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2D-DIGE-HPLC-nESIMS/MS对2,4-二硝基苯磺酸损伤HaCaT细胞差异蛋白质的鉴定 被引量:2
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作者 孙明忠 杨帆 +3 位作者 侯志杰 郭春梅 郭一萌 刘淑清 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期146-151,共6页
采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3。凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain)。DeCyder定量分析... 采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3。凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain)。DeCyder定量分析软件在每块凝胶上平均检测到1 200个以上蛋白斑点,每块胶上都匹配得到的相同蛋白质斑点有846个。其中有7个斑点丰度变化在50%以上,统计学意义显著(P值小于0.05)。利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI MS/MS)成功鉴定5个表达上调的斑点分别为X染色体开放阅读框26(Cxorf26)、人辅分子伴侣23(PTGES3)、钙调蛋白(CALM3)、肌球蛋白轻链6(MYL6)和断裂点丛集区蛋白1(BANF1);2个表达下调蛋白斑点被鉴定为转录延伸因子B肽链2(TCEB2)和核糖体蛋白L23(RPL23)。除MYL6被报道与皮肤疾病相关外,其它蛋白与皮肤病变的关系有待研究。该研究得到的7个差异表达蛋白为DNBS类化学致癌物职业接触者皮肤病变研究提供了有价值的线索。 展开更多
关键词 2 4-二硝基苯磺酸 职业暴露 2D—DIGE HPLC—nESI MS/MS HACAT
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大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系的不同器官蛋白质组比较 被引量:9
2
作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 盖钧镒 喻德跃 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期8-14,共7页
质核互作雄性不育在杂种优势利用中起着重要作用,探讨质核互作雄性不育发生的机理具有重要的理论和实践意义。本研究开展大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的不同器官蛋白质组比较分析。以大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A... 质核互作雄性不育在杂种优势利用中起着重要作用,探讨质核互作雄性不育发生的机理具有重要的理论和实践意义。本研究开展大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的不同器官蛋白质组比较分析。以大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系NJCMS1B的种子、叶片和花药为材料,采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离,考马斯亮蓝染色,获得重复性好的蛋白质双向电泳图谱,利用PDQuest软件处理分析,寻找差异表达蛋白。结果发现不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的种子2-DE图谱间存在7个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,3个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,1个在NJCMS1A中表达量明显增强;苗期叶片2-DE图谱间基本一致,没有差异表达蛋白点;单核小孢子期花药2-DE图谱间有9个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,6个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达;二胞花粉期花药2-DE图谱间有24个差异表达蛋白点,其中10个在NJCMS1A中表达而在NJC-MS1B中缺失,12个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,2个在NJCMS1B中表达量明显增强。两系花药间存在较多差异表达蛋白点,种子间仅有少量差异表达蛋白点,而苗期叶片间基本没有差异表达蛋白点,说明不育基因表达具有时空性和器官特异性,与育性有关的蛋白主要在花药中表达。 展开更多
关键词 大豆 质核互作雄性不育 不同器官 蛋白质组 双向凝胶电泳
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不同生态型芦苇叶片蛋白质双向电泳系统的筛选和优化 被引量:9
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作者 林文芳 陈林姣 +1 位作者 彭浩 朱学艺 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1209-1214,共6页
通过优化组合植物蛋白质提取方法及与之匹配的蛋白质裂解液,采用改进的O′Farrel双向电泳系统,以自然生境野生芦苇叶片为材料,筛选出一种适合纤维含量高、革质化明显的4种不同生态型芦苇(水生芦苇、轻度盐化草甸芦苇、重度盐化草甸芦苇... 通过优化组合植物蛋白质提取方法及与之匹配的蛋白质裂解液,采用改进的O′Farrel双向电泳系统,以自然生境野生芦苇叶片为材料,筛选出一种适合纤维含量高、革质化明显的4种不同生态型芦苇(水生芦苇、轻度盐化草甸芦苇、重度盐化草甸芦苇、沙丘芦苇)叶片蛋白质分析的双向电泳系统,即以饱和酚-醋酸铵/甲醇沉淀法提取叶片蛋白质样品,经裂解液[8mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS,65mmol/LDTT,2%Ampholine(pH3.5 ̄10∶pH5 ̄8=1∶4)]裂解后按80!g上样,银染后获得背景清晰、蛋白质分辨率较高的双向电泳图谱.该系统用于水稻等植物叶片蛋白质双向电泳分析,同样获得较好的电泳图谱和分辨率. 展开更多
关键词 芦苇 不同生态型 蛋白质制样 裂解液 双向电泳
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LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究 被引量:6
4
作者 李美香 肖志强 +7 位作者 彭芳 李国庆 张鹏飞 李茂玉 李萃 李峰 刘迎福 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1122-1133,共12页
间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视.为寻找与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双... 间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视.为寻找与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双向凝胶电泳(fluorescent two-dimensional difference gel electrophoresis 2-D,DIGE)结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋白.Westernblot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋白(CapG、L-plastin和S100A9),证实了2D-DIGE结果的可靠性.建立了LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,共得到34个有统计学意义的蛋白质点,质谱鉴定得到20个差异蛋白.研究结果提示:这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻咽癌细胞和周围间质的关系.对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生中的作用机制,并为从间质途径寻找肿瘤治疗靶标提供新思路. 展开更多
关键词 鼻咽癌 间质 激光捕获显微切割 荧光差异双向凝胶电泳 质谱 免疫组织化学
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体外模拟脑缺血再灌注OGD/R模型的差异凝胶电泳分析 被引量:1
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作者 刘守跃 张影 +3 位作者 胡林森 宋彬 罗毅男 关文明 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期861-865,F0002,共6页
目的:通过体外模拟缺血-再灌注损伤(I/R)诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立,应用蛋白质组学技术观察凋亡细胞蛋白质组的差异表达,进一步揭示神经元凋亡的发生机制。方法:选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验... 目的:通过体外模拟缺血-再灌注损伤(I/R)诱导细胞凋亡的氧糖剥离再灌注(OGD/R)模型的建立,应用蛋白质组学技术观察凋亡细胞蛋白质组的差异表达,进一步揭示神经元凋亡的发生机制。方法:选用人神经母细胞瘤系SH-SY5Y细胞分为对照组和实验组,实验组给予OGD10h/R24h处理建立OGD/R诱导SH-SY5Y细胞凋亡模型,提取对照组和实验组细胞总蛋白,利用荧光染色双向差异凝胶电泳技术(2D-DIGE)检测细胞蛋白质组的差异表达变化。结果:DeCyder软件分析2D-DIGE凝胶图像显示平均分离了(1 800±156)个蛋白质点;与对照组比较,实验组共有30个蛋白点的表达水平有显著变化(蛋白表达量上调或下调30%以上),其中22个升高,8个降低,与同时间对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:应用双向差异凝胶电泳的蛋白质组学技术在OGD/R模型中发现有差异蛋白的表达。 展开更多
关键词 氧糖剥离 再灌注 蛋白质组学 二维荧光差异凝胶电泳
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采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因(英文) 被引量:1
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作者 汤参娥 谭潭 +7 位作者 肖艳华 阮林 李萃 彭芳 李茂玉 张鹏飞 易红 肖志强 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期641-648,共8页
目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-... 目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理的HL-60细胞的总蛋白质,Decyder和PDquest图像分析软件识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了5-aza-2-dC处理与未处理的HL-60细胞蛋白质的F-2D-DIGE图谱,图像分析识别了53个差异表达的蛋白质点,质谱分析鉴定了35个差异表达的蛋白质,其中32个蛋白质在5-aza-2-dC处理后的HL-60细胞中表达上调,3个蛋白质表达下调。结论:35个差异表达蛋白可能与甲基化相关,为白血病的表观遗传学研究提供了有价值的信息。 展开更多
关键词 HL-60 甲基化 荧光差异双向凝胶电泳 5-杂氮-2-脱氧胞苷
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园参根不同部位双向电泳图谱的比较分析 被引量:1
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作者 孙立伟 马朋涛 +3 位作者 麻锐 雷秀娟 陈雪楠 祁超 《华中师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期639-643,共5页
通过对经典TCA-丙酮提取法加以优化,结合超声破碎技术,建立了园参芦头、主根、须根、表皮等4个不同部位的双向电泳图谱,采用I mage Master 2D Platinum6.0对其进行比较分析,发现了人参不同部位13个相同的蛋白点,并在主根中发现了2个特异... 通过对经典TCA-丙酮提取法加以优化,结合超声破碎技术,建立了园参芦头、主根、须根、表皮等4个不同部位的双向电泳图谱,采用I mage Master 2D Platinum6.0对其进行比较分析,发现了人参不同部位13个相同的蛋白点,并在主根中发现了2个特异点,在芦头和表皮中发现了1个特异点,在须根中发现了1组特异点群(3个点).另外,还发现了2个蛋白出现明显表达差异的区域,从而为建立在蛋白分子水平上人参内在质量评价和鉴定方法提供依据,丰富了其内在质量评价标准体系. 展开更多
关键词 人参不同部位 双向电泳 质量标准评价
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宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织差异表达蛋白分析 被引量:2
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作者 何玥 吴玉梅 +4 位作者 赵群 王晓丽 陈硕 钱小红 张玉祥 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第1期36-44,共9页
目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京... 目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科收治的正常子宫颈组织因子宫肌瘤手术行全子宫切除术患者9例为对照组、CIN组织23例(其中CINⅠ7例、CINⅡ8例、CINⅢ8例)。应用二维荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2-DDIGE)及DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分析差异蛋白质点,数据库搜索鉴定差异表达最明显的S100蛋白家族A9(S100 calcium-binding protein A9,S100A9),真核延长因子1α1(eukaryoticelongation factor 1-alpha-1,eEF1A1)及丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)3种蛋白质;应用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)(其中正常宫颈组织10例、CINⅠ10例、CINⅡ10例、CINⅢ10例)及蛋白印记法(Western blotting)(其中正常宫颈组织12例,CINⅠ~Ⅱ12例,CINⅢ12例)进一步验证上述3种蛋白在CIN组织和正常宫颈组织的表达差异。结果获得CIN组织与正常宫颈组织2-D DIGE图,成功鉴定25个蛋白;免疫组化及蛋白印迹验证结果提示:S100A9蛋白表达于细胞质中,在CIN中表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P=0.010);eEF1A1蛋白表达于细胞质中、PKM2蛋白表达于细胞核中,2者在CIN中表达水平均低于正常组,差异有统计学意义(P分别为0.352,0.000)。结论在正常宫颈组织与CIN组织之间存在差异蛋白质表达,S100A9蛋白可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,PKM2蛋白可能成为抑制CIN发生的蛋白质,并可根据2种差异蛋白表达预测CIN的发生发展。 展开更多
关键词 蛋白质组学 宫颈上皮内瘤变 二维荧光差异凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱
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中韩野生软枣猕猴桃种质资源遗传多样性分析 被引量:13
9
作者 赵成日 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1043-1051,共9页
【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲... 【目的】利用RAPD分子标记技术研究国内长白山地区和韩国由来野生软枣猕猴桃种质资源的遗传多样性。【方法】以长白山地区和韩国由来的28个野生软枣猕猴桃的叶片为材料,利用RAPD分子标记技术进行了遗传多样性分析,并明确了它们之间的亲缘关系。【结果】利用131个随机引物进行PCR,从中筛选出了多态性高、重复性好且扩增条带清晰的24个引物。24个引物在28个野生软枣猕猴桃中共扩增出191条带,其中多态性条带为186条,占97.4%。平均每个引物产生7.75个多态性条带。应用NTSYSpc 2.10e软件进行遗传一致度和遗传距离分析后用UPGMA方法进行聚类分析。28个野生软枣猕猴桃种质资源之间的遗传距离为0.020 2~0.934 2。遗传距离0.58时可将28个野生种划分成2大类。在遗传距离最小的0.02处,有蛟河2号和3号2个野生种,其RAPD分子标记相似性为98%。【结论】来自不同地理区域的野生软枣猕猴桃之间存在较高的遗传多样性,而在同一地理区域内遗传多样性较低。韩国野生软枣猕猴桃之间的遗传多样性较低,且与二道白河、汪清、左家等地的野生软枣猕猴桃亲缘关系较近。即具有同一地理区域聚类趋势,且不同地理区域间存在较高的遗传多样性。 展开更多
关键词 软枣猕猴桃 遗传多样性 RAPD 长白山地区 韩国
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