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Gelsolin表达下调降低鼠源肝癌细胞的侵袭能力 被引量:2
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作者 王绍清 孙明忠 +2 位作者 刘淑清 王波 唐建武 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第16期948-952,共5页
目的:研究高低淋巴道转移力细胞株Hca-F(淋巴道转移>80%)和Hca-P(淋巴道转移<30%)细胞中gelsolin的表达及其对Hca-F细胞侵袭能力的影响,阐明gelsolin在肝癌淋巴道转移过程中发挥的作用方法:应用荧光差异双向凝胶电泳技术及质谱定... 目的:研究高低淋巴道转移力细胞株Hca-F(淋巴道转移>80%)和Hca-P(淋巴道转移<30%)细胞中gelsolin的表达及其对Hca-F细胞侵袭能力的影响,阐明gelsolin在肝癌淋巴道转移过程中发挥的作用方法:应用荧光差异双向凝胶电泳技术及质谱定量和鉴定gelsolin在Hca-F细胞和Hca-P细胞中的表达;构建pSileneer-shR-NA-gelsolin表达载体,稳定转染Hca-F细胞并获得gelsolin的表达稳定下调的Hca-F细胞株,同时建立稳定转染pSilencer-无关序列Hca-F细胞株作为对照,在mRN水平和蛋白水平检测干扰后gelsolin的表达;Transwell 小室体外侵袭试验观察下调gelsolin表达后对Hca-F 细胞侵袭能力的影响结果:Gelsolin基因在Hca-F细胞中表达高于是Hca-P细胞( F/P= 1.7 );获得gelsolin稳定下调的Hca-F细胞株,RT-PCR和Wesiern Blot分析结果表明在稳定转染Hca-F细胞中,gelsolin在基因水平和蛋白水平的表达明显下调;在体外侵袭实验中,Hca-F细胞、对照组细胞、干扰组细胞穿过人工基底膜的细胞在570nm处的吸光度分别为0.2007±0.0129、0.2236±0.0446和0.1557±0.0051;表明下调gelsolin蛋白表达后,干扰组细胞穿过人工基底膜的细胞吸光度显著降低(P<0.05)。下调Hca-F细胞中gelsolin的表达后,转移的肿瘤细胞数量减少,癌细胞的侵袭能力下降结论:通过抑制gelsoin基因和蛋白的表达,可以降低鼠源肝癌细胞Hca-F侵袭能力的作用。 展开更多
关键词 gelSOLIN 荧光差异双向凝胶电泳 肝肿瘤 侵袭 淋巴道转移
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采用定量蛋白质组学技术筛选小鼠肝癌淋巴道转移相关蛋白 被引量:21
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作者 孙成荣 唐建武 +7 位作者 孙明忠 刘淑清 张宏颖 王波 宋波 张亚楠 张竹清 赵志英 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第8期856-864,共9页
淋巴道转移是上皮来源恶性肿瘤转移的早期阶段,其发生机制不清,一直是肿瘤学研究面临的难题,为寻找淋巴道转移相关蛋白,以一对来源于同一亲本细胞,且淋巴道转移潜能显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株为研究对象,其中Hca-F为高淋巴道转移... 淋巴道转移是上皮来源恶性肿瘤转移的早期阶段,其发生机制不清,一直是肿瘤学研究面临的难题,为寻找淋巴道转移相关蛋白,以一对来源于同一亲本细胞,且淋巴道转移潜能显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株为研究对象,其中Hca-F为高淋巴道转移力细胞株,Hca-P为低淋巴道转移力细胞株,采用定量蛋白质组学技术——荧光差异双向凝胶电泳,建立了高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤淋巴道转移相关的蛋白质.经DeCyde软件分析,共得到163个有统计学差异的蛋白质点,选择2倍以上的差异性蛋白质点23个,经质谱鉴定得到17个蛋白质,在Hca-F中高表达的蛋白质有7个:转羟乙醛酶、波形蛋白、肌酸激酶(脑)、膜联蛋白7、膜联蛋白5、烯酰辅酶A水合酶1(过氧化物酶体)、核内异质核糖核蛋白A2/B1异构体1.而在Hca-F中低表达的蛋白质有10个:真核翻译延长因子2、Ero1样蛋白、乙醛脱氢酶2(线粒体)、苹果酸盐脱氢酶2(NAD)、β-内酰胺酶2、谷胱甘肽S转移酶"1、泛素C末端水解酶同工酶L3、内质网蛋白29(前体)、溶血磷脂酶1、微管不稳定蛋白.这些差异性蛋白质的功能涉及到代谢、蛋白质分泌、蛋白质结合、核苷酸结合,钙离子结合、凋亡和调节生长等过程.对这些蛋白质功能的进一步验证,将有助于解析肿瘤淋巴道转移的分子机制. 展开更多
关键词 肝癌 淋巴道转移 定量蛋白质组 荧光差异双向凝胶电泳 质谱
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人膝骨关节炎血清生物学标志物的筛选 被引量:7
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作者 曾花 蔡道章 +5 位作者 陈郁鲜 曾春 叶志强 庄泽 黎明涛 胡坤华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期884-888,共5页
目的:比较膝骨关节炎患者与正常人血清蛋白质组的差异,筛选其能用于骨关节炎诊断、治疗或发病机制研究的血清生物学标志物。方法:利用双向荧光差异凝胶电泳技术比较膝骨关节炎患者血清(4例)与健康志愿者血清(4例)蛋白图谱的差异,使用基... 目的:比较膝骨关节炎患者与正常人血清蛋白质组的差异,筛选其能用于骨关节炎诊断、治疗或发病机制研究的血清生物学标志物。方法:利用双向荧光差异凝胶电泳技术比较膝骨关节炎患者血清(4例)与健康志愿者血清(4例)蛋白图谱的差异,使用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱及生物信息学相关技术对获得的差异蛋白进行鉴定和初步分析,并用Western blotting进一步验证所鉴定的蛋白。结果:成功建立了骨关节炎血清差异蛋白质组学的研究方法;通过质谱分析初步鉴定出8个差异蛋白,其中5个蛋白在膝骨关节炎组表达上调,3个蛋白在膝骨关节炎组表达下调。Western blotting进一步验证得到α2-巨球蛋白在膝骨关节炎组表达上调,与双向荧光胶内差异凝胶电泳技术联合质谱分析的结果一致。结论:膝骨关节炎患者血清与正常人血清蛋白表达存在明显差异,其中α2-巨球蛋白可作为骨关节炎潜在的疾病相关生物学标志物进一步研究,为骨关节炎的诊断、治疗和发病机制的研究提供新的线索和实验基础。 展开更多
关键词 骨关节炎 血清 生物学标记物 双向荧光差异凝胶电泳
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LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的定量蛋白质组学研究 被引量:6
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作者 李美香 肖志强 +7 位作者 彭芳 李国庆 张鹏飞 李茂玉 李萃 李峰 刘迎福 陈主初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1122-1133,共12页
间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视.为寻找与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双... 间质在肿瘤发生发展中的作用越来越受到重视.为寻找与鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)发生发展相关的特异性间质蛋白,采用激光捕获显微切割技术(laser capture microdissection,LCM)纯化鼻咽癌间质和正常鼻咽黏膜间质,荧光差异双向凝胶电泳(fluorescent two-dimensional difference gel electrophoresis 2-D,DIGE)结合质谱技术分离鉴定间质相关蛋白.Westernblot及免疫组织化学技术验证了其中3个差异蛋白(CapG、L-plastin和S100A9),证实了2D-DIGE结果的可靠性.建立了LCM纯化的鼻咽癌间质和正常鼻咽间质的荧光差异蛋白表达图谱,高通量筛选与肿瘤发生相关的间质蛋白,共得到34个有统计学意义的蛋白质点,质谱鉴定得到20个差异蛋白.研究结果提示:这些差异表达的蛋白质将有助于阐明鼻咽癌细胞和周围间质的关系.对间质蛋白功能的进一步研究,将有助于解析间质在肿瘤发生中的作用机制,并为从间质途径寻找肿瘤治疗靶标提供新思路. 展开更多
关键词 鼻咽癌 间质 激光捕获显微切割 荧光差异双向凝胶电泳 质谱 免疫组织化学
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鼠肝癌淋巴道转移细胞模型的蛋白质组学研究 被引量:7
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作者 孙明忠 刘淑清 唐建武 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期517-524,共8页
对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细... 对2株来源于同一亲本细胞但淋巴道转移力显著不同的小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F(淋巴结转移率75%)和Hca-P(淋巴结转移率25%),采用荧光差异双向凝胶电泳(2D DIGE)和DeCyder定量分析软件及HPLC-nESI-MS/MS技术,定量分析和鉴定了小鼠肝癌细胞Hca-F和Hca-P的差异表达蛋白.结果显示,有116个蛋白质点表达水平存在明显差异(p<0.05),在Hca-F中表达上调蛋白质点62个,下调蛋白质点54个.对所有116个蛋白质点进行了电喷雾串联质谱鉴定,共鉴定出109种单一(Unique)蛋白.其中部分蛋白已被报道与不同类型肿瘤的发生、浸润和转移相关,多数蛋白质被首次报道与肝癌的淋巴道转移过程直接相关. 展开更多
关键词 荧光差异双向凝胶电泳 高压液相色谱-电喷雾质谱联用 肝癌 淋巴结转移
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中波紫外线与化学致癌物诱导下HaCaT细胞的蛋白表达应答 被引量:1
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作者 孙明忠 刘淑清 +4 位作者 吕晓 郭一萌 郭春梅 辛毅 唐建武 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1965-1971,共7页
对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激,利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术,对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了... 对角质形成细胞HaCaT分别进行中波紫外线(UVB)照射、2,4-二硝基苯磺酸(DNBS)刺激及UVB+DNBS(UD)共同刺激,利用二维荧光差异胶内凝胶电泳(2D DIGE)、DeCyder定量分析软件和HPLC-nESI-MS/MS分析技术,对HaCaT细胞产生的差异表达蛋白进行了鉴定.有65个蛋白质点发生了明显表达差异(P<0.05),与UVB或DNBS单独处理细胞相比,有41个蛋白点表现为UVB和DNBS的正协同效应,13个蛋白点表现为负协同效应,5个蛋白点与UVB单独处理相近,6个蛋白点与DNBS单独处理相近.HPLC-nESI-MS/MS从65个差异表达蛋白质点中共鉴定出60种单一(Unique)蛋白.采用生物信息学方法对这些鉴定蛋白所涉及的分子功能、参与的生物学过程及信号通路进行了系统分析.实验得到了与紫外辐射和化学诱导损伤的直接相关蛋白,有助于研究不同环境条件下皮肤癌的形成及皮肤疾病的有效防护与治疗. 展开更多
关键词 HaCaT细胞系 中波紫外线 2 4-二硝基苯磺酸 二维荧光差异胶内凝胶电泳
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采用定量蛋白质组学技术筛选急性髓系白血病HL-60细胞的甲基化相关基因(英文) 被引量:1
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作者 汤参娥 谭潭 +7 位作者 肖艳华 阮林 李萃 彭芳 李茂玉 张鹏飞 易红 肖志强 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期641-648,共8页
目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-... 目的:筛选人急性髓系白血病细胞株HL-60甲基化沉默基因,为揭示白血病的发病机制及防治提供科学依据。方法:应用荧光差异双向凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference gel electro-phoresis,F-2D-DIGE)分离甲基转移酶抑制剂5-杂氮-2-脱氧胞苷(5-aza-2-dC)处理与未处理的HL-60细胞的总蛋白质,Decyder和PDquest图像分析软件识别差异表达蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术鉴定差异表达蛋白质。结果:建立了5-aza-2-dC处理与未处理的HL-60细胞蛋白质的F-2D-DIGE图谱,图像分析识别了53个差异表达的蛋白质点,质谱分析鉴定了35个差异表达的蛋白质,其中32个蛋白质在5-aza-2-dC处理后的HL-60细胞中表达上调,3个蛋白质表达下调。结论:35个差异表达蛋白可能与甲基化相关,为白血病的表观遗传学研究提供了有价值的信息。 展开更多
关键词 HL-60 甲基化 荧光差异双向凝胶电泳 5-杂氮-2-脱氧胞苷
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宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织差异表达蛋白分析 被引量:2
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作者 何玥 吴玉梅 +4 位作者 赵群 王晓丽 陈硕 钱小红 张玉祥 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第1期36-44,共9页
目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京... 目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科收治的正常子宫颈组织因子宫肌瘤手术行全子宫切除术患者9例为对照组、CIN组织23例(其中CINⅠ7例、CINⅡ8例、CINⅢ8例)。应用二维荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2-DDIGE)及DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分析差异蛋白质点,数据库搜索鉴定差异表达最明显的S100蛋白家族A9(S100 calcium-binding protein A9,S100A9),真核延长因子1α1(eukaryoticelongation factor 1-alpha-1,eEF1A1)及丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)3种蛋白质;应用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)(其中正常宫颈组织10例、CINⅠ10例、CINⅡ10例、CINⅢ10例)及蛋白印记法(Western blotting)(其中正常宫颈组织12例,CINⅠ~Ⅱ12例,CINⅢ12例)进一步验证上述3种蛋白在CIN组织和正常宫颈组织的表达差异。结果获得CIN组织与正常宫颈组织2-D DIGE图,成功鉴定25个蛋白;免疫组化及蛋白印迹验证结果提示:S100A9蛋白表达于细胞质中,在CIN中表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P=0.010);eEF1A1蛋白表达于细胞质中、PKM2蛋白表达于细胞核中,2者在CIN中表达水平均低于正常组,差异有统计学意义(P分别为0.352,0.000)。结论在正常宫颈组织与CIN组织之间存在差异蛋白质表达,S100A9蛋白可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,PKM2蛋白可能成为抑制CIN发生的蛋白质,并可根据2种差异蛋白表达预测CIN的发生发展。 展开更多
关键词 蛋白质组学 宫颈上皮内瘤变 二维荧光差异凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱
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应用2D-DIGE技术分析柑橘衰退病毒诱导的甜橙差异表达蛋白
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作者 杨方云 李中安 +1 位作者 周常勇 周彦 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期16-21,I0002,共7页
【目的】为了研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)诱导甜橙差异表达蛋白的分离和鉴定,【方法】以接种了CTV的甜橙植株为实验组,健康植株为对照组,利用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术分析CTV诱导的甜橙差异表达蛋白。【结... 【目的】为了研究柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)诱导甜橙差异表达蛋白的分离和鉴定,【方法】以接种了CTV的甜橙植株为实验组,健康植株为对照组,利用双向荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)技术分析CTV诱导的甜橙差异表达蛋白。【结果】以t检验P<0.05和相对表达量≥1.5的水平作为判别标准,获得了91个CTV诱导的差异表达蛋白点,在实验组中含量高于对照组的蛋白56个,含量低于对照组的蛋白35个。通过MALDI-TOF质谱分析成功鉴定从中选择的37个蛋白点,其中19个蛋白功能明确,16个为预测或假定具有某种蛋白功能,包括与抗氧化相关的硫氧还蛋白、铁氧还蛋白、超氧化物歧化酶和抗坏血酸过氧化酶,与代谢相关的磷酸甘油酸酯水解酶、木葡聚糖内糖基转移酶、变味蛋白,分子伴侣热激蛋白,折叠酶肽酰脯氨酰顺反式异构酶,以及与光合代谢相关的蛋白等。【结论】CTV的侵染影响到甜橙各种复杂的生物学过程。 展开更多
关键词 柑橘 衰退病毒 蛋白 双向荧光差异凝胶电泳
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米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质组及其对温度变化的响应研究
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作者 王坤 王沛 +2 位作者 张浩 张树峰 王大志 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期652-663,共12页
米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)近年在我国福建、浙江和广东沿海经常形成赤潮,其赤潮不仅影响到海洋生态系统的稳定,也严重威胁到水产养殖以及人类生命健康安全。本论文以米氏凯伦藻为研究对象,建立了米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质荧光标... 米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)近年在我国福建、浙江和广东沿海经常形成赤潮,其赤潮不仅影响到海洋生态系统的稳定,也严重威胁到水产养殖以及人类生命健康安全。本论文以米氏凯伦藻为研究对象,建立了米氏凯伦藻细胞表面膜蛋白质荧光标记技术和细胞膜蛋白质提取方法,运用荧光差异凝胶电泳技术(2-DDIGE)对膜蛋白质进行了分析,并研究了米氏凯伦藻的膜蛋白质组及其对环境温度变动的响应。实验共鉴定到44个细胞表面膜蛋白,其中有效注释27个,主要为转运蛋白、HSP70蛋白家族和捕光蛋白等。米氏凯伦藻在20℃条件下的细胞生长和光合作用要明显好于16℃和12℃,但16℃和12℃条件下的差别不大,表明低温限制了米氏凯伦藻的生长。当米氏凯伦藻从12℃快速转移至16℃和20℃时,藻细胞密度和光合作用效率短时间迅速降低,但细胞很快即适应温度变化。细胞膜上的转运蛋白和光合作用蛋白在其适应温度变化中起着重要作用。 展开更多
关键词 米氏凯伦藻 温度 膜蛋白质 蛋白质组 差异荧光凝胶电泳技术
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