2D-DIGE-HPLC-nESIMS/MS对2,4-二硝基苯磺酸损伤HaCaT细胞差异蛋白质的鉴定 被引量：2

1

作者 孙明忠 杨帆 +3 位作者 侯志杰 郭春梅 郭一萌 刘淑清 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期146-151,共6页

采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3。凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain)。DeCyder定量分析... 采用Cy2、Cy3和Cy5荧光染料标记蛋白,建立了人角质形成细胞HaCaT受2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激前后的双向胶内差异凝胶电泳(2D-DIGE)图谱,每组平行样本数为3。凝胶采用蛋白荧光染料Deep Purple进行后染色(Post-stain)。DeCyder定量分析软件在每块凝胶上平均检测到1 200个以上蛋白斑点,每块胶上都匹配得到的相同蛋白质斑点有846个。其中有7个斑点丰度变化在50%以上,统计学意义显著(P值小于0.05)。利用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(HPLC-nESI MS/MS)成功鉴定5个表达上调的斑点分别为X染色体开放阅读框26(Cxorf26)、人辅分子伴侣23(PTGES3)、钙调蛋白(CALM3)、肌球蛋白轻链6(MYL6)和断裂点丛集区蛋白1(BANF1);2个表达下调蛋白斑点被鉴定为转录延伸因子B肽链2(TCEB2)和核糖体蛋白L23(RPL23)。除MYL6被报道与皮肤疾病相关外,其它蛋白与皮肤病变的关系有待研究。该研究得到的7个差异表达蛋白为DNBS类化学致癌物职业接触者皮肤病变研究提供了有价值的线索。 展开更多

关键词 2 4-二硝基苯磺酸 职业暴露 2D—DIGE HPLC—nESI MS/MS HACAT

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2型猪链球菌强毒株与无毒株胞外蛋白的双向电泳图谱比较分析 被引量：3

2

作者 张爱玲 王兴龙 +3 位作者 李吉平 冯书章 张辉 卜昭阳 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期250-254,共5页

利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较,寻找与毒力相关的蛋白质。2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16h,从培养物上清中获得胞外蛋白。第一向电泳用pH4-7线性IPG... 利用双向电泳技术可以对体外培养的2型猪链球菌强毒株和无毒株进行胞外蛋白质组比较,寻找与毒力相关的蛋白质。2型猪链球菌强毒株和无毒株在无蛋白细菌培养液中37℃摇床培养16h,从培养物上清中获得胞外蛋白。第一向电泳用pH4-7线性IPG胶条进行等电聚焦,第二向电泳用SDS-PAGE凝胶再分离蛋白,经过考马斯亮蓝R350染色,图像扫描后,利用软件分析处理图像。在2型猪链球菌强毒株和无毒株的胞外蛋白质图谱中都分别检测出180±10个蛋白质斑点,它们的蛋白质分子质量分布基本相似;在所检测到的差异蛋白质斑点中,其中有50个蛋白斑点只存在于无毒株中而强毒株中不存在,有52个蛋白斑点只存在于强毒株中而无毒株中不存在,有7个蛋白斑点的表达量相差达5倍以上。这为研究2型猪链球菌的致病机理提供了蛋白质组学方面的信息。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 双向电泳 蛋白质组 胞外蛋白

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非编码小RNA BSR0602在布鲁菌环境适应能力中的调控作用 被引量：1

3

作者 袁久云 龚春丽 +4 位作者 庄妤冰 雷霜霜 陈泽良 黄克和 王玉飞 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期989-998,共10页

BSR0602是位于布鲁菌染色体上的非编码小RNA,在前期研究中我们发现,BSR0602与布鲁菌的胞内生存能力相关.为了进一步研究BSR0602对布鲁菌胞内环境适应能力的调控作用,采用双向电泳技术对布鲁菌野生株16M和BSR0602过表达株的全菌蛋白质谱... BSR0602是位于布鲁菌染色体上的非编码小RNA,在前期研究中我们发现,BSR0602与布鲁菌的胞内生存能力相关.为了进一步研究BSR0602对布鲁菌胞内环境适应能力的调控作用,采用双向电泳技术对布鲁菌野生株16M和BSR0602过表达株的全菌蛋白质谱进行比较分析.结果显示,BSR0602过表达后,布鲁菌转运代谢蛋白和压力适应蛋白的表达发生变化.qRT-PCR和HIS表位标记实验结果进一步证实,BSR0602在转录和翻译水平均影响氧压力适应蛋白Sod A的表达.相关表型实验结果显示,BSR0602过表达株对氧压力更为敏感,证实了BSR0602在布鲁菌适应氧压力中的作用.结果表明,非编码小RNA BSR0602作为布鲁菌的转录后调控因子,可通过调控压力适应蛋白的表达来影响布鲁菌的压力适应能力和胞内生存. 展开更多

关键词 布鲁菌 非编码小RNA 双向凝胶电泳 转录调控 氧压力

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2型猪链球菌中国强毒株及其covR基因突变株的蛋白质组学研究

4

作者 倪华 张剑 +4 位作者 郑峰 胡丹 李先富 王长军 潘秀珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期417-423,共7页

目的通过比较2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33及其covR基因突变株△covR蛋白表达谱差异,质谱鉴定差异表达蛋白,分析CovR在蛋白表达调控中的作用。方法首先将05ZYH33和△covR在THB培养基中培养至对数期,然后裂解细菌制备蛋白样品。第一向... 目的通过比较2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33及其covR基因突变株△covR蛋白表达谱差异,质谱鉴定差异表达蛋白,分析CovR在蛋白表达调控中的作用。方法首先将05ZYH33和△covR在THB培养基中培养至对数期,然后裂解细菌制备蛋白样品。第一向等电聚焦电泳在pH3～10的IPG胶条上完成后进行SDS-PAGE电泳,电泳胶经扫描分析后选取蛋白点进行质谱鉴定。结果 05ZYH33和△covR全菌蛋白裂解液经二维电泳分别得到559和491个蛋白点,经比对发现两菌株蛋白表达量差异3倍以上蛋白点40个,经质谱鉴定出15个蛋白,主要涉及细胞代谢的酶类如谷氨酸脱氢酶、腺苷酸激酶、PTS系统成分等,以及分子伴侣蛋白如GroEL和Dnak等;电泳分离得到△covR特异蛋白点124个,质谱鉴定出15个,主要为参与细胞糖代谢过程中的酶,如磷酸甘油酸激酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶等;质谱鉴定05ZYH33特异表达蛋白5个。结论鉴定05ZYH33和△covR差异表达蛋白35个,部分蛋白涉及细菌毒力、宿主细胞粘附、细胞分裂等生命过程,同时蛋白分子伴侣在△covR中的表达变化说明CovR的调控可能发生在蛋白修饰水平,为研究CovR在调控细菌毒力中的作用和分子机制奠定基础。 展开更多

关键词 2型猪链球菌 毒力调控因子CovR 二维电泳 蛋白质组

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穿心莲内酯衍生物抗H2O2诱导胰岛RIN-mβ细胞凋亡的蛋白组学研究 被引量：2

5

作者 周辉华 丁文 +2 位作者 贾红玲 王玉强 晏光荣 《生态科学》 CSCD 2010年第1期80-84,共5页

采用蛋白组学方法筛选穿心莲内酯衍生物（AL-1）抗过氧化氢诱导胰岛RIN—mβ细胞凋亡的差异蛋白质分子并探讨其作用分子机制。结果显示：AL-1浓度依赖性地提高H2O2处理的胰RIN-mβ细胞的存活率。经蛋白组学研究分析，成功地鉴定了18个... 采用蛋白组学方法筛选穿心莲内酯衍生物（AL-1）抗过氧化氢诱导胰岛RIN—mβ细胞凋亡的差异蛋白质分子并探讨其作用分子机制。结果显示：AL-1浓度依赖性地提高H2O2处理的胰RIN-mβ细胞的存活率。经蛋白组学研究分析，成功地鉴定了18个与凋亡、应激等相关的蛋白，包括Prohibitin、Shmt2、RhoGDP-dissociation inhibitor-1、Galectin-1、Cytb5、Hsps等；与对照组（H202）相比，处理组（AL-1＋H2O2）中，有9个表达上调的蛋白和9个表达下调的蛋白。AL-1过调控与细胞凋亡、应激等相关的蛋白发挥其抗H2O2诱导的凋亡作用。 展开更多

关键词 穿心莲内酯衍生物AL-1 H2O2 胰岛RIN-mβ细胞株 双向凝胶电泳 蛋白质组学

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成年和老年小鼠脑蛋白质组双向电泳图谱比较 被引量：19

6

作者 丁勤学 阙海萍 +2 位作者 郭尧君 景书谦 刘少君 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期683-687,共5页

使用双向电泳 (2 DE)比较成年和老年小鼠脑蛋白质差异 ,从分子水平初步探索老年脑蛋白整体变化规律 .以固相 pH梯度等电聚焦为第一向 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶水平电泳 (PAGE)为第二向进行 2 DE .图象分析软件Imagemaster 2DElite分析电... 使用双向电泳 (2 DE)比较成年和老年小鼠脑蛋白质差异 ,从分子水平初步探索老年脑蛋白整体变化规律 .以固相 pH梯度等电聚焦为第一向 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶水平电泳 (PAGE)为第二向进行 2 DE .图象分析软件Imagemaster 2DElite分析电泳图谱 .重复性实验结果显示 ,同组样品在三次不同实验中所得蛋白质斑点数目的相对标准差 (变异系数 )为 4 43%± 0 2 5 % ;同一蛋白质斑点在三次实验中等电点、分子质量和蛋白质量的相对标准差分别为 8 76 %± 5 14% ,13 0 0 %± 4 2 2 %和 10 84%± 9 16 % .成年和老年小鼠脑组织 2 DE图谱分别获得 996和 12 5 6个蛋白质斑点 ,其中 8个蛋白质在老年脑组织中含量降低 ,2 0个蛋白质斑点含量增加 .另至少有 4个蛋白质斑点在老年脑组织中缺失 ,14个蛋白质点为老年脑特有 . 展开更多

关键词 老年 脑蛋白 固相PH梯度 双向电泳图谱 蛋白质组 成年 小鼠 脑老化 功能退变

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大豆种子萌发过程中的差异蛋白质组研究 被引量：27

7

作者 徐晓燕 郑蕊 +2 位作者 李春梅 盖钧镒 喻德跃 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1106-1112,共7页

运用蛋白质组学技术对大豆(Glycinemax)N2899种子萌发0h、8h、36h、60h4个时期蛋白质的差异表达情况进行了研究.结果发现,在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH3～10胶上,PDQuest图像分析软件可识别的点约350个,其中表达量变化2.5倍以上的蛋白... 运用蛋白质组学技术对大豆(Glycinemax)N2899种子萌发0h、8h、36h、60h4个时期蛋白质的差异表达情况进行了研究.结果发现,在考马斯亮蓝染色的双向电泳pH3～10胶上,PDQuest图像分析软件可识别的点约350个,其中表达量变化2.5倍以上的蛋白质点有24个,而绝大部分大豆种子贮藏蛋白在萌发期尚未降解.在萌发的第一阶段,24个差异表达蛋白中有10个蛋白质的丰度发生变化.第二阶段,差异表达蛋白的种类和量增加,其中15个蛋白质是动态变化的,14个蛋白质在胚根突破种皮时表达量达到峰值,表明吸胀后种子内的生命活动越来越强.对这24个蛋白质点进行胶内酶解,用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定均获得肽质量指纹图谱.搜索大豆的UniGene库初步鉴定出6个蛋白质,分别是核苷二磷酸激酶、热激蛋白、硫氧还蛋白、35ku种子成熟蛋白及种子成熟蛋白PM36.对这些蛋白质在种子萌发过程中可能的作用进行了讨论. 展开更多

关键词 大豆 种子萌发 蛋白质组 双向电泳 基质辅助激光解吸飞行时间质谱

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低温胁迫下棉花子叶蛋白质差异表达的双向电泳分析 被引量：16

8

作者 邰付菊 李扬 +1 位作者 陈良 李学宝 《华中师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2008年第2期262-266,共5页

采用TCA-丙酮沉淀法,改良优化了棉花蛋白质组研究中的双向电泳技术.通过对根和子叶全细胞蛋白的提取、蛋白的溶解、胶条的选择及电泳等环节的优化,得到了重复性很高、分辨率很好的蛋白质图谱.进一步对5 d苗龄的棉花进行4℃低温处理12 h... 采用TCA-丙酮沉淀法,改良优化了棉花蛋白质组研究中的双向电泳技术.通过对根和子叶全细胞蛋白的提取、蛋白的溶解、胶条的选择及电泳等环节的优化,得到了重复性很高、分辨率很好的蛋白质图谱.进一步对5 d苗龄的棉花进行4℃低温处理12 h后,提取子叶的蛋白质,利用双向电泳技术分离全细胞蛋白.并用PDQuest软件分析比较棉花子叶在低温处理下的蛋白表达谱,得到了49个有显著差异的蛋白点.其中,低温处理上调表达的蛋白点有27个,减弱表达的蛋白点有22个,推测这些差异蛋白点可能与低温胁迫相关. 展开更多

关键词 棉花 低温处理 双向电泳

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植物蛋白质组学技术研究进展 被引量：10

9

作者 张根连 范术丽 +2 位作者 宋美珍 庞朝友 喻树迅 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期26-30,共5页

蛋白质组学被认为是后基因组研究中的最主要部分。与基因组学相比较,蛋白质组学的研究内容更为复杂,同时也更为直观地揭示生命过程。近年来新的蛋白质组学研究技术层出不穷,极大地推动了生命科学的研究进展。简要介绍了蛋白质组学的概... 蛋白质组学被认为是后基因组研究中的最主要部分。与基因组学相比较,蛋白质组学的研究内容更为复杂,同时也更为直观地揭示生命过程。近年来新的蛋白质组学研究技术层出不穷,极大地推动了生命科学的研究进展。简要介绍了蛋白质组学的概念、蛋白质组学的研究内容以及一些新的研究技术在植物中的应用等。 展开更多

关键词 蛋白质组学 双向凝胶电泳 ITRAQ 生物信息学

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蛋白质组学分离检测技术研究进展 被引量：6

10

作者 常俊丽 杨广笑 何光源 《武汉植物学研究》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期261-266,共6页

蛋白质组学是后基因组时代的新兴学科,是当今生命科学领域新的增长点,而其中的分离检测技术则是蛋白质组学得以迅速发展的重要基石。对蛋白质组学中的分离检测技术-双向凝胶电泳、色谱和质谱等技术近几年的发展现状及最新研究进展进行综... 蛋白质组学是后基因组时代的新兴学科,是当今生命科学领域新的增长点,而其中的分离检测技术则是蛋白质组学得以迅速发展的重要基石。对蛋白质组学中的分离检测技术-双向凝胶电泳、色谱和质谱等技术近几年的发展现状及最新研究进展进行综述,并对本实验室在蛋白质组学方面的研究结合生物信息学的探索进行概述。 展开更多

关键词 蛋白质组学 双向凝胶电泳 色谱 质谱 生物信息学

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肺癌与良性胸腔积液蛋白质双向电泳图谱差异分析 被引量：5

11

作者 侯伟健 吴广平 +2 位作者 贾兰玲 王宏 阎影 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期52-54,共3页

目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱... 目的:建立肺癌与肺良性胸腔积液的双向电泳图谱,分析二者表达蛋白质的差异及特点。方法:利用固相pH梯度双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法分离肺癌和肺良性胸腔积液中的总蛋白质。凝胶经银染色后用PDQUEST6.2.1电泳分析软件对胸水中的蛋白质谱进行分析,识别差异表达的蛋白质。结果:肺癌与肺良性胸腔积液的蛋白质组分布的基本框架很相似,并可发现二者之间有差异蛋白点;两种胸腔积液电泳图谱平均蛋白质点数分别为326±16和343±12,平均匹配点数为286±14和298±21,匹配率87.7%,86.9%.差异蛋白点82个,其中37个在肺癌胸腔积液中高表达,24个在肺癌胸腔积液中低表达。有17个点仅在良性胸腔积液表达,4个点仅在肺癌胸腔积液表达。结论:用双向电泳法得到了分辨率较高且重复率较好的肺癌与肺良性胸腔积液蛋白质组图谱,二者存在一些表达差异蛋白质。 展开更多

关键词 双向电泳 肺癌 胸腔积液 蛋白质组

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大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系的不同器官蛋白质组比较 被引量：9

12

作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 盖钧镒 喻德跃 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期8-14,共7页

质核互作雄性不育在杂种优势利用中起着重要作用,探讨质核互作雄性不育发生的机理具有重要的理论和实践意义。本研究开展大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的不同器官蛋白质组比较分析。以大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A... 质核互作雄性不育在杂种优势利用中起着重要作用,探讨质核互作雄性不育发生的机理具有重要的理论和实践意义。本研究开展大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的不同器官蛋白质组比较分析。以大豆质核互作雄性不育系NJCMS1A和其保持系NJCMS1B的种子、叶片和花药为材料,采用双向凝胶电泳技术对其蛋白质进行分离,考马斯亮蓝染色,获得重复性好的蛋白质双向电泳图谱,利用PDQuest软件处理分析,寻找差异表达蛋白。结果发现不育系NJCMS1A与其保持系NJCMS1B的种子2-DE图谱间存在7个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,3个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,1个在NJCMS1A中表达量明显增强;苗期叶片2-DE图谱间基本一致,没有差异表达蛋白点;单核小孢子期花药2-DE图谱间有9个差异表达蛋白点,其中3个在NJCMS1A中表达而在NJCMS1B中缺失,6个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达;二胞花粉期花药2-DE图谱间有24个差异表达蛋白点,其中10个在NJCMS1A中表达而在NJC-MS1B中缺失,12个在NJCMS1A中缺失而在NJCMS1B中表达,2个在NJCMS1B中表达量明显增强。两系花药间存在较多差异表达蛋白点,种子间仅有少量差异表达蛋白点,而苗期叶片间基本没有差异表达蛋白点,说明不育基因表达具有时空性和器官特异性,与育性有关的蛋白主要在花药中表达。 展开更多

关键词 大豆 质核互作雄性不育 不同器官 蛋白质组 双向凝胶电泳

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血清蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立 被引量：8

13

作者 母昭德 彭咏波 +1 位作者 易发平 邱宗荫 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2006年第6期821-823,840,共4页

目的:建立血清蛋白质组双向凝胶电泳(2-DE)技术。方法:对血清蛋白质2-DE的各种条件进行调整、优化。结果:建立了稳定的2-DE技术。结论:已建立的血清蛋白质2-DE技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。

关键词 血清蛋白质组学 蛋白质组 双向凝胶电泳

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白鲢鱼肌原纤维蛋白双向电泳分析体系的建立 被引量：5

14

作者 仪淑敏 李睿智 +6 位作者 陈杨 励建荣 李学鹏 徐永霞 李春 丁浩宸 郁晓君 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第1期41-46,共6页

以白鲢鱼为研究对象,建立并优化其肌原纤维蛋白的双向电泳技术。结果表明,选用固相p H值梯度预制胶条p H 4~7,上样量120μg,等电聚焦程序Ⅲ(50 V主动水化15 h,250 V、2 h,1 000 V、2.5 h及4 000 V、3 h三段式除盐,8 000 V、2 h和10 000 ... 以白鲢鱼为研究对象,建立并优化其肌原纤维蛋白的双向电泳技术。结果表明,选用固相p H值梯度预制胶条p H 4~7,上样量120μg,等电聚焦程序Ⅲ(50 V主动水化15 h,250 V、2 h,1 000 V、2.5 h及4 000 V、3 h三段式除盐,8 000 V、2 h和10 000 V、1.5 h两段式升压,10 000 V聚焦80 000 V·h,500 V保持10 h)以及12%的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶条件下进行双向电泳,凝胶银染后用PDQuest软件分析,得到具有高分离度的肌原纤维蛋白双向电泳图谱,蛋白点清晰。 展开更多

关键词 白鲢鱼 肌原纤维蛋白 双向电泳

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成年无精子症男性睾丸活检组织双向电泳分析技术的初步建立及其优化 被引量：5

15

作者 李飞 邹亚光 +6 位作者 赵亮 周其赵 李铁求 郭文兵 景晓玮 李建明 毛向明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第24期4139-4142,共4页

目的:建立并优化成年无精子症男性睾丸活检组织双向凝胶电泳图谱。方法:采用固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳分离技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析双向凝胶电泳技术(2-DE)图谱。对聚... 目的:建立并优化成年无精子症男性睾丸活检组织双向凝胶电泳图谱。方法:采用固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向的双向电泳分离技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析双向凝胶电泳技术(2-DE)图谱。对聚焦参数的设置和样品的处理等步骤进行优化。结果:优化后成功地获得了成年无精子症男性睾丸活检组织分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。结论:应用2-DE初步建立了成年无精子症男性睾丸活检组织分辨率较高且重复性好双向凝胶电泳图谱,为从睾丸蛋白质组学水平进一步研究无精子症奠定了基础。 展开更多

关键词 无精子症 双向凝胶电泳 睾丸 蛋白质组

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双向电泳技术分离燕窝水溶性蛋白 被引量：5

16

作者 郭丽丽 吴亚君 +4 位作者 刘鸣畅 王斌 韩建勋 葛毅强 陈颖 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第24期97-101,共5页

为研究燕窝功效成分以及建立燕窝真伪检测和质量分级体系,采用双向电泳技术分离了燕窝水溶性蛋白。以印度尼西亚苏门答腊岛毛燕为材料,从提取溶剂、提取条件、水化上样缓冲液和分离胶体积分数4个方面对燕窝蛋白双向电泳技术进行优化。... 为研究燕窝功效成分以及建立燕窝真伪检测和质量分级体系,采用双向电泳技术分离了燕窝水溶性蛋白。以印度尼西亚苏门答腊岛毛燕为材料,从提取溶剂、提取条件、水化上样缓冲液和分离胶体积分数4个方面对燕窝蛋白双向电泳技术进行优化。结果表明:以超纯水作为提取溶剂,60℃静置提取6h,以8mol/L尿素、4g/100mL CHAPS、65mmol/L DTT、0.2%(体积分数)Bio-Lyte 4/6 Ampholyte、0.1%Bio-Lyte 5/8 Ampholyte、0.001g/100mL溴酚蓝组成的溶液作为水化上样缓冲液,采用8%的分离胶体积分数可获得高分离度、高重复性的燕窝蛋白双向电泳图谱。同时,采用4个不同的燕窝样品对所建立的方法进行验证,证实了方法的可靠性。 展开更多

关键词 燕窝 蛋白质 提取 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 双向电泳

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不同生态型芦苇叶片蛋白质双向电泳系统的筛选和优化 被引量：9

17

作者 林文芳 陈林姣 +1 位作者 彭浩 朱学艺 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1209-1214,共6页

通过优化组合植物蛋白质提取方法及与之匹配的蛋白质裂解液,采用改进的O′Farrel双向电泳系统,以自然生境野生芦苇叶片为材料,筛选出一种适合纤维含量高、革质化明显的4种不同生态型芦苇(水生芦苇、轻度盐化草甸芦苇、重度盐化草甸芦苇... 通过优化组合植物蛋白质提取方法及与之匹配的蛋白质裂解液,采用改进的O′Farrel双向电泳系统,以自然生境野生芦苇叶片为材料,筛选出一种适合纤维含量高、革质化明显的4种不同生态型芦苇(水生芦苇、轻度盐化草甸芦苇、重度盐化草甸芦苇、沙丘芦苇)叶片蛋白质分析的双向电泳系统,即以饱和酚-醋酸铵/甲醇沉淀法提取叶片蛋白质样品,经裂解液[8mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS,65mmol/LDTT,2%Ampholine(pH3.5￣10∶pH5￣8=1∶4)]裂解后按80!g上样,银染后获得背景清晰、蛋白质分辨率较高的双向电泳图谱.该系统用于水稻等植物叶片蛋白质双向电泳分析,同样获得较好的电泳图谱和分辨率. 展开更多

关键词 芦苇 不同生态型 蛋白质制样 裂解液 双向电泳

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桃叶片总蛋白双向电泳技术的研究 被引量：4

18

作者 杜保伟 李成斌 +1 位作者 熊明国 李靖 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期752-755,共4页

采用改进的O'Farrell双向电泳系统,研究适于桃树叶片蛋白质组分析的双向电泳方法。通过对不同蛋白样品提取方法、不同pH梯度范围、不同上样量的比较,探索出一套适合桃树叶片总蛋白分析的双向电泳方法,即以TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋... 采用改进的O'Farrell双向电泳系统,研究适于桃树叶片蛋白质组分析的双向电泳方法。通过对不同蛋白样品提取方法、不同pH梯度范围、不同上样量的比较,探索出一套适合桃树叶片总蛋白分析的双向电泳方法,即以TCA/丙酮沉淀法提取叶片蛋白质样品,采用两性电解质配比pH3～10︰pH5～7为1∶4的IEF胶条,按90μg蛋白上样量,并结合适宜的双向电泳参数,可获得背景清晰、重复性较好、蛋白分辨率高的双向电泳图谱。经此方法分离的桃叶片蛋白质经串联质谱分析(MS/MS)得到了较好的鉴定。 展开更多

关键词 桃 叶片 蛋白质 双向电泳

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海滨木槿叶片蛋白质双向电泳体系的建立 被引量：6

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作者 李翠云 姜彦成 +3 位作者 乔桂荣 刘明英 蒋晶 卓仁英 《西南林业大学学报（自然科学）》 CAS 2012年第4期30-35,共6页

为建立一套适合海滨木槿叶片蛋白质组学分析的双向电泳体系,以海滨木槿无性系叶片为材料,分别采用裂解液法、三氯乙酸-丙酮沉淀法、改良酚抽法分离纯化蛋白质,选用24 cm pH 3～10的IPG胶条,并对不同上样量、等电聚焦程序、平衡时间等电... 为建立一套适合海滨木槿叶片蛋白质组学分析的双向电泳体系,以海滨木槿无性系叶片为材料,分别采用裂解液法、三氯乙酸-丙酮沉淀法、改良酚抽法分离纯化蛋白质,选用24 cm pH 3～10的IPG胶条,并对不同上样量、等电聚焦程序、平衡时间等电泳条件进行优化。结果表明:采用改良酚抽法提取蛋白质,上样量为每IPG胶条1 000μg,总聚焦功率90 kV.h,平衡时间15 min,胶体考马斯亮蓝染色,可得到蛋白质点数目多、分辨率高的双向电泳图谱。重复性试验结果显示,该体系具有很好的稳定性及可重复性,可满足海滨木槿蛋白质组学研究的要求。 展开更多

关键词 海滨木槿 耐盐 蛋白质 双向电泳

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大豆雄性不育系与其保持系不同器官蛋白质比较 被引量：5

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作者 曾维英 杨守萍 +1 位作者 喻德跃 盖钧镒 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1619-1624,共6页

采用双向凝胶电泳技术对大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A及其保持系NJCMS2B的种子、叶片和花药等不同器官蛋白质进行比较分析.结果显示,不育系NJCMS2A与其保持系NJCMS2B的花药2-DE图谱间存在较多差异表达蛋白点,种子2-DE图谱间仅有少量... 采用双向凝胶电泳技术对大豆质核互作雄性不育系NJCMS2A及其保持系NJCMS2B的种子、叶片和花药等不同器官蛋白质进行比较分析.结果显示,不育系NJCMS2A与其保持系NJCMS2B的花药2-DE图谱间存在较多差异表达蛋白点,种子2-DE图谱间仅有少量差异表达蛋白点,而叶片2-DE图谱间基本没有差异表达蛋白点.结果表明,不育基因表达具有时空性和器官特异性,与育性有关的蛋白主要在花药中表达. 展开更多

关键词 大豆 质核互作雄性不育 双向凝胶电泳(2-de) 蛋白质

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