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复方仙蓉颗粒抑制MCF-10AT乳腺癌癌前病变的研究 被引量:11
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作者 洪日 陈红风 邓樱 《中华中医药学刊》 CAS 2010年第3期567-570,共4页
目的:建立MCF-10AT乳腺癌癌前病变模型,探讨复方仙蓉颗粒(Compound Xian Rong Granules,CXRG)对MCF-10AT乳腺癌癌前病变模型的抑制作用。方法:采用体外接种MCF-10AT细胞于BALB/c雌性裸鼠,并肌注苯甲酸雌二醇建立乳腺癌癌前病变模型。随... 目的:建立MCF-10AT乳腺癌癌前病变模型,探讨复方仙蓉颗粒(Compound Xian Rong Granules,CXRG)对MCF-10AT乳腺癌癌前病变模型的抑制作用。方法:采用体外接种MCF-10AT细胞于BALB/c雌性裸鼠,并肌注苯甲酸雌二醇建立乳腺癌癌前病变模型。随机分为模型组、CXRG组、三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)组,每组20只。分接种后21、35、49、63天,分组观察裸鼠移植瘤重量及体积变化,观察移植瘤组织形态学变化。结果:接种后21天起裸鼠移植瘤组织均出现不同程度的增生。接种后35~49天,3组裸鼠移植瘤组织均出现不同程度的不典型增生,发生率为80%~100%。接种后63天,共出现3例浸润癌,其中模型组2/7,TAM组1/7;而CXRG组表现与49天时相似。结论:复方仙蓉颗粒能抑制或减缓MCF-10AT乳腺癌癌前病变的增殖,作用优于三苯氧胺。 展开更多
关键词 复方仙蓉颗粒 三苯氧胺 mcf-10at细胞株 乳腺癌癌前病变模型
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Line 10肝癌细胞产生的肿瘤生长因子对人肝上皮癌细胞体外增殖的影响 被引量:2
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作者 楼慧泉 吕昌龙 +3 位作者 张建 刘健 鲍蕾 阎建忠 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期353-355,358,共4页
目的:检测近交2系豚鼠肝癌细胞line10分泌的生长因子TuGF(s)对人肝上皮癌细胞(BEL-7402)生长的影响。方法:集落形成测定法检测TuGF(s)对BEL-7402细胞在软琼脂培养基内生长的影响。MTT法测... 目的:检测近交2系豚鼠肝癌细胞line10分泌的生长因子TuGF(s)对人肝上皮癌细胞(BEL-7402)生长的影响。方法:集落形成测定法检测TuGF(s)对BEL-7402细胞在软琼脂培养基内生长的影响。MTT法测定TuGF(s)对BEL-7402细胞在液体培养基内增殖的影响。结果:软琼脂培养基内培养时TuGF(s)对BEL-7402细胞无集落形成促进或抑制作用;单层培养的条件下,TuGF(s)对BEL-7402细胞在1×105个/ml接种细胞浓度下,具有促进细胞生长的作用;而在1×104个/ml细胞浓度下,则为抑制细胞生长的作用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 line10细胞 肿瘤生长因子 BEL-7402
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人白细胞介素10在支气管上皮细胞株H292中的表达及生物活性鉴定 被引量:1
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作者 程远雄 钟南山 +1 位作者 徐军 赖克方 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期853-856,共4页
目的 探讨在支气管上皮细胞H2 92株 (H2 92 )中表达人白细胞介素 10 (hIL 10 ) ,并鉴定其生物活性。方法 将载有hIL 10基因的pcDSRα质粒 (pcDSRα IL 10 ) ,经脂质体Fuge 6介导转染H2 92株。应用逆转录聚合酶反应 (RT)及聚合酶链式反... 目的 探讨在支气管上皮细胞H2 92株 (H2 92 )中表达人白细胞介素 10 (hIL 10 ) ,并鉴定其生物活性。方法 将载有hIL 10基因的pcDSRα质粒 (pcDSRα IL 10 ) ,经脂质体Fuge 6介导转染H2 92株。应用逆转录聚合酶反应 (RT)及聚合酶链式反应 (PCR) ,检测转染后 48hH2 92株中IL 10mRNA的表达 ;用ELISA法测定hIL 10在不同时段H2 92培养上清液中的表达的量 ;分析hIL 10对LPS诱导T淋巴细胞IFN γ分泌的抑制作用。结果 RT PCR检测显示转染后的H2 92中有hIL 10mRNA表达 ,未转染的H2 92则未能检测到其mRNA表达。ELISA检测转染后H2 92上清液中 2 4h已有hIL 10表达 ,48h达高峰 ,以后逐渐下降 ,未转染组上清液则无IL 10表达。表达的hIL 10与标准hIL 10对LPS诱导的IFN γ分泌抑制作用差别不显著 (P >0 .0 5 ) ,均显著强于未转染组 (P <0 .0 1)。结论 重组的hIL 10pcDSRα质粒可成功在H2 92中表达hIL 10 ,表达的hIL 10有理想的生物活性 ,可用于体内转基因研究。 展开更多
关键词 IL-10 转基因治疗 支气管上皮细胞 pcDSRα质粒
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重组ACTH(4-10)与GDNF融合蛋白及其生物活性研究
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作者 陈哲宇 张勇 +2 位作者 何成 路长林 吴祥甫 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第1期67-71,共5页
通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可... 通过PCR方法构建了促肾上腺皮质激素 4 10 (ACTH (4 10 ) )与胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)的融合基因 ,并将它重组克隆到表达载体 pET 2 8a (+ )中 ,构建表达质粒pET ACTH (4 10 ) GDNF ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,经IPTG诱导可高效表达ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白 .用Ni2 + NTA树脂一步法纯化目的蛋白 ,纯度达 85 %以上 .纯化和复性的ACTH (4 10 ) GDNF融合蛋白能显著促进脊髓神经元存活 ,作用强于ACTH (4 10 )及GDNF蛋白 . 展开更多
关键词 促肾上腺皮质激素4-10 胶质细胞源性营养因子 融合蛋白 基因表达
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稳定表达IL-10的PK-15细胞的构建及其在PCV2增殖中的应用 被引量:2
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作者 张敬寒 李枝兰 +6 位作者 韩佃刚 何帅 刘金华 吕念词 邹丰才 柴俊 张以芳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1085-1095,共11页
【目的】研究白细胞介素-10(IL-10)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)复制的影响,筛选PCV2高感染性细胞系和提高PCV2病毒滴度,为后续疫苗的研发及IL-10在PCV2感染中的作用研究提供参考。【方法】利用PCR技术扩增猪IL-10... 【目的】研究白细胞介素-10(IL-10)对猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)复制的影响,筛选PCV2高感染性细胞系和提高PCV2病毒滴度,为后续疫苗的研发及IL-10在PCV2感染中的作用研究提供参考。【方法】利用PCR技术扩增猪IL-10基因,将目的基因与慢病毒表达载体(pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP+Puro)进行连接,获得重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞进行慢病毒包装。用收集的慢病毒液感染PK-15细胞,经嘌呤霉素筛选后得到细胞株PK-15-IL-10,对照组细胞分别命名为PK-15-pCDH和PK-15。PCV2感染PK-15-IL-10、PK-15-pCDH和PK-15细胞株后,在24、48和72 h分别收集细胞液,利用CCK-8检测细胞活力。利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测IL-10基因的表达水平和PCV2的复制情况;利用间接免疫荧光试验(IFA)观察PCV2在细胞中的复制情况及测定PCV2的病毒滴度(TCID50)。【结果】试验成功构建了重组质粒pCDH-CMV-IL-10,将其与包装质粒psPAX2和pMD2.G共转染293T细胞后,48 h时细胞状态最好,荧光最强。分别收集共转染48和72 h的慢病毒液上清感染PK-15细胞,pCDH-CMV-IL-10组的荧光最强,将其在嘌呤霉素浓度为2.5μg/mL的完全培养基中继续培养,获得仍有绿色荧光的稳转细胞株。实时荧光定量PCR和Western blotting检测发现,IL-10基因在pCDH-IL-10细胞株中的表达量明显高于对照组PK-15-pCDH和PK-15,PCV2的拷贝数增加了4倍,复制能力增强,且将病毒稀释连续传3代后,PK-15-IL-10细胞中的PCV2极显著高于PK-15细胞(P<0.01)。细胞增殖试验表明,猪IL-10基因在细胞中过表达对细胞活力无明显影响;IFA结果表明,PK-15-IL-10细胞中的荧光比PK-15细胞更强,PCV2在PK-15-IL-10细胞中的TCID50在感染后48 h极显著高于PK-15细胞(P<0.01)。【结论】本研究成功构建了pCDH-CMV-IL-10的慢病毒表达载体,并利用其感染PK-15细胞,继续培养后筛选出过表达IL-10的PK-15-IL-10细胞株,用PCV2感染该细胞株能促进PCV2在PK-15细胞中的复制。本试验结果为后期疫苗研究提供了参考,为进一步研究IL-10对PCV2在PK-15细胞中复制的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型(PCV2) 白细胞介素-10(IL-10) 免疫抑制 慢病毒表达载体 稳定表达细胞系
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