蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579 CK2β和Akt表达的影响 被引量：5

1

作者 刘超 刘洋 +2 位作者 赵颂 王翠瑶 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期276-280,共5页

目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100... 目的:观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法:体外培养SW579细胞,实验分为对照组(未加任何处理组和DMSO组)、TBB组(终浓度为25μmol·L-1)和Wortmannin组(终浓度为100 nmol·L-1)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果:与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加(P<0.01),细胞内CK2的活性明显降低(P<0.01)。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA表达水平显著降低(P<0.01),Akt的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化(P>0.05),TBB组CK2β的表达明显降低(P<0.01),同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制(P<0.01),总Akt水平无明显变化。结论:TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。 展开更多

关键词 四溴苯三唑 甲状腺鳞癌 ck2β AKT/PKB SW579

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CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系 被引量：5

2

作者 李红伟 李多杰 +3 位作者 柴大敏 江浩 汪朝歌 马莉 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期200-205,共6页

目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与... 目的探讨CIP2A和CK2β蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达意义及对患者预后的影响。方法采用免疫组织化学法检测155例ESCC组织(实验组)、50例癌旁正常黏膜组织(对照组)中CIP2A和CK2β蛋白的表达,分析CIP2A和CK2β蛋白表达水平及与临床病理参数之间的关系,应用Kaplan-Meier生存分析和Cox多因素分析对ESCC患者的生存情况进行分析。结果 CIP2A和CK2β蛋白在ESCC组织中的表达阳性率分别为76.67%和66.45%,均明显高于正常对照组的16.00%和12.00%,差异有统计学意义(均P=0.000)。CIP2A蛋白与ESCC的淋巴结转移及临床分期有关(P=0.005,P=0.000),而与患者的年龄、性别、组织学分级和浸润深度等无相关性。CK2β蛋白的表达与ESCC的组织学分级、淋巴结转移和临床分期有关(P=0.000,P=0.004,P=0.000),而与患者的年龄、性别和浸润深度无相关性。CIP2A与CK2β蛋白表达呈正相关(r=0.611,P=0.000)。ESCC患者总体5年生存率为23.33%。CIP2A蛋白表达阳性患者的5年生存率为8.11%(9/111),阴性者为66.67%(26/39),差异具有统计学意义(P=0.000)。CK2β蛋白表达阳性患者的5年生存率为6.06%(6/99),阴性者为56.86%(29/51),差异具有统计学意义(P=0.000)。Cox多因素预后分析显示,TNM临床分期和CIP2A及CK2β蛋白表达水平是影响ESCC患者预后的独立因素(P=0.008,P=0.013,P=0.000)。结论 CIP2A和CK2β的表达与ESCC发生及发展密切相关,其可能参与了ESCC的浸润及转移,阳性表达者预后较差。联合检测2种蛋白的表达对判断ESCC的预后具有重要意义。 展开更多

关键词 食管鳞状细胞癌 CIP2A ck2β 预后

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重组人CK2β亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：29

3

作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第2期201-205,共5页

将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg... 将构建成功的人蛋白激酶CK2 β亚基cDNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,在IPTG诱导下表达 .表达蛋白大多数以不溶形式存在 .6L (约 10 2g)表达菌抽提得到约 2 0mg的可溶性表达产物 ,通过P11磷酸纤维素一步层析分离 ,得到 6 8mg纯化蛋白 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示纯化的蛋白为一分子质量2 6ku的单一蛋白带 .蛋白质印迹结果证明 :纯化的表达产物与抗人CK2 β抗体可发生特异性免疫反应 .CK2 β亚基对CK2α有激活作用 ,纯化的CK2α和β亚基在等摩尔混合时即可组成有最大生物活性的全酶 .实验结果有力地证明了克隆表达与纯化的重组蛋白是人蛋白激酶CK2 β亚基 . 展开更多

关键词 人蛋白激酶 ck2β亚基 蛋白质纯化 基因表达

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蛋白激酶CK2β SiRNA对肺腺癌细胞A549增殖的抑制作用 被引量：3

4

作者 阮杰 王菲菲 +3 位作者 刘新光 骆艳婷 刘振杰 梁念慈 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期701-706,共6页

目的:探讨蛋白激酶CK2B特异性小干扰RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响。方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,... 目的:探讨蛋白激酶CK2B特异性小干扰RNA对肺腺癌细胞系A549生长增殖的影响。方法:构建CK2βsiRNA表达质粒稳定转染A549细胞,RT-PCR、免疫印迹、免疫细胞化学技术检测转染前后CK2β的mRNA和蛋白表达水平,同位素掺入法测定细胞内CK2活性,细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间,流式细胞术分析细胞周期。结果:与空白组和阴性对照组相比,稳定转染pGPU6-CSNK2B质粒后,A549细胞中CK2β的mRNA水平、胞浆蛋白表达水平以及CK2活性均明显下降(P<0.05),但各组间细胞核中CK2β的蛋白表达水平无明显差异(P>0.05);A549细胞生长明显受到抑制,倍增时间增加;A549细胞阻滞于G0/G1期。结论:CK2β siRNA可以下调A549细胞中CK2β的表达及其激酶活性,并抑制细胞增殖;本研究为CK2特异性siRNA作为抗肿瘤药物的开发和CK2药靶的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 肺肿瘤 癌 蛋白激酶ck2 ck2β SIRNA

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高表达Ck2β与大肠癌发生和转移的相关性研究 被引量：3

5

作者 邹金金 罗何三 +3 位作者 黄志勇 董忠谊 曾钦 吴德华 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期628-632,共5页

目的探讨ck2β蛋白在正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达及其在大肠癌发生及转移中的作用。方法采用免疫组化方法检测46例正常大肠粘膜组织、20例大肠腺瘤及66例大肠癌组织中ck2β蛋白的表达。用RNA干扰技术沉默大肠癌细胞中ck... 目的探讨ck2β蛋白在正常大肠粘膜、大肠腺瘤和大肠癌组织中的表达及其在大肠癌发生及转移中的作用。方法采用免疫组化方法检测46例正常大肠粘膜组织、20例大肠腺瘤及66例大肠癌组织中ck2β蛋白的表达。用RNA干扰技术沉默大肠癌细胞中ck2β蛋白表达,Western blot实验检测干扰效果;平板克隆形成实验检测细胞增殖能力的变化;Tran-swell侵袭小室实验检测细胞侵袭能力的变化。结果 ck2β在正常大肠粘膜组织中不表达或弱表达,核表达阳性率为8.7%,浆表达阳性率为13.0%;在大肠腺瘤组织中中度表达,60%呈核阳性表达,40%呈浆阳性表达;而在大肠癌组织中,ck2β呈强阳性表达,核表达阳性率为75.8%,浆表达阳性率为62.1%,三者间差异有统计学意义(P<0.05)。ck2β蛋白表达与大肠癌的淋巴结转移密切相关,伴发淋巴结转移的大肠癌组织ck2β阳性表达明显高于无淋巴结转移者(P<0.05)。体外实验发现,沉默大肠癌细胞中ck2β的表达能显著抑制细胞的增殖及侵袭能力。结论 ck2β蛋白的表达与大肠癌的发生和转移密切相关。 展开更多

关键词 ck2β 大肠癌发生 大肠癌转移

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蛋白激酶CK2β小干扰RNA促进小鼠受精卵早期发育 被引量：1

6

作者 刘超 任丽莉 +1 位作者 刘洋 肖建英 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期678-682,共5页

目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,... 目的:利用特异性小发夹RNA(siRNA)寡核苷酸片段,研究蛋白激酶CK2调节亚基CK2β对小鼠受精卵早期发育的影响,阐明调控小鼠受精卵早期发育的机制。方法:超排卵获得小鼠1-细胞期受精卵,分别显微注射TE缓冲液、scramble siRNA和CK2βsiRNA,收集卵细胞后用RT-PCR和Western blotting方法检测CK2βsiRNA的干涉效能;相差显微镜观察受精卵的形态变化、计数卵裂率;放射自显影测定M期促进因子(MPF)活性。结果:与TE缓冲液和scramble siRNA组比较,CK2βsiRNA组CK2β的mRNA水平和蛋白表达显著降低(P<0.01),MPF的活性明显升高(P<0.01),在人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射后28.5h达到高峰;受精卵第一次有丝分裂加速,CK2βsiRNA组在hCG注射后28.5h大多数受精卵已经分裂为2-细胞期胚胎;hCG注射后32.0h卵裂率为89.5%,与TE缓冲液和scramble siRNA组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CK2βsiRNA通过提前激活MPF活性,进而促进小鼠1-细胞期受精卵的发育。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2β SIRNA M期促进因子 小鼠受精卵

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重组人蛋白激酶CK2β亚基cDNA的克隆与测序 被引量：33

7

作者 刘新光 梁念慈 +1 位作者 马涧泉 刘文 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期228-231,共4页

蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／... 蛋白激酶ＣＫ２是一种存在的信使非依赖性丝／苏氨酸蛋白激酶．它是由两个催化亚基（α或α′）和两个调节亚基（β）组成的不均一四聚体．用反转录ＰＣＲ从ＨＬ－６０细胞中获得了人蛋白激酶ＣＫ２β亚基编码区ｃＤＮＡ，将ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切ＰＣＲ产物连接到表达载体ｐＴ７－７的ＮｄｅⅠ／ＨｉｎｄⅢ双酶切位点中．转化感受态细菌ＤＨ５α获得转化子，阳性筛选率为７２％．限制性酶切分析结果表明，插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符．随机挑选４个阳性质粒测定其插入片段ＤＮＡ序列，结果显示有２个含有正确插入的人蛋白激酶ＣＫ２βｃＤＮＡ，命名为ｐＴＣＫＢ．其余２个克隆分别存在１个和２个点突变，即在其编码区ｃｏｎｄｏｎ１４８的ＴＣＡ→ＴＴＡ，结果Ｓｅｒ→Ｌｅｕ；另一个则在Ｃｏｎｄｏｎ１４３ＧＴＧ→ＡＴＧ，Ｖａｌ→Ｍｅｔ；Ｃｏｎｄｏｎ１７０ＧＴＧ→ＧＣＧ，Ｖａｌ→Ａｌａ．重组质粒（ｐＴＣＫＢ）克隆的成功，将为在原核细胞中表达蛋白激酶ＣＫ２β亚基以及利用ＣＫ２βｃＤＮＡ作为探针进行深入研究打下基础． 展开更多

关键词 人蛋白激酶ck2 Β亚基 DNA测序 重组 CDNA

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宫颈癌组织中CD24、CK2β分子表达量与癌细胞生长的关系研究 被引量：5

8

作者 周秋媛 王红莉 +2 位作者 李虹 李伟 徐艳华 《海南医学院学报》 CAS 2018年第3期394-397,401,共5页

目的:探讨宫颈癌组织中CD24、CK2β分子表达量与癌细胞生长的关系。方法:2016年7月~2017年10月在本院接受宫颈癌根治术治疗的原发性宫颈癌患者118例,取术中宫颈癌组织及癌旁正常组织分别作为宫颈癌组、癌旁组织组。采用荧光定量PCR法检... 目的:探讨宫颈癌组织中CD24、CK2β分子表达量与癌细胞生长的关系。方法:2016年7月~2017年10月在本院接受宫颈癌根治术治疗的原发性宫颈癌患者118例,取术中宫颈癌组织及癌旁正常组织分别作为宫颈癌组、癌旁组织组。采用荧光定量PCR法检测其中CD24、CK2β以及增殖基因、凋亡基因、自噬基因的表达量。采用Pearson检验评估宫颈癌组织中CD24、CK2β分子表达量与癌细胞生长的关系。结果:宫颈癌组中CD24、CK2βmRNA的表达量高于癌旁组织组;增殖基因MTA1、HPV18-E7、EZH2、Prdx4mRNA的表达量高于癌旁组织组,SFRP2、FOXF2 mRNA的表达量低于癌旁组织组;凋亡基因Caspase-3、Caspase-9、Fas mRNA的表达量低于癌旁组织组,FasL mRNA的表达量高于癌旁组织组;自噬基因Beclin1、ARHI、PULK、PI3KC3 mRNA的表达量低于癌旁组织组,p62mRNA的表达量高于癌旁组织组。Pearson检验发现,宫颈癌组织中CD24、CK2β基因表达量与增殖基因、凋亡基因、自噬基因的表达量直接相关。结论:CD24、CK2β基因在宫颈癌组织中异常高表达,直接参与癌细胞的增殖、凋亡及自噬过程。 展开更多

关键词 宫颈癌 CD24 ck2β 增殖 凋亡 自噬

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人蛋白激酶CK2α′亚基在大肠杆菌中的克隆、表达及其重组蛋白的纯化与性质鉴定 被引量：24

9

作者 陈小文 刘新光 +1 位作者 梁景耀 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期176-182,共7页

通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符... 通过RT PCR从HL 6 0细胞获得人蛋白激酶CK2α′亚基编码区cDNA ,将NdeⅠ HindⅢ双酶切的PCR产物和pT7 7表达载体进行定向克隆、细菌转化、电泳初筛和限制性酶切分析鉴定 .随机挑选阳性克隆进行DNA测序确证 ,筛选含与已知序列完全相符的重组质粒 (命名为pTCKA′) .将其转化BL2 1(DE3)菌 ,IPTG诱导后未见高效特异表达 .然后将人CK2α′cDNA亚克隆至GST融合蛋白表达载体 ,经同样转化和诱导步骤后可见一蛋白特异高效表达 .Western印迹结果证明 :该蛋白能与兔抗人CK2α′3 3 3 3 50 肽段抗血清发生特异性免疫反应 .采用GSH Sepharose 4B柱纯化 ,凝血酶酶切 ,最后从 4g细菌获 4 4mg纯化重组蛋白 .通过性质鉴定和酶动力学分析证明 :克隆、表达和纯化的重组蛋白是有生物学活性的人CK2α′亚基 . 展开更多

关键词 人蛋白激酶ck2α'亚基 大肠杆菌 克隆 表达 纯化 重组蛋白 鉴定

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山奈酚抑制蛋白激酶CK2活性 被引量：15

10

作者 林小聪 刘新光 +1 位作者 陈小文 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期894-901,共8页

研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA... 研究体外以及HL-60细胞内山奈酚对蛋白激酶CK2的抑制作用及机制.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨山奈酚对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α′和β亚基的mRNA表达水平;通过Lineweaver-Burk作图法,分析CK2的酶动力学机制.山奈酚能显著抑制重组人CK2活性(IC50=1.88μmol/L)和HL-60细胞内的CK2活性,对细胞内CK2的作用效果强于阳性对照四溴-2-氮杂苯并咪唑(TBB).山奈酚作用2h,对CK2各亚基的mRNA表达水平均没有影响.山奈酚对重组人CK2的酶动力学分析表明,山奈酚与ATP(Ki=1.14μmol/L)及酪蛋白(Ki=1.03μmol/L)均呈非竞争性抑制作用.结果提示,山奈酚是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂,其作用机制可能与其阻碍CK2与ATP以及底物的结合有关. 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 山奈酚 酶动力学

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9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2活性的影响及构效浅析 被引量：7

11

作者 林小聪 李春梅 +2 位作者 刘新光 陈小文 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期733-737,共5页

目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,... 目的观察9种蒽醌类衍生物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响,并进行构效分析。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨蒽醌类衍生物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果米托蒽醌、2-羧基蒽醌、1,2-二氨蒽醌、1,8-二羟蒽醌和醌茜能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是0.66、0.81、8.81、28.76和61.26μmol·L-1;其中米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3。1-氨基蒽醌和1-氯蒽醌对CK2的作用效果较弱,其IC50值分别为143.38和221.18μmol·L-1;而蒽醌和2-乙基蒽醌对CK2的活性则没有明显的影响。构效分析表明:C2上的-COOH、C8位上的-OH以及C2上的-NH2可能分别是2-羧基蒽醌、1,8-二羟蒽醌和1,2-二氨基蒽醌的药效基团;而C2上的-CH2CH3和C1上的-Cl可能分别是2-乙基蒽醌和1-氯蒽醌的非必需基团。结论米托蒽醌、2-羧基蒽醌和1,2-二氨蒽醌是3种较强的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 蒽醌类衍生物 IC50 构效分析

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重组人蛋白激酶CK 2α亚基的原核表达、纯化与鉴定 被引量：17

12

作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期17-22,共6页

将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sep... 将构建成功的人蛋白激酶 CK2 α亚基 c DNA的重组质粒 ,转化大肠杆菌 BL2 1 ( DE3) ,IPTG诱导后获特异高效表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 30 % ,但大多数重组蛋白以不溶形式存在 .表达产物依次进行 DE- 5 2、P1 1磷酸纤维素和肝素 - Sepharose柱层析分离 ,最后从 30 9mg可溶性蛋白质中得到 6.1 mg纯化蛋白 . SDS- PAGE显示纯化的蛋白质为一分子量 4 2 k D的单一蛋白带 .Western- blot的结果证明 :纯化的表达产物与抗人 CK2α抗体可发生特异性免疫反应 . CK2α和β亚基等摩尔分子混合可组成有完全活性的全酶 .重组的 CK2全酶的性质和功能与该酶的已知特性一致 .这些结果证明重组蛋白是人蛋白激酶 CK2 展开更多

关键词 人蛋白激酶ck2α亚基 原核表达 纯化 鉴定

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蛋白激酶CK2在细胞周期调控中的作用 被引量：12

13

作者 刘振杰 刘新光 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1281-1285,共5页

细胞周期的研究是生物生长、发育、遗传及医学等相关领域中重大问题研究的基础,其运转的分子基础是以Cyc lin-CDK-CK I为中心的细胞周期网络调控系统。蛋白激酶CK2在进化过程中是最保守的蛋白激酶之一,大量的研究表明,其在细胞周期的调... 细胞周期的研究是生物生长、发育、遗传及医学等相关领域中重大问题研究的基础,其运转的分子基础是以Cyc lin-CDK-CK I为中心的细胞周期网络调控系统。蛋白激酶CK2在进化过程中是最保守的蛋白激酶之一,大量的研究表明,其在细胞周期的调控中发挥着举足轻重的作用。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 细胞周期 调控

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木犀草素对蛋白激酶CK2的抑制作用 被引量：4

14

作者 林小聪 刘新光 +2 位作者 陈小文 陈伟珠 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1314-1319,共6页

目的观察体外以及细胞内木犀草素对蛋白激酶CK2活性的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ3-2P... 目的观察体外以及细胞内木犀草素对蛋白激酶CK2活性的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ3-2P]ATP的32P的放射性活度,探讨木犀草素对重组人CK2全酶以及HL-60细胞内CK2活性的抑制作用,并采用L ineweaver-Burk作图法分析其酶动力学机制。结果木犀草素能显著抑制重组人CK2活性(IC50=0.86μmol.L-1)以及HL-60细胞内的CK2活性,其对细胞内CK2的作用效果要强于阳性对照TBB。酶动力学分析表明,木犀草素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19μmol.L-1),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11μmol.L-1)。结论木犀草素是一种有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 木犀草素 酶动力学

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七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系(英文) 被引量：4

15

作者 李春梅 刘新光 +1 位作者 林小聪 陈小文 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期20-26,共7页

目的:观察7种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析。方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的... 目的:观察7种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析。方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63μmol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB。结构效应关系分析表明,C6,C3′和C4′上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个-OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2′和C5′上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用。结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 全酶 黄酮类化合物 结构效应关系

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黄色黄素抑制人白血病HL-60细胞内蛋白激酶CK2的实验研究 被引量：3

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作者 林小聪 刘新光 +2 位作者 阮杰 陈小文 梁念慈 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第2期187-195,共9页

蛋白激酶CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点,其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值.通过测定药物作用后转移到CK2底物上[γ-32P]ATP的放射性活度,探讨黄色黄素对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多... 蛋白激酶CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点,其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值.通过测定药物作用后转移到CK2底物上[γ-32P]ATP的放射性活度,探讨黄色黄素对重组人CK2全酶以及细胞内CK2活性的影响;采用多重RT-PCR检测CK2α、α'和β亚基的mRNA表达水平;Lineweaver-Burk作图法分析CK2的酶动力学机制.发现黄色黄素能显著抑制重组人CK2全酶(IC50=0.86μmol/L)以及HL-60细胞内的CK2活性,其作用效果均强于阳性对照TBB.另外,黄色黄素作用2h可使CK2α和α'亚基的mRNA表达下降,对β亚基则无明显的影响.酶动力学分析表明,黄色黄素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性.研究说明,黄色黄素是一种有效的细胞内蛋白激酶CK2抑制剂. 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 黄色黄素 HL-60细胞

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槲皮素-7-硫酸酯钠盐对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响 被引量：4

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作者 刘文 刘新光 梁念慈 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期315-318,共4页

目的　观察槲皮素 7 硫酸酯钠盐 (SQMS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法　通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP的 [3 2 P]放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果　SQMS对重组人CK2全酶有很强的抑制作... 目的　观察槲皮素 7 硫酸酯钠盐 (SQMS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法　通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP的 [3 2 P]放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果　SQMS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用 ,IC50 为 1 37μmol·L-1。CK2的动力学研究表明 :SQMS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论　SQMS是CK2的抑制剂 ,SQMS的抑制作用与ATP呈竞争性。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 重组蛋白 全酶 槲皮素 衍生物 酶动力学

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酵母双杂交筛选与蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白--泛素-52氨基酸融合蛋白的鉴定 被引量：3

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作者 陈碧 骆艳婷 +1 位作者 刘新光 梁念慈 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期826-832,共7页

蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α... 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶.为研究CK2α′亚基在精子发生中的作用机制,将构建于pACT2质粒的人睾丸cDNA文库和人蛋白激酶CK2α′为诱饵蛋白进行酵母双杂交实验.以初步筛选与人蛋白激酶CK2α′相互作用蛋白的阳性候选克隆,筛选获得8个阳性克隆,其中1个与人泛素-52氨基酸融合蛋白基因(UBA52)的cDNA序列有高度同源性(100%).GST pull-down实验在细胞外进一步证实了CK2α′与UBA52之间存在相互作用.本实验证明,人泛素-52氨基酸(UBA52)融合蛋白是人CK2α′亚基的相互作用蛋白,它们之间的相互作用对精子发生机制的影响尚不清楚,进一步分子机制研究正在进行中. 展开更多

关键词 人蛋白激酶ck2α′ 酵母双杂交系统 睾丸 人泛素-52氨基酸融合蛋白(UBA52) GST pull-down

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AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用 被引量：3

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作者 刘新光 梁念慈 马涧泉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期657-660,共4页

目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定... 目的　观察Tyrphostin中的AG1112对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法　利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP或 [γ 3 2 P]GTP的 [3 2 P]放射活度来检测。结果　重组人CK2是一种Ca2 + 、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG1112对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 6 0 μmol·L-1,抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3。AG1112对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP和酪蛋白分别呈混合性和非竞争性抑制作用。结论　由于AG1112对重组人CK2显示出很强的抑制作用 。 展开更多

关键词 蛋白激酶ck2 重组蛋白 全酶 TYRPHOSTINS AG1112 IC50 酶动力学

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RNAi介导的CK2α基因沉默对喉癌细胞上皮间质转化过程的影响 被引量：3

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作者 张芳 杨博 +1 位作者 杜莉 姜学钧 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期1253-1257,共5页

目的探讨人喉癌Hep-2细胞稳定转染干扰质粒后,蛋白激酶CK2α表达对其上皮间质转化过程的影响。方法应用体外构建的干扰质粒pGCsi-H1-CK2α稳定转染人喉癌上皮细胞Hep-2,分为未转染组(parental)、对照质粒转染组(pGCsi-H1-control)和干... 目的探讨人喉癌Hep-2细胞稳定转染干扰质粒后,蛋白激酶CK2α表达对其上皮间质转化过程的影响。方法应用体外构建的干扰质粒pGCsi-H1-CK2α稳定转染人喉癌上皮细胞Hep-2,分为未转染组(parental)、对照质粒转染组(pGCsi-H1-control)和干扰质粒转染组(pGCsi-H1-CK2α)。转染24 h后经G418筛选出稳定转染的细胞系,应用Real-time PCR和Western blot进行鉴定;采用Transwell小室检测转染后Hep-2细胞的侵袭和迁移能力;使用相差显微镜观察各组细胞形态并通过Western blot检测细胞上皮标志物E-cadherin、vimentin及转录因子slug、snail的表达。结果干扰质粒转染组中CK2α基因在m RNA和蛋白水平的表达明显低于未转染组及对照质粒转染组(P<0.01)。Transwell实验显示稳定敲低CK2α阻止了Hep-2细胞的迁移与侵袭。与未转染组及对照质粒转染组相比,干扰质粒转染组中的E-cadherin的表达增加,但是snail、slug和vimentin的表达下降。结论 RNAi介导的CK2α抑制表达抑制了喉癌细胞上皮间质转化过程。 展开更多

关键词 人喉癌上皮细胞 蛋白激酶ck2α 侵袭转移 上皮间质转化

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