通便汤对慢传输型便秘大鼠结肠c-kit和MLCK表达的影响 被引量：16

1

作者 乐音子 王晓鹏 +3 位作者 甄曙光 孙明明 吴本升 颜帅 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第8期1215-1220,共6页

目的 探讨通便汤对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织c-kit、MLCK蛋白及其他细胞因子的影响。方法 采用洛哌丁胺混悬液灌胃法复制STC大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通便汤低、中、高剂量组和莫沙必利组。各组予以不同药物干预2周后,检... 目的 探讨通便汤对慢传输型便秘(STC)大鼠结肠组织c-kit、MLCK蛋白及其他细胞因子的影响。方法 采用洛哌丁胺混悬液灌胃法复制STC大鼠模型,随机分为正常组、模型组、通便汤低、中、高剂量组和莫沙必利组。各组予以不同药物干预2周后,检测各组大鼠粪便含水率、小肠活性炭推进率;HE染色观察大鼠结肠病理学特征;酶联免疫法检测结肠一氧化氮(NO)、一氧化氮酶(NOS)的含量;免疫组化法检测结肠c-kit、MLCK的表达情况。结果 与正常组比较,模型组大鼠粪便质地干硬,含水率明显下降,小肠活性炭推进率显著下降(P<0.05),结肠组织正常结构被破坏,炎性细胞浸润,结肠组织NO和NOS含量明显上升, c-kit和MLCK蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,通便汤各剂量组增加粪便含水率以及结肠肌层厚度和绒毛高度(P<0.05),提高小肠活性炭推进率,显著上调结肠组织c-kit和MLCK蛋白表达,同时降低结肠组织NO和NOS含量(P<0.05)。结论 通便汤能提高STC大鼠小肠活性炭推进率,增加粪便含水率,改善结肠病理形态,其作用机制可能与调节NO、NOS水平,上调结肠c-kit、MLCK蛋白表达有关。 展开更多

关键词 通便汤 慢传输型便秘 一氧化氮 C-KIT mlck

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“和解肝脾腹部推拿法”对非酒精性脂肪肝大鼠肠组织MLCK信号通路的影响 被引量：9

2

作者 石玉生 李海争 张玮 《辽宁中医杂志》 CAS 2018年第10期2200-2203,I0001,共5页

目的：观察和解肝脾腹部推拿法对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠肠黏膜组织MLCK信号通路的调控作用。方法：采用高脂饮食喂养10周建立NAFLD大鼠模型,再以和解肝脾腹部推拿法治疗4周后对比手法干预组和模型对照组体质量、肝湿重变化,用West... 目的：观察和解肝脾腹部推拿法对非酒精性脂肪肝（NAFLD）大鼠肠黏膜组织MLCK信号通路的调控作用。方法：采用高脂饮食喂养10周建立NAFLD大鼠模型,再以和解肝脾腹部推拿法治疗4周后对比手法干预组和模型对照组体质量、肝湿重变化,用Western blot方法,检测手法干预前后,NAFLD大鼠模型肠黏膜组织MLCK及其介导的PMLC蛋白表达的变化,利用异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-Dextran）示踪法检测干预前后大鼠肠黏膜通透性变化。结果：与模型对照组相比较,手法干预组大鼠体质量及肝湿重明显降低（P 〈0. 05）;手法干预组肠黏膜组织MLCK蛋白表达及其介导的P-MLC蛋白表达较对照组明显降低（P 〈0. 05）;手法干预组大鼠肠袋外漏出FITC-Dextran含量与模型对照组相比明显降低（P 〈0. 05）。结论：和解肝脾腹部推拿法可降低NAFLD大鼠体质量与肝湿重,其通过调控肠组织MLCK信号通路,改善肠上皮屏障功能,降低肠道黏膜的通透性,有利于阻断LPS等毒素对肝脏的侵袭,此可能为和解肝脾腹部推拿法治疗NAFLD的作用机制。 展开更多

关键词 mlck信号通路 和解肝脾 非酒精性脂肪肝 揉腹 肠道黏膜通透性

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聚合酶链反应在MLCK表达载体构建中的应用 被引量：3

3

作者 汪渊 桂淑玉 《安徽医科大学学报》 CAS 1997年第5期527-529,共3页

用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法扩增出含有ＳａｌⅠ位点和转录起始点ＡＴＧ的肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎＬｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉ－ｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）ｃＤＮＡ片段，并插入质... 用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）方法扩增出含有ＳａｌⅠ位点和转录起始点ＡＴＧ的肌球蛋白轻链激酶（ｍｙｏｓｉｎＬｉｇｈｔｃｈａｉｎｋｉ－ｎａｓｅ，ＭＬＣＫ）ｃＤＮＡ片段，并插入质粒ｐＢＫｒｓｖ中，构建成能在宿主细胞中表达的表达载体，并通过酶切图谱、ＳａｌⅠ位点ＤＮＡ序列分析得到证实。为进一步研究ＭＬＣＫ的表达奠定基础。 展开更多

关键词 聚合酶链反应 mlck 基因载体 质粒 构建

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清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响 被引量：4

4

作者 玛娜璐璐 朱海燕 +5 位作者 高永红 孙逸坤 赵一舟 娄利霞 娄晋宁 谭丽娜 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第2期327-329,I0011,共4页

目的:研究清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响。方法:细胞分为正常对照组(有糖Earle液)、模型组(缺氧缺糖模拟缺血:无糖Earle液,37℃,5%CO2,1%O2培养24 h)、清开灵低、中、高浓度组(缺氧缺塘+清开灵1%、2%、4%),... 目的:研究清开灵对小鼠脑微血管内皮细胞缺氧损伤MLCK基因转录的影响。方法:细胞分为正常对照组(有糖Earle液)、模型组(缺氧缺糖模拟缺血:无糖Earle液,37℃,5%CO2,1%O2培养24 h)、清开灵低、中、高浓度组(缺氧缺塘+清开灵1%、2%、4%),在37℃、5%CO2培养箱中培养24 h后经MTT比色法检测细胞活力、荧光定时定量PCR检测MLCK基因转录。结果:缺氧缺糖24 h后微血管内皮细胞活性降低(P<0.05)、MLCK基因转录被抑制(P<0.05);清开灵1%、2%、4%组均抑制了缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性的降低(P<0.05),清开灵4%组降低MLCK的表达(P<0.05)。结论:缺糖缺氧条件下微血管内皮细胞活性降低。清开灵通过抑制MLCK的表达,恢复BBB的部分屏障功能。 展开更多

关键词 清开灵 mlck 脑微血管内皮细胞 缺氧

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凝血酶信号传导过程中PI3-K与MLCK激酶的作用 被引量：1

5

作者 韩悦 高海丽 +7 位作者 张威 白霞 戴兰 沈文红 孙爱宁 吴德沛 王兆钺 阮长耿 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第3期661-664,共4页

本研究比较凝血酶受体活化过程中不同浓度的wortmannin对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物糖蛋白GPIb表达的影响,探讨脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在凝血酶信号传递机制中的作用。分别以凝血酶受体活化肽PAR1... 本研究比较凝血酶受体活化过程中不同浓度的wortmannin对血小板聚集率以及血小板膜表面活化标记物糖蛋白GPIb表达的影响,探讨脂酰肌醇-3-激酶(PI3-K)与肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在凝血酶信号传递机制中的作用。分别以凝血酶受体活化肽PAR1-AP(SFLLRN)与PAR4-AP(AYPGKF)诱导血小板活化。检测100nmol/L wortmannin(抑制PI3-K)与10μmol/L wortmannin(抑制MLCK)作用过程中血小板聚集与血小板膜表面糖蛋白GPIb的改变。结果显示:wortmannin作用对两类凝血酶受体诱导血小板活化的过程均有不同程度的影响。100nmol/L的wortmannin部分抑制PAR1-AP引起的血小板聚集,对PAR4-AP诱导的聚集过程没有影响;10μmol/Lwortmannin明显抑制两类PAR肽引起的血小板活化,抑制程度达到60%-80%,仅出现少部分聚集。流式细胞仪检测显示,GPIbα的动态分布过程中100nmol/L wortmannin能部份抑制GPIbα向胞内移动,PAR1-AP刺激后5分钟内wort-mannin起效明显(1、2、5分钟p<0.05),对PAR4-AP的反应则稍延迟,在2到10分钟有意义(2、5、10分钟p<0.05)。10μmol/L wortmannin对整个PAR活化过程中的GPIbα逆转没有任何影响,只对PAR1刺激过程中GPIbα的恢复起作用,延缓GPIbα重返血小板膜表面的进程;而PAR4-AP作用后各时间段GPIbα的动态分布不受10μmol/L wortmannin任何影响。结论:PI3-K与MLCK在凝血酶受体的活化过程中作用不同,PI3-K在GPIbα内转的短暂过程中起着重要作用;而MLCK磷酸化仅仅对PAR1受体介导的GPIbα回复起促进作用。 展开更多

关键词 血小板 凝血酶受体 糖蛋白Ib 磷脂酰肌醇-3-激酶 肌球蛋白轻链激酶 渥太青霉素

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ATRA通过ERK/MAPK通路调控AS兔心脏MLCK的表达 被引量：1

6

作者 王雪 余沛 +3 位作者 王怡 周青 汪渊 朱华庆 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2018年第10期1494-1499,共6页

目的研究全反式维甲酸(ATRA)通过信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路调控动脉粥样硬化(AS)模型兔心脏中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法普通新西兰大耳朵白兔随机分为正常组、模型组、ATRA组,正常组给予普通饲料喂养,... 目的研究全反式维甲酸(ATRA)通过信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶(ERK/MAPK)通路调控动脉粥样硬化(AS)模型兔心脏中肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法普通新西兰大耳朵白兔随机分为正常组、模型组、ATRA组,正常组给予普通饲料喂养,模型组和ATRA组给予高脂饲料(普通饲料+1%胆固醇+5%猪油)喂养,并且ATRA组同时给予ATRA灌胃5 mg/(kg·d)。12周后,取动脉和心脏组织,油红染色分析动脉壁斑块形成情况;HE染色和Masson染色观察心肌组织形态学变化,免疫组织化学染色观察心脏中MLCK的表达;Western blot法检测各组MLCK蛋白和ERK蛋白磷酸化水平。体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、ATRA组、ERK/MAPK选择性抑制剂(PD)组。Western blot法检测各组MLCK蛋白的表达水平。结果 12周以后,AS兔模型建立成功。与正常组比较,模型组动脉壁形成大量粥样斑块;HE染色结果显示模型组心肌组织出现严重的紊乱情况;Masson染色结果显示模型组心肌组织发生明显胶原纤维堆积;免疫组化结果显示模型组心肌组织中MLCK表达量增多;而给予ATRA以后,心肌组织紊乱情况得到改善,胶原纤维堆积得到缓解,MLCK表达量和ERK磷酸化水平均有所降低。并且模型组细胞中MLCK蛋白表达升高,给予ATRA和PD98059后,MLCK表达降低。结论 ATRA可能通过ERK/MAPK通路降低模型兔心肌细胞MLCK的表达。 展开更多

关键词 全反式维甲酸 动脉粥样硬化 心肌组织 肌球蛋白轻链激酶 丝裂原活化蛋白激酶

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不同剂量黄连对脾虚大鼠胃黏膜病理形态及CaM/MLCK mRNA表达水平的影响 被引量：3

7

作者 杨红莲 段玉红 钱笑音 《辽宁中医杂志》 CAS 北大核心 2017年第9期1975-1977,I0006,共4页

目的:观察不同剂量黄连水煎液对脾虚大鼠胃黏膜病理变化和胃窦平滑肌组织CaM/MLCKmRNA表达水平的影响。方法:采用利血平腹腔注射法建立脾虚证大鼠模型,共造模14 d。受试大鼠随机分为6组,即空白对照组,模型组,多潘立酮组,黄连高、中、低... 目的:观察不同剂量黄连水煎液对脾虚大鼠胃黏膜病理变化和胃窦平滑肌组织CaM/MLCKmRNA表达水平的影响。方法:采用利血平腹腔注射法建立脾虚证大鼠模型,共造模14 d。受试大鼠随机分为6组,即空白对照组,模型组,多潘立酮组,黄连高、中、低剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余各组采用利血平腹腔注射法建立脾虚证大鼠模型。造模结束后,黄连各组灌服不同剂量黄连水煎液(给药剂量分别为5 g·kg^(-1),2.5 g·kg^(-1),1.25 g·kg^(-1)),多潘立酮组灌服多潘立酮水溶液,正常组和模型组则用等体积生理盐水对照灌胃,持续14 d。HE黏膜染色观察胃黏膜病理变化,Real-time PCR法检测大鼠胃窦平滑肌组织CaM、MLCK mRNA表达水平。结果:脾虚模型组胃黏膜萎缩变薄,皱襞低平,出现胃黏膜中断,水肿明显,脂肪及胶原纤维组织增生。黄连高、中、低剂量组胃黏膜中段、水肿等病理现象均不同程度减轻,脂肪及胶原纤维组织增生也减少。与空白对照组比较,模型组胃窦平滑肌组织CaM和MLCK mRNA含量均显著下降(P<0.001);与模型组比较,黄连高、中、低剂量组CaM mRNA含量均显著升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,多潘立酮组、黄连高、中剂量组MLCK mRNA含量均显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:一定剂量黄连可能通过保护胃黏膜,增加胃黏膜组织CaM/MLCK mRNA的表达调控"Ca^(2+)-CaM-MLCK"实现"健胃"作用。 展开更多

关键词 黄连 脾虚证 病理形态 CAM mlck

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基于MLCK信号通路探讨一指禅推法对脾虚家兔胃肠传输功能的影响 被引量：5

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作者 黄文婷 王继红 《辽宁中医杂志》 CAS 2022年第6期208-210,共3页

目的观察一指禅推法对脾虚家兔胃肠传输功能的影响,从肌球蛋白轻链激酶(MLCK)信号通路角度探讨一指禅推法调节胃肠动力的作用机制。方法取成年新西兰兔40只,随机分为K组(空白组)、P组(模型组)、I-1组(频率101~150次/min)、I-2组(频率201... 目的观察一指禅推法对脾虚家兔胃肠传输功能的影响,从肌球蛋白轻链激酶(MLCK)信号通路角度探讨一指禅推法调节胃肠动力的作用机制。方法取成年新西兰兔40只,随机分为K组(空白组)、P组(模型组)、I-1组(频率101~150次/min)、I-2组(频率201~250次/min),每组10只,造脾虚模型。I-1组和I-2组在中脘、天枢(双)予以不同频率一指禅推法干预治疗,每日手法治疗后均进行腹腔注射Akt激酶选择性强效抑制剂(ML-9),其余组不采取干预措施。干预结束后采用炭末灌胃法对各组家兔进行小肠推进率的测定,评估一指禅推法对家兔胃肠传输功能的影响。结果与K组比较,P组家兔小肠推进率显著降低(P<0.05);与P组比较,I-1组和I-2组家兔小肠推进率均明显提高(P<0.01);I-1组与I-2组比较,I-1组小肠推进率高于I-2组(P<0.05)。结论当胃肠平滑肌细胞内的MLCK被抑制后,一指禅推法仍能明显改善脾虚家兔的胃肠传输功能,其产生效应的机制可能是通过多通路、多靶点发挥作用。 展开更多

关键词 一指禅推法 mlck信号通路 小肠推进率 肌球蛋白轻链激酶 脾虚证

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黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪的血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC的影响 被引量：1

9

作者 赵文华 庄锋 +3 位作者 熊春红 刘宇 付书林 邱银生 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第11期3190-3197,共8页

本研究利用脂多糖(LPS)诱导建立仔猪免疫损伤模型,研究黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC信号通路变化的影响,并探讨其保护机制。试验选取42头健康仔猪,分为空白对照组(A组)、LPS模型组(B组)、LPS+丙酮酸乙酯处理... 本研究利用脂多糖(LPS)诱导建立仔猪免疫损伤模型,研究黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC信号通路变化的影响,并探讨其保护机制。试验选取42头健康仔猪,分为空白对照组(A组)、LPS模型组(B组)、LPS+丙酮酸乙酯处理组(C组)、LPS+氟尼辛葡甲胺处理组(D)和LPS+黄芩苷处理组(剂量分别为25、50和100 mg/kg,E、F、G组)。饲喂7 d后,攻毒前0.5 h进行药物处理,处理组及模型组腹腔注射LPS,空白对照组注射等量生理盐水,LPS诱导6 h后再次给药。试验1 d后,采集主动脉血管样品2份,通过免疫组化及免疫荧光观察血管中紧密连接蛋白(闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、密封蛋白-1(Claudin-1)和闭合蛋白(Occludin))的表达变化;Western blotting法测定血管MLCK-MLC信号通路相关蛋白(肌球蛋白轻链激酶(MLCK)、肌球蛋白轻链2(MLC2)和磷酸化肌球蛋白轻链2(p-MLC2))的表达量。结果表明,LPS诱导后,仔猪血管中ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达量均极显著降低(P<0.01),黄芩苷处理能明显提高仔猪血管紧密连接蛋白的表达量。LPS模型组MLCK和p-MLC2蛋白表达量均极显著升高(P<0.01),黄芩苷能显著下调MLCK和p-MLC2表达量(P<0.05),各组间MLC2表达量差异不显著(P>0.05)。综上所述,LPS能引起仔猪的血管损伤,激活MLCK-MLC信号通路,影响紧密连接蛋白表达量及功能,黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接损伤具有保护作用。本试验结果为黄芩苷用于治疗猪的炎性血管损伤提供了科学依据。 展开更多

关键词 黄芩苷 脂多糖(LPS) 紧密连接 肌球蛋白轻链激酶(mlck) 肌球蛋白轻链(MLC)

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肌球蛋白轻链激酶非激酶活性调节磷酸化肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动 被引量：15

10

作者 梁明丽 崔颖 +1 位作者 吕广艳 高颖 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第1期91-96,共6页

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆... 肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)具有激酶和非激酶活性,在平滑肌收缩过程中起着关键酶调控的作用.为进一步阐明MLCK非激酶活性在平滑肌收缩过程中的调节作用,利用已删除部分激酶区域的MLCK重组体(pGEX-F6.5)在大肠杆菌中进行表达,采用亲和层析技术纯化表达的MLCK片段,应用EnzChek磷分析试剂盒检测MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、水解重酶解肌球蛋白(heavy meromyosin,HMM)及肌球蛋白亚片段1(subfragment1,S1)ATP酶活性的影响,体外检测MLCK片段对肌动蛋白肌丝运动的调节.研究结果显示,pGEX-F6.5重组表达载体在大肠杆菌中以可溶性GST融合蛋白的形式表达.该融合蛋白经Glutathione-Sepharose4B纯化、SDS-PAGE鉴定得到较纯的单一表达条带.纯化的MLCK片段对磷酸化肌球蛋白、HMM和S1的ATP酶活性均有明显激活作用.MLCK片段激活磷酸化肌球蛋白ATP酶活性为:Vmax=(19.426±1.669)倍;Km=(0.486±0.106)μmol/L,MLCK片段对磷酸化HMM和S1的ATP酶活性也有相似的刺激作用.体外肌丝运动研究表明,随着MLCK片段浓度的增加,磷酸化肌球蛋白与肌动蛋白结合的数量不断增加,肌丝运动的速度也随之增加.上述结果表明,MLCK的C端非激酶活性具有调节磷酸化的肌球蛋白ATP酶活性及肌丝运动的作用. 展开更多

关键词 平滑肌收缩 肌球蛋白 肌球蛋白轻链激酶(mlck) 肌球蛋白Mg2+-ATP酶活性 体外肌丝运动

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急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响

11

作者 曹纯章 付平平 +3 位作者 王维忠 侯立中 杨同书 王绍霞 《白求恩医科大学学报》 CSCD 1997年第6期597-599,共3页

为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验性心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导... 为探讨急性心肌损害对心肌肌球蛋白磷酸化系统的影响，选择对于心肌有特异性损害作用的异丙基肾上腺素（ＩＳＰ），造成大鼠实验性心肌损害的动物模型，动态观察心肌损害时肌球蛋白磷酸化系统的变化规律。研究结果表明，低剂量ＩＳＰ导致心肌匀浆中肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和肌动球蛋白ＡＴＰ酶的活性下降，但心肌组织病理切片基本正常；高剂量注射ＩＳＰ，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性显著下降，与正常对照组和低剂量组相比，差异十分显著（Ｐ＜０．０１）。在病理形态学上大鼠心肌组织有多处较大的坏死灶。提示，在未发生明显的病理性变化前，心肌细胞内就已发生了一系列的代谢紊乱，如酶活性下降，心肌细胞的收缩功能发生改变；当心肌组织出现病理形态学改变时，细胞内酶活性显著下降，表明已由可逆性损害发展到不可逆的心肌坏死。 展开更多

关键词 心肌损害 心肌球蛋白 轻链磷酸化 mlck

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香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良大鼠的干预机制研究 被引量：12

12

作者 刘梦雅 成映霞 +5 位作者 白敏 赵琳娜 李润法 张延英 安耀荣 段永强 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期232-239,共8页

目的 探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠的干预机制。方法 将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为空白组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法(碘乙酰胺灌服+游泳力竭+饥饱失常)复制脾胃虚... 目的 探讨香砂六君子汤对脾胃虚弱型功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)大鼠的干预机制。方法 将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为空白组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法(碘乙酰胺灌服+游泳力竭+饥饱失常)复制脾胃虚弱型FD大鼠模型。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、阳性对照组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。空白组和模型组大鼠给予10 mL/(kg·d)生理盐水灌胃,阳性对照组给予1.35 mg/(kg·d)莫沙必利药剂灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予12、6、3 g/(kg·d)香砂六君子汤汤剂灌胃,持续干预14 d。造模和给药前后观察大鼠一般状况,测定大鼠体重、3 h进食量。给药干预结束后,测定大鼠胃排空率、肠推进率,采用苏木素-伊红染色观察胃组织病理改变,采用生化试剂盒测定大鼠胃组织匀浆液中Mg2+-ATP酶含量,采用蛋白免疫印迹法检测胃组织中CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠毛发枯乱、倦懒怠动、行动缓迟,一般状况评分显著降低,体重、3 h进食量、胃排空率及肠推进率均显著下降(P<0.05);胃组织病理未见明显异常;胃组织中Mg2+-ATP酶含量减少,胃组织中CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与模型组比较,高、中剂量给药组大鼠一般状况评分显著提升,体重、3 h进食量以及胃排空率显著增加(P<0.05);胃组织病理未见明显差异;胃组织中Mg2+-ATP酶含量显著增加,胃组织中CaM、MLCK、p-MLC20蛋白表达水平显著升高(P<0.05),上述指标香砂六君子汤组干预作用呈剂量依赖性。结论 香砂六君子汤能够有效改善脾胃虚弱型FD大鼠一般状况及胃动力,作用机制可能与其激活胃组织中CaM/MLCK/MLC20通路调控平滑肌舒缩,促进胃动力有关。 展开更多

关键词 香砂六君子汤 脾胃虚弱型 CaM/mlck/MLC20通路 功能性消化不良

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褪黑素延缓糖尿病大鼠肾脏细胞衰老的机制研究 被引量：5

13

作者 陈永昕 刘婉卿 +3 位作者 周青 汪渊 王怡 朱华庆 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第7期1032-1036,1041,共6页

目的观察褪黑素(MLT)对糖尿病肾病(DN)大鼠的影响,探究MLT延缓大鼠DN进程的作用机制。方法SD雄性大鼠15只随机分成正常组、模型组、MLT组,每组各5只。模型组及MLT组采用腹腔注射法给予链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg,建立DN大鼠模型。成功建... 目的观察褪黑素(MLT)对糖尿病肾病(DN)大鼠的影响,探究MLT延缓大鼠DN进程的作用机制。方法SD雄性大鼠15只随机分成正常组、模型组、MLT组,每组各5只。模型组及MLT组采用腹腔注射法给予链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg,建立DN大鼠模型。成功建立模型后,MLT组采用腹腔注射给予MLT 10 mg/(kg·d),正常组与模型组给予等体积生理盐水。连续给药16周后,取大鼠腹主动脉血及肾脏组织,检测血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(SCR);Masson染色观察肾脏组织形态学变化;β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal)检测肾脏细胞衰老变化;采用Western blot法检测肾脏组织中自噬标志物(p62、LC3B)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)抑制因子(p16、p53和p21)的表达水平。结果与正常组比较,模型组血清中BUN、SCR水平升高,肾间质纤维化明显,肾脏组织自噬水平降低,MLCK、p16、p53、p21表达水平均升高。给予MLT后,与模型组比较,MLT组血清中BUN、SCR水平降低,肾脏组织衰老延缓,病理损伤明显减轻,肾脏组织自噬水平也得到改善,MLCK、p16、p53、p21表达水平均降低。结论MLT可以通过增强自噬、延缓衰老进而改善DN大鼠的DN进程。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 自噬 褪黑素 P16 P53 mlck

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环孢素A对DSS结肠炎小鼠肠黏膜通透性影响及其机制的研究 被引量：11

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作者 黄健 梅俏 +4 位作者 韩亮 刘晓昌 刁磊 陈茉莉 许建明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1468-1471,共4页

目的探讨环孢素A(CsA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及作用机制。方法 C57BL/6J小鼠(6～8周龄、体质量20 g±2 g、♂),实验分为正常对照组(饮用无菌蒸馏水+腹腔注射0.9%NS)、DSS模型组(DSS溶液+腹腔注射0.9%NS)... 目的探讨环孢素A(CsA)对葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎小鼠肠黏膜通透性的影响及作用机制。方法 C57BL/6J小鼠(6～8周龄、体质量20 g±2 g、♂),实验分为正常对照组(饮用无菌蒸馏水+腹腔注射0.9%NS)、DSS模型组(DSS溶液+腹腔注射0.9%NS)、环孢素A组(DSS溶液+腹腔注射CsA)。小鼠自由饮用5%DSS溶液1周制备结肠炎模型,环孢素A(0.025 mg.g-1)腹腔注射给药,每天1次,共7 d。每日行DAI评分,实验结束后取结肠进行HE染色评分,结肠匀浆检测MPO活性、TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平,另取小鼠小肠黏膜进行透射电镜检查和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性测定,采用Evans blue和异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)方法检测小肠黏膜通透性。结果与正常对照组比较,模型对照组小鼠1周后出现明显体重减轻、便血和腹泻,DAI评分和HI评分增高,同时结肠黏膜MPO活性明显增高。电镜检查小鼠回肠黏膜上皮绒毛萎缩、排列不规则,细胞间连接复合体缩短、变宽,细胞间隙扩大,小肠黏膜通透性增高。小鼠结肠匀浆中TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度增高,小肠黏膜中MLCK活性明显增高。与DSS模型组比较,环孢素A组小鼠DAI评分和HI评分明显降低,结肠黏膜MPO活性减低,回肠黏膜上皮细胞绒毛排列整齐,小肠黏膜通透性降低,小肠黏膜MLCK活性和结肠匀浆中TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度降低。结论环孢素A具有明显的抗DSS小鼠结肠炎作用,机制可能与通过调控MLCK表达,改善肠黏膜通透性有关。 展开更多

关键词 结肠炎 环孢素A 葡聚糖硫酸钠 肌球蛋白轻链激酶 肠黏膜通透性 肠黏膜屏障

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胰岛素对糖尿病模型大鼠肾脏肌球蛋白轻链激酶表达的影响 被引量：3

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作者 张孝林 朱华庆 +7 位作者 卜丽佳 任传利 周青 吴学平 贾雪梅 王勇生 桂淑玉 汪渊 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期1407-1408,共2页

关键词 肌球蛋白轻链激酶 肾脏 胰岛素 大鼠

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长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备

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作者 吕宁 朱春花 +2 位作者 张文程 朱敏生 陈华群 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期124-128,共5页

长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L... 长型肌球蛋白轻链激酶(long myosin light chain kinase,L-MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚.在研究其功能时,特异性抗体是一基本工具,但目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体.为此,我们先在大肠杆菌E.coliBL21中重组表达了鸡L-MLCK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig),蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠.在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上,建立了2株杂交瘤细胞株,获得抗鸡MLCK4Ig的单克隆抗体.该抗体可以特异与鸡L-MLCK和鸡MLCK4Ig反应.本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论.结果表明,我们部分解决了L-MLCK的抗体缺乏问题,为研究L-MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具. 展开更多

关键词 mlck 4Ig 蛋白表达 单克隆抗体

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肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞调控机制的研究 被引量：2

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作者 辛华 郑雅娟 +1 位作者 韩振国 王维忠 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期761-764,共4页

目的 :阐明肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)及Rho Rho激酶的调控作用。方法 :利用肿瘤细胞向血管外游走的体外模型 ,观察肿瘤细胞的血管外游走状况 ,并测定肿瘤细胞游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化 ;... 目的 :阐明肿瘤细胞向血管外游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链激酶 (MLCK)及Rho Rho激酶的调控作用。方法 :利用肿瘤细胞向血管外游走的体外模型 ,观察肿瘤细胞的血管外游走状况 ,并测定肿瘤细胞游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化 ;通过Westernblot评价肿瘤游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链 (MLC)的磷酸化水平。结果 :肿瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外 ;并且肿瘤细胞向血管外游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降、内皮细胞MLC的磷酸化水平升高 ;而内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂 (ML 7)及Rho抑制剂 (C3转移酶 )、Rho激酶抑制剂 (Y 2 76 32 )能够抑制上述变化。结论 :内皮细胞MLCK及Rho Rho激酶可以通过控制MLC的磷酸化水平来引起内皮细胞骨架蛋白的改变 。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 向血管外游走 内皮细胞 肌球蛋白轻链激酶 RHO/RHO激酶

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平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化 被引量：4

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作者 林原 唐泽耀 +3 位作者 陈华 戴淑芳 杨静娴 王晓明 《科学技术与工程》 2002年第6期37-40,共4页

发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提... 发现肌球蛋白轻链激酶(MLCK)不仅以钙依赖性的方式,同时也以非钙依赖性的方式参与对肌球蛋白轻链的磷酸化。该非钙依赖性磷酸化的特征是:需要高浓度,但受温度升高、反应时间延长、离子浓度升高的影响远小于钙依赖性磷酸化。研究结果提示肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白的非钙依赖性磷酸化可能是一种新的机制,并与平滑肌张力的维持有关。 展开更多

关键词 平滑肌 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白 非钙依赖性 磷酸化

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全反式维甲酸对人胃腺癌细胞株BGC-823迁移的影响 被引量：1

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作者 杨艳艳 胡安拉 +2 位作者 张素梅 周青 汪渊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2014年第7期867-871,共5页

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胃腺癌细胞株BGC-823细胞迁移能力的影响及其可能机制。方法不同浓度ATRA处理BGC-823后,MTT法检测ATRA对细胞增殖的影响并计算半数抑制率(IC50),倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕法检测其对细胞迁移... 目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胃腺癌细胞株BGC-823细胞迁移能力的影响及其可能机制。方法不同浓度ATRA处理BGC-823后,MTT法检测ATRA对细胞增殖的影响并计算半数抑制率(IC50),倒置显微镜下观察细胞形态学变化,划痕法检测其对细胞迁移能力的作用,平板克隆法观察其对细胞体外克隆形成能力的影响,Western blot法检测可能与迁移相关蛋白的表达。结果 ATRA对BGC-823细胞增殖具有明显的抑制作用,呈浓度依赖性,IC50为42.402 5μmol/L;ATRA可抑制细胞生长速度,使细胞形态拉长;ATRA可抑制BGC-823细胞的迁移;ATRA可明显降低细胞克隆形成数(P<0.05);Western blot结果显示ATRA显著降低肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达和肌球蛋白轻链(MLC)的磷酸化。结论 ATRA对人胃腺癌细胞株BGC-823细胞的迁移具有抑制作用,可能与降低MLCK表达和MLC磷酸化水平有关。 展开更多

关键词 ATRA 胃癌 迁移 肌球蛋白轻链激酶 肌球蛋白轻链

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磷酸化肌球蛋白轻链及其激酶在耐药颞叶癫癎患者脑组织中的表达 被引量：1

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作者 李劲梅 何梅 +7 位作者 曾艳 王学峰 肖飞 林涛 朱丹 郭强 卢涌 李红卫 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期529-532,共4页

目的探讨耐药性癫癎颞叶和海马脑组织中磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylation of myosin light chain,P-MLC)及其激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达在癫癎芽生形成中的作用。方法免疫组化检测32例耐药性颞叶癫癎中P-MLC及其激... 目的探讨耐药性癫癎颞叶和海马脑组织中磷酸化肌球蛋白轻链(phosphorylation of myosin light chain,P-MLC)及其激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达在癫癎芽生形成中的作用。方法免疫组化检测32例耐药性颞叶癫癎中P-MLC及其激酶MLCK的蛋白质表达水平,并与对照组比较。结果P-MLC免疫组化结果显示,耐药性颞叶癫癎组颞叶光密度值(0.35±0.13)高于对照组(0.19±0.027,P<0.05);耐药组海马光密度值(0.41±0.02)高于对照组(0.10±0.06,P<0.05)。免疫组化结果显示耐药组的MLCK表达水平在颞叶组织和海马组织中较对照组无统计学差异(P>0.05)。结论P-MLC及其激酶MLCK的功能与苔藓纤维芽生关系密切,P-MLC蛋白质产物在耐药性癫中明显升高,但其磷酸化激酶MLCK的表达并不升高,提示MLCK和去磷酸化酶间动态平衡被打破是P-MLC升高的原因,而P-MLC的升高可能在苔藓纤维芽生的形成中发挥重要作用。 展开更多

关键词 磷酸化肌球蛋白轻链 肌球蛋白轻链激酶 苔藓纤维 癫癎耐药

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