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Gateway球囊扩张治疗症状性大脑中动脉重度狭窄患者效果评价
1
作者 周兴磊 魏锋 +3 位作者 吴胤菲 雷剑伟 宋思辉 宋书欣 《介入放射学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第10期1106-1110,共5页
目的评价Gateway球囊扩张术治疗症状性大脑中动脉重度狭窄的效果。方法回顾性分析2019年5月至2022年8月南昌大学第二附属医院收治的98例症状性大脑中动脉重度狭窄患者临床及影像学资料。分析Gateway球囊扩张治疗前后狭窄血管直径,狭窄... 目的评价Gateway球囊扩张术治疗症状性大脑中动脉重度狭窄的效果。方法回顾性分析2019年5月至2022年8月南昌大学第二附属医院收治的98例症状性大脑中动脉重度狭窄患者临床及影像学资料。分析Gateway球囊扩张治疗前后狭窄血管直径,狭窄段收缩期峰值血流速度(PSV)、舒张末期血流速度(EDV),狭窄病变Mori分型,手术并发症,影像学及临床随访结果等。结果98例患者中Mori分型A型83例(84.69%),B型15例(15.31%)。所有患者Gateway球囊扩张治疗均获成功。术后症状均有不同程度改善或稳定。狭窄病变残余管腔直径由术前(2.01±0.13)mm显著增大至术后(2.33±0.25)mm,狭窄程度由术前(81.28±15.17)%显著降低至术后(50.24±12.83)%,PSV、EDV分别由术前(251.01±60.13)cm/s、(104.28±32.25)cm/s显著降低至术后(155.33±53.28)cm/s、(70.24±36.33)cm/s,差异有统计学意义(均P<0.05)。7例患者出现手术并发症,症状随后得到改善。临床随访10个月,88例(89.79%)患者改良Rankin量表(mRS)评分≤2分,显示生活质量和功能恢复良好。结论Gateway球囊扩张治疗症状性大脑中动脉重度狭窄远期疗效显著,手术并发症少,是治疗该类疾病的有效手段。 展开更多
关键词 gateway球囊扩张 大脑中动脉重度狭窄 狭窄分型 狭窄程度
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Gateway技术构建酵母双杂分析用辣椒cDNA文库 被引量：11
2
作者 邱爱连 刘林林 +5 位作者 蔡汉阳 朱万里 黄木坤 陈雄 何水林 张健 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期791-796,共6页
构建cDNA文库是利用酵母双杂交技术开展特定cDNA分离的重要基础工作。利用Gateway技术,在成功提取辣椒总RNA并分离mRNA的基础上,合成了3种读码框的双链cDNA,通过BP反应构建其相应的入门文库,再通过LR反应将cDNA迅速且定向地重组到酵母... 构建cDNA文库是利用酵母双杂交技术开展特定cDNA分离的重要基础工作。利用Gateway技术,在成功提取辣椒总RNA并分离mRNA的基础上,合成了3种读码框的双链cDNA,通过BP反应构建其相应的入门文库,再通过LR反应将cDNA迅速且定向地重组到酵母双杂分析用目的载体pDESTTM22上,构建成高质量目的文库。经检测入门文库和目的文库滴度均达到(4.0～5.0)×106cfu/mL,文库总容量为(2.4～3.0)×107cfu,平均插入片段大小为1250bp,其质量完全满足于进一步利用酵母双杂体系分析目的基因互作蛋白cDNA。 展开更多
关键词 辣椒 入门文库 目的文库 gateway 酵母双杂
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基于Gateway技术的低成本植物双分子荧光互补分析系统 被引量：6
3
作者 周洁 王栩鸣 +5 位作者 陈斌 陈娟 杨勇 余初浪 严成其 陈剑平 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期1024-1030,共7页
创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染... 创制基于Gateway重组技术的双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)载体,同时创制低成本低克隆背景的Gateway入门载体。利用入门载体,采用Gateway技术快速将目标基因重组到BiFC目标载体,并采用农杆菌注射侵染烟草的方法观察荧光互作结果。构建的Gateway入门载体,由于带有ccdB基因,非线性化的载体无法在ccdB敏感菌株中生长,因此消除了载体本身的背景。同时由XcmⅠ酶切后产生的T突出,可以很好地与PCR产物结合,连接效率和普通商业化T载体一致。此外,由于载体可由实验室自行制备且采用了TA克隆,创制入门克隆的成本大大降低。借助该研究改造的BiFC目标载体,目的基因能快速地重组到目的载体用于基因互作鉴定。利用本研究构建的Gateway系统,能够以较低成本快速的进行基因克隆和互作研究。 展开更多
关键词 入门载体 BIFC 基因互作 gateway
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使用与Gateway技术兼容的T载体获得入门克隆 被引量：10
4
作者 陈其军 安瑞 +2 位作者 周海梦 陈珈 王学臣 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期951-954,共4页
与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与... 与Gateway技术兼容的农杆菌双元载体系统已开始应用于植物功能基因组的研究 ,但应用这些载体系统的一个瓶颈问题 ,是如何简单、经济和高效地将PCR产物或其他来源的目的DNA片段构建到入门载体上获得入门克隆 .为此 ,将传统的TA克隆技术与Gateway重组克隆技术进行整合 ,构建了与Gateway技术兼容的两种TA克隆载体 ,用于在克隆PCR产物或其他来源的目的DNA片段的同时获得入门克隆 .利用兼容Gateway技术的TA克隆载体有效地解决了上述瓶颈问题 . 展开更多
关键词 gateway克隆技术 TA克隆技术 入门载体 T载体 入门克隆
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Gateway技术构建结缕草低温和干旱诱导cDNA文库及其质量鉴定 被引量：11
5
作者 王舟 宗俊勤 +1 位作者 郭海林 刘建秀 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期911-917,共7页
为研究结缕草(Zoysia japonica)胁迫响应信号转导途径中的关键基因,揭示结缕草抗逆分子机制,建立结缕草功能基因组学研究基础平台,以经低温、干旱处理的结缕草为材料,采用Gateway技术构建了首个结缕草低温和干旱诱导的标准cDNA文库。文... 为研究结缕草(Zoysia japonica)胁迫响应信号转导途径中的关键基因,揭示结缕草抗逆分子机制,建立结缕草功能基因组学研究基础平台,以经低温、干旱处理的结缕草为材料,采用Gateway技术构建了首个结缕草低温和干旱诱导的标准cDNA文库。文库质量分析表明,未扩增的原始文库滴度1.76×106 pfu.mL-1,库容7.04×106 pfu,插入片段平均大小大于1kb,重组率90%。文库质量优良,可能包含大量新基因,不仅能为结缕草功能基因组分析提供必要资源,也可为后期进行高通量EST测序、发掘新抗逆相关基因、制作基因芯片等研究奠定基础。 展开更多
关键词 结缕草 CDNA文库 低温胁迫 干旱胁迫 构建 gateway技术
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单子叶植物RNA干扰和过表达Gateway载体的构建 被引量：10
6
作者 毕惠惠 王根平 +1 位作者 王成社 夏兰琴 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期115-123,共9页
基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础,RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambd... 基因枪和农杆菌介导的遗传转化是目前常用的两种单子叶植物遗传转化方法。载体的发展和改良是提高植物遗传转化效率的重要基础,RNA干扰载体和过表达载体是目前通过遗传转化研究植物基因功能的主要工具。Gateway克隆技术是一种基于lambda噬菌体特异位点重组特性的通用克隆技术,该技术可以将大批目的基因方便、快捷地连接到受体载体上。本文利用Gateway技术结合传统酶切、连接方法,构建了适用于单子叶植物基因枪和农杆菌转化的RNA干扰Gateway载体pAHC-PSK-RNAi、pClean-G185-RNAi和过表达Gateway载体pAHC-PSK-OE和pClean-G185-OE,为利用基因枪和农杆菌介导的遗传转化,在小麦和水稻等单子叶植物中进行规模化基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 单子叶植物 遗传转化 RNA干扰 过表达 gateway
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番茄核体系酵母文库的构建及ToCV CP互作蛋白的筛选
7
作者 王利娜 高亢 +5 位作者 康忱 田哲娟 李亚栋 王鹏 李朝炜 吴志明 《华北农学报》 北大核心 2025年第3期34-43,共10页
旨在从cDNA文库中筛选潜在与番茄褪绿病毒(ToCV)外壳蛋白(CP)互作的蛋白,探究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能,以应对当前越夏、秋延后番茄生产中因番茄褪绿病毒病大肆传播而致使番茄产量和品质严重受影响的状况。以感染ToCV的Mon... 旨在从cDNA文库中筛选潜在与番茄褪绿病毒(ToCV)外壳蛋白(CP)互作的蛋白,探究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能,以应对当前越夏、秋延后番茄生产中因番茄褪绿病毒病大肆传播而致使番茄产量和品质严重受影响的状况。以感染ToCV的Moneymaker番茄品种作为试验材料,采用Gateway技术构建感染ToCV的番茄核体系酵母cDNA文库,并构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-CP(CP-BD)。以CP为诱饵蛋白,通过核体系酵母文库筛选出上百种参与多种生理过程的潜在互作蛋白,并进一步通过一对一的酵母双杂交验证以及NCBI BLAST比对确定与ToCV CP互作的相关蛋白。构建了核体系酵母文库,初级文库总克隆数为1.60×10^(7),重组率达100%,平均插入片段长度超过1000 bp;次级文库总克隆数同样为1.60×10^(7),重组率为100%,平均插入片段长度大于1000 bp,达到质量标准,满足后续酵母杂交试验的条件。由文库筛选得到的ToCV CP互作蛋白涵盖了细胞过程、生物调节、细胞物质运输等类别,其中在病毒复制和运输、侵染宿主细胞以及调节宿主细胞的代谢和细胞周期等生物过程相关的蛋白数量较多。此外,还涉及蛋白质结合、核酸结合、水解酶活性等相关蛋白,其中RNA酶最为丰富,在病毒侵染过程中发挥重要作用。最终确定了HSPs、DnaJ与TCPs等30种与ToCV CP互作的蛋白,为后续深入研究ToCV的侵染机制及CP在侵染过程中的功能奠定了良好基础。 展开更多
关键词 番茄褪绿病毒 外壳蛋白 gateway技术 酵母双杂交 核体系
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利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体 被引量：3
8
作者 王聪颖 陈书霞 +5 位作者 陈巧 郝丽宁 孟焕文 万旭花 申晓青 程智慧 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期152-158,共7页
为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入... 为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323bp的片段进行测序,测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上,通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8,构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi,分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323bp的片段,与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8-HPLi转化农杆菌GV3101,经菌液PCR扩增获得323bp的目的条带,表明RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi已成功转入农杆菌中。 展开更多
关键词 黄瓜 HPL基因 RNAi干扰 克隆载体 表达载体 gateway技术
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乳酸杆菌组成型启动子探测载体pgateway-612的构建 被引量：2
9
作者 陈家锃 崔红玉 +4 位作者 田志军 葛俊伟 安同庆 彭金美 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期849-853,共5页
为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编... 为筛选适宜乳酸菌(LAB)宿主表达载体的启动子,本研究以大肠杆菌-LAB穿梭载体pPG612为基本骨架,利用GatewayTM克隆技术操作构建了LAB组成型启动子探测载体,并利用该载体筛选了短乳杆菌的S层启动子。我们利用底物X-gluC与报告基因gusA编码的蛋白酶之间的特异性显色反应筛选阳性菌落,超声破碎后的菌体蛋白经SDS-PAGE和western blot分析表明该启动子在宿主菌中具有组成型启动子活性。本研究为进一步利用表达载体及筛选其他LAB启动子奠定基础。 展开更多
关键词 乳酸菌 启动子探测载体 gateway克隆技术 X-gluC
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利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库 被引量：4
10
作者 李梦辉 刘连瑞 +6 位作者 涂浩 黄经纬 张振超 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期630-635,共6页
[目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建... [目的]为了寻找可用于研制高效重组疫苗的抗原基因,利用gateway技术构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库。[方法]首先从新鲜分离的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊中提取总RNA并分离纯化mRNA,用Clone MinerTMⅡcDNA文库构建试剂盒构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库,然后将cDNA从初级文库重组到p VAX1.0上,构建巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA表达文库,最后用7个已知巨型艾美耳球虫基因的引物鉴定文库。[结果]构建的巨型艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA初级文库总容量为0.92×107CFU,插入片段平均大小为1.63 kb;表达文库总容量为2.32×107CFU,插入片段平均大小为1.64 kb。两种文库的阳性重组率均为100%。能用特异性引物从该表达文库扩增出7个已知的巨型艾美耳球虫基因。[结论]该文库质量高,代表性强,为进一步筛选免疫保护性抗原基因奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 巨型艾美耳球虫 孢子化卵囊 gateway技术 CDNA表达文库
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Gateway技术构建小鼠血管生成素-1慢病毒表达载体及其病毒包装 被引量：2
11
作者 李秋平 马新娜 +4 位作者 张小英 许靖 章晟 王春枝 封志纯 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期866-870,共5页
目的构建携带小鼠血管生成素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂... 目的构建携带小鼠血管生成素-1(Ang-1)基因的慢病毒载体并进行慢病毒包装。方法利用Gateway技术构建携带DsRed荧光蛋白的Ang-1慢病毒载体,经PCR及基因测序鉴定后,与辅助质粒pLV/helper-SL3、pLV/helper-SL4及pLV/helper-SL5混合采用脂质体法制备DNA-Lipofectamine 2000复合物,并共同转染293FT细胞进行慢病毒包装,产生相应慢病毒颗粒,通过荧光表达情况来测定病毒滴度和感染效率。结果通过PCR、基因测序证实,Ang-1慢病毒表达载体PLV.Ex3d.P/puro-CMV>Ang-1>IRES/DsRed-Express2构建成功。经转染293FT细胞包装出具高效感染力的慢病毒,经测定病毒滴度为5×108TU/ml。结论成功构建Ang-1慢病毒表达载体,并包装出具高效感染力的慢病毒颗粒,为进一步研究Ang-1基因功能及基因治疗提供实验基础。 展开更多
关键词 血管生成素-1 慢病毒 载体 gateway技术
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小麦TaWRKY46-1基因克隆及建立在Gateway技术上的可诱导表达载体的构建 被引量：2
12
作者 李明 丁博 +5 位作者 牛有雄 吕芳芳 杨文丽 Silin Zhong 孙守钧 谢晓东 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第2期17-22,共6页
以小麦品种扬麦158为材料,根据NCBI中小麦TaWRKY46基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从小麦总RNA中分离了大小为870 bp的cDNA片段。测序表明,该片段与NCBI中已克隆的小麦TaWRKY46基因高度同源,包含完整的读码框,值得注意的是此蛋白保守... 以小麦品种扬麦158为材料,根据NCBI中小麦TaWRKY46基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从小麦总RNA中分离了大小为870 bp的cDNA片段。测序表明,该片段与NCBI中已克隆的小麦TaWRKY46基因高度同源,包含完整的读码框,值得注意的是此蛋白保守氨基酸序列WRKYGQK突变为WRKYGEK,为TaWRKY46的新等位基因,命名为TaWRKY46-1。采用Gateway克隆技术构建了该基因的可诱导型超量表达载体,并转化农杆菌,为接下来转基因验证TaWRKY46-1的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 小麦 WRKY转录因子 gateway克隆技术 可诱导表达载体
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利用Gateway技术改造原核表达载体pGEX-4T-1、pET-28a 被引量：1
13
作者 胡丽松 邬华松 +3 位作者 郝朝运 谭乐和 范睿 吴刚 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2015年第8期1445-1450,共6页
质粒载体是基因工程研究中不可或缺的工具。为提高载体构建效率,进一步满足基因工程研究在构建表达载体时的需要,本文提供了一种重组型载体的改造策略。基本流程如下:利用带BglⅡ、XhoⅠ酶切位点以及att B重组序列的引物,从Gateway的入... 质粒载体是基因工程研究中不可或缺的工具。为提高载体构建效率,进一步满足基因工程研究在构建表达载体时的需要,本文提供了一种重组型载体的改造策略。基本流程如下:利用带BglⅡ、XhoⅠ酶切位点以及att B重组序列的引物,从Gateway的入门载体p DONR Zeo中克隆到"BglⅡ-att B1-ccd B-att B2-XhoⅠ"片段。通过酶切连接的方法,将该片段插入到原核表达载体p GEX-4T-1以及p ET-28a的多克隆位点,构建具有重组位点以及ccd B致死基因的原核表达载体。以胡椒High mobility group protein(HMGB)基因的开放读码框为目标片段,通过重组反应将目的基因构建到改造后的原核表达载体上,经检测体外诱导表达出大小正确的HMGB蛋白,验证本研究中改造载体的正确性。该载体的成功构建,为基因工程科研工作提供了一个高效的蛋白表达载体以及载体改造的新策略。 展开更多
关键词 gateway技术 载体改造 胡椒PnHMGB 原核表达
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利用Gateway技术构建重组腺病毒pAd-NK4 被引量：6
14
作者 阙文忠 陈君敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期462-467,共6页
目的利用Gateway技术构建含人肝细胞生长因子(HGF)NK4基因的重组腺病毒载体。方法以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因,将回收的NK4PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4。从该重... 目的利用Gateway技术构建含人肝细胞生长因子(HGF)NK4基因的重组腺病毒载体。方法以含有HGF/NK4基因的质粒为模板PCR扩增NK4基因,将回收的NK4PCR产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-6获得重组质粒pYr-adshuttle-6-NK4。从该重组质粒上,利用LR同源重组将NK4-IRES-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAD/BL-DEST,获得重组腺病毒质粒pAd-NK4-IRES-EGFP。该质粒经pacI线性化后转染293包装细胞,获得重组腺病毒rAd-NK4-IRES-EGFP。采用TCID 50(tissue cell infectiousdosage 50,TCID 50)法测定重组腺病毒滴度。重组腺病毒分别经酶切和PCR等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。结果证实腺病毒载体中含有NK4基因的目的片段;病毒滴度为6.3×1011 PFU.L-1;荧光显微镜发现该重组腺病毒能在HEK293细胞中高效的表达。结论利用Gateway技术可以快速地构建同时表达NK4蛋白和绿色荧光的重组腺病毒,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础。 展开更多
关键词 腺病毒 gateway技术 人肝细胞生长因子 NK4 基因治疗 肿瘤
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Gateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉慢性狭窄的疗效观察 被引量：3
15
作者 袁波 李慎茂 +3 位作者 缪中荣 朱凤水 焦力群 凌锋 《中国脑血管病杂志》 CAS 2011年第5期265-269,共5页
目的评价Gateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉狭窄的安全性及有效性。方法回顾性分析20例应用Gateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉慢性狭窄患者的临床资料,观察支架置入的手术成功率、狭窄率的改变、围手术期并发症及术后... 目的评价Gateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉狭窄的安全性及有效性。方法回顾性分析20例应用Gateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉慢性狭窄患者的临床资料,观察支架置入的手术成功率、狭窄率的改变、围手术期并发症及术后症状改善的情况。结果①20例基底动脉狭窄病变,共置入20枚Wingspan支架,技术成功率为100%。②术后即刻造影证实,狭窄率由(79.0±6.0)%下降至(13.0±3.4)%。围手术期1例发生小脑前下动脉闭塞,导致脑干梗死。③本组在术后1、3、6个月进行随访,根据Malek评分,术后3次评分均为1分者共12例(60%),均为2分者2例(10%),均为3分者1例(5%)。这15例患者的病情稳定,其中12例疗效肯定;其余5例术后早期疗效明显,但以后有所下降,其中有3例(15%)1个月时评分为1,3个月时转为2分;有2例(10%)1、3个月为1分,6个月时转为2分。结论经短期随访发现,采用Cateway-Wingspan球囊支架系统治疗基底动脉狭窄安全性及疗效均良好。 展开更多
关键词 基底动脉 缩窄 病理性 血管成形术 gateway—Wingspan球囊支架系统
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计算机检修管理系统中Gateway的设计与性能测试 被引量：1
16
作者 贾晓楠 吴俊勇 《电力自动化设备》 EI CSCD 北大核心 2008年第1期98-100,共3页
针对电厂状态检修的实际需求,采用国产的三维力控软件平台与PI数据库和Oracle数据库相结合,完成了石嘴山电厂状态检修系统计算机检修管理系统(CMMS)的详细设计。其中,状态检修系统需要的绝大部分实时数据都取自厂级监控信息系统(SIS)的P... 针对电厂状态检修的实际需求,采用国产的三维力控软件平台与PI数据库和Oracle数据库相结合,完成了石嘴山电厂状态检修系统计算机检修管理系统(CMMS)的详细设计。其中,状态检修系统需要的绝大部分实时数据都取自厂级监控信息系统(SIS)的PI实时数据库,因此,PI数据库和力控实时数据库之间的接口Gateway的性能将直接决定整个状态检修系统的性能。采用VC/C++、PI数据库的API和力控平台的ActiveX控件,开发了PI和力控系统间的Gateway,并对Gateway的结构进行了优化。通过对软件平台中Gateway的极限测试表明,该软件平台能满足状态检修系统性能指标的要求。 展开更多
关键词 状态检修 CMMS 数据库 组态软件 gateway
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MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用
17
作者 王各各 李娇娜 +4 位作者 杜峰 邓舒 梁佳元 曹雅明 罗恩杰 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1068-1072,共5页
目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒... 目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。 展开更多
关键词 疟原虫 质粒 基因打靶 MultiSite gateway技术
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利用Gateway克隆技术构建人Hiwi腺病毒载体
18
作者 马宁 董晓燕 +2 位作者 姜艳芳 刘蒙蒙 刘子玲 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期898-903,I0004,共7页
目的:获得人的全长Hiwi编码区基因,构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Hiwi腺病毒载体,为进一步研究Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法:运用重叠延伸PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长;利用Gateway克隆技术将Hiwi编码... 目的:获得人的全长Hiwi编码区基因,构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的人Hiwi腺病毒载体,为进一步研究Hiwi诱导白血病干细胞分化和凋亡的作用和机制奠定基础。方法:运用重叠延伸PCR方法扩增Hiwi编码区基因全长;利用Gateway克隆技术将Hiwi编码区基因全长插入带有GFP的载体Flag-IRES-hrGFP中构建成为pDown-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP,再将克隆载体pDown-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP与表达载体pAV.Des1d进行同源重组反应,得到重组腺病毒载体pAV.Ex1d-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP。经PCR筛选阳性克隆提取重组腺病毒质粒,包装成重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒。结果:人Hiwi全长编码区基因克隆成功,经酶切及基因测序鉴定证实重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒构建成功。采用Lipofectamine法将Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP转染入HEK293A细胞中,在荧光显微镜下,可以观察到转染细胞中的绿色荧光。结论:成功构建重组Ad-Hiwi-3×flag-IRES-hrGFP腺病毒质粒,其可在HEK293A细胞内表达。 展开更多
关键词 Hiwi基因 腺病毒 重叠延伸聚合酶链反应 gateway克隆技术
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含发夹结构的Gateway质粒DNA测序方法改进
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作者 刘耘 熊家军 杨利国 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期441-444,共4页
Gateway克隆技术现已广泛用于cDNA文库构建。然而,用常规DNA测序程序对Gateway cDNA进行测序时,反向重复的att序列易形成发夹结构,导致测序质量较差,且测得的序列较短,成为Gateway克隆技术应用的限制因素。本研究报道了1种Gateway cDNA... Gateway克隆技术现已广泛用于cDNA文库构建。然而,用常规DNA测序程序对Gateway cDNA进行测序时,反向重复的att序列易形成发夹结构,导致测序质量较差,且测得的序列较短,成为Gateway克隆技术应用的限制因素。本研究报道了1种Gateway cDNA克隆高温变性测序方法,即在Gateway cDNA测序PCR反应之前,先将DNA在98℃预变性5 min,可有效防止测序峰值的快速下降,极显著地增加Gateway cDNA克隆测序长度(质量Q≥20的序列平均长度从528 bp提高到816 bp)。该方法在常规DNA测序程序的基础上仅新增了5 min的高温预变性,不增加任何实验成本和操作步骤,非常适合Gateway质粒DNA的大规模测序。 展开更多
关键词 gateway克隆系统 DNA测序 发夹 高温预变性
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利用Gateway技术构建神经元特异性人apoE4(1-272)真核表达质粒及鉴定
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作者 李子希 卢颖洁 +2 位作者 刘晓峰 冯曾义 陈娟 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期369-373,共5页
目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质... 目的构建神经元特异性人apoE4(1-272)片段的真核表达质粒,并转染小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a细胞)验证其表达,为后续利用该质粒构建转基因小鼠,并探讨其作用奠定实验基础。方法以同济医学院生物化学与分子生物学系实验室已有的人apoE4质粒为基础,利用Gateway技术设计引物,将人apoE4(1-272)片段克隆至pRP.EX3d载体上,并将神经元特异性启动子SYN1插入至人apoE4(1-272)片段之前,再借助IRES元件连接EGFP报告基因,构建pRP.EX3d-SYN1-apoE4(1-272)-IRES/EGFP重组表达质粒;经脂质体转染法将上述质粒转染至N2a细胞,转染24h后,荧光显微镜观察转染效率,并采用Western blot检测apoE4(1-272)蛋白的表达水平。结果成功构建神经元特异性表达人apoE4(1-272)的真核表达质粒,经测序鉴定各核心元件序列均正确无误,与预期结果相一致,且经转染N2a细胞观察到新构建质粒可顺利表达,Western blot检测结果显示apoE表达及分子量均与预期一致。结论成功构建了神经元特异性人apoE4(1-272)片段的表达质粒,并初步鉴定了其表达功能,为后续开展相关研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 apoE4(1-272) 神经元特异性表达 gateway技术
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