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利用梯度PCR和降落PCR扩增CIRP基因的比较 被引量:12
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作者 李玉恒 赵明慧 +7 位作者 赵紫阳 李峥 袁雪 李昌盛 林增 胡婧 李俭 李士泽 《黑龙江八一农垦大学学报》 2011年第5期46-49,75,共5页
提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明:降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也... 提取SD大鼠总RNA,同时应用降落PCR和梯度PCR在常规PCR反应体系和低模板浓度PCR反应体系中扩增CIRP基因片段,对两种方法的扩增效果进行比较。结果表明:降落PCR法可以通过一次反应即顺利扩增出CIRP基因特异性条带,并且在模板浓度降低后也能扩增出产物;梯度PCR法扩增结果不稳定,不但有非特异性条带出现而且不能检测出低浓度模板的存在。结论:降落PCR省略了梯度PCR摸索最适退火温度的过程,并且其灵敏度和特异性均高于梯度PCR。 展开更多
关键词 降落pcr 梯度pcr 退火温度 CIRP基因
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触减PCR在扩增抗体重链和轻链可变区中的应用 被引量:1
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作者 秦琴 刘建荣 +2 位作者 王毅民 董丽娜 高嵩丹 《山西医科大学学报》 CAS 2010年第1期91-93,共3页
目的探讨扩增人免疫球蛋白重链和轻链可变区基因的方法。方法提取经免疫的具有乙肝表面抗体的人外周血淋巴细胞总RNA,反转录合成cDNA,采用普通PCR和触减PCR两种方法扩增抗体重链和轻链可变区基因。结果利用触减PCR方法,扩增出抗体重链... 目的探讨扩增人免疫球蛋白重链和轻链可变区基因的方法。方法提取经免疫的具有乙肝表面抗体的人外周血淋巴细胞总RNA,反转录合成cDNA,采用普通PCR和触减PCR两种方法扩增抗体重链和轻链可变区基因。结果利用触减PCR方法,扩增出抗体重链和轻链的可变区基因,基因片段分别约为340bp和325bp,而普通PCR没有得到预期的结果。结论触减PCR比普通PCR更容易扩增出抗体可变区基因片段。 展开更多
关键词 触减pcr 噬菌体展示技术 抗体库
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基于不同程序的甜菜CBDP核心引物的筛选
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作者 宋玥 吴则东 《中国糖料》 2025年第1期23-30,共8页
【目的】旨在选出高多态性、高稳定性、可重复性好的核心引物,并找到更适合筛选甜菜CBDP引物扩增的PCR程序。【方法】利用3种不同的PCR程序,对39条CBDP引物进行筛选,并通过此3种PCR程序的扩增结果进行比较分析。【结果】Touch Down程序... 【目的】旨在选出高多态性、高稳定性、可重复性好的核心引物,并找到更适合筛选甜菜CBDP引物扩增的PCR程序。【方法】利用3种不同的PCR程序,对39条CBDP引物进行筛选,并通过此3种PCR程序的扩增结果进行比较分析。【结果】Touch Down程序扩增结果优于固定退火温度55℃以及低退火温度的程序,基于最优退火温度从39条CBDP引物中筛选出9条多态性好的CBDP引物,这9条引物扩增出的总条带数为76条,多态性条带为72条,多态百分比为94.7%。多态性信息量范围在0.552~0.913,引物的平均PIC值为0.762。【结论】CBDP核心引物的筛选为进一步研究甜菜种质资源的遗传多样性提供了新的思路,为利用分子标记辅助育种等相关研究奠定了基础。 展开更多
关键词 甜菜 降落pcr CBDP引物 分子标记 核心引物
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蓖麻毒蛋白A链基因克隆与重复表达载体构建 被引量:2
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作者 黄凤兰 李国瑞 +2 位作者 萨日娜 陈永胜 阎秀峰 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期167-172,共6页
利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的... 利用降落PCR的方法,从蓖麻基因组DNA中克隆毒蛋白A链基因的560bp片段;利用一步法将该基因的2个正义片段和2个反义片段分别与pB I-121质粒连接,构建含该基因的正义重复和反义重复表达载体,为利用共抑制技术抑制蓖麻毒蛋白A链基因表达的研究奠定基础。 展开更多
关键词 蓖麻毒蛋白 重复表达载体 降落pcr 一步法 共抑制
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基于微卫星标记鉴定湖羊家系 被引量:8
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作者 赵志达 王欣悦 +3 位作者 石田培 胡文萍 尚明玉 张莉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第11期3573-3583,共11页
试验旨在基于微卫星(simple sequence repeats,SSR)多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA... 试验旨在基于微卫星(simple sequence repeats,SSR)多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA023、ETH152和MCM527。采集30只湖羊种公羊血液,使用试剂盒提取血液基因组DNA,合成筛选出的9个微卫星引物并使用荧光基团标记,利用降落式PCR进行扩增,扩增产物在基因分型后使用CERVUS3.0.7进行基因型分析,使用POPGENE1.32基于Nei氏遗传距离构建树状聚类图,根据图示的亲缘关系远近划分湖羊家系。结果显示,当双亲基因型未知时,9个微卫星位点的单亲累积排除概率为99.2094%;当单亲基因型已知时,9个微卫星位点的累积排除概率为99.9688%;当双亲基因型未知时9个微卫星位点的双亲累积排除概率为99.9999%,排除概率能够满足遗传育种中亲子鉴定和系谱分析的要求。根据Nei氏遗传距离构建UPGMA聚类图,将30只种公羊划分为6个家系,为育种工作提供了一定参考。本方法能够进行湖羊家系的鉴定与划分,对湖羊育种工作具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 湖羊 微卫星标记 降落pcr 家系鉴定
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人抵抗素基因全长的体外拼接及真核表达载体的构建
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作者 乔小芝 王宪锋 +4 位作者 赵冬久 徐哲荣 俞玲娣 陈智 杨云梅 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 2007年第6期588-591,609,共5页
目的:利用合成的寡核苷酸片段,在体外拼接人抵抗素(Resistin,Retn)基因的全长,并构建其真核表达载体。方法:根据已知抵抗素基因(GenBank:AF323081),设计并合成10条寡核苷酸片段,采用降落PCR方法进行拼接,获得预期大小的PCR产物后将其克... 目的:利用合成的寡核苷酸片段,在体外拼接人抵抗素(Resistin,Retn)基因的全长,并构建其真核表达载体。方法:根据已知抵抗素基因(GenBank:AF323081),设计并合成10条寡核苷酸片段,采用降落PCR方法进行拼接,获得预期大小的PCR产物后将其克隆入pSecTag2B载体进行测序确认。结果:降落PCR法扩增的特异条带与目的基因的大小一致。克隆载体测序结果与GenBank中已知序列完全符合。结论:降落PCR成功地拼接和扩增了人抵抗素全长基因,并构建了含有该基因的真核表达载体,为进一步研究该基因的功能奠定了实验基础。 展开更多
关键词 激素类 异位 寡核苷酸类 聚合酶链反应 基因扩增 人Resistin基因 降落pcr 表达载体
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