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聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT-PCR中的应用 被引量：12
1
作者 边杉 王颖 +4 位作者 于涛 丁选胜 吴梧桐 叶波平 奚涛 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期178-182,共5页
目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数... 目的 :探讨聚丙烯酰胺凝胶银染技术在半定量RT PCR中的应用。方法 :提取正常组大鼠和链脲佐菌素致糖尿病模型组大鼠心肌组织总RNA ,逆转录得到cDNA第一链 ,以此为模板进行PCR扩增 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术分析不同循环数及模板量与PCR产物量间的关系。结果 :PCR扩增反应在第 2 0～ 2 5个循环 ,起始模板量为 0 8～ 2 4 μg时 ,PCR产物量与起始模板量呈现较好的线性关系。 结论 :通过控制起始模板量 ,减少PCR循环数使目的基因的扩增处于PCR扩增指数期 ,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和DNA银染技术 。 展开更多
关键词 聚丙烯酰胺凝胶电泳 DNA银染 半定量rt-pcr
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小麦硫转运蛋白基因半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：14
2
作者 陈昕 王保莉 +1 位作者 曲东 张燕 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期309-313,共5页
为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(ST)的表达,选用小麦-αT ubu lin基因(T a)为内参照,提取小麦根系总RNA,反转录cDNA,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对PCR体系中M g2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性... 为进一步研究干旱胁迫下小麦硫转运蛋白基因(ST)的表达,选用小麦-αT ubu lin基因(T a)为内参照,提取小麦根系总RNA,反转录cDNA,同批异管对2个基因片段进行PCR扩增.通过对PCR体系中M g2+浓度、退火温度及循环次数的优化和对体系重复性、准确性的分析,最终建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系.该体系可用于比较不同小麦样品间硫转运蛋白基因的表达,且因为两对引物均垮内含子,其稳定RT-PCR体系,也为实验室建立小麦mRNA反转录体系提供了参考依据. 展开更多
关键词 小麦 硫转运蛋白 半定量rt pcr Α-TUBULIN
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绵羊MC4R基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：13
3
作者 张菊 杜立新 +1 位作者 李宏滨 魏彩虹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期804-810,共7页
本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 ... 本研究旨在对绵羊MC4R基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考牛MC4R基因序列设计引物,采用PCR技术克隆绵羊MC4R基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的绵羊MC4R基因全长1 919 bp,含有999 bp的完整CDS编码区,编码332个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与牛、人、猪、大鼠、小鼠MC4R基因对应序列的同源性分别为95.2%、68.8%、82.7%、76.6%、77.1%,预测的氨基酸序列同源性分别为97.0%、92.8%、93.7%、92.2%、91.6%。组织表达谱分析表明MC4R基因在各组织均不同程度的表达,其中在大脑表达量很高,其他组织较低。生物信息学预测MC4R蛋白功能发现,绵羊的MC4R蛋白存在7个跨膜螺旋结构域,同时预测MC4R存在10个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。结果表明,MC4R是一个非常保守的蛋白,在绵羊的生长发育中起着重要作用。 展开更多
关键词 黑素皮质素受体-4 基因克隆 半定量rt-pcr 生物信息学
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水分胁迫下小麦类脱水素基因表达的半定量RT-PCR分析 被引量：16
4
作者 张晓娟 张林生 杨颖 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期2158-2162,共5页
以‘郑引1号’小麦为材料,经水分胁迫后进行RT-PCR扩增,结果在胁迫条件下获得500bp的脱水素基因(wzy1-1)。利用半定量RT-PCR方法,分析‘陕合6号’和‘郑引1号’小麦在正常供水条件下及PEG6000胁迫后18、24和42h,以及复水6和12h时wzy1-1... 以‘郑引1号’小麦为材料,经水分胁迫后进行RT-PCR扩增,结果在胁迫条件下获得500bp的脱水素基因(wzy1-1)。利用半定量RT-PCR方法,分析‘陕合6号’和‘郑引1号’小麦在正常供水条件下及PEG6000胁迫后18、24和42h,以及复水6和12h时wzy1-1在叶片中的表达。结果表明:2个小麦品种中wzy1-1在水分胁迫后18h均有表达,至胁迫24、48h时表达量较18h均有所增多;复水6h后该基因表达迅速降低,至复水后12h表达消失。且该基因在‘陕合6号’(抗旱性较强)叶片中表达量较‘郑引1号’(抗旱性较弱)高,表明该基因的表达与小麦的抗旱性密切相关。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 水分胁迫 基因表达 小麦
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黄瓜RGA基因的半定量RT-PCR表达分析 被引量：6
5
作者 丁国华 许春梅 +2 位作者 于虹 周秀艳 秦智伟 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期659-664,共6页
以黄瓜(Cucumis sativusL.)抗霜霉病品种东农129为材料,利用RT-PCR半定量法研究了接种霜霉病菌(Pseudoperonospora cubensisRostow)、喷施水杨酸(SA)和氯化钙(CaCl2)等不同处理对黄瓜抗病基因类似序列(RGA)表达的影响.结果表明:CsRGA1和... 以黄瓜(Cucumis sativusL.)抗霜霉病品种东农129为材料,利用RT-PCR半定量法研究了接种霜霉病菌(Pseudoperonospora cubensisRostow)、喷施水杨酸(SA)和氯化钙(CaCl2)等不同处理对黄瓜抗病基因类似序列(RGA)表达的影响.结果表明:CsRGA1和CsRGA5基因的表达受霜霉病菌的侵染而启动或加强,外施SA和CaCl2都能够增强其表达;CsRGA4和CsRGA8属于组成型表达基因,其表达可能与霜霉病菌的侵染无关;CsRGA2的表达与外施SA和CaCl2缺乏密切关联. 展开更多
关键词 黄瓜 抗病基因类似序列 半定量rt-pcr 表达分析
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甘薯NPR1基因半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：8
6
作者 陈观水 潘大仁 +3 位作者 周以飞 林生 高丽华 杨志伟 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期56-59,共4页
为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准... 为进一步研究甘薯病原微生物的侵染对甘薯病程相关非表达子1基因(NPR1)表达的影响,以甘薯肌动蛋白(β-ac-tin)基因为内参照基因,提取甘薯叶片总RNA,反转录为cDNA,同批异管对该2个基因进行PCR扩增.通过对循环数的优化和对体系重复性、准确性的分析,建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系. 展开更多
关键词 甘薯 病程相关非表达子1(NPR1) 基因表达 半定量rt-pcr
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山羊子宫中LHR基因片段的克隆及半定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：3
7
作者 申颖 王慧 +3 位作者 王树迎 王立芹 侯衍猛 黄丽波 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2009年第2期6-10,共5页
【目的】进一步研究处于发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫中黄体生成素受体（LHR）mRNA表达量的变化，为探讨其对山羊生殖内分泌机制的作用规律提供理论依据。【方法】以GAPDH为内参照基因，从济宁青山羊的子宫组织中提取总RNA，用RT—... 【目的】进一步研究处于发情周期不同阶段的济宁青山羊子宫中黄体生成素受体（LHR）mRNA表达量的变化，为探讨其对山羊生殖内分泌机制的作用规律提供理论依据。【方法】以GAPDH为内参照基因，从济宁青山羊的子宫组织中提取总RNA，用RT—PCR方法扩增目的基因，进行克隆测序，并对半定量RT—PCR反应体系进行了优化。【结果】获得了济宁青山羊LHR mRNA的部分序列，长度约为286bp，与已报道的GenBank中羊的I。HRmRNA（序列号为AF379199）41～326bp序列同源性为100％。以此基因片段的阳性克隆为基础优化的半定量RT—PCR体系为：LHR基因的适宜循环数为30个，内参照GAPDH基因的循环数为26个，Mg^2＋浓度均为1．5mmol／L。【结论】克隆了山羊LHRmRNA的部分序列，并建立了优化的半定量RT—PCR体系。 展开更多
关键词 半定量rt—pcr LHR MRNA 基因克隆 山羊
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半定量RT-PCR技术的研究及应用 被引量：12
8
作者 金凤媚 薛俊 +1 位作者 郏艳红 刘仲齐 《天津农业科学》 CAS 2008年第1期10-13,共4页
介绍了半定量逆转录多聚合酶链式反应(RT-PCR)技术的原理和实验过程中潜在的问题,并且讨论了该技术在实际中的应用。
关键词 半定量rt—pcr 反应参数 应用
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用荧光半定量RT-PCR检测蚊溴氰菊酯抗性 被引量：3
9
作者 马磊 沈波 +2 位作者 李秀兰 胡小邦 朱昌亮 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期447-449,共3页
目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法。方法:应用荧光半定量RT鄄PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD鄄Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平。结果:经荧光半定量RT鄄PCR检测,NYD鄄Tr进入指... 目的:建立蚊对菊酯类杀虫剂抗性的PCR检测方法。方法:应用荧光半定量RT鄄PCR,检测经SSH结合cDNA芯片分离鉴定的淡色库蚊对溴氰菊酯抗性相关基因NYD鄄Tr在抗性品系与敏感品系中的表达水平。结果:经荧光半定量RT鄄PCR检测,NYD鄄Tr进入指数期的循环数抗性品系早于敏感品系,抗性品系组比敏感品系组先进入指数增长期。结论:以NYD鄄Tr作为靶基因,荧光半定量RT鄄PCR可区分淡色库蚊对溴氰菊酯抗性品系与敏感品系,亦即可检测淡色库蚊溴氰菊酯抗性。 展开更多
关键词 淡色库蚊 抗药性 溴氰菊酯 荧光半定量rt-pcr
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应用SYBR荧光实时定量RT-PCR法检测TGF-β1诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞中PAI-1mRNA表达 被引量：2
10
作者 何淑芳 杨林 +6 位作者 黄维娟 杨雁 周伏圣 方巧云 张安平 杨森 张学军 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期64-67,共4页
目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1（transforming growth factor betal，TGF-β1）诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFS）中纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor1，PAI-1）mRN... 目的应用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测转化生长因子-β1（transforming growth factor betal，TGF-β1）诱导瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFS）中纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor1，PAI-1）mRNA的表达。方法体外分离培养KFs，应用不同浓度（1．25～20pmol·L-1）TGF-β1刺激KFs3h或TGF-β1（10pmol·L-1）刺激KFs不同时间（0．5～6h），采用SYBRGreenI荧光实时定量RT—PCR法检测，以B—actin基因作为内参，计算各组PAI-1mRNA的相对表达量。结果与空白对照组相比，TGF-β1能明显诱导KFs中PAI-1mRNA的表达，10、20pmol·L-1浓度组表达比值分别增至4．19及4．44倍（P〈0．01）；TGF-β1（10pmol·L。）的1、2h时问组表达比值分别增至2．29及2．41倍（P〈0．05），3、6h时间组分别增至4．19及5．83倍（P〈0．01）。提示，TGF-β1诱导KFs中PAI=1mRNA表达的最适浓度为10pmol·L-1、最适时间为3h。结论利用SYBR荧光实时定量RT—PCR法检测TGF-β1诱导KFs中PAI-1mRNA的表达，为进一步研究瘢痕疙瘩中TGF-β1信号通路的靶基因调控机制，以及开发治疗瘢痕疙瘩的新药提供了基础。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 转化生长因子-β1 纤溶酶原激活物抑制剂-1 荧光实时定量rt—pcr
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小麦ArfGAP基因的克隆、半定量RT-PCR分析及原核表达 被引量：2
11
作者 许峰 闫素辉 +3 位作者 张从宇 时侠清 李文阳 张子学 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期1631-1638,共8页
为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121b... 为明确小麦ArfGAP基因在非生物胁迫中所行使的功能,采用电子克隆技术分离普通小麦ArfGAP基因后对其在不同非生物胁迫下的表达特性进行了分析,并在大肠杆菌中表达了该基因。结果表明,从扬麦18号中克隆得到的TaArfGAP基因ORF全长为2 121bp。生物信息学分析表明,TaArfGAP蛋白氨基端方向存在一个典型的ArfGAP蛋白结构域,在亲缘关系上与山羊草、乌拉尔图小麦和短柄草较近,而与甘蓝等作物关系较远。半定量RT-PCR分析表明,TaArfGAP基因在干旱、PEG和NaCl胁迫下显著上调表达,但在高温条件下则显著下调表达。SDS-PAGE检测结果表明,IPTG终浓度为0.8~1.0mmol·L-1、诱导温度为24℃及诱导时间为10h时,在分子量大小为81kD左右可以得到较大的可溶性表达蛋白量,且与预期结果一致,说明TaArfGAP基因在原核表达体系中成功表达。 展开更多
关键词 小麦 ADP核糖基化因子GTP水解酶激活蛋白 半定量rt-pcr 融合蛋白
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绵羊BTG1基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：2
12
作者 张菊 杜立新 +1 位作者 李宏滨 魏彩虹 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期911-917,共7页
B细胞易位基因1(BTG1基因)是BTG/TOB基因家族的成员之一,在动物细胞的增殖和分化中起重要的作用.利用牛BTG1基因的mRNA序列与绵羊的EST数据库进行Blast检索,并通过序列拼接和逆转录RT-PCR方法首次获得绵羊BTG1基因的部分cDNA序列(GenBan... B细胞易位基因1(BTG1基因)是BTG/TOB基因家族的成员之一,在动物细胞的增殖和分化中起重要的作用.利用牛BTG1基因的mRNA序列与绵羊的EST数据库进行Blast检索,并通过序列拼接和逆转录RT-PCR方法首次获得绵羊BTG1基因的部分cDNA序列(GenBank登录号FJ444829),其片段长度为1 358 bp,包括完整的开放阅读框516 bp,编码171个氨基酸.半定量PCR研究结果表明:BTG1基因在小尾寒羊和陶赛特羊的10种组织中均表达,并具有一致的表达趋势.同源分析结果表明,绵羊BTG1蛋白的氨基酸序列中存在BTG/TOB的保守结构域,并且该蛋白在不同物种间具有很高的保守性.通过生物信息学预测BTG1蛋白功能,发现绵羊BTG1蛋白存在1个跨膜结构域、8个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点.蛋白质结构同源建模分析表明,绵羊BTG1蛋白具有BTG/TOB蛋白家族的典型空间结构. 展开更多
关键词 B细胞易位基因1(BTG1基因) CDNA克隆 半定量rt-pcr 生物信息学预测
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疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因ME196半定量RT-PCR分析 被引量：2
13
作者 吕广磊 刘芳芳 +4 位作者 蔺忠龙 白现广 付坚 黄兴奇 程在全 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2009年第1期6-10,共5页
以从疣粒野生稻受白叶枯病菌诱导所建的差减文库中筛选出的一个具有丝氨酸一苏氨酸激酶抗病结构域的基因(克隆号为ME196),用半定量RT-PCR法,以肌动蛋白(-βactin)基因为内参,研究疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因ME196基因mRNA的表达水平... 以从疣粒野生稻受白叶枯病菌诱导所建的差减文库中筛选出的一个具有丝氨酸一苏氨酸激酶抗病结构域的基因(克隆号为ME196),用半定量RT-PCR法,以肌动蛋白(-βactin)基因为内参,研究疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因ME196基因mRNA的表达水平。通过ME196基因与-βactin基因PCR产物的灰度之比,确定ME196为诱导性表达,并进一步推测其为疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因,甚至为抗病基因。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr ME196基因 疣粒野生稻 诱导性表达
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利用半定量RT-PCR检测烟碱生物合成的方法 被引量：2
14
作者 马雷 戚元成 刘卫群 《江西农业学报》 CAS 2009年第8期12-13,共2页
将水培65 d的烟株进行打顶处理,测定打顶和不打顶烟株上部叶的烟碱含量。分别提取根中总RNA,利用腐胺-N-甲基转移酶(PMT)基因特异引物进行actin做内参的半定量RT-PCR,分析打顶前后PMT转录水平。结果表明,上部烟叶烟碱含量和腐胺-N-甲基... 将水培65 d的烟株进行打顶处理,测定打顶和不打顶烟株上部叶的烟碱含量。分别提取根中总RNA,利用腐胺-N-甲基转移酶(PMT)基因特异引物进行actin做内参的半定量RT-PCR,分析打顶前后PMT转录水平。结果表明,上部烟叶烟碱含量和腐胺-N-甲基转移酶基因表达量的变化趋势是一致的。 展开更多
关键词 烟碱 腐胺-N-甲基转移酶(PMT) 半定量rt—pcr
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三黄鸡ST3Gal6基因的半定量RT-PCR及生物信息学分析 被引量：1
15
作者 周飞 崔连成 +1 位作者 安玉甫 宁章勇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期51-54,共4页
本研究旨在对三黄鸡ST3Gal6基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考三黄鸡ST3Gal6基因序列设计引物,采用PCR技术克隆三黄鸡ST3Gal6基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的三黄... 本研究旨在对三黄鸡ST3Gal6基因进行组织表达谱和生物信息学分析。参考三黄鸡ST3Gal6基因序列设计引物,采用PCR技术克隆三黄鸡ST3Gal6基因序列,并利用半定量RT-PCR进行组织表达谱分析;同时对其进行生物信息学分析。结果表明,克隆的三黄鸡ST3Gal6基因全长1169bp,含有1059bp的完整CDS编码区,编码352个氨基酸。其CDS编码区的核苷酸序列与人、黑猩猩、牛、大鼠、蟾ST3Gal6基因对应序列的同源性分别为62%、62%、61.9%、59%、54.4%。组织表达谱分析表明,ST3Gal6基因在各组织均不同程度地表达,其中在大脑表达量很高,肺脏中最低。生物信息学预测ST3Gal6蛋白结构发现,三黄鸡的ST3Gal6蛋白存在2个跨膜螺旋结构域,同时预测ST3Gal6存在22个磷酸化位点和1个特异性蛋白激酶磷酸化位点。 展开更多
关键词 唾液酸转移酶 流感受体 鸡 半定量 生物信息学
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半定量RT-PCR在基因表达方面的应用 被引量：16
16
作者 高海波 张拴林 陈燕红 《畜禽业》 2008年第2期34-37,共4页
RT-PCR是一种常用的具有很高灵敏度和特异性的基因表达检测方法。它有定量RT-PCR和半定量RT-PCR法。半定量RT-PCR法因其对试验条件的要求不高,费用低、普通实验室容易做到而被经常使用。本文从半定量RT-PCR的原理、技术、操作步骤及注... RT-PCR是一种常用的具有很高灵敏度和特异性的基因表达检测方法。它有定量RT-PCR和半定量RT-PCR法。半定量RT-PCR法因其对试验条件的要求不高,费用低、普通实验室容易做到而被经常使用。本文从半定量RT-PCR的原理、技术、操作步骤及注意事进行了综述。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 基因表达 应用
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猪繁殖与呼吸综合征病毒主要结构蛋白基因半定量RT-PCR方法的建立及其在RNA干扰研究中的应用 被引量：1
17
作者 黄娟 单虎 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第6期22-26,共5页
为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中... 为了建立以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法,根据PRRSV VR2332株病毒基因组和GAPDH序列设计4对特异性引物,分别扩增GP5、M、N和GAPDH基因序列,将shRNA表达质粒和GP5、M、N真核表达质粒共转染HEK293A细胞,应用该法检测了转染孔中GP5、M、N的相对表达量。同管和分管扩增法均建立了以GAPDH基因为参照的半定量RT-PCR检测方法。靶向GP5、M和N蛋白基因的shRNA表达质粒对其各自蛋白的抑制率为36%～69%,其中pSi-N3和pSi-G1抑制效果最为显著。结果表明,建立的半定量RT-PCR可以用于PRRSV主要结构蛋白基因表达水平的检测分析中。 展开更多
关键词 PRRSV 结构蛋白 半定量rt-pcr RNA干扰
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半定量RT-PCR法检测原代培养脂肪细胞生脂基因mRNA转录表达 被引量：6
18
作者 卢建雄 臧荣鑫 +3 位作者 潘和平 杨具田 陈粉粉 杨公社 《中兽医医药杂志》 2005年第6期16-18,共3页
在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中,为了检测生脂基因ACC l和FAS mRNA表达水平变化,细胞总RNA经反转录合成cDNA,以β-actin为内参照,分别与ACC l和FAS等基因同管扩增。通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgC l2浓度和循环次... 在原代培养脂肪细胞生脂机制研究中,为了检测生脂基因ACC l和FAS mRNA表达水平变化,细胞总RNA经反转录合成cDNA,以β-actin为内参照,分别与ACC l和FAS等基因同管扩增。通过探讨和优化PCR体系中引物设计、退火温度、MgC l2浓度和循环次数等参数,以及引物对间的扩增竞争,建立了检测脂肪细胞生脂相关基因mRNA表达的半定量多重RT-PCR体系。结果显示,RT-PCR产物经电泳后,β-actin及生脂基因电泳带清晰,与预期产物大小一致,引物对间无扩增竞争,其扩增效率和特异性与单重RT-PCR体系相同,实验重复性好。因此,该方法和体系可用于快速、灵敏、可靠地检测特异基因mRNA的表达。 展开更多
关键词 原代培养脂肪细胞 生脂基因 半定量rt—pcr
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半定量RT-PCR方法检测NaCl胁迫下杂花苜蓿mvNHX基因表达及体系优化
19
作者 许磊 石庆华 +3 位作者 代培红 杨云尧 王永超 张桦 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2484-2488,共5页
【目的】优化半定量RT-PCR反应体系,并用优化体系检测杂花苜蓿mvNHX基因的表达情况。【方法】提取用150 mmol/L盐浓度、处理不同时间的苜蓿叶片组织总RNA;反转录得到cDNA;利用优化半定量RT-PCR法检测。【结果】检测到mvNHX基因随胁迫时... 【目的】优化半定量RT-PCR反应体系,并用优化体系检测杂花苜蓿mvNHX基因的表达情况。【方法】提取用150 mmol/L盐浓度、处理不同时间的苜蓿叶片组织总RNA;反转录得到cDNA;利用优化半定量RT-PCR法检测。【结果】检测到mvNHX基因随胁迫时间基因表达量总体上逐渐升高。【结论】通过半定量RT-PCR法检测基因在胁迫条件的表达量的变化。同时对该方法进行优化,为进一步研究该基因克隆及其功能验证奠定了一定的实验基础。 展开更多
关键词 半定量rt-pcr 盐胁迫 mvNHX基因
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三黄鸡ST6基因的半定量RT-PCR分析
20
作者 周飞 于梦 +2 位作者 刘荣昌 袁远华 宁章勇 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2013年第3期13-15,共3页
本研究旨在对三黄鸡ST6(ST6GalⅠ和ST6GalⅡ)基因进行组织表达谱分析。参考鸡ST6GalⅠ和ST6GalⅡ基因序列设计引物,利用半定量RT-PCR进行了组织表达谱分析。结果表明,ST6GalⅠ和ST6GalⅡ基因在各组织均有不同程度的表达,其中ST6GalⅠ在... 本研究旨在对三黄鸡ST6(ST6GalⅠ和ST6GalⅡ)基因进行组织表达谱分析。参考鸡ST6GalⅠ和ST6GalⅡ基因序列设计引物,利用半定量RT-PCR进行了组织表达谱分析。结果表明,ST6GalⅠ和ST6GalⅡ基因在各组织均有不同程度的表达,其中ST6GalⅠ在心脏中表达最高,脑中最低;ST6GalⅡ在胸腺中表达最高,在肝脏中表达最低。ST6GalⅠ在各组织中的表达比其相应组织中ST6GalⅡ的表达要低。 展开更多
关键词 唾液酸转移酶 流感受体 半定量
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