红娘子蛋白提取工艺优化及其对肝癌细胞Bel-7402的影响

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作者 姜蓉 李正龙 王淑敏 《特产研究》 2025年第2期73-80,共8页

本研究旨在优化红娘子蛋白提取工艺,考察红娘子生品及炮制品蛋白成分对肝癌细胞Bel-7402的影响。试验以蛋白含量为评价指标,考察料液比、超声时间、溶液pH对红娘子蛋白提取的影响,通过正交试验优选最佳提取工艺。体外研究红娘子生品及... 本研究旨在优化红娘子蛋白提取工艺,考察红娘子生品及炮制品蛋白成分对肝癌细胞Bel-7402的影响。试验以蛋白含量为评价指标,考察料液比、超声时间、溶液pH对红娘子蛋白提取的影响,通过正交试验优选最佳提取工艺。体外研究红娘子生品及炮制品蛋白成分对Bel-7402肝癌细胞的影响,CellCountingKit-8检测对细胞活力影响;细胞集落研究对细胞增殖能力影响;划痕试验检测对细胞迁移能力影响;AnnexinV-FITC/PI双染法检测对细胞凋亡影响;WesternBlotting检测相关凋亡蛋白的作用机制。红娘子蛋白最佳提取工艺为红娘子粉末加20倍体积水溶液(pH为10.8),冰水浴超声提取150min。生品及炮制品蛋白可显著降低Bel-7402肝癌细胞存活率,具有良好的抑制肝癌细胞增殖能力,可显著抑制肝癌细胞迁移;显著增加Bel-7402肝癌细胞凋亡率,可促进凋亡相关蛋白BCL2-AssociatedX(Bax)和Caspase-3表达,降低B-cell lymphoma-2(Bcl-2)蛋白表达。优化的红娘子蛋白提取工艺稳定,蛋白含量可达240.55mg/g。红娘子生品及炮制品蛋白成分均具有较好的抑制Bel-7402肝癌细胞迁移及增殖的能力,其机制可能是通过上调抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达、下调促凋亡蛋白Bax蛋白表达,激活Caspase级联反应,上调效应子Caspase-3蛋白表达,从而促进细胞凋亡,且炮制品蛋白效果优于生品蛋白。 展开更多

关键词 红娘子 蛋白质 提取工艺 肝癌细胞bel-7402 细胞凋亡

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异甘草素和3-甲氧基异甘草素对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性 被引量：11

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作者 木合布力·阿布力孜 王永波 +1 位作者 徐方野 阿布力孜·阿布杜拉 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期887-888,共2页

肝癌多药耐药（ MDR）不仅限制了化疗效果,也是导致肝癌复发转移的重要原因,如何逆转多药耐药性已是肿瘤药物干预研究的热点。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型,在新型抗癌候选药物研究中较为常用。国内学者利用此种模型从天然药... 肝癌多药耐药（ MDR）不仅限制了化疗效果,也是导致肝癌复发转移的重要原因,如何逆转多药耐药性已是肿瘤药物干预研究的热点。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型,在新型抗癌候选药物研究中较为常用。国内学者利用此种模型从天然药物中筛选出了对肝癌Bel-7402细胞具有明显抑制活性的黄芩苷、虫草素、蜂毒素、蛇葡萄素、川芎嗪等天然活性成分,并探讨其在肝癌的辅助治疗、逆转耐药性等方面的应用价值[1-4]。本课题组研究发现,甘草查耳酮成分异甘草素（ isoliquiritigenin, ILG）对人宫颈癌SiHa细胞具有明显的抑制增殖和促进凋亡活性,并对正常细胞的毒性低,从而显示较好的先导化合物的潜力[5]。本研究参照前期研究方法[6]对天然化合物ILG及其衍生物3-甲氧基异甘草素（3-OM-ILG）进行人工合成制备,并应用人肝癌 Bel-7402细胞为体外模型,用MTT法和流式细胞仪法对两种化合物的抗肝癌活性及促进癌细胞凋亡作用进行对比研究。 展开更多

关键词 异甘草素 3-甲氧基异甘草素 合成制备 人肝癌bel7402细胞 抗癌活性 细胞凋亡

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根皮素诱导肝癌BEL-7402细胞凋亡 被引量：18

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作者 罗辉 汪亚君 +2 位作者 陈杰 刘江琴 张海涛 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期1249-1251,共3页

目的研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果根皮素... 目的研究根皮素诱导肝癌细胞系BEL-7402细胞凋亡。方法MTT法测定BEL-7402细胞毒性,荧光显微镜观察细胞形态学的变化,流式细胞仪分析细胞周期和线粒体膜电位的变化。发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9活性变化。结果根皮素对BEL-7402细胞IC50在89.23μg/mL。BEL-7402细胞生长曲线表明,根皮素浓度增高,生长率明显下降。细胞凋亡可在40-160μg/mL根皮素处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强。根皮素阻断细胞于G1期,线粒体膜电位降低。Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变。根皮素处理BEL-7402细胞12hCaspase-9活性最高,而Caspase-6活性在18h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24h后。结论根皮素可以诱导BEL-7402细胞发生凋亡,途径可能是通过线粒体旁路。 展开更多

关键词 根皮素 bel-7402 细胞凋亡 线粒体膜电位

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胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响 被引量：11

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作者 陈丽 那顺巴雅尔 +2 位作者 张建 于娟 顾为望 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1208-1211,共4页

目的了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响。方法12.5μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备。结果12.5μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变。扫... 目的了解胡桃醌对人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构的影响。方法12.5μmol/L胡桃醌作用于BEL-7402细胞24h后固定,分别行HE染色、考马斯亮蓝染色、扫描电镜及透射电镜样品制备。结果12.5μmol/L胡桃醌处理组细胞形态和细胞骨架发生改变。扫描电镜结果显示BEL-7402细胞胞体体积缩小,与周围细胞群脱离,表面微绒毛卷曲、畸变、小球结构逐渐增多,细胞间连接逐渐断裂,细胞间隙增宽,有凋亡小体形成。透射电镜结果显示胡桃醌作用BEL-7402细胞24h后,细胞内质网扩大,线粒体结构疏松,胞核核仁裂解,凋亡小体形成。结论胡桃醌能有效改变人肝癌BEL-7402细胞亚显微结构,诱导细胞凋亡。 展开更多

关键词 bel-7402 细胞骨架 亚显微结构 细胞凋亡

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虫草素对人肝癌Bel-7402细胞抑制及作用机制的研究 被引量：25

5

作者 卢群 罗少洪 +1 位作者 何伟彬 梅文杰 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1477-1477,共1页

虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研... 虫草素是虫草的主要活性成分,具有抗肿瘤、抑菌、抑制病毒、抑制蛋白质激酶活性等作用[1-2]。研究证明虫草素能抑制mRNA的合成,诱导细胞凋亡,促进细胞分化,对多种肿瘤细胞的生长具有抑制作用[1-2]。诱导肿瘤细胞凋亡以及作用靶点已成研究的焦点。为探讨虫草素诱导肿瘤细胞凋亡的新靶点。 展开更多

关键词 虫草素 人肝癌bel-7402细胞 抑制 凋亡 机制 P53 BCL-2

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脂蟾毒配基通过线粒体途径诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的研究 被引量：20

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作者 黄应申 肖军军 +3 位作者 孟书聪 董晓敏 王传社 果德安 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第20期1141-1145,共5页

目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡... 目的:探讨中药蟾酥主要成份之一脂蟾毒配基(Resibufogenin,RG)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用机制。方法:体外培养Bel-7402细胞,采用酸性磷酸酶法检测RG对细胞增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率及线粒体膜电位(△ψm)变化;WesternBlot检测与细胞凋亡相关蛋白表达的变化。结果:RG显著抑制细胞增殖,其作用24、48、72h的IC50分别为3.8、1.8、1.2"mol/L;经10"mol/LRG处理24h后,癌细胞出现凋亡的形态变化,其凋亡率明显高于对照组细胞;RG引起△ψm下降,释放入胞质中的细胞色素c(cytochromec,CytC)增多,促进Caspase-3蛋白活化,抑制Bcl-2蛋白表达,诱导细胞凋亡。结论:RG诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,其诱导凋亡作用可能通过线粒体通路实现。 展开更多

关键词 脂蟾毒配基 细胞凋亡 人肝癌bel-7402细胞 线粒体跨膜电位(△ψm)

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盐酸小檗硷对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响 被引量：11

7

作者 潘淮宁 王书奎 +3 位作者 王自正 魏敬 吴锦丹 蒋建东 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期865-868,共4页

目的:探讨盐酸小檗硷(BBR)在体外对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响。方法:采用不同浓度的BBR与人肝Bel-7402细胞株共同培养不同的时间后,通过RT-PCR、流式细胞术及Western-Blotting技术分别检测LDLRmRNA、LDLR及过氧化物酶体增生物... 目的:探讨盐酸小檗硷(BBR)在体外对人肝Bel-7402细胞株LDLR表达的影响。方法:采用不同浓度的BBR与人肝Bel-7402细胞株共同培养不同的时间后,通过RT-PCR、流式细胞术及Western-Blotting技术分别检测LDLRmRNA、LDLR及过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPAR-γ)的表达。结果:经BBR处理过的肝细胞的LDLRmRNA表达明显增加,且其表达强度与所加入的BBR浓度及及作用时间呈正相关;最小有效剂量是0.25μg/ml,最短起效时间是2h,24h仍保持较高的表达水平。而PPAR-γ的mRNA表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:BBR能通过增加LDLR的表达而有效调节细胞对脂蛋白的摄取和代谢,从而维持细胞外LDL-C水平的稳定。 展开更多

关键词 盐酸小檗硷 bel-7402细胞株 低密度脂蛋白受体 过氧化物酶体增生物激活受体Γ

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MTT法测定多柔比星和氟尿嘧啶及顺铂对肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM的IC_(50)值 被引量：15

8

作者 王姗姗 刘明 +1 位作者 刘英 汪选斌 《医药导报》 CAS 2010年第5期579-581,共3页

目的研究多柔比星(ADM)、氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)对人肝癌多药耐药细胞株Bel-7402/ADM的细胞毒作用,为开展逆转肿瘤多药耐药研究提供实验依据。方法以MTT法测定ADM、5-Fu、DDP对Bel-7402/ADM的细胞毒作用,计算每种药物的半数抑制浓度... 目的研究多柔比星(ADM)、氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)对人肝癌多药耐药细胞株Bel-7402/ADM的细胞毒作用,为开展逆转肿瘤多药耐药研究提供实验依据。方法以MTT法测定ADM、5-Fu、DDP对Bel-7402/ADM的细胞毒作用,计算每种药物的半数抑制浓度(IC50)。结果ADM、5-Fu、DDP对Bel-7402/ADM的IC50分别为10.00,30.60,11.48μmol.L-1。结论MTT法检测药物细胞毒作用方便快捷,节省试剂;随着化疗药物浓度的增加,药物对细胞的抑制率增加。 展开更多

关键词 多柔比星 氟尿嘧啶 顺铂 肝癌细胞 耐多药 bel-7402/ADM 半数抑制浓度

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合成芪类化合物抑制肿瘤细胞增殖并诱导Bel-7402细胞凋亡 被引量：4

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作者 韩雪莲 方志杰 +3 位作者 陈军浩 高军峰 马春艳 殷晓进 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期963-970,共8页

芪类化合物在癌的起始、促进和发展阶段均有化学抗癌活性,对其化学结构进行改造并进行作用机制研究,提高其抗肿瘤活性,有可能发现新的抗肿瘤药物.在合成23种芪类化合物的基础上,以MTT法测定其对9种肿瘤细胞系的抑制作用,发现多种化合物... 芪类化合物在癌的起始、促进和发展阶段均有化学抗癌活性,对其化学结构进行改造并进行作用机制研究,提高其抗肿瘤活性,有可能发现新的抗肿瘤药物.在合成23种芪类化合物的基础上,以MTT法测定其对9种肿瘤细胞系的抑制作用,发现多种化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞系具有较明显的抑制活性.以细胞周期分析、Hoechst33258荧光染色及线粒体膜电位变化进行检测,发现经抑制作用较强的化合物HCQ-10处理后的Bel-7402细胞发生G2/M期阻滞,并继发细胞凋亡.实验结果说明,合成芪类化合物对SMMC-7721、BGC-823、HepG2、Bel-7402、MCF-7、SGC-7901细胞具有较为明显的增殖抑制作用,其抑制Bel-7402细胞增殖的作用机制为阻滞细胞于G2/M期并诱导细胞继发凋亡. 展开更多

关键词 芪类化合物 bel-7402细胞 细胞周期 细胞凋亡

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川芎嗪对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR多柔比星蓄积的影响 被引量：12

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作者 刘英 李瑞生 +6 位作者 王珊珊 汪选斌 刘明 郭陵郧 孔霞 黄霞 鲁英 《医药导报》 CAS 2009年第5期565-567,共3页

目的考察中药川芎有效成分川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR中多柔比星(DXR)蓄积的影响。方法将人肝癌细胞耐药株Bel-7402/DXR及其亲本细胞Bel-7402分为6组:亲本空白对照组(Parental)、耐药空白对照组(Resi... 目的考察中药川芎有效成分川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR中多柔比星(DXR)蓄积的影响。方法将人肝癌细胞耐药株Bel-7402/DXR及其亲本细胞Bel-7402分为6组:亲本空白对照组(Parental)、耐药空白对照组(Resistance)、亲本多柔比星组(Parental+DXR)、耐药多柔比星组(Resistance+DXR)、TMP组(Resistance+DXR+TMP)、维拉帕米(VRP)阳性对照组(Resistance+DXR+VRP),荧光显微镜下观察细胞内DXR荧光强度,流式细胞术检测细胞内DXR的平均荧光强度。结果荧光显微镜结果显示,(Resistance+DXR)组、TMP组、VRP组,其细胞内DXR荧光强度分别占Parental+DXR组的(50.03±6.01)%、(119.34±5.4)%、(169.25±21.0)%;流式细胞术结果显示:Resistance+DXR组、TMP组、VRP组细胞内DXR平均荧光强度分别为Parental+DXR组的(82.08±6.98)%、(134.43±39.5)%、(262.74±47.18)%。结论TMP可使人肝癌耐药细胞Bel-7402/DXR中抗癌药多柔比星的蓄积增加,其机制可能与逆转P-gp对药物的外排功能有关。 展开更多

关键词 川芎嗪 人肝癌耐药细胞bel-7402/DXR 多柔比星 细胞内药物蓄积

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肝癌细胞株Bel-7402中侧群细胞的分离和致瘤能力 被引量：5

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作者 陈伟 姜楠 +4 位作者 张彤 李华 张琪 陈规划 曾宪成 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期561-566,576,共7页

【目的】分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。【方法】采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2亚群。实验分组:SP组与NSP组。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NS... 【目的】分选肝癌Bel-7402细胞中的侧群(SP)细胞并分析其生物学特性。【方法】采用流式细胞荧光激活分选(FACS)技术将Bel-7402细胞分为SP细胞和非侧群(NSP)细胞2亚群。实验分组:SP组与NSP组。细胞生长曲线法和平板克隆法比较SP细胞和NSP细胞的增殖能力和克隆形成能力;RT-PCR法检测SP细胞和NSP细胞的CD133、三磷酸腺苷结合盒转动蛋白G2(ABCG2)表达;流式细胞术分析细胞凋亡率;无血清培养法检测SP细胞及NSP细胞成球率;非肥胖糖尿病/严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠体内成瘤实验比较SP细胞和NSP细胞的致瘤性。【结果】Bel-7402细胞中分选出的SP细胞比例为(2.4±0.0)%。生长曲线表明SP细胞的增殖速度快于NSP细胞(P<0.05)。SP、NSP细胞的克隆形成率分别为(20.5±2.6)%、(5.1±0.9)%,两者差异明显(P<0.05)。SP细胞ABCG2 mRNA和CD133 mRNA平均表达水平分别是NSP细胞的3.03倍(P<0.01)和1.98倍(P<0.01)。SP细胞凋亡率为(0.89±0.23)%,低于NSP细胞(P<0.05)。在无血清培养基中,SP细胞成球率为(14.1±1.9)%,高于NSP细胞(P<0.05)。1×103、104、105数量的SP细胞形成皮下移植瘤(P>0.05,P<0.05,P<0.05),而1×105NSP细胞则还不能成瘤。【结论】肝癌Bel-7402细胞中的SP细胞可能富集了肝癌干细胞。 展开更多

关键词 肝癌 侧群细胞 肿瘤干细胞 bel-7402细胞

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桂皮酸诱导Bel-7402人肝癌细胞凋亡的作用及机制 被引量：12

12

作者 路蕾 朱文渊 +1 位作者 林国旺 梁康檐 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期542-546,共5页

【目的】通过检测不同浓度的桂皮酸对人肝癌Bel-7402细胞生存率及凋亡的影响,明确中药桂皮酸诱导该肿瘤细胞凋亡的作用和机制。【方法】采用MTT法检测0、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对正常肝细胞CL48及人肝癌细胞Bel-7402生存率的影响;采... 【目的】通过检测不同浓度的桂皮酸对人肝癌Bel-7402细胞生存率及凋亡的影响,明确中药桂皮酸诱导该肿瘤细胞凋亡的作用和机制。【方法】采用MTT法检测0、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对正常肝细胞CL48及人肝癌细胞Bel-7402生存率的影响;采用PI/AnnexinⅤ双染法检测0、1、3、5和10 mmol/L桂皮酸对Bel-7402细胞凋亡作用的影响;应用Western-blot技术检测不同浓度桂皮酸对Bel-7402细胞中Bax、cytochrome c、caspase 8、caspase 9及caspase 3的作用。【结果】MTT结果显示桂皮酸能剂量依赖性地抑制Bel-7402细胞的生长,而对正常肝细胞的生存率无影响,P<0.05。PI/AnnexinⅤ双染法,流式细胞仪检测显示空白对照组细胞凋亡率为(5.43±0.57)%,浓度为1、3、5和10mmol/L的桂皮酸处理组细胞凋亡率分别为(7.37±0.74)%、(13.73±1.5)%、(25.67±2.15)%和(52.23±4.18)%。蛋白质印迹法结果显示,桂皮酸能促进Bel-7402细胞caspase 8、caspase 9及caspase 3的切割;促进Bax蛋白转位至线粒体及cytochrome c的释放。【结论】桂皮酸具有抑制肝癌Bel-7402细胞生长及促进其凋亡的作用,可能是通过促进Bax蛋白转位至线粒体,从而刺激cytochrome c释放至胞浆,激活caspase蛋白导致肿瘤细胞凋亡。 展开更多

关键词 桂皮酸 bel-7402细胞 凋亡 细胞色素C BAX

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OA对人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402增殖的影响和对细胞凋亡的诱导作用研究 被引量：7

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作者 陈洋 颜天 +1 位作者 于仁成 周名江 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期86-92,共7页

以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V-FITC&PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表... 以人肝细胞HL-7702和肝癌细胞Bel-7402为研究对象,通过MTT法、细胞外部形态观察、Annexin V-FITC&PI双染法及TUNEL法等方法,研究了腹泻性贝毒的主要组分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)对其增殖的影响及对细胞凋亡的诱导作用。结果表明:OA对人两株细胞的增殖均有显著的抑制作用,24 h IC50分别为65ng/mL和60 ng/mL,且这种抑制作用呈剂量依赖性。OA导致两株细胞的形态均发生明显变化:细胞变圆,脱壁,细胞膜形成泡状突起,最终形成膜包裹的凋亡小体。Annexin V-FITC和PI双染法及TUNEL法检测均发现:OA能够诱导两株细胞发生不同程度的凋亡,且凋亡细胞的比例与OA的浓度相关。以上结果表明:OA能够通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡而对人肝细胞和肝癌细胞造成影响,且这种影响的程度与OA的浓度和作用时间密切相关。 展开更多

关键词 大田软海绵酸 人肝细胞HL-7702 人肝癌细胞bel-7402 增殖 细胞凋亡

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蜂毒素对人肝癌BEL-7402细胞增殖和VEGF、bFGF表达的影响 被引量：5

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作者 宋长城 吕祥 +2 位作者 程彬彬 李柏 凌昌全 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1374-1378,共5页

目的研究蜂毒素(Melittin,Mel)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及VEGF、bFGF表达的影响。方法应用MTT法检测Mel对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响;采用ELISA法和免疫细胞化学法检测VEGF和bFGF的表达。实时荧光定量PCR检测VEGF mRNA和bFGF mRN... 目的研究蜂毒素(Melittin,Mel)对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及VEGF、bFGF表达的影响。方法应用MTT法检测Mel对人肝癌BEL-7402细胞增殖的影响;采用ELISA法和免疫细胞化学法检测VEGF和bFGF的表达。实时荧光定量PCR检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的变化。结果 Mel可明显抑制BEL-7402细胞的增殖活性,且具有浓度和时间依赖性。经Mel作用24、48和72 h后的IC50分别为6.80、5.47和4.87 mg·L-1。Mel(2.0、4.0、8.0mg·L-1)作用24 h后,能明显降低BEL-7402细胞上清液中VEGF及bFGF的含量(P<0.05或P<0.01),并可下调VEGF和bFGF的蛋白表达(P<0.01)。荧光定量PCR检测显示,Mel能降低BEL-7402细胞VEGF mRNA和bFGFmRNA的转录水平(P<0.01)。结论 Mel具有抑制人肝癌细胞株BEL-7402增殖的作用,并可下调促血管生成因子VEGF和bFGF的表达,有可能阻碍肿瘤血管生成。 展开更多

关键词 蜂毒素 bel-7402细胞 肝细胞癌 血管生成 血管内皮生长因子 碱性成纤维细胞生长因子

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持续表达HCV NS5B的Bel-7402细胞系的构建与鉴定 被引量：2

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作者 孔令保 吴晓玉 +3 位作者 李昆太 徐波 刘好桔 熊舒珺 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期717-722,共6页

HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂... HCV NS5B是HCV复制所必需的RNA依赖的RNA聚合酶和抗HCV药物的一个理想靶标,构建持续表达NS5B的肝细胞系将有助于研究HCV在肝细胞的复制机制和抗HCV药物的研发。ScaI酶切含有NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,获得的线性化pcDNA-5B通过脂质体转染人肝癌细胞系Bel-7402细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定,证实获得持续表达NS5B的Bel-7402细胞系。体外复制试验和荧光素酶试验表明:Bel-7402细胞表达的NS5B蛋白有体外和细胞内RNA依赖的RNA聚合酶活性。持续表达有聚合酶活性的HCV NS5B的Bel-7402细胞系的建立为进一步研究NS5B催化的HCV复制机制和NS5B抑制剂的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 HCV NS5B bel-7402 持续表达 活性

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姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中HIF-1α表达的影响 被引量：15

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作者 孙军 李岩 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1379-1383,共5页

目的探讨姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α表达的影响以及蛋白酶体在其中的作用。方法以0、2.5、5、10、15、20μmol.L-1的姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,W ST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和... 目的探讨姜黄素对人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α表达的影响以及蛋白酶体在其中的作用。方法以0、2.5、5、10、15、20μmol.L-1的姜黄素处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,W ST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和W estern B lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的表达;以0、10μmol.L-1姜黄素、10μmol.L-1MG-132、10μmol.L-1姜黄素+10μmol.L-1MG-132处理人肝癌细胞BEL-7402缺氧环境中培养6 h,采用W esternB lot方法检测肝癌细胞中H IF-1α的蛋白表达。结果①不同剂量的姜黄素对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性;②随着姜黄素浓度的增加,H IF-1α蛋白表达逐渐降低;③不同剂量的姜黄素对H IF-1αmRNA表达的影响与对照组相比差异无显著性;④MG-132能够逆转姜黄素对H IF-1α蛋白的减少。结论姜黄素抑制人肝癌细胞BEL-7402中H IF-1α蛋白表达是通过转录后机制和蛋白酶体途径。 展开更多

关键词 姜黄素 缺氧诱导因子-1 人肝癌细胞bel-7402

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稀土离子对BEL-7402细胞蛋白质构象变化的影响 被引量：5

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作者 红枫 王夔 +1 位作者 李荣昌 黄沛力 《首都医科大学学报》 CAS 2003年第3期225-227,共3页

应用傅立叶变换红外光谱 (FT IR)方法 ,考察了稀土离子作用于BEL 740 2细胞后所引起的整个细胞蛋白质构象的变化。结果 :在Hepes缓冲液介质中 ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1La3+对BEL 740 2细胞蛋白二级结构的影响随时间变化 ,作用... 应用傅立叶变换红外光谱 (FT IR)方法 ,考察了稀土离子作用于BEL 740 2细胞后所引起的整个细胞蛋白质构象的变化。结果 :在Hepes缓冲液介质中 ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1La3+对BEL 740 2细胞蛋白二级结构的影响随时间变化 ,作用 1h没有影响 ;作用 2h和 3h结果类似 ;作用 3h ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1的不同稀土离子相比较 ,使Random上升的程度是Yb3+>La3+>Gd3+。提示 :稀土离子可使BEL 740 2细胞蛋白质构象发生变化 。 展开更多

关键词 稀土离子 bel-7402细胞 蛋白质构象 傅立叶变换红外光谱 FT-IR

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胡桃醌不同给药途径对人肝癌细胞BEL-7402裸鼠皮下移植瘤生长的影响 被引量：5

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作者 陈丽 张建 +2 位作者 汪思应 黄德武 顾为望 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2011年第4期339-344,I0022,共7页

目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡... 目的采用裸鼠皮下移植瘤模型,通过不同给药途径对胡桃醌抗肿瘤活性和毒性进行评价。方法建立人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,通过腹腔注射和局部注射两个给药途径观察胡桃醌抑制肿瘤生长的效果。结果①以600、300和150μg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,发现该剂量胡桃醌对肿瘤生长没有明显的影响;NK细胞活性检测发现,600、300μg/kg胡桃醌对裸鼠免疫功能有影响(P均<0.01),150μg/kg胡桃醌则没有影响(P>0.05);与阳性对照组(5-Fu)相比,600μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异无显著性(P>0.05),300和150μg/kg胡桃醌组NK细胞活性差异有显著性(P<0.05,P<0.01),结果提示胡桃醌对小鼠免疫系统有一定的损伤作用。②以4.5、3和1.5 mg/kg胡桃醌腹腔注射于人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型,抑瘤率分别为为78.24%、66.57%、48.94%;4.5、3 mg/kg胡桃醌的抑瘤作用可与阳性对照组比拟(P均>0.05)。但4.5 mg/kg胡桃醌组裸鼠出现明显的皮下脂肪减少、消瘦,并有死亡现象。③以pH 7.4和pH 4.0的600、300和150μg/kg胡桃醌人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤模型局部给药,结果发现不同pH(pH 7.4或4.0)600、300μg/kg的胡桃醌局部注射抑瘤作用与阳性对照组(5-Fu)组差异无显著性(P>0.05),而不同pH的150μg/kg胡桃醌抑瘤作用不明显。同一浓度不同pH药物的抑瘤作用差异无显著性(P均>0.05),但pH 4.0的胡桃醌组肿瘤细胞肝转移较少。结论胡桃醌不同给药途径均可抑制人肝癌BEL-7402细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,但有一定的毒副作用,药物安全范围较小。 展开更多

关键词 胡桃醌 bel-7402细胞移植瘤 药效学 裸鼠 生长抑制

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甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞毒性作用的机制研究 被引量：5

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作者 俞发荣 连秀珍 郭红云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1513-1517,共5页

目的探讨甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞的毒性作用机制。方法采用色-质联用仪对甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸进行分析;采用流式细胞仪、MTT法和扫描电镜法检测其毒性作用。结果分别给予BEL-7402细胞0.2、0.8、3.2mg.L-1甘肃猫儿眼... 目的探讨甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞的毒性作用机制。方法采用色-质联用仪对甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸进行分析;采用流式细胞仪、MTT法和扫描电镜法检测其毒性作用。结果分别给予BEL-7402细胞0.2、0.8、3.2mg.L-1甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸培养48h,测定结果显示,甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞增殖抑制率分别为34.0%、44.8%和70.7%,半数抑制浓度(IC50)为0.812mg.L-1;凋亡率分别为18.6%、22.7%和24.2%;细胞膜微绒毛断裂,细胞破裂。结论甘肃猫儿眼不饱和脂肪酸对人BEL-7402细胞具有毒性作用,其机制可能与破坏细胞膜结构,抑制细胞分裂,损伤线粒体结构有关。 展开更多

关键词 甘肃猫儿眼 不饱和脂肪酸 人bel-7402细胞 毒性作用

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雄黄抗人肝癌BEL-7402细胞作用 被引量：8

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作者 黄姣娥 戴支凯 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期936-939,共4页

目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制。方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位。结果:与... 目的:观察雄黄体外抗人肝癌BEL-7402细胞作用和作用机制。方法:采用MTS法和细胞克隆实验法观察雄黄对BEL-7402细胞增殖的影响,应用PI/Hoechest33258双染法和流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光分光光度计检测细胞内钙和线粒体膜电位。结果:与阴性对照组比,雄黄能剂量依赖性地抑制BEL-7402细胞的生长和克隆形成。雄黄作用后,BEL-7402细胞出现了凋亡形态学改变如染色质浓缩等;流式细胞仪检测显示,雄黄能剂量依赖性地诱导细胞凋亡,其中,225μg/ml雄黄引起BEL-7402细胞凋亡的百分率为(28.6±4.6)%。与阴性对照组比,雄黄作用后,BEL-7402细胞的细胞内钙升高和线粒体膜电位降低。结论:雄黄具有一定的抗肿瘤作用,其作用机制与升高细胞内钙、降低细胞线粒体膜电位并诱导细胞凋亡有关。 展开更多

关键词 雄黄 人肝癌细胞系bel-7402 抗肿瘤作用

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