPRV-E2AD的E2基因A-D表位区表达情况。通过半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测不同理化性质处理后病毒增殖情况,对重组病毒培养特性、理化特性进行评价。【结果】通过细胞内同源重组和病毒蚀斑纯化,得到了同时表达CSFV E2AD抗原和EGFP的重组病毒rPRV-E2AD-EGFP。通过CRISPR/Cas9技术敲除EGFP基因,得到了无EGFP基因表达的重组病毒rPRV-E2AD。Western blotting检测结果显示,该毒株表达蛋白大小约27 ku,与预期CSFV E2AD抗原大小一致。rPRV-E2AD毒株与亲本株在ST、IPEC-J2、PK-15、Vero细胞中生长特性基本一致,均在感染后12 h引起细胞融合,36 h出现细胞脱落。理化特性检测结果显示,重组毒株与亲本株在相同理化条件处理下,培养特性相似。【结论】本研究成功获得重组病毒rPRV-E2AD,且外源基因不影响亲本株的增殖特性,试验结果为研发重组CSFV E2基因活载体疫苗提供了候选毒株,也为PRV活载体疫苗的开发提供了研究基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒(CSFV) 伪狂犬病病毒(PRV) 重组病毒 E2基因

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改良育阴方对非洲猪瘟病毒感染PAMs的cGAS-STING通路影响

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作者 陈晓丽 周佳浩 +7 位作者 周静 屈倩 王志华 熊鹰 朱咏琪 贾伟新 吕伟杰 郭世宁 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5839-5853,共15页

旨在为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用,本研究将5种试验用药:连翘、马勃、改良育阴方(modified Yuyin decoction,MYY)、复方鱼腥草(复方2)和银翘马勃散(复方3),通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,... 旨在为评价中药体外对非洲猪瘟病毒的抑制作用,本研究将5种试验用药:连翘、马勃、改良育阴方(modified Yuyin decoction,MYY)、复方鱼腥草(复方2)和银翘马勃散(复方3),通过qPCR检测不同中药在被非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)感染的猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)中,对ASFV编码的衣壳蛋白p72的影响,筛选出可以显著降低ASFV-p 72基因表达的中药为改良育阴方(MYY)。采用LC-MS分析检测出改良育阴方的主要化学成分;采用CCK8法观察改良育阴方对猪肺泡巨噬细胞(PAMs)活力的影响;荧光定量PCR检测ASFV-p 72基因的表达;Western blot和ELISA检测CGAS-STING信号通路蛋白表达水平;RU.521作为cGAS抑制剂用于验证MYY在cGAS-STING通路中对ASFV的作用。结果表明,在PAMs中,MYY可以显著降低ASFV-p 72基因表达,在ASFV感染2 h给药效果最佳,对ASFV感染PAMs后的细胞活力具有浓度依赖性改善作用。攻毒后2 h,使用MYY发现PAMs细胞上清液中干扰素基因刺激蛋白(STING)、TANK结合激酶1(TBK1)、干扰素调节因子3(IRF3)、干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)表达量的下降,PAMs细胞内环状GMP-AMP合成酶(cGAS)、干扰素β(IFNβ)蛋白量表达增加,MYY可激活cGAS-STING-TBK1-IRF3-IFNβ信号通路,促进IFITM3的表达。经RU.521处理后,MYY仍能提高细胞活力,降低ASFV-p 72基因的表达。综上所述,MYY具有抑制ASFV的潜在作用,可能与cGAS-STING信号通路的激活促进IFITM3的表达有关。 展开更多

关键词 改良育阴方 非洲猪瘟病毒 ASFV-p 72基因 CGAS-STING信号通路 LC-MS分析

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非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立 被引量：22

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作者 曹琛福 梁云浩 +6 位作者 陶虹 花群义 曾少灵 杨俊兴 陈兵 张桂红 吕建强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第2期6-10,共5页

将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包... 将非洲猪瘟病毒P54基因克隆到原核表达载体pET-52b(+)3C/LIC中,转入BL21(DE3)菌中诱导表达,对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot分析的结果表明,表达蛋p54的分子质量约为28ku,具有很好的抗原性。纯化p54蛋白后,采用2.5μg/mL浓度作包被抗原,建立了检测非洲猪瘟p54抗体的间接ELISA方法,结果表明建立的间接ELISA方法特异性、敏感性都较好。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 p54基因 原核表达 间接ELISA

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我国近期猪瘟分子流行病学动态 被引量：15

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作者 孙世琪 靳野 +8 位作者 郭慧琛 尚佑军 魏旭文 马军武 韩雪清 邱伯根 梁原祥 刘湘涛 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2004年第6期69-71,共3页

利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核... 利用反转录聚合酶链式反应 (RT PCR)及测序技术 ,测定 2 0 0 2年分离于我国甘肃、湖南、海南、青海等省的 9株猪瘟野毒的E2基因序列 ,并与C 株疫苗毒进行同源性比较 ,绘制CSFV系统发生树。结果表明 ,近期分离于我国的 9株野毒与C 株核苷酸序列间的同源性在80 .7%～ 99.1 %,氨基酸同源性在 89.3%～98.9%。9株野毒分属于 2个不同的组群 ,其中 5株与我国经典的石门强毒和C 株疫苗毒同属于Subgroups1 .1 ,另 4株属于与C 株有较大差异的Subgroup2 .1。 展开更多

关键词 中国 猪瘟 分子流行病学 动态分析

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猪瘟病毒促进细胞自噬并利于病毒增殖 被引量：7

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作者 康恺 林鸷 +6 位作者 高海慧 张成成 李河林 梁武龙 王静 曹志 张彦明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1481-1487,共7页

细胞自噬在病毒的增殖、释放中有着重要的作用,目前国内仍然没有猪瘟病毒与细胞自噬相互作用关系的报道。本研究旨在探讨猪瘟病毒Shimen株感染宿主细胞(ST)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬对病毒增殖的作用。通过透射电镜和自噬体标记... 细胞自噬在病毒的增殖、释放中有着重要的作用,目前国内仍然没有猪瘟病毒与细胞自噬相互作用关系的报道。本研究旨在探讨猪瘟病毒Shimen株感染宿主细胞(ST)后对细胞自噬的影响,以及细胞自噬对病毒增殖的作用。通过透射电镜和自噬体标记分子LC3的荧光聚点的观察,直观判断病毒对自噬的影响;并通过Western blot,检测LC3蛋白和P62蛋白的表达量,以及LC3蛋白转化分析,确定猪瘟病毒感染促进细胞自噬发生。利用自噬促进剂雷帕霉素、抑制剂3-MA、自噬体与溶酶体融合阻断剂氯喹(CQ),以及自噬基因Beclin 1、LC3蛋白的干扰,调控自噬来研究自噬对病毒增殖的影响。结果表明,病毒感染细胞促进了细胞自噬的发生,且能形成完整的自噬过程,同时病毒利用细胞自噬来促进自身增殖。本研究为探索猪瘟病毒与宿主细胞相互作用关系增加了新的数据。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 细胞自噬 病毒增殖 自噬相关基因

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2012年我国部分地区猪瘟流行病学调查及E2部分基因遗传演化分析 被引量：8

6

作者 王博扬 邵卫星 +7 位作者 吕占军 董雅琴 刘爽 王建 吴发兴 张志 刘自立 李晓成 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第5期50-56,共7页

为分析我国猪瘟病毒(CSFV)遗传变异情况,根据已发表的文献设计合成E2主要抗原区基因的引物,采用RT-PCR方法,对2012年我国12个省收集到的组织样品进行E2基因扩增与序列测定,并进行遗传进化分析。结果表明,在分离到的107株猪瘟阳性样品中... 为分析我国猪瘟病毒(CSFV)遗传变异情况,根据已发表的文献设计合成E2主要抗原区基因的引物,采用RT-PCR方法,对2012年我国12个省收集到的组织样品进行E2基因扩增与序列测定,并进行遗传进化分析。结果表明,在分离到的107株猪瘟阳性样品中,48株属于基因Ⅰ群中的1.1亚群,占45%;59株属于基因Ⅱ群中的2.1b和2.1c亚群,占55%,未发现传统流行亚群2.2与2.3。表明我国目前流行的CSFV主要是1.1和2.1亚群。分析发现,2012年分离的48株的1.1亚群病毒均是弱毒,与HCLV毒株亲缘关系较近,而与Shimen毒株较远,表明2.1亚群是我国目前CSFV流行的主要基因亚群,其中2.1b是CSFV流行的优势毒株,2.1c毒株有不断扩散的趋势。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 基因型 遗传变异

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猪瘟病毒福建野毒分离株FJ-1E2基因序列分析 被引量：7

7

作者 杨小燕 刘建奎 +2 位作者 魏春华 戴爱玲 李晓华 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2013年第8期46-50,共5页

应用RT-PCR技术对福建省某一猪场采集的疑似猪瘟样品进行猪瘟病毒E2基因扩增,并对其核苷酸序列进行分析。结果表明,猪瘟野毒与标准参考毒株及国内分离株的同源性为81%～98.1%;遗传进化树分析表明流行野毒与中国C株存在很大差异;预测的... 应用RT-PCR技术对福建省某一猪场采集的疑似猪瘟样品进行猪瘟病毒E2基因扩增,并对其核苷酸序列进行分析。结果表明,猪瘟野毒与标准参考毒株及国内分离株的同源性为81%～98.1%;遗传进化树分析表明流行野毒与中国C株存在很大差异;预测的抗原表位表明该野毒株与中国C株相比发生了抗原漂移,该差异是否预示福建流行株正在向远离疫苗株的方向变异尚待进一步的研究。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析

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北京部分地区猪瘟病毒流行株E2基因序列分析 被引量：7

8

作者 傅彩霞 郑瑞峰 +5 位作者 郭峰 靳兴军 吴惠明 李佳 陈立本 王玉田 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第1期61-66,共6页

为了解北京地区猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的遗传变异情况,采用套式RT-PCR方法,对从北京部分地区近期分离的7株CSFV流行毒株的E2基因主要抗原编码区进行了扩增、克隆与序列测定,并应用DNA Star分析软件对所测定的7株毒株与国内外参考毒株... 为了解北京地区猪瘟病毒(CSFV)流行毒株的遗传变异情况,采用套式RT-PCR方法,对从北京部分地区近期分离的7株CSFV流行毒株的E2基因主要抗原编码区进行了扩增、克隆与序列测定,并应用DNA Star分析软件对所测定的7株毒株与国内外参考毒株的相应序列进行了同源性分析及氨基酸序列比对。结果表明,7株CSFV流行毒株之间核苷酸与氨基酸的同源性分别为96.3%～99.3%和95.6%～100%,与CSFV石门毒株(Shimen株)的核苷酸与氨基酸的同源性分别为81.7%～83.5%和82.4%～84.6%,与CSFV兔化弱毒株(HCLV株)的核苷酸与氨基酸的同源性分别为80.6%～81.7%和78.0%～80.2%,7株CSFV流行毒株均属于基因2群,且705、713、729和734位氨基酸发生置换。本研究初步揭示了北京部分地区目前流行的CSFV毒株与Shimen株和HCLV株在E2基因主要抗原区上存在较大差异。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 序列分析

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非洲猪瘟病毒B438L蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定 被引量：14

9

作者 刘雪婷 王召阳 +6 位作者 鑫婷 郭晓宇 姜一曈 崔帅 于海男 朱鸿飞 贾红 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第3期991-1000,共10页

本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1(GenBank登录号:FR682468.1)公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a(+)载体,构建pET-28a-B... 本研究旨在通过构建非洲猪瘟病毒(ASFV)B438L基因原核表达系统表达p49重组蛋白,并制备抗p49蛋白的多克隆抗体。根据ASFV Georgia 2007/1(GenBank登录号:FR682468.1)公布的基因序列合成B438L基因,并将其插入pET-28a(+)载体,构建pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,在16℃经1 mmol/L IPTG诱导12 h,通过SDS-PAGE对重组蛋白表达形式进行分析;利用串联质谱技术鉴定重组蛋白是否正确表达;将纯化的p49重组蛋白免疫小鼠制备鼠源抗p49多克隆抗体,利用间接ELISA方法测定该多克隆抗体的效价,并以间接免疫荧光试验及Western blotting检测该多克隆抗体的特异性。结果显示,试验成功构建了pET-28a-B438L重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经诱导表达获得了p49重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式表达,大小约为60 ku;串联质谱技术进一步证实该蛋白为p49。间接ELISA检测制备的鼠源抗p49多克隆抗体效价达1∶64000,间接免疫荧光试验及Western blotting结果表明制备的鼠源抗p49多克隆抗体能特异性识别p49蛋白。以上结果表明,该原核表达的ASFV p49重组蛋白具有良好的免疫原性,利用表达的p49重组蛋白制备的多克隆抗体具有较高的抗体效价和特异性,为进一步研究ASFV p49蛋白的结构与功能、研制相关的ASFV诊断试剂及疫苗提供了生物材料。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) B438L基因 p49重组蛋白 原核表达 多克隆抗体

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表达猪瘟病毒石门株E0抗原的重组腺病毒构建及免疫性的研究 被引量：4

10

作者 孙永科 杨玉艾 +1 位作者 王养会 张彦明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期482-487,共6页

应用PCR从pMD18-T-E0质粒中扩增编码CSFV E0蛋白的基因片段,定向克隆到重组腺病毒Adeasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用细菌内同源重组“两步转化法”构建携带CSFV E0基因的重组腺病毒基因组质粒pAdEasy-E0,转染293细胞,成功包装... 应用PCR从pMD18-T-E0质粒中扩增编码CSFV E0蛋白的基因片段,定向克隆到重组腺病毒Adeasy-1系统的穿梭质粒pAdTrack-CMV上,采用细菌内同源重组“两步转化法”构建携带CSFV E0基因的重组腺病毒基因组质粒pAdEasy-E0,转染293细胞,成功包装出重组腺病毒pAd-E0,PCR证实E0基因已整合至腺病毒基因组中,用Western blot检测到重组病毒感染293细胞中E0蛋白的表达。重组病毒免疫小鼠和猪,结果2次免疫后产生明显的免疫应答,ELISA检测小鼠血清抗体滴度分别为1∶512和1∶10240;猪血清抗体滴度分别为1∶16和1∶64。本研究成功构建了表达猪瘟病毒E0基因的非复制型重组腺病毒,该重组病毒免疫小鼠可产生较高的抗体滴度,免疫猪后能提供一定的保护效果。 展开更多

关键词 腺病毒 猪瘟病毒 E0基因 同源重组

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猪瘟病毒E2基因密码子偏爱性分析 被引量：5

11

作者 罗丹丹 曹冶 +5 位作者 谢晶 赵素君 李江凌 廖党金 叶勇刚 李兴玉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第12期50-55,共6页

本试验旨在阐明猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)囊膜结构(糖)蛋白E2基因的密码子使用规律,以期为选择高效的表达系统、探索基因功能提供理论依据。本研究运用EMBOSS在线分析软件的CHIPS和CUSP程序对CSFV E2基因进行密码子... 本试验旨在阐明猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)囊膜结构(糖)蛋白E2基因的密码子使用规律,以期为选择高效的表达系统、探索基因功能提供理论依据。本研究运用EMBOSS在线分析软件的CHIPS和CUSP程序对CSFV E2基因进行密码子偏爱性分析。结果显示CSFVE2基因的CAI值为0.703,ENC值为53.161,表明E2在密码子使用上存在较明显的偏爱性,且第3位核苷酸尤其偏爱G或C;从与CSFVE2基因密码子使用频率比值上看,使用频率差异较大的在大肠杆菌有33个、酵母有25个、人有25个;CSFVE2基因共有34个稀有密码子,且还有多个稀有密码子多次串联成簇的情况出现。本试验结果表明酵母等真核生物与CSFVE2基因密码子偏爱性较为接近,可作为其体外表达系统。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 密码子偏爱性

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非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：15

12

作者 黄萍 肖家勇 +6 位作者 欧阳振宇 陈盼 白雪 朱中武 孟芳 吴愈柏 唐连飞 《中国动物检疫》 CAS 2010年第11期28-30,共3页

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的... 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的敏感性和重复性。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 P72基因 实时荧光定量PCR 质粒

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猪瘟病毒四川分离株E2基因的分子克隆、原核表达及免疫学活性分析 被引量：4

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作者 韩国全 郭万柱 +4 位作者 林华 王利娜 张博 陈弟诗 陈杨 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2010年第3期65-71,共7页

分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami... 分子克隆猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)四川分离株E2基因,并对其进行原核表达及免疫学活性分析。PK-15细胞培养增殖CSFV四川分离株提取总RNA,运用RT-PCR扩增E2基因,定向克隆构建原核重组表达载体,转化E.coli Rosetta-gami-TM(DE3)plysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达,Western blotting分析表达蛋白的免疫学活性。试验结果表明,成功克隆了E2基因,共1119 bp,包含有编码E2蛋白的完整序列,编码373个氨基酸;成功构建了CS-FVE2基因完整阅读框、主要抗原区原核表达载体pET-E2(pe)、pET-mE2(pe);蛋白质电泳结果显示,成功表达出约45.32、28.49 ku两目的蛋白,而且表达的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白均能被CSFV阳性血清所识别,具有良好的免疫学反应活性。因此,本试验成功获得CSFV四川分离株E2基因,表达出具有生物学活性的E2(pe)、mE2(pe)融合蛋白。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 四川分离株 E2基因 原核表达 免疫学活性

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猪瘟病毒E2基因的克隆及其初步鉴定 被引量：5

14

作者 杨文超 谢金文 余为一 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第25期7841-7841,共1页

[目的]为了研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原性质和进一步筛选保护性抗原表位。[方法]克隆猪瘟病毒E2蛋白的部分基因片段,通过自行设计的一对引物,应用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒株细胞培养物,扩增出一DNA片段,并对其进行鉴定。[结果]经初步鉴定,该... [目的]为了研究猪瘟病毒E2蛋白的抗原性质和进一步筛选保护性抗原表位。[方法]克隆猪瘟病毒E2蛋白的部分基因片段,通过自行设计的一对引物,应用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒株细胞培养物,扩增出一DNA片段,并对其进行鉴定。[结果]经初步鉴定,该片段大小约703 bp,核苷酸序列测定结果表明该片段为E2蛋白基因。[结论]该研究为筛选CSFV抗原奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2基因 克隆

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猪瘟病毒的分子生物学研究进展 被引量：6

15

作者 胡建和 张彦明 谢庆阁 《动物医学进展》 CSCD 2002年第4期15-18,25,共5页

本文概述了猪瘟病毒的基因结构和功能 ,猪瘟的分子生物学诊断技术和基因疫苗 ,以及猪瘟病毒全长感染性 c DNA的研究进展。为进一步研究猪瘟病毒的复制机理、毒力及其决定因素、致弱机理、致病机理、基因产物的功能、宿主嗜性及标记疫苗... 本文概述了猪瘟病毒的基因结构和功能 ,猪瘟的分子生物学诊断技术和基因疫苗 ,以及猪瘟病毒全长感染性 c DNA的研究进展。为进一步研究猪瘟病毒的复制机理、毒力及其决定因素、致弱机理、致病机理、基因产物的功能、宿主嗜性及标记疫苗的开发提供理论参考。 展开更多

关键词 分子生物学 猪瘟病毒 诊断 检测 基因疫苗 全长感染性cDNA 基因结构 基因功能

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GM-CSF与猪瘟病毒E_2基因共表达载体的构建及其诱导的免疫应答 被引量：3

16

作者 邱元 黄复深 +2 位作者 陈尔曼 郝知友 袁鑫 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期200-204,共5页

为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响,将CSFVE2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2,pcE2-GF及pcGF核酸疫苗.动物试验时,50只雌性供试小鼠随机分为5组,即pcE2,p... 为探讨粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对猪瘟病毒E2基因核酸疫苗小鼠免疫应答诱导的影响,将CSFVE2基因和GM-CSF片段插入真核表达载体pcDNA3.0内构建pcE2,pcE2-GF及pcGF核酸疫苗.动物试验时,50只雌性供试小鼠随机分为5组,即pcE2,pcE2-GF,pcDNA3.0,pcGF,生理盐水组,每组10只.0,2,4周于小鼠左后肢胫前肌进行肌注免疫,质粒量为每只每次50μg.每次免疫前和末次免疫后2周尾静脉采血收集血清,ELISA检测血清内特异性IgG水平.末次免疫后1周每组随机选3只无菌取脾,MTT法检测淋巴细胞增殖情况.结果表明,与对照组比较,pcE2和pcE2-GF第3次免疫2周后,免疫小鼠IgG抗体水平逐渐增高,淋巴细胞的转化率也明显增高,且pcE2-GF免疫组的IgG抗体水平和淋巴细胞的转化率高于pcE2免疫组.可见,细胞因子GM-CSF可有效提高猪瘟病毒E2基因核酸疫苗的免疫应答. 展开更多

关键词 猪瘟病毒E2基因 粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子 核酸疫苗 免疫应答

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载体介导的shRNA抑制猪瘟病毒在PK-15细胞中增殖特性的研究 被引量：5

17

作者 冶贵生 张彦明 徐浩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期500-505,共6页

利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGe... 利用生物学软件分析猪瘟病毒NS3基因,设计针对NS3基因不同位置的干扰序列,化学合成这些序列,然后退火连接为双链干扰片段,再定向克隆到干扰载体中,将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3、pGene-NS3-Negative。重组干扰载体经纯化后转染PK-15细胞,并进行G418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后,接种猪瘟病毒Shimen株,收集细胞分别进行实时定量PCR和ELISA光吸收度分析。Real-time PCR分析表明,与对照细胞比较,pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3转录产生的shRNA分子均在一定程度上沉默了病毒的基因,抑制率约为63%、46%、49%。ELISA检测结果表明,转染pGene-NS3-1、pGene-NS3-2、pGene-NS3-3重组载体的PK-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 RNAI NS3基因 SHRNA PK-15细胞

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猪瘟病毒NS2 3′端基因的克隆与原核表达 被引量：2

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作者 杨幼聪 张彦明 +3 位作者 康恺 向华 汤智慧 张三东 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第5期14-17,共4页

从真核表达载体pEGFP-NS2中克隆得到猪瘟病毒(CSFV)NS2 3′端的基因片段,将其克隆到pET-32a载体上,构建出重组表达载体,经IPTG诱导表达。结果表明,克隆了大小为363 bp NS2 3′端的基因,重组载体pET-NS2-C363在大肠埃希菌中以包涵体形式... 从真核表达载体pEGFP-NS2中克隆得到猪瘟病毒(CSFV)NS2 3′端的基因片段,将其克隆到pET-32a载体上,构建出重组表达载体,经IPTG诱导表达。结果表明,克隆了大小为363 bp NS2 3′端的基因,重组载体pET-NS2-C363在大肠埃希菌中以包涵体形式表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot鉴定大小为33.84 ku,与预期结果一致。结果为进一步研究NS2蛋白与猪脐静脉血管内皮细胞中蛋白之间的相互作用提供材料及为制备单克隆抗体奠定基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 NS2基因 克隆 原核表达

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猪瘟病毒广西流行毒株E0基因的克隆与分析 被引量：4

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作者 曾咏芳 曹佳媛 +3 位作者 杨可妍 吴军 覃雨阳 熊毅 《动物医学进展》 北大核心 2015年第1期31-35,共5页

应用RT-PCR方法对猪瘟病毒E0基因进行扩增、克隆及测序,用DNA Star分析软件对6株毒株与猪瘟兔化弱毒苗（HCLV）、石门（Shimen）株、Paderborn株、GXWZ02株的相应片段进行比较分析,构建了CSFV遗传进化树。序列分析表明,广西流行株与HCL... 应用RT-PCR方法对猪瘟病毒E0基因进行扩增、克隆及测序,用DNA Star分析软件对6株毒株与猪瘟兔化弱毒苗（HCLV）、石门（Shimen）株、Paderborn株、GXWZ02株的相应片段进行比较分析,构建了CSFV遗传进化树。序列分析表明,广西流行株与HCLV株、Shimen株、Paderborn株、GXWZ02株之间核苷酸的同源性分别为80.8%-81.5%、82.8%-83.3%、93.1%-94.2%、93.7%-94.2%,推导的氨基酸同源性分别为88.3%-89.7%、89.7%-91.1%、96.2%-97.7%、97.7%-99.1%;6株广西CSFV流行毒株与国内外已发表的14株病毒相应序列进行比较,构建遗传进化树,结果表明所比较的20株毒株分为2个基因群,广西流行毒株均属于基因群Ⅱ。本研究成功地对广西流行猪瘟病毒株的E0基因进行了测序分析,表明近年来广西流行毒株未发生较大的变异,但病毒株有远离疫苗株发展的趋势。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0基因 序列分析 同源性比较

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表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗在兔体上的免疫原性分析 被引量：3

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作者 张小苗 张恒 +6 位作者 杨玉艾 张志 孙健 陶晓珊 李晓成 范根成 孙永科 《动物医学进展》 北大核心 2015年第9期8-12,共5页

研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.... 研究表达猪瘟病毒E0-E2基因重组腺病毒疫苗(rAd-E0-E2)在兔体上的免疫原性,并确定其最小免疫保护剂量。将rAd-E0-E2按10倍梯度稀释为107.0 IFU、106.0 IFU、105.0 IFU,分别免疫接种家兔,14d后,用猪瘟脾淋苗对各组兔子进行攻毒。结果107.0 IFU组和猪瘟脾淋苗组均未出现定型热反应(0/4),脾重/体重指数比值分别为0.055%、0.05%,脾组织切片均未见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法均未检测到脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒;106.0 IFU组3/4出现定型热反应,脾重/体重指数比值为0.074%,脾组织切片3/4可见充血、淤血,用RT-PCR和IFA方法可检测到3/4脾脏有猪瘟脾淋苗病毒;105.0 IFU组和对照组全部出现定型热反应(4/4),脾重/体重指数比值分别为0.099%和0.102%,脾组织切片充血、淤血严重,用RT-PCR和IFA方法均可检测到兔子脾脏内有猪瘟脾淋苗病毒。结果表明与对照组均不保护和猪瘟脾淋苗组全部保护相比,rAd-E0-E2在兔体的最小免疫保护剂量为107.0 IFU,本研究成功完成了rAd-E0-E2在兔体上的免疫原性分析。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E0-E2基因 重组腺病毒疫苗 兔 免疫原性

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